UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO

NORTE
Grupo: Bruno Robson Simonetti Silva
Fernanda da Silva Pereira
Vanessa da Silva Pessa
Data: 12/11/10
Disciplina: Bioqumica Fundamental para n!en"eiros
Professor: #ui$ Roberto %i$ de &breu
Aula Prtica: aracteri!a"#o $as Prote%nas
Intro$u"#o:
&s protenas s'o as macromol(culas mais abundantes nas
c(lulas vivas) sinteti$adas pelos or!anismos vivos a partir da
condensa*'o e rearran+o entre os 20 amino,cidos presentes na
nature$a) li!ados covalentemente em sequ-ncias lineares.
& partir da capacidade de combinar os amino,cidos nas mais
variadas /ormas os or!anismos podem sinteti$ar protenas
lar!amente di/erentes entre si) e0ercendo /un*1es como en$imas)
"ormnios) transportadores) anticorpos) protenas do cristalino do
ol"o) pernas de p,ssaros) teias de aran"a) c"i/re de rinoceronte)
protenas do leite) antibi2ticos) venenos de /un!os e dentre outras
in3nidade de produtos.
&s protenas s'o /ormadas pela desidrata*'o de amino,cidos)
onde os resduos de amino,cidos se li!am aos seus vi$in"os por
li!a*1es covalentes e podem ser redu$idas tamb(m aos seus
amino,cidos constituintes pela "idr2lise. S'o divididas quanto a sua
estrutura em: prim,ria 4li!a*1es peptdicas e estrutura linear5)
secund,ria 4mantidas por pontes de "idro!-nio entre as carbonilas e
o "idro!-nio) /ormando cadeias em "(lice ou /ol"as5) terci,ria
4/ormada pelo enovelamento da cadeia polipeptdica apresentando
li!a*1es do tipo) intera*1es inicas) intera*1es "idro/2bicas) ponte de
"idro!-nio e pontes dissul/eto5 e quatern,ria 4mais de uma cadeia
polipeptdica5.
0istem caractersticas prot(icas que podem ser identi3cadas
com simples rea*1es) que permitem a descoberta e identi3ca*'o das
li!a*1es peptdicas) dos !rupos aminas) de como as protenas se
comportam /ora e dentro de seu ponto isoel(trico) a observa*'o da
desnatura*'o prot(ica e quais /atores inter/erem nessa desnatura*'o.
O&'eti(os: 6bservar v,rias caractersticas das protenas com o
au0lio de rea*1es de mecanismo previamente con"ecido: Rea*'o do
Biureto 47denti3car #i!a*1es Peptdicas5) Rea*'o da 8in"idrina
47denti3car 9rupos &minos5) Rea*'o de Precipita*'o pelo :cido
;ricloroac(tico 46bservar desnatura*'o e precipita*'o das protenas
carre!adas positivamente5) Rea*'o de Precipita*'o Salina 46bservar a
precipita*'o da protena causada pela desidrata*'o) <Saltin! 6ut=5)
;ermocoa!ula*'o 46bservar a rea*'o de coa!ula*'o da protena
estando dentro ou /ora do seu ponto isoel(trico5.
)aterial e )*to$os:
>aterial:
? ;ubos de nsaio@
? Suporte para ;ubos de nsaio@
? Bast'o de Vidro@
? Pipetas@
? P-ra@
? #amparina@
? Reativo de Biureto@
? sp,tula@
? :!ua destilada@
? Ar(ia@
? Solu*'o de 6voalbumina@
? Solu*'o de 8in"idrina@
? Solu*'o de :cido ;ricloroac(tico B 10C@
? Solu*'o de Sul/ato de &mnia B DEC@
? Solu*'o de :cido Flordrico 0)1>@
? Solu*'o de Gidr20ido de S2dio 0)1>@
? Solu*'o ;amp'o &cetato pG H)D@
? Procedimentos:
+ , Rea"#o $o -iureto:
? numerou?se 0I tubos de ensaio@
? 8o primeiro tubo pipetou?se 2 m# de ,!ua destilada@
? 8o se!undo tubo adicionou?se uma pequena quantidade de ur(ia
com a+uda de uma esp,tula e aqueceu?se@
? &dicionou?se 2 m# de ,!ua destilada no se!undo tubo@
? 8o tubo terceiro tubo adicionou?se 2 m# de solu*'o de ovoalbumina@
?&dicionou?se I m# do Reativo de Biureto em cada tubo)
"omo!enei$ou?se e anotou?se os resultados obtidos.
. , Rea"#o $e Ni/in$rina
? m um tubo de ensaio adicionou?se 2 m# da solu*'o de 8i"indrina@
? &dicionou?se 0E !otas da solu*'o de ovoalbumina@
? Ferveu?se a solu*'o por 2 minutos) cuidadosamente.
0 , Rea"#o $e Precipita"#o pelo TA 12ci$o Tricloroac*tico3
? Folocou?se em um tubo de ensaio 2 m# de solu*'o de ovoalbumina@
? &dicionou?se 1 m# de ,cido tricloroac(tico B 10C@
? 6bservou?se a precipita*'o.
4 , Rea"#o $e Precipita"#o por Satura"#o Salina 1Saltin5 Out3
? Pipetou?se para um tubo de ensaio E m# de solu*'o de
ovoalbumina@
? &dicionou?se 10 m# de solu*'o de sul/ato de amnia B DEC@
? >isturou?se por invers'o@
? &p2s 10 minutos 3ltrou?se para um novo tubo de ensaio@
? Pipetou?se 2 m# do 3ltrado para um outro tubo de ensaio e
adicionou?se I m# do Reativo de Biureto@
? &notou?se as obversa*1es.
6 , Ter7ocoa5ula"#o
? 8umerou?se 0I tubos de ensaio@
? &dicionou?se E m# de solu*'o de ovoalbumina nos tr-s tubos@
? 8o primeiro tubo adicionou?se 1 m# de ,cido clordrico 0)1>@
? 8o se!undo tubo adicionou?se 1 m# de "idr20ido de s2dio 0)1>@
? 8o terceiro tubo adicionou?se 1 m# de solu*'o ;amp'o &cetato pG
H)D@
? &!itou?se os tubos e os colocou em ban"o?maria /ervente por E
minutos@
? Res/riou?se os tubos e obvervou?se em quais "ouve /orma*'o de
coa!ulo@
? 8o se!undo tubo adicionou?se 0)E m# de solu*'o ;amp'o &cetato
pG H)D@
? 6bservou?se os resultados.
Resulta$os e Discuss#o:
8a rea*'o do Biureto observou?se na ovoalbumina a presen*a
de li!a*1es peptdicas) atrav(s do aparecimento da colora*'o violeta)
decorrente da rea*'o entre o !rupo F68G da ovoalbumina e o cobre
do Biureto) que estava o0idado pelo pG alcalino.
8a rea*'o da 8in"idrina observou?se a presen*a de !rupos
aminos) pois a solu*'o de 8in"idrina aquecida com solu*'o de
amino,cidos) peptdeos) ou protenas) desenvolve colora*'o a$ul?
violeta. & rea*'o se d, por o0ido?redu*'o) com libera*'o de amnia e
aldedo por desamina*'o o0idativa.
8a rea*'o de Precipita*'o pelo ,cido tricloroac(tico observou?
se a desnatura*'o e precipita*'o das protenas em meio ,cido)
/ormando sais de protenas.
8a rea*'o de Precipita*'o Salina observou?se a que adi*'o de
sais precipitou a ovoalbumina e que esta depois de 3ltrada) n'o
apresentou positividade para a Rea*'o do Biureto) indicando que
toda a protena precipitada /oi retida no papel 3ltro.
8a rea*'o de ;ermocoa!ula*'o observou?se que s2 ocorre
coa!ula*'o mediante aquecimento se a protena encontrar?se em seu
ponto isoel(trico) e tamb(m que se a protena /or aquecida /ora da
/ai0a do seu P7 e depois /or inserida nesta /ai0a ocorrer, uma possvel
Jocula*'o.
8uest9es para Fi:a"#o $a Aula Prtica:
01 K Lual o ob+etivo de reali$ar a rea*'o do biureto com a ur(ia
aquecida e com a ovoalbuminaM
Resposta: 6 ob+etivo de reali$ar a rea*'o do biureto com as duas
substNncias citadas ( mostrar que ambas possuem li!a*1es
peptdicas e consequentemente que estas substNncias possuem
estrutura de proteinas) visto que a rea*'o entre o Biureto) o cobre
o0idado e o !rupo F68G das li!a*1es peptdicas das protenas resulta
em uma colora*'o violeta.
02 K Fomo rea!e uma protena quando precipitada por ,cidos como o
Pcrico) ;un!stico) ;F&) etc.M
Resposta: Luando uma protena rea!e com ,cidos como os citados
acima elas desnaturam e precipitam) pois estes ,cidos /ornecem ons
ne!ativos) que se li!am as mol(culas de protenas positivamente
carre!adas e /ormam sais de protenas) que precipitam) pois n'o
possuem car!a lquida e consequentemente n'o intera!em
/ortemente com as mol(culas de ,!ua.
0I K 0plique o que voc- observou na e0peri-ncia H. 6 que 3cou
retido no papel 3ltroM Por que a rea*'o do biureto /oi ne!ativa para o
3ltrado obtidoM
Resposta: 8a e0peri-ncia H observou?se que a adi*'o de sais
precipitou a ovoalbumina. & ovoalbumina 3cou completamente retida
no papel 3ltro. & rea*'o do Biureto /oi ne!ativa para o 3ltrado obtido)
pois este 3ltrado n'o contin"a ovoalbumina) +, que esta 3cara
totalmente retida no papel 3ltro.
0H K Por que "ouve coa!ula*'o no tubo IM 6 que voc- observou nos
tubos 1 e 2M
Resposta: Gouve coa!ula*'o no tubo I porque a ovoalbumina
estava dentro da /ai0a do seu ponto isoel(trico) ent'o as protenas
depois de desnaturadas coa!ularam pois estavam sem car!a lquida
e n'o estavam intera!indo /ortemente com a ,!ua. 8os tubos 1 e 2
n'o "ouve coa!ula*'o) pois a ovoalbumina estava /ora da /ai0a do
seu ponto isoel(trico) lo!o mesmo sendo desnaturada pelo calor
ainda manteve?se solOvel em ,!ua devido B presen*a de car!a que
resulta em intera*'o com a ,!ua.
0E K &p2s adicionar a solu*'o tamp'o no tubo 2 o que voc- veri3couM
Resposta: &p2s a adi*'o de solu*'o tamp'o no tubo 2 veri3cou?se o
aparecimento de um co,!ulo esbranqui*ado na super/cie) indicando
que se a protena estiver desnaturada e /ora da /ai0a do seu ponto
isoel(trico) ela poder, ser coa!ulada quando inserida dentro da /ai0a
do seu p7.
onclus#o:
Foncluiu?se que e0istem v,rias rea*1es que nos permitem
entender mel"or a estrutura das protenas) como tamb(m observar
/atores como precipita*'o e coa!ula*'o e tamb(m a inJu-ncia do
ponto 7soel(trico sobre a coa!ula*'o. 6bservou?se que a rea*'o do
Biureto serve para identi3car as li!a*1es peptdicas e a rea*'o da
8in"idrina nos permite identi3car os !rupos aminos. Fonstatou?se
que al!umas substNncias em contato com as protenas /a$em com
que estar precipitem) como por e0emplo) al!uns ,cidos e al!uns sais.
Por 3m) viu?se que uma protena estando /ora do seu ponto
isoel(trico n'o coa!ula mediante aquecimento) a protena s2 ir,
coa!ular se ocorrer aquecimento e ela estiver no seu ponto
isoel(trico ou /or posteriormente inserida neste 48este caso a
coa!ula*'o ( menor5.
-i&lio5ra;a:
LEHNINGER, A. L.; NELSON, D. L. COX, M. M. Princpios de Bioqumica.
So Paulo: Sarvier, 199.
CHAMPE, Pa!ela C.; HAR"E#, Ri$%ar& A. Bioqumica Ilustrada. Artes
Mdicas. Por'o Ale(re, 199).