Exame de bioqumica experimental I 2010-2011 1Fase

Questo 1 valia 8 valores! a) Definir gama de fraccionamento e limite de excluso molecular b) O que o volume morto e como detectaria experimentalmente? c) Depois tens um grfico do tipo e uma sds page das fraces 11 a 15 mas no consigo agora fazer aquii o desenho.. (sorry)
6 5 actividade 4 3 2 1 0 1 3 5 7 9 11 13 15 numero das fraces

a) Davam-te as massas moleculares do padro usado na sds page e pedia-te para as escreveres ao lado da banda correspondente. E justificar b) Ser que a purificao do enzima foi efectuada com sucesso? c) Sugira uma possvel estrutura para o enzima em estudo

Questo 2 valia 3 valores! Depois tinhas um grfico GC de fase reversa a) Dizer que tcninca era esta e porqu. b) Se aumentssemos a percentagem de acetonitrilo o que aconteceria ao tempo de reteno? Justifique. c) Porque que os picos tm reas diferentes j que se ejectou a mesma quantidade de amostra?

Questo 3 valia 4 valores! Era para fazer um quadro de purificao (rendimento, grau de purificao, actividade total, actividade especfica, etc.) Este n m lembro dos valores

Questo 4 valia 5 valores! Uma amostra contendo uma mistura das protenas X,Y e Z foi fraccionada cromatograficamente, de modo independente, usando-se as condies: A- Aplicou-se a amostra numa resina de permuta aninica equilibrada a ph=7.0 A coluna foi eluda utilizando-se um gradiente de gel em que esse parmetro variava de 7.0 at 4.0 B- Aplicou-se a amostra numa resina de permuta aninica equilibrada a ph=6.0 A coluna foi eluda utilizando-se um gradiente de gel em que esse parmetro variava de 6.0 at 4.0

Abs (280nm)

PROTEINA PI MASSA MOLECULAR X Y Z 6.0 6.9 5.1 140kDa 35 kDa 139 kDa

Tempo (s)

4.1 Indique o ponto onde foi aplicado o gradiente de ph nos cromatogramas efectuados. Indique tambm a que cromatograma a que corresponde cada condio das acima descritas, justifique. 4.2 Esta no me lembro mas eu depois vou l ver a correco do exame e mando-te mensagem! * Desculpa a demora! Um grande beijinho e bom estudo!