Universidade Federal Fluminense Departamento de Biologia Celular e Molecular Disciplina de Iniciao Pesquisa I Professoras responsveis: Ldia Amorim e Patricia

a Burth.

VIDRARIAS E UTENSLIOS DE LABORATRIO

VIDRARIAS
Balo de fundo redondo: mais usado para o aquecimento de lquidos e reaes com desprendimento de gases e para liofilizao de amostras.

Fig. 1: Bales de fundo redondo Balo Volumtrico: Recipientes de vidro que permitem medir com preciso volumes fixos de lquidos. rigorosamente calibrado a determinada temperatura, no podendo ser aquecido ou submetido a mudanas bruscas de temperatura. Existem bales cuja capacidade varia de 5 mL a 2.000 mL. So utilizados para a preparao das solues de reagentes em concentraes exatas, particularmente de solues padres. Os bales volumtricos esto calibrados para um volume exato de um lquido e no devem ser usados para transferir volumes. Pode ou no conter rolha esmerilhada.

Fig. 2 - Bales volumtricos com diferentes capacidades

Basto de vidro: O basto de vidro utilizado para misturar substncias facilitando a homogeneizao. Auxilia tambm na transferncia de um lquido de um recipiente para outro.

Fig. 3: Bastes de vidro Bcker: de uso geral em laboratrio. Recipiente de diversos volumes usado em reaes, para dissoluo, pesagem ou aquecimento de substncias, podendo ser de vidro ou plstico. De modo muito grosseiro efetua-se medidas com o copo de Becker, pois a sua medida muito imprecisa. Se utilizado para aquecimento, deve ser colocado em trip com a proteo da tela de amianto sobre o Bico de Bunsen ou diretamente sobre a placa de aquecimento. Pode ser graduado ou no. Feito de vidro pyrex refratrio o bcker pode ser utilizado em uma ampla faixa de variao de temperatura.

Fig. 4: Bcker em diversos volumes Erlenmeyer: Frascos de vidro, empregados na dissoluo de substncias, em titulaes, aquecimento de lquidos e em reaes qumicas. Sua capacidade varivel. Podem ter ou no rolha esmerilhada, podendo tambm ser graduados ou no. Seu diferencial em relao ao bcker que este permite agitao manual, devido ao seu afunilamento, sem que haja risco de perda do material agitado.

Fig. 5: Erlenmeyer Kitassato: constitudo de um vidro espesso e um orifcio lateral utilizado para efetuar filtraes a vcuo. Para esse procedimento o orifcio lateral ligado a uma bomba de vcuo, por uma pequena mangueira e o filtro ajustado a boca do kitassato. A bomba, quando ligada, diminui a presso no interior do kitassato, e essa diferena entre a presso externa (atmosfrica) e a interna (do kitassato) facilita a passagem da fase lquida pelo material filtrante.

Fig. 6: Kitassato Funil de vidro: Ele utilizado nas operaes envolvendo lquidos, na transferncia, na reteno de partculas slidas atravs da filtrao e como suporte para papel de filtro. Deve ser sempre usado apoiando-o em anel de ferro apropriado, preso em suporte apropriado e nunca apoiado sobre o frasco de acondicionamento. Existente em diversos dimetros.

Fig. 7: Funis de vidro Pipetas: As pipetas so utilizadas para transferncias (precisas ou no) de volumes de lquidos. Podem ser de vidro ou plstico. Existem trs tipos de pipetas, as volumtricas, as graduadas e a Pasteur. As volumtricas s permitem pipetar um volume nico de lquido, j as pipetas graduadas permitem a transferncia de diferentes volumes. A frao numrica no extremo superior indica a gradao: por exemplo: 1 in 1/10 significa para a pipeta de volume total de 1mL, cada diviso corresponde a um volume de 0,1 mL. Ainda deve ser reconhecida uma diferena importante: as pipetas (seja de um tipo ou de outro) possuem uma ou duas listras no extremo superior. A existncia de duas listras significa que quando o liquido despejado, o que restar dentro da pipeta deve ser extrado (ou soprado). O caso contrrio acontece justamente com as pipetas que possuem uma listra. importante neste ponto considerar que diferentes tipos de solues podem ter distinta viscosidade e/ou tenso superficial, com o qual um especial cuidado deve ser tomado quando se pipeta um lquido viscoso com uma pipeta de duas listras. Existe tambm a pipeta Pasteur, que possui um bulbo em sua extremidade, no graduada e permite medir volumes sem preciso.

Fig. 8: Pipetas A) volumtrica, B) graduada e C)Pasteur

Placa de Petri: Recipiente de vidro ou plstico muito utilizado para cultura de bactrias. constitudo por duas partes: uma base (recipiente menor) e uma tampa (recipiente maior). Para se usar em microbiologia, a placa parcialmente cheia com gar, onde esto misturados alguns nutrientes, sais e aminocidos, de acordo com as necessidades especficas do metabolismo do micrbio a estudar. Depois do gar solidificar, ento colocado o inoculo do micrbio a ser cultivado. Alm deste uso, freqente utilizar a placa de Petri para observar a germinao das plantas e de gros de plen, entre outros usos.

Fig. 9: Placa de Petri Proveta: empregada nas medies aproximadas de volumes de lquidos (preciso de at 0.5 %). H provetas cuja capacidade varia de 5 mL a 2.000 mL. No deve ser aquecida. Pode ser graduada ou no, de plstico ou vidro e com ou sem rolha esmerilhada.

Fig. 10: Provetas

Tubo de ensaio: Empregado para fazer reaes em pequena escala, principalmente em testes de reao em geral. Pode ser aquecido com movimentos circulares e com cuidado diretamente sob a chama do Bico de Bunsen.

Fig. 11: Tubos de ensaio

OUTROS UTENSLIOS
Barra magntica: Auxilia na mistura de solues, podendo ser de vrios tamanhos. Tambm conhecida como bailarina ou peixe, a barra recoberta com teflon protegendo-a contra a corroso de substncias usadas na soluo. A escolha do tamanho da barra para ser usada na mistura das solues est diretamente relacionada com o tamanho do recipiente e do volume de soluo. A mistura feita com a utilizao de um agitador magntico, que por sua vez, possui um im giratrio que faz com que a barra magntica no recipiente gire e misture a soluo. Ao terminar a soluo, a barra pode ser imobilizada por uma maior do lado de fora o que facilita a passagem da soluo misturada para o balo onde ser avolumada.

Fig. 1: Barras magnticas Bico de Bunsen: Fonte de aquecimento mais utilizada em laboratrios. Atualmente vem sendo substitudo por chapas de aquecimento. Possui um orifcio para a entrada de oxignio. Quanto maior a entrada de oxignio, maior ser a combusto e mais azul ser a sua chama.

Fig. 2: Bico de Bunsen Eppendorf: Tubo de plstico, com tamanhos diversos, empregado em pesagens de reagentes slidos (alguns gramas no mximo), na prtica da reao de polimerizao em cadeia PCR, no armazenamento e conservao de pequenas quantidades de materiais (incluindo clulas), podendo tambm, servir de recipiente para centrifugao.

Fig. 3: Tubos eppendorf Micropipeta: Utilizada para transferir pequenos volumes. Podem pipetar volumes fixos ou variveis como, por exemplo, 0,5-10 L, 20-200 L e 200-1000 L. Antes da pipetagem uma ponteira prpria para o modelo da pipeta colocada. Existem trs tipos de ponteiras: Brancas usadas para pipetagem de 0,5 a 10 L; Amarelas usadas em pipetagem de 5 a 200 L; e Azuis usadas em pipetagem de 100 a 1000 L.

Fig. 4: A)Modelos de pipetas de volumes variados; B) ponteira de 5 a 200 L

Pra e Pipetador Pi-Pump: Utilizados acoplados a pipeta para sugar e expelir lquidos, importante no manuseio de substncias corrosivas e perigosas.

A Fig. 4: A)Pipetador Pi-Pump e B)Pra

Trip e tela de amianto: O trip um sustentculo utilizado em aquecimentos de solues em vidrarias diversas de laboratrio. utilizado em conjunto com a tela de amianto, um suporte para as peas a serem aquecidas. O amianto tem a funo de distribuir uniformemente o calor recebido pelo bico de Bunsen.

Fig. 5: Erlenmeyer em trip com tela de amianto sobre o Bico de Bunsen

Tubos polipropileno (chamados de tubo Falcon): Utilizados para armazenamento e conservao de materiais e tambm centrifugao. Podem ser ou no graduados, de volume de 15 mL e 50 mL.

Fig. 6: Tubos de polipropileno Cmara de Neubauer: o instrumento mais utilizado para contagem de clulas. Consiste no mtodo mais simples, mais barato e mais antigo de se realizar a contagem de clulas. Alm disso, pode-se visualizar o que est sendo contado e a viabilidade celular tambm pode ser analisada por este mtodo. A rea total da cmara de Neubauer, ocupada por 25 campos de contagem, corresponde a uma rea total de 1 mm2 (1 mm de cada lado). Sabendo-se que a lamnula fica a 0,1 mm acima da cmara, esta rea comporta o volume de 0,1 mm3. Este dado importante quando se quer descobrir o nmero de clulas por mL de soluo.

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Fig. 7: A)Cmara de Neubauer, B) Esquema das marcaes observadas ao microscpio Garrafa para Cultura de Clulas: Utilizada para a manuteno de cultura celular dos mais variados tipos. Existente em diferentes tamanhos. Essas garrafas so mantidas dentro da estufa nas posies horizontal (possibilitando a formao de um tapete de clulas aderidas face da garrafa-clulas aderentes) ou vertical (clulas em suspenso). A observao das clulas em cultura s poder ser feita com um Microscpio Invertido.

Fig 8: Garrafas de cultura celular

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Vrtex: Aparelho que possui um copo giratrio e que utilizado para misturar solues em tubos Falcon, tubos de ensaio, eppendorfs, etc. A velocidade de rotao pode ser ajustada de modo a obter uma velocidade adequada para que o lquido no vaze.

Fig. 9: Vrtex ou agitador Agitador magntico: Tambm chamado de placa agitadora magntica, formado por uma placa metlica que possui um im giratrio por baixo. usado para misturar solues em recipientes que permitam a colocao de uma barra magntica. Alm de ser possvel regular a velocidade de rotao do im, alguns modelos tambm possuem a funo de aquecimento.

Fig. 10: Agitador magntico Bomba de vcuo: Equipamento capaz de criar vcuo em recipientes acoplados, como kitassatos ou sistemas de filtrao.

Fig. 11: Bomba de vcuo 12

Banho-maria: Equipamento usado para manter a gua em seu interior a uma determinada temperatura, muito til, por exemplo, durante reaes enzimticas. Existem desde modelos bem simples, compostos unicamente por um recipiente e uma resistncia eltrica para esquentar a gua, at os mais sofisticados, que permitem um ajuste preciso da temperatura e podem ter um sistema de circulao de gua, para manter a temperatura mais uniforme.

Fig. 12: Banho-maria com ajuste de temperatura Balanas: Aparelhos usados para fazer pesagens. importante mant-las em superfcies planas e sem oscilaes, para que haja o mnimo de interferncia possvel nas medies. Tambm importante identificar a capacidade mxima da balana e sua preciso, para no danific-la e escolher o tipo mais adequado para cada uso. Podem ser classificadas em 2 tipos: semianalticas (podem ter preciso de 2 a 3 casas decimais e geralmente suportam capacidades maiores) ou analticas (preciso de 4 casas decimais; as pesagens devem ser feitas com as portas de vidros fechadas, pois eventuais correntes de vento podem interferir na medio).

A B Fig. 13: A) Balana semi-analtica; B) Balana analtica

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Potencimetro (pHmetro): Aparelho que faz medies de pH atravs de um eletrodo de vidro que fica mergulhado na soluo. Existem modelos portteis e de mesa e com ou sem termmetro para compensao de temperatura. importante lembrar que todo pHmetro deve ser calibrado antes de sua utilizao; caso ele no tenha termmetro, tanto os padres de calibrao quanto as solues a serem analisadas devem estar temperatura ambiente. Se o aparelho tiver termmetro ou algum sistema de compensao de temperatura, tanto os tampes de calibrao quanto as demais solues devem estar mesma temperatura.

Fig. 14: Diferentes modelos de pHmetro Centrfugas: Aceleram o processo de decantao graas fora centrfuga gerada atravs de um movimento de rotao. muito importante que os tubos sejam equilibrados quando colocados na centrfuga, ou seja, tubos que ficarem um de frente para o outro em relao ao eixo de rotao devem ter sempre o mesmo peso ou o mesmo volume, caso as solues em ambos sejam iguais. Centrfugas mal equilibradas podem causar srios acidentes, tais como deslocamento por causa das vibraes e danos ou at quebra do eixo da centrfuga. Tambm importante adequar os espaos para colocao das amostras de acordo com a espessura do tubo utilizado, usando adaptadores quando necessrio. De acordo com o tipo de rotor, elas podem ser classificadas em centrfugas de rotor mvel ou horizontal (o compartimento das amostras mvel e durante a rotao os tubos ficam num plano horizontal) ou de rotor fixo (o compartimento das amostras fixo e durante a rotao os tubos permanecem sempre num determinado ngulo em relao ao eixo de rotao). H ainda uma outra classificao de acordo com a velocidade que a centrfuga capaz de alcanar, que pode ser vista na tabela abaixo:

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Baixa velocidade Faixa de velocidade (rpm) RCF mximo (g) Refrigerao Vcuo 1 - 6000 6000 algumas no

Alta velocidade 1000 - 25000 50000 sim algumas

Ultracentrfuga 20 80000 600000 sim sim

A converso entre as unidades rpm e xg (fora gravidade) pode ser feita utilizando-se um grfico chamado nomograma ou de acordo com a equao: RCF = 1,19x10-5 . rpm2 . raio mdio do rotor

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D Fig. 15: A) Centrfuga de baixa velocidade com rotor mvel; B) Centrfuga de roto fixo especial para eppendorfs; C) Rotor fixo para centrfugas de baixa e alta velocidade; D) Nomograma para fora gravitacional (http://homepages.gac.edu/~cellab/appds/appd-f.html)

Estufas: Podem ser divididas em 3 categorias: estufas de secagem e/ou esterilizao (podem chegar at 200 ou 300 C e esterilizam materiais pelo mtodo do calor seco, ou seja, sem o uso de vapor dgua; muito usada para esterilizar materiais metlicos e/ou cortantes); estufas de

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cultura sem CO2 (normalmente usadas para cultivo de microorganismos, tais como bactrias) e estufas de cultura com CO2 (usadas para manuteno de culturas de clulas animais; o CO2 ajuda na manuteno do pH do meio de cultura).

Fig. 16: A) Estufa de secagem; B) Estufa de cultura com CO2 Capela: Equipamento usado para exausto de gases txicos ou de vapores nocivos provenientes de solues. importante lembrar que a capela no cria um ambiente assptico e portanto no deve ser usada para trabalhos como cultura de clulas, etc.

Fig. 17: Capela de exausto de gases

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Cabine de Fluxo Laminar: Cria um ambiente estril em seu interior, permitindo o trabalho com materiais que no podem ser contaminados e/ou que possam contaminar o manipulador. O ar entra no aparelho num fluxo unidirecional, passa por um filtro microbiolgico antes de entrar em contato com o material e antes da sua liberao para o meio externo. Tambm possui uma lmpada capaz de emitir luz ultravioleta, usada para esterilizar o ambiente antes e aps o trabalho. No entanto, todo o material de trabalho deve estar estril antes de ser colocado dentro do fluxo; este no deve ser usado para esterilizar material. Alm disso, o fluxo laminar tambm no deve ser usado como capela de exausto, pois gases txicos podem danificar o aparelho. Existem cabines com nveis de segurana classes I, II e III, que diferem no funcionamento, na trajetria do ar e na aplicabilidade.

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Fig. 18: A) Cabine de fluxo laminar classe II; B e C) Esquemas de funcionamento de cabines de fluxo laminar classes II e III, respectivamente. As reas tracejadas representam os filtros microbiolgicos.

Espectrofotmetro: Aparelho que usa a energia luminosa para fazer quantificao de substncias em soluo. O feixe luminoso atravessa a amostra e um detector (clula fotoeltrica) capaz de quantificar a frao da energia luminosa que foi transmitida e convert-la em absorvncia (frao da energia luminosa absorvida). As dosagens podem ser realizadas, pois a absorvncia proporcional concentrao da soluo. Existem modelos que trabalham somente com a faixa visvel do espectro de luz; outros so capazes de trabalhar com as faixas do ultravioleta e/ou do infravermelho.

Fig. 19: Espectrofotmetro Autoclave: Aparelho de esterilizao que utiliza o mtodo do calor mido. Ela trabalha com o mesmo princpio de uma panela de presso: quando ela fechada e a gua comea a esquentar, a presso em seu interior aumenta. Por isso, a gua s entra em ebulio a 120C, matando os microorganismos para esterilizar em seu interior. No deve ser usada metlicos e/ou cortantes nem termolbeis (ex: alguns materiais

(enferrujam e perdem o corte) meios de cultura).

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Fig. 20: Autoclave Destilador: Aparelho purificador de gua atravs da destilao (evaporao seguida de condensao).

Fig. 21: Destilador Gales de N2 lquido: Nesse recipiente possvel manter material biolgico conservado - 196C por longos perodos. Quando usado para cultura de clulas, necessrio o uso de criopreservadores (ex: glicerol ou DMSO 10%), que evitam a formao de cristais de gelo que poderiam romper as clulas. No entanto, essa tcnica no aplicvel a todos os tipos de clulas e cada tipo celular possui um protocolo de congelamento e um perodo de viabilidade.

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Fig. 22: Gales para armazenamento de amostras em N2

Liofilizador: Aparelho usado para promover a liofilizao de vrios materiais, mtodo de conservao tambm bastante duradouro. Os materiais so congelados em recipientes apropriados e o aparelho promove a extrao total da gua presente na amostra por sublimao. Assim obtido um extrato seco que pode ser armazenado por longos perodos, bastando uma simples hidratao.

Fig. 23: Liofilizador

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