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BF&A_ 1
Tpicos em Validao de Mtodos
I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Tpicos em Validao de M todos
Dr Oscar Bahia Filho
BF&A Consultores
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BF&A_ 2
Tpicos em Validao de Mtodos
I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
1. Reconhece Padres,
2. Observa e mantm
sob controle,
3. Melhora
Sistema de Gesto
no Lab
Gestor
Barreira 1
Confiabilidade Instrumental
Barreira 2
Gargalos da Anlise
Barreira 3
Significncia do resultado
Barreira 4
Cumprimento dos requisitos legais
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BF&A_ 3
Tpicos em Validao de Mtodos
I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Mtodo Analtico Mtodo Analtico
Anlise de Rotina Anlise de Rotina
Como os de fora pensam
que
Sistema Analtico Sistema Analtico
Como realmente
Rplica Experimental
Ens aio Local
Es tabilidade
Ajusta /
Verifica
Qualificao Instrumental
Avaliao
Matriz
Analitos
padro
Matriz
Analitos
Adequado?
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n
Adequado?
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Otimiza Mtodo
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BF&A_ 4
Tpicos em Validao de Mtodos
I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
A validao do mtodo feita para garantir que a metodologia
analtica exata, reprodutvel e flexvel sobre uma faixa especfica
que uma substncia ser analizada.
uma avaliao que garante a conformidade com as exigncias
legais ou fim proposto (interesse de terceiros) do mtodo analtico
O processo que prove evidncia documentada de que realiza aquilo
para o qual est indicado para fazer.
Obstculo: Linguagem Metrolgica x Linguagem Cientfica
Por que validar?
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BF&A_ 5
Tpicos em Validao de Mtodos
I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Definies
ICH*
O objetivo da validao de um mtodo analtico demonstrar que
adequado para o seu propsito.
*Internacional Conference on Harmonization of Technical Requiriments for Registration of Pharmaceuticals for
Human Use
USP**
Validao de um mtodo analtico o processo que fornece uma
evidncia documentada, atravs de estudos de laboratrio, de que realiza
aquilo para o qual indicado para fazer.
A performance expressa em termos de caractersticas analticas.
**United States Pharmacopeia 24
Para quem?
Para quem?
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BF&A_ 6
Tpicos em Validao de Mtodos
I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Reconhecimento formal da competncia de um laboratrio para realizar
ensaios especficos
Voluntrio e aberto a qualquer tipo de laboratrio
Reconhecimento formal da competncia de um laboratrio para realizar
ensaios especficos
Voluntrio e aberto a qualquer tipo de laboratrio
Credenciamento / Avaliao
Um laboratrio de ensaios, deve ter meios para assegurar a qualidade
de seus relatrios/laudos.
Os principais meios so:
usar mtodos validados,
ter POPs de controle interno da qualidade,
participar de programas de ensaios de proficincia, e
estar credenciado por Norma nacional/internacional
Um laboratrio de ensaios, deve ter meios para assegurar a qualidade
de seus relatrios/laudos.
Os principais meios so:
usar mtodos validados,
ter POPs de controle interno da qualidade,
participar de programas de ensaios de proficincia, e
estar credenciado por Norma nacional/internacional

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BF&A_ 7
Tpicos em Validao de Mtodos
I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Avaliao para Credenciamento
Exame de um laboratrio de calibrao ou ensaio para
determinar a conformidade com os requisitos de credenciamento
previamente estabelecidos
Requisitos do Credenciamento*
NBR ISO/IEC 17025
NIT DICLA 028 (BPL)
NIT DICLA 083 (Lab. Clnicos)
outros
* Todas as normas fazem aluso a: Validao de mtodos e Estimativa da Incerteza da medida
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BF&A_ 8
Tpicos em Validao de Mtodos
I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
EuraChem,
ICH
US FDA
US EPA
ICH
USP
FAO/AIEA
Codex,
MAPA (CLAVE),
MS (ANVISA)
MMA (IBAMA)....
IUPAC (Interdivisional Working Party on
Harmonisation of Quality Assurance
Schemes for Analytical Laboratories)
Protocolos de Validao
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BF&A_ 9
Tpicos em Validao de Mtodos
I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Processo de Validao
Validao
Software
Hardware
Mtodo Analtico
Critrios Conformidade
A qualificao instrumental (IQ) uma etapa anterior ao processo de
validao.
Antes de validar um mtodo, deve-se certificar que todos os esforos de
otimizao j tenham sido esgotados para as condies locais do ensaio.
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BF&A_ 10
Tpicos em Validao de Mtodos
I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Especificidade/ seletividade (interferncia)
LOD
LOQ
Faixa (Linearidade)
Exatido (recuperao)
Preciso ( Repetibilidade, Preciso intermediria e
Reprodutibilidade)
Robustez (resistncia a variaes intencionais)
Aplicabilidade (nvel)
Elementos da validao
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BF&A_ 11
Tpicos em Validao de Mtodos
I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
1. Linearidade e Faixa
Plano de Validao
Elemento de validao
- prepare 5 nveis de solues padro
- adicione 0, 50, 75, 100 e 150% TD
- mede 3 x cada
Tarefa experimental
- grfico adequado
- RSD 10%
Critrios de aceitao
- modelo de Regresso
- mdia, SD e RSD%
- LOD e LOQ (instrumental)
- Limite superior (LSC) e inferior da curva (LIC)
Clculos
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BF&A_ 12
Tpicos em Validao de Mtodos
I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
2. Exatido
Plano de Validao
Elemento de validao
- 80 % recuperao 120
- RSD (mdio) 15%
Critrios de aceitao
- % recuperao
- mdia, SD e RSD%
- LOD e LOQ (mtodo)
Clculos
- prepare 12 rplicas de placebo
- fortifique 0, 80, 100 e 120% TD
- mede 3 x cada
Tarefa experimental
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BF&A_ 13
Tpicos em Validao de Mtodos
I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
3. Seletividade/Especificidade
Plano de Validao
Elemento de validao
- prepare 5 rplicas de placebo
- mede 3 x cada
Tarefa experimental
- Concentrao equivalente do placebo
- mdia, SD e RSD%
Clculos
- mdia

33% do LOQ (mtodo)

- RSD

15%
Critrios de aceitao
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BF&A_ 14
Tpicos em Validao de Mtodos
I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
4. Preciso (repe e repro)
Plano de Validao
Elemento de validao
- prepare 5 rplicas de placebo (2 labs mnimo)
- fortifique com 100% LOQ
- mede 3 x cada
Tarefa experimental
- RSD 15%
- 80 % recuperao 120
Critrios de aceitao
- % de recuperao
- mdia, SD e RSD%
- teste de significncia de Fisher
Clculos
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BF&A_ 15
Tpicos em Validao de Mtodos
I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
5. LOQ e LOD
Plano de Validao
Elemento de validao
- prepare 5 rplicas de placebo
- fortifique 100% TD
- mede 3 x cada
Tarefa experimental
- 80 % recuperao 120
- RSD (mdio) 15%
Critrios de aceitao
- % recuperao
- mdia, SD e RSD%
- LOD e LOQ (mtodo)
Clculos
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BF&A_ 16
Tpicos em Validao de Mtodos
I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
6. Robustez*
Plano de Validao
Elemento de validao
Tarefa experimental
- Nas 12 rplicas do placebo e 5 nveis de
soluo padro, medidas 3 x cada.
*Planejamento experimental (arranjo fatorial) minimiza esforos e promove
informaes quanto a robustez.
Variaes intencionais
- nvel de treinamento do tcnico,
- diferentes dias,
- diferentes fornecedores,
- diferentes laboratrios,
- pequenas mudanas nas etapas do mtodo
- etc.
Clculos
- dependem das variaes
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BF&A_ 17
Tpicos em Validao de Mtodos
I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
Testes Estatsticos
Usados para facilitar a tomada de decises, evitando as subjetivas, os
mais comuns so:
Student
Distribuio normal dos valores experimentais Linearidade e Faixa,
Robustez
Cochran
Testa a homogeneidade (varincia) dos dados Linearidade e Faixa,
Exadido, Preciso
Dixon
Descobre dados outliers se o teste de Cochram for falso Linearidade e
Faixa, Exadido, Preciso
Fischer
Compara a varncia de duas populaes Linearidade e Faixa, Exadido,
Preciso, Robustez
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BF&A_ 18
Tpicos em Validao de Mtodos
I Escola Avanada de Metrologia em Qumica Nov/2003
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x
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n
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r
Inclinao
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LoQ
LoD
S/N > 10 e RSD < 10%
S/N > 3
u
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u. de Concentrao
Interseo
b
LOD e LOQ
Y
L
= y
B
+ k * S
B
Y
L
a menor leitura diferente do branco, y
B
a mdia das medidas do branco, S
B
o desvio
padro do branco e k fator (2,3, etc..)
IUPAC
LD = 3 * S / a * C LQ = 10 * S / a * C
Referncia
S o desvio padro da medida, a a inclinao da curva de calibrao e C a concentrao usada