Apostila Pratica2012

UNIVERSIDADE DE SO PAULO
Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz

Departae!to de "i#!cias $iol%gicas
RO&EIRO DE AULAS PR'&I"AS
$IOQU()I"A
PRO*+ DR+ DANIEL S,ERER DE )OURA
PRO*A+ DRA+ ,ELAINE "ARRER
PRO*+ DR+LUI- AN&ONIO .ALLO
PRO*+ DR+ LUI- "ARLOS $ASSO
PRO*+ DR+ )URILO )ELO
Piracica/a 0 SP
1231
1
SU)ARIO
ASSUNTO pg
Normas para redao do relatrio de aulas prticas
de Bioqumica 03
Colorimetria e spectro!otometria 0"
#etermi$ao de Aucares %edutores &0
Cromatogra'a em (apel de )iltro *&
#etermi$ao de (rote$as +reao do ,iureto- *.
#etermi$ao da Co$sta$te de /ic0aelis +1m- e da
2elocidade m3ima +2m- de uma $4ima5 30
%eao de 6ill +)otlise da gua- 3"
%edutase de Nitrato em (la$tas 3.
7istas de 3erccios "0
2
NOR)AS PARA REDA4O DO RELA&5RIO DE AULAS PR'&I"AS DE
$IOQU()I"A L"$ 126
7OP"IONAL8
A 9ora para se redigir o relat%rio de:e ser respeitada; ua :ez
<ue a a:alia=>o do eso ? 9eita de acordo co esta
orie!ta=>o+ Assi todo relat%rio de:era co!ter os segui!tes
ite!s@
"APA
De:era ter@ Noe da ESALQ+ Depto de "i#!cias $iol%gicas
Relat%rio de aulas prAticas de $io<uBica
&Btulo da aula 7!uero da aula8
Noe e !Cero dos alu!os
Data 7dDDa8
O$EE&IVOS
IN&RODU4O
"oe!tArio da aula; i!clui!do coparati:ae!te os
9u!dae!tos <uBicos da etodologia epregada
REVISO DE LI&ERA&URA
Aspectos te%ricos e i!9orati:os do assu!to da aula pratica
e!co!trados !a literatura
)A&ERIAL E )F&ODOS 7PRO"EDI)EN&OS8
Descre:er os procedie!tos eGecutados e aula; i!clusi:e as
odiHca=Ies propostas pelo pro9essor
RESUL&ADOS E DIS"USSO
"olocar e ta/elas os resultados o/tidos; grAHcos; etc+ As reta
padr>o soe!te ser>o aceitas se 9ore 9eitas e papel
ilietrado+ "oe!tar os resultados copara!do0os co os da
literatura
"ON"LUSO
"oe!tar <uais as co!clusIes da aula pratica+ Ser claro e
o/Jeti:o !as co!clusIes+ Alguas poucas li!Kas s>o suHcie!tes+
Esclarecer se os o/Jeti:os propostos 9ora ati!gidos ou !>o+
$I$LIO.RA*IA "ONSUL&ADA
3
Aula Pratica NL 3 @ "OLORI)E&RIA E ESPE"&RO*O&O)E&RIA
&5 O$EE&IVOS
#osage$s de esp8cies qumicas media$te a a,soro de lu45
*5 *UNDA)EN&OS
A Colorimetria e a spectro!otometria podem ser co$ceituadas como
um procedime$to a$altico atra98s do qual se determi$a a co$ce$trao de
esp8cies qumicas media$te a a,soro de e$ergia radia$te +lu4-5
A lu4 pode ser e$te$dida como uma !orma de e$ergia: de $ature4a
o$dulatria: caracteri4ada pelos di9ersos comprime$tos de o$da +: e3pressos
em m ou $m- e que aprese$ta a propriedade de i$teragir com a mat8ria:
se$do que parte de sua e$ergia 8 a,sor9ida por el8tro$s da eletros!era dos
tomos co$stitui$tes das mol8culas5
Uma soluo qua$do ilumi$ada por lu4 ,ra$ca: aprese$ta uma cor que 8
resulta$te da a,soro relati9a dos 9rios comprime$tos de o$da que a
comp;em5 sta a,soro: em cada comprime$to de o$da: depe$de da
$ature4a da su,st<$cia: de usa co$ce$trao e da espessura da mesma que 8
atra9essada pela lu45
*igura 3= spectro de radiao eletromag$8tica: com destaque para a
regio do 9is9el5
4
Ta,ela & > Comprime$to de o$da apro3imado das cores

"or "oprie!to
de o!da 7!8
"or "oprie!to de
o!da 7!8
Ultra:iolet
a
?"00 Aarelo @.0A@B0
Violeta "00A"@0 Alara!Jado @B0AC*0
Azul "@0A@00 VerelKo C*0A.C0
Verde @00A@.0 I!9ra:erelKo D.C0
*igura 1@ O espectro de radiao eletromag$8tico e sua comparao
com o,Eetos
A Lei de La/ert0$eer= A lei di4 que a a,sor,<$cia 8 proporcio$al F
co$ce$trao da esp8cie qumica a,sor9e$te: se$do co$sta$tes o
comprime$to de o$da: a espessura atra9essada pelo !ei3e lumi$oso e demais
!atores5 2eri'caAse uma relao li$ear e$tre a,sor,<$cia ou de$sidade tica
e co$ce$trao: e de uma relao logartmica e$tre tra$smit<$cia e
co$ce$trao5
5
Io I
b

cG co$ce$trao da esp8cie qumica a,sor9e$te
,G espessura atra9essada pelo !ei3e lumi$oso
H
o
G i$te$sidade de lu4 i$cide$te
HG i$te$sidade de lu4 emerge$te +tra$smitida-

H ? H
o

Ho
A, G #5O5 G 15,5c G log +a,sor,<$cia ou de$sidade tica-
H

A G A log T G A log H I Ho G log Ho I H

A Tra$smit<$cia ou Tra$smisso +TJ-: correspo$de a=

H
Ho H T G &00
&00 T
H
o

H T

Ho &00
como:
G
: temos que = G

Ho

&00

H

T

Ho

&00
porta$to: log G log

H

T
logo: A, G log &00 A log T
*otocolorBetro@
*igura M @ squema de um !otocolorimetro +espectro!otKmetro-
6
Ab = 2 log T
M+ )A&ERIAL E )F&ODOS
M+3+ E<uipae!tos e Vidrarias
A spectro!otKmetro com cu,etas
A (ipetas de @ m7 graduadas
A sta$te com tu,os de e$saio
M+1+ Reage!tes
A Alara$Eado de /etila= Co$ce$trao= LLLLLL
A A4ul de Bromo!e$ol = Co$ce$trao= LLLLLL
M+M+ Procedie!to@
A+ "oleta de dados para a co!stru=>o do espectro de a/sor=>o do
Alara$Eado de /etila ou do A4ul de Bromo!e$ol +um composto para cada
grupo-5
Usa$do gua destilada como re!erM$cia: e!etuar as leituras de A,sor,<$cia
+ou #5O5- do Alara$Eado de /etila + $os segui$tes comprime$tos de o$da= "00:
"*0: ""0: "C0: "N0: @00: @*0: @@0: C00: C@0 e .00 $m- e o A4ul de
Bromo!e$ol +$os segui$tes comprime$tos de o$da= "00: ""0: "B0: @*0: @"0:
@C@: @N0: @B0: C*0: CC0 e .00 $m-
*igura N > 3emplo de espectro de a,soro de uma amostra
7
(ree$c0er os dados da ta,ela & a,ai3o: de acordo com o cora$te escol0ido
pelo grupo=
"ORAN&E@ ALARANEADO DE )E&ILA
7!)8 Leitura
&7O8
A/sor/P!c
ia
"00
"*0
""
"C0
"N0
@00
@*0
@@0
C00
C@0
.00
"ORAN&E@ A-UL DE $RO)O*ENOL
7!)8 Leitura
& 7O8
A/sor/P!ci
a
"00
""0
"B0
@*0
@"0
@C@
@N0
@B0
C*0
CC0
.00
Utili4a$do os dados da ta,ela acima preparar um gr'co + 3 G comprime$to
de o$da $m -e +O G leitura em a,sor,<$cia-: e$co$tra$do qual o comprime$to
de o$de re!ereAse ao pico de a,soro do cora$te usado em aula5
A/s

Pual o comprime$to de o$da correspo$de$te ao pico de a,soro do seu
cora$teQ LLLLLLLLLLLL$m
$+ Deo!stra=>o da Lei de La/ert0$eer@
(reparar C tu,os de e$saio +e$umerados de 0 a @- co$!orme o quadro que se
segue +Ta,ela *-R o tu,o $
o
C estar co$te$do soluo do cora$te com
co$ce$trao desco$0ecida: a qual de9er ser determi$ada atra98s da 7ei de
7am,ertABeer5
&a/ela 1@
&U$O
7N
o
8
'.UA
7L8
"ORAN&E
Q
7L8
"ON"EN&RA4
O O$&IDA
7gDL8
&RANS)I&RN"I
A
7&O8QQ
A$SOR$RN"IA
7A/s ou D+O+8
8
0 @ 0
& " &
* 3 *
3 * 3
" & "
@ 0 @
C @ m7 $co$trar $o
gr'co
S Alara$Eado de /etila ou A4ul de Bromo!e$ol
SS 7eituras e!etuadas $o comprime$to de o$da que correspo$de ao pico de
a,soro do composto + ma3-5
N+ RESUL&ADOS A SERE) APRESEN&ADOS NO RELA&5RIO@
"5&5 Ta,ela de leitura do cora$te completa$do os 9alores de a,sor,<$cia
atra98s de ta,ela ou clculo5
"5*5 Co$struir um gr'co da A,sor,<$cia +A,s- em !u$o do comprime$to de
o$da +- e determi$ar o pico de a,soro +ma3- do composto estudado5
"535 Completar a ta,ela * calcula$do as co$ce$tra;es do cora$te $os
di9ersos tu,os
"5"5 Co$struir um segu$do gr'co aprese$ta$do as 9aria;es de #e$sidade
Ttica +#5O5- ou A,sor,<$cia +A,s- em !u$o da co$ce$trao da esp8cie
qumica a,sor9e$te e um terceiro gr'co aprese$ta$do as 9aria;es de
Tra$smit<$cia em !u$o da co$ce$trao5

"5@5 Aprese$tar o 9alor da co$ce$trao do cora$te $o tu,o C media$te
i$terpolao da leitura de Tra$smita$cia +T 3 co$ce$trao- e A,sor,<$cia
+A,s 3 co$ce$trao-$o gr'co5
A/s
S+ AN'LISES DOS RESUL&ADOS E "ON"LUSTES
#iscutir os resultados e listar as co$clus;es o,tidas dura$te os e3perime$tos
reali4ados em classe5
U+ $I$LIO.RA*IA
7istar as re!erM$cias ,i,liogr'cas utili4adas para preparar o relatrio5
*u!dae!tos de $io<uBica EGperie!tal A Uose %aul Cister$as: Uose
2arga e Osmar /o$te5 d5 At0e$eu &BBB: *.C pg5
)?todos de La/orat%rio e $io<uBica > Adelar Brac0t e mO 7ui4a Hs0iiA
HVamoto5 d5 /a$ole: *003 "3B pg5
9
Transmitncia
Concentrao Concentrao
Aula Pratica NL 1 @ DE&ER)INA4O DE A4U"ARES REDU&ORES
+/WTO#O # SO/OXY Z N7SON-
3+ O$EE&IVO
Pua$ti'car o teor de lactose em amostra de leite pelo m8todo de SomogOA
Nelso$5
1+ IN&RODU4O
O 7eite= O leite 8 uma com,i$ao de di9ersos eleme$tos slidos em
gua5 Os eleme$tos slidos represe$tam apro3imadame$te &* a &3J do leite
e a gua: apro3imadame$te N.J5 Os pri$cipais eleme$tos slidos do leite so
lipdios +gordura-: car,oidratos: prote$as: sais mi$erais e 9itami$as5 sses
eleme$tos: suas distri,ui;es e i$tera;es so determi$a$tes para a
estrutura: propriedades !u$cio$ais e aptido do leite para processame$to5 As
micelas de case$a e os gl,ulos de gordura so respo$s9eis pela maior
parte das caractersticas !sicas +estrutura e cor- e$co$tradas $os produtos
lcteos5
Os termos slidos totais +ST- ou e3trato seco total +ST- e$glo,am todos os
compo$e$tes do leite e3ceto a gua5 (or slidos $o gordurosos +SNX- ou
e3trato seco dese$gordurado +S#- compree$demAse todos os eleme$tos do
leite: me$os a gua e a gordura5
Os compo$e$tes do leite perma$ecem em equil,rio: de modo que a relao
e$tre eles 8 muito est9el5 O co$0ecime$to dessa esta,ilidade 8 a ,ase para
os testes que so reali4ados com o o,Eeti9o de apo$tar a ocorrM$cia de
pro,lemas que alteram a composio do leite5 Uma reduo su,sta$cial da
co$ce$trao de lactose ou dos slidos totais poderia le9a$tar suspeitas de
adio !raudule$ta de gua: aps a orde$0a5 Nesse caso: ocorrem altera;es
das propriedades !sicas do leite: !acilme$te detect9eis em la,oratrio5
A composio do leite pode 9ariar de acordo com o estgio de lactao= $o
colostro: o co$te[do de prote$a 8 maior e o de lactose e$co$traAse redu4ido5
Outros !atores que podem i$ter!erir $a composio do leite so= raa das
9acas: alime$tao +pla$o de $utrio e !orma !sica da rao-: temperatura
am,ie$te: ma$eEo e i$ter9alo e$tre as orde$0as: produo de leite e i$!eco
da gl<$dula mamria5
O leite 8 o alime$to mais completo de que se pode dispor: de9e$do ser
tomado pelas cria$as: Eo9e$s e adultos5
(ara que se te$0a ,oa sa[de e crescime$to $ormal 8 i$dispe$s9el tomar
leite todos os dias: $as segui$tes qua$tidades=
A Cria$as 555555555555555555555555555555555555555555555555555555 3 a " copos por dia
A Adultos 55555555555555555555555555555555555555555555555555555555 * a 3 copos por dia
A Se$0oras em gestao ou amame$tao55555555 " a C copos por dia
O leite !a4 ,em F sa[de porque=
A AEuda o crescime$toR
A Co$tri,ui para a !ormao dos ossos: m[sculos e de$tes !ortesR
A %egula o sistema $er9osoR
A Aume$ta a resistM$cia Fs doe$as i$!ecciosasR
A #esperta o apetiteR
A )acilita a digestoR
A AEuda a pessoa a se co$ser9ar alegre e disposta para o tra,al0o5
O leite: em,ora traga todos esses ,e$e!cios: poder tam,8m causar muito
mal se $o ti9er o $ecessrio cuidado com ele dura$te a orde$0a: $o
tra$sporte e $a sua co$ser9ao posterior= $a usi$a de ,e$e'ciame$to: $as
!,ricas: $o com8rcio e $a distri,uio5
DeH!i=>o do leite
6 di9ersas de'$i;es do leite: cada uma delas !eita por um ou mais
10
estudiosos do assu$to e co$sidera$do o leite so, determi$ado po$to de 9ista5
(ara o $osso caso 9amos co$siderar ape$as uma de'$io: isto 8: so, o po$to
de 9ista 0igiM$ico=
\7eite 8 o produto $tegro da orde$0a total e sem i$terrupo: de uma !Mmea
leiteira sadia: ,em alime$tada: desca$sada: de9e$do ser orde$0ado e
aco$dicio$ado em co$di;es 0igiM$icas e sem co$ter colostro]5
"olostro
O colostro 8 o leite produ4ido $os primeiros dias aps o parto5 Tem
composio di!ere$te do leite $ormal e $o de9e ser usado $a alime$tao
0uma$a: e $em $o !a,rico de produtos de latic$ios: pri$cipalme$te de
queiEos5 No e$ta$to: $o pode dei3ar de ser dado aos ,e4erros rec8mA
$ascidos: pois sua composio especial protege a sa[de do a$imal e 8 um
,om la3ati9o5
"aractesrBsticas orga!ol?pticas
$te$deAse por caractersticas orga$ol8pticas do leite o que se pode perce,er
pela 9iso: ol!ato e paladar5 Com estes trMs se$tidos podeAse o,ser9ar o
aspecto: a cor: o c0eiro e o sa,or do leite5
O leite /o te@
Aspecto: lquido: 0omogM$eo +,em misturado-: limpo +$o co$t8m su,st<$cias
estra$0as-5 Xeralme$te !orma uma camada de gordura $a super!cie qua$do
dei3ado em repouso5
Cor: cor ,ra$ca: meio amarelada5
Odor: sua9e: le9eme$te cido: e lem,ra mais ou me$os o a$imal que o
produ4iu5
Sabor= le9eme$te adocicado e agrad9el5
CO/(OSH^_O #O 7HT # #H)%NTS S(WCHS
sp8cies #e$sidade `gua (rote$as Xordura 7actose 3trato seco Sais
/i$erais
/ul0er &503& NN:&* &:B0 ":@0 @:30 &&:NN
0:&N
Wgua &503& NN:N0 *:.0 *:@0 @:@0
&&:*0 0:@0
Ca,ra &503* N.:@" 3:.0 ":*0 ":00 *:"C
0:@C
O9el0a &503N N0:"& C:@* C:NC @:*3 &B:@B
0:BN
Uume$ta &5033 B0:"@ &:.0 &:@@ @:N0 B:@@
0:@0
B[!ala &503" N*:0@ ":00 .:BN @:&N &.:B@
0:.B
2aca &5030 N.:*@ 3:@0 3:N0 ":N0 &*:.@
0:C@
O leite: em co$di;es $ormais: tem em m8dia os segui$tes compo$e$tes=
A `gua55555555555555555555555555555555555555555555555555555555555 N.:*@J
A 3trato seco +ou slidos-555555555555555555555555555555 &*:.@J
O e3trato seco 8 co$stitudo dos segui$tes eleme$tos=
A Xordura5555555555555555555555555555555555555555555555555555555555 3:N0J
A (rote$as55555555555555555555555555555555555555555555555555555555 3:@0J
A 7actose +a[car-5555555555555555555555555555555555555555555555 ":N0J
A Sais /i$erais555555555555555555555555555555555555555555555555555 0:C@J
A composio do leite pode 9ariar de acordo com os segui$tes !atores=
a- %aa
11
,- (erodo de lactao
c- Alime$tao
d- Sa[de
e- (erodo de cio
!- Hdade
g- Caractersticas i$di9iduais
0- Clima
i- spao e$tre as orde$0as
E- stao do a$o
Descri=>o dos copo!e!tes
'gua@ 8 o compo$e$te que e3iste $o leite em maior qua$tidade: o$de se
e$co$tram dissol9idos: suspe$sos ou emulsio$ados os demais compo$e$tes5
A gua comum 8 igual a gua do leite em todos os se$tidos5 Hsto 8:
praticame$te pro9ado qua$do se dissol9e leite em p $a gua e se o,t8m o
leite lquido com algumas modi'ca;es peque$as $os slidos5
.ORDURA @ 8 o compo$e$te que d ao leite cor amarelada5 A gordura 8 um
dos compo$e$tes mais ricos do leite5 A mat8ria gorda do leite !orma uma
emulso relati9ame$te est9el: co$stituda por gl,ulos de peque$os
di<metros: ,em distri,udos: que & milmetro c[,ico de leite co$t8m & a @
mil0;es de gl,ulos5 Os gl,ulos so co,ertos por uma mem,ra$a protetora5
A ,atedura do creme resulta$te do des$ate do leite: rompe a mem,ra$a
protetora e permite a u$io dos gl,ulos para !ormar a ma$teiga 5 Cada
gl,ulo 8 e$9ol9ido por uma camada !ormada por um compo$e$te da gordura
de$omi$ado !os!olipdio5 ssa camada !orma uma mem,ra$a que impede a
u$io de todos os gl,ulos5 #esse modo: a gordura do leite 8 ma$tida $a
!orma de suspe$so5
A maior parte da gordura do leite 8 co$stituda de triglicerdios: que so
!ormados por cidos gra3os ligados ao glicerol5 A gordura do leite est
prese$te em !orma de peque$os gl,ulos em suspe$so $a gua5 A !rao de
gordura do leite ser9e de 9eculo para as 9itami$as lipossol[9eis +A: #: : 1-:
colesterol e outras su,st<$cias sol[9eis em gordura: como os carote$ides
+pro9itami$a A-: que do ao leite sua cor amarelo creme5
A co$ce$trao de gordura $o leite 9aria geralme$te e$tre 3:@ e @:3J: em
ra4o de di!ere$as e$tre raas: estgio da lactao e de acordo com a
alime$tao dos a$imais5
A gordura pode ser retirada do leite por processo $atural: retira$doAse a $ata
que so,e F super!cie qua$do o leite 'ca em repouso: isto porque 8 mais le9e
que os outros compo$e$tes do leite: ou pelo processo do des$ate: atra98s de
mqui$a de$omi$ada des$atadeira5 W o que se c0ama de des$ate do leite5 A
gordura se separa em !orma de creme5
Eprego i!dustrial da gordura@
a- )a,ricao de ma$teigaR
,- )a,ricao de creme de mesaR
c- )a,ricao de queiEoR
d- )a,ricao de creme c0a$titOR
e- )a,ricao de sor9etes: etc555
PRO&E(NAS
As prote$as represe$tam e$tre 3J e "J dos slidos e$co$trados $o leite5 A
porce$tagem de prote$a 9aria: de$tre outros !atores: com a raa e 8
proporcio$al F qua$tidade de gordura prese$te $o leite5 Hsso sig$i'ca que
qua$to maior a perce$tagem de gordura $o leite: maior ser a de prote$a5
3istem 9rios tipos de prote$a $o leite5 A pri$cipal delas 8 a case$a: que
aprese$ta alta qualidade $utricio$al e 8 muito importa$te $a !a,ricao dos
queiEos5 A case$a 8 produ4ida pelas c8lulas secretoras da gl<$dula mamria e
12
e$co$traAse orga$i4ada $a !orma de micelas: que so agrupame$tos de 9rias
mol8culas de case$a Eu$to com clcio: !s!oro e outros sais5 Cerca de B@J da
case$a total do leite est $essa !orma5 As micelas de case$a Eu$to com os
gl,ulos de gordura so respo$s9eis por gra$de parte das propriedades
relati9as F co$sistM$cia e F cor dos produtos lcteos5
A case$a $o 8 !acilme$te alterada pelo calor: perma$ece$do ,asta$te
est9el qua$do o leite 8 pasteuri4ado5 $treta$to: qua$do ocorrem muda$as
$a acide4 do leite: 0 rompime$to da estrutura das micelas: o que !a4 a
case$a precipitar e !ormar cogulos5 A gordura e a case$a tMm import<$cia
!u$dame$tal para a ma$u!atura de 9rios deri9ados lcteos: se$do que
represe$tam a maior co$ce$trao de eleme$tos slidos dos queiEos5 As
prote$as do ao leite a cor es,ra$quiada opaca5 W !cil de se co$0ecer as
prote$as do leite: pois so elas as pri$cipais !ormadoras de massa ,ra$ca
qua$do o leite coagula: e 8 ma$ipulado para !a,ricar queiEos5
As prote$as do leite so !ormadas de=
A Case$a +maior parte-R
A Al,umi$a e glo,uli$a5
A case$a 8 !ormada por uma soluo coloidal co$stitui$doAse $a maior parte
de mat8ria a4otada do leite5 W um dos compo$e$tes mais [teis do leite5
O,t8mAse a case$a propriame$te dita= pela precipitao $atural do leite:
!erme$tao ltica e pela coagulao com au3lio de coal0os +e$4ima- e
cidosA!erme$to ltico: etc555
A import<$cia i$dustrial da case$a est $a= !a,ricao de queiEos: case$a
propriame$te dita e leite em p associado a outros compo$e$tes do leite5
A al,umi$a: de$omi$ada tam,8m de lactoAal,umi$a: 8 sol[9el $a gua: $o
se coagula pelo coal0o: mas pelo calor e pelos cidos5 Pua$do se !a,rica
queiEos: a al,umi$a sai Eu$to com o soro5 ste soro 8 apro9eitado para !a4er
ai$da outro queiEo: a %icota: o,tido pelo aquecime$to do soro e adio de
cido ltico: !erme$to ltico ou ai$da soro cido a B0a#5
As prote$as e3iste$tes $o leite aprese$tamAse $as segui$tes perce$tage$s
m8dias= 3:0J: lactoAal,umi$a 0:@J5 stas perce$tage$s so muito mais '3as
que as re!ere$tes a gordura5
"AR$OIDRA&OS
O pri$cipal car,oidrato do leite 8 a lactose5 W produ4ida pelas c8lulas epiteliais
da gl<$dula mamria e 8 a pri$cipal !o$te de e$ergia dos rec8m $ascidos5
Al8m da lactose: podem ser e$co$trados $o leite outros car,oidratos: como a
glicose e a galactose: mas em peque$as qua$tidades5
A lactose compree$de apro3imadame$te @*J dos slidos totais do leite
des$atado e .0J dos slidos e$co$trados $o soro do leite5 Co$trola o 9olume
de leite produ4ido: atrai$do a gua do sa$gue para equili,rar a presso
osmtica $a gl<$dula mamria5 A qua$tidade de gua do leite e:
co$seqbe$teme$te: o 9olume de leite produ4ido pela 9aca: depe$de da
qua$tidade de lactose secretada $a gl<$dula mamria5 A co$ce$trao de
lactose $o leite 8 de apro3imadame$te @J +":. a @:*J-5 W um dos eleme$tos
mais est9eis do leite: isto 8: me$os suEeito a 9aria;es5
A lactose 8 o a[car do leite: se$do praticame$te o [$ico que $ele e3iste e se
aprese$ta $o leite de todos os mam!eros5 (orta$to: 8 a respo$s9el pelo
gosto adocicado do leite5
H$dustrialme$te: por8m: a !erme$tao da lactose: por ao micro,ia$a:
ocupa lugar de maior destaque5 Um $[mero ele9ado de microrga$ismos
tra$s!orma a lactose em cido ltico5 Uma mol8cula de lactose tra$s!ormaAse
em " mol8culas de cido ltico5 No leite a acidi'cao $atural 8 um !ato de
o,ser9ao corre$te5 m muitos casos a !erme$tao da lactose com a
acidi'cao do leite 8 um !e$Kme$o de9idame$te co$trolado e dirigido: 8
apro9eitado $a i$d[stria de latic$ios para o,te$o de di9ersos produtos
13
deri9ados do leite= iogurte: leite acid'lo: queiEos: requeiE;es: cido ltico:
case$as e etc555
mprego i$dustrial da lactose=
a- preparo de leite mater$i4adosR
,- preparo de produtos !armacMuticosR
c- em la,oratrios de micro,iologia > meios de culturaR
d- $a !a,ricao de queiEos +como compo$e$te $atural do leite-5
SAIS )INERAIS E VI&A)INAS
O leite 8 uma !o$te e3cele$te da maioria dos sais mi$erais $ecessrios para o
dese$9ol9ime$to dos i$di9duos Eo9e$s5 O clcio e o !s!oro do leite
aprese$tam alta dispo$i,ilidade: em parte porque se e$co$tram associados F
case$a5 (or isso: o leite 8 a mel0or !o$te de clcio para o crescime$to do
esqueleto dos i$di9duos Eo9e$s e para a ma$ute$o da i$tegridade dos
ossos dos adultos5 O co$te[do de !erro 8 ,ai3o5
O leite 8 uma importa$te !o$te de 9itami$as: algumas se associam com a
gordura +A: #: e 1-: e$qua$to outras se associam com a parte aquosa5
#e$tre as [ltimas: esto as do comple3o B e a 9itami$a C5 /ais de de4
9itami$as di!ere$tes do comple3o B so e$co$tradas $o leite5 $treta$to: com
e3ceo da 9itami$a B
*
+ri,oca9i$a-: as outras so e$co$tradas em
qua$tidades peque$as5 As 9itami$as do comple3o B so produ4idas $o
estKmago composto +r[me$- dos a$imais5
O leite 8 uma !o$te importa$te de 9itami$a C +cido ascr,ico-: mas esta 8
rapidame$te o3idada $a prese$a de co,re em um produto ,iologicame$te
i$ati9o5
Sais i!erais@ $o leite e3istem pri$cipalme$te !os!atos: citratos: car,o$ato
de sdio: clcio: potssio e mag$8sio5 A ao 'siolgica dos di!ere$tes sais do
leite 8 importa$te: pri$cipalme$te do !os!ato de clcio: $a !ormao de ossos
e de$tes5 #a a $ecessidade de se alime$tar as cria$as com maior
qua$tidade de leite5
Vitai!as@ o leite co$stitui uma larga !o$te para !or$ecime$to de 9itami$as
$ecessrias ao orga$ismo5 So e$co$tradas $o leite as segui$tes 9itami$as=
a) Vitamina A
A 9itami$a A 8 relati9ame$te a,u$da$te $o leite: estritame$te associada F
gordura: mas o seu teor 8 muito 9ari9el: te$do como !u$o ,sica a
alime$tao 9erde !or$ecida ao gado +pastagem-R
b) Complexo B
2itami$a B& e3iste $o leite em propor;es 9ari9eis: cerca de .@0 miligramas
por litro: os quais .@J das $ecessidades 0uma$as desta 9itami$a5
2itami$a B*: ri,oca9i$a: desempe$0a papel importa$te $as !erme$ta;es: $a
produo dos aromas caractersticos $a ma$teiga pela !ormao de diacetil:
est prese$te $o leite $uma proporo em tor$o de & mg por litro: qua$tidade
que co,re ,oa parte das $ecessidades 0uma$as5
2itami$a B" desempe$0a ao coA!erme$to $a !erme$tao ltica5
2itami$as BC e B&* so outros compo$e$tes do comple3o B prese$tes
regularme$te $o leite: em qua$tidades que e3ercem um papel 'siolgico
importa$te5
c) Vitamina C
O leite co$stitui a !o$te mais rica de 9itami$a C de origem a$imal: e$co$traAse
14
$ele $a proporo de &0 a *0 mg por litro5 As $ecessidades 0uma$as so de
@0 a .0 mg por dia5
d) Vitamina D
O leite: de modo geral: $o 8 muito rico $esta 9itami$a: pois co$t8m ape$as &
a * miligramas por litro5 Co$sideraAse que as $ecessidades alime$tares so de
umas &0 miligramas5 A irradiao do leite pelos raios ultra9ioleta aume$ta
e3traordi$ariame$te o seu teor de 9itami$a #: at8 &5000 a *5000 9e4es5
e) Vitamina E
Se e$co$tra associada F gordura do leite: mas em qua$tidade i$su'cie$te
para ate$der as $ecessidades 0uma$as de & mg diariame$te
f) Vitamina K
Tem sido e$co$trada em qua$tidades 9ari9eis: mas 8 comum estar prese$te
$o leite5 Assim: podeAse a'rmar que o leite $ormal co$ta com todos os
eleme$tos 9itam$icos $ecessrios a uma ,oa $utrio5
Uma dieta e3clusi9ame$te lctea pode assegurar per!eito dese$9ol9ime$to
aos mam!eros por perodos relati9ame$te lo$gos5
&ipos de Leite@
7eites casei$osos A leite em que a qua$tidade de case$a 8 muito superior Fs
qua$tidades de al,umi$a e glo,uli$a +9aca: ca,ra e o9el0a-R
7eites al,umi$osos > leite em que a proporo e$tre a al,umi$a e glo,uli$a 8
quase igual F case$a +mul0er: as$a e 8gua-R
"lassiHca=>o do Leite 0 "ategorias de leite a!ial coercializado
Leite tipo A
Orde$0a de leite mec<$ica
7eite in natura: 8 retirado pela orde$0a mec<$ica e 9ai direto para um ta$que:
o$de 8 aquecido at8 .0A.@ graus Celsius e depois res!riado5 sse processo
de$omi$aAse pasteuri4ao: em seguida 9ai para a mqui$a em,aladora5
Pua$to a composio: a di!ere$a e$tre o A e o B 8 ,em peque$a5 Os dois so
praticame$te i$tegrais5 O tipo A tem mais gordura e me$os prote$a que o
tipo B5
O leite tipo A dura mais que o tipo B por ter uma qua$tidade me$or de
,act8rias5
Leite tipo $
As 9acas perma$ecem em est,ulos: o que aEuda $a ma$ute$o das
co$di;es de 0igie$e5 Assim como $o leite tipo A: a orde$0a de9e ser
mec<$ica5 O local de arma4e$ame$to 8 mais so'sticado do que o tipo C5
(ermite uma re!rigerao a temperaturas mais ,ai3as: e$tre 3:@ a "d graus
ce$tigrados5 A meca$i4ao co$tri,ui para a e3celM$cia $a e3trao do leite
tipo B5
m 9erdade a di!ere$a: est $a qua$tidade de gordura e prote$as
co$sta$tes $o leite tipo B5
Leite tipo "
A orde$0a pode ser ma$ual ou mec<$ica e as 9acas 'cam soltas $o pasto5 O
leite 8 arma4e$ado em a,rigos r[sticos: mas re!rigerados: a$tes de seguir
para a usi$a o$de ser em,alado5 Aprese$ta um teor de gordura de
apro3imadame$te 3J5 As usi$as utili4am o resta$te para produ4ir ma$teiga:
queiEo e deri9ados5
Variedades de leite
#e 9aca: ou ,o9i$o 8 largame$te utili4ado $a alime$tao 0uma$a: e
rico em 9itami$a A e clcio5
15
#e ,[!ala: muito apreciado e mais gorduroso que o leite ,o9i$o5
#e ca,ra: muito comum $o Nordeste ,rasileiro: se$do o tipo de leite
mais co$sumido $o mu$do5
#e camela: muito apreciado e$tre os ,edu$os: po9o $Kmade do $orte
de `!rica5
#e 8gua: co$sumida $a `sia Ce$tral: utili4ada $a !a,ricao da ,e,ida
1umis5
Tabela 2. Composio mdia (%) do leite de diferentes raas de bovinos leiteiros.
Raa Gordura Protena Lactose Cinas !"lidos#
$%rs&ire '()* '(+* +(,- *(., ,(,)
Pardo !uio '('* '(** /(*, *(01 ,(,*
Guernse% '(.* '(1* +(). *(0+ ,()*
2oland3s '(+* '(1* +(,0 *(., ,(0/
4erse% +(+* '(.* /(** *(0* )('*
# !"lidos desen5ordurados
6onte 7 2$RR8! 9 :$C2;$<( -),,.
Leite Kua!o
#esig$aAse por leite ater!o o leite produ4ido pelas mul0er e que 8
utili4ado para alime$tar os ,e,es5 O leite mater$o 8 a primeira e pri$cipal
!o$te de $utrio dos rec8mA$ascidos at8 que se tor$em aptos a comer e
digerir os alime$tos slidos5
Tem caractersticas 9ariadas depe$de$do da idade gestacio$al do
rec8mA$ascido e cro$olgica do rec8mA $ascido e da durao da
amame$tao em si5
W produ4ido pela me de um rec8mA$ascido prematuro ou $o: possui
gra$de qua$tidade de imu$oglo,uli$as +Ga$ticorpos-5
Nos primeiros dias de idade o leite tem caractersticas ,em di!ere$tes:
co$te$do pouca gordura e mais imu$oglo,uli$as: 8 o c0amado colostro5
$tre os 0uma$os: 8 ,asta$te comum que a me te$0a pouco leite logo
aps o parto: pri$cipalme$te se !or seu primeiro 'l0o5 A edescidae do
leite pode demorar at8 u$s quatro dias e 8 co$0ecida como apoEadura5
*UNDA)EN&O DO )F&ODO
QuBica do leite
A=ucares redutores= Os a[cares redutores possuem grupos aldedos e
ceto$as li9res $a cadeia e so c0amados redutores por atuarem como age$tes
redutores: isto 8:que so!rem o3idao +doam el8tro$s-5 A[cares $o
redutores +como a sacarose- possuem esses grupame$tos i$terligados e
tor$amAse redutores a partir do mome$to em que so!rem 0idrlise+que,ra-5
Lactose +Xalactose fA&:" glucose- 8 um tipo de glicdio5 W o a[car prese$te
$o leite e seus deri9ados5 Os a[cares so !ormados por u$idades c0amadas
sacardeos5 A lactose 8 !ormada por duas dessas u$idades: a glicose e a
galactose: se$do: porta$to: um dissacardeo5
O leite 0uma$o co$t8m de CANJ de lactose e o de 9aca: de "ACJ5 sta 8
0idrolisada pela ao da lactase: uma ,etaAgalactosidase se$do co$siderada
porta$to como um ,etaAgalactosdeo5 W !racame$te doce5 A le9edura $o a
16
!erme$ta: mas pode ser adaptada para !a4MAlo5 7acto,acilos a tra$s!ormamA$a
em cido ltico5 A 7actose 8 o 0idrato de car,o$o mais importa$te $o leite da
maioria de esp8cie5 W ,iossi$teti4ado $a gl<$dula mamaria5 As co$ce$tra;es
$o leite 9ariam !orteme$te com a esp8cie5 A 7actose 8 o primeiro e [$ico
0idrato de car,o$o que o 'l0ote de mam!ero +seres 0uma$os i$clusi9e-
co$some em qua$tidades sig$i'cati9as5 O leite de Bo9deos co$tem "@ a @0
gramas de lactose por o litro5 H$dustrialme$te: a lactose 8 produ4ida do leite
de Bo9deos some$te: ou a partir dos deri9ados do leite tais como o soro do
queiEo ou do 'ltrado da ultra'ltrao5 A 7actose 8 co$0ecida tam,8m como o
a[car de leite5
Na maior parte dos mam!eros: a e$4ima respo$s9el pela sua 0idrlise +a
lactase- s 8 si$teti4ada dura$te o perodo de aleitame$to5 Na ausM$cia de
lactase: a lactose $o pode ser digerida: tor$a$doAse por isso uma !o$te de
alime$to a,u$da$te para a cora i$testi$al +que e$to comea a crescer
desco$troladame$te-: e origi$a$do por isso $useas e 9mitos: assim como
diarr8ia +por a!etar a osmolaridade do i$testi$o delgado-5 No e$ta$to: desde a
domesticao do gado: algumas popula;es 0uma$as dese$9ol9eram a
capacidade de co$ti$uarem a si$teti4ar a lactase dura$te toda a 9ida5 Origem=
gihip8dia: a e$ciclop8dia li9re5
O $ome qumico o'cial da lactose: como e$co$trado !reqbe$teme$te em
ma$uais tais
como o (0armacopoeia: 8= 4-O--D-galactopyranosyl, D-glucopyranose /-isomeros5
No leite: a lactose se e$co$tra em duas !ormas isom8ricas de$omi$adas de
iA e fAlactose5
As estruturas moleculares da - e da -lactose di!erem $a orie$tao de um
0idrogM$io e em um grupo 0idro3ila $o tomo de car,o$o & +$a mol8cula da
glicose-5 Am,os os isKmeros mudam e$tre si co$ti$uame$te5 ste !e$Kme$o 8
c0amado mutarrotao5 A 9elocidade da mutarrotao 8 determi$ada por
!atores tais como a temperatura: a co$ce$trao: e o p6 da soluo5 As
solu;es de 7actose procuram o estado do equil,rio e$tre as !ormas i e f5 Na
temperatura am,ie$te: o equil,rio resulta em uma relao de "0J -lactose e
C0J de -lactose apro3imadame$te5 O !ato de que dois isomeros da lactose
17
e3istem e que di!erem $a estrutura molecular tem e!eitos pro!u$dos em
9rias propriedades da lactose: tais como suas propriedades $o estado
slido:$a mor!ologia dos cristais e $a solu,ilidade5 A 7actose 8 um dos
e3cipie$tes mais e3te$same$te usados $a i$d[stria !armacMutica5 6 muitas
ra4;es para esta popularidade: por que a lactose 8 i$erte: relati9ame$te
,arata: $o t3ica e a lactose tem uma lo$ga 0istria de ser aplicada em
mil0ares de !ormula;es ,em sucedidas mu$dialme$te5 stas !ormula;es
,em sucedidas i$cluem i$ala$tes: ta,letes: cpsulas e saqui$0os secos do p
+Sac0ets-5
A lactose: dissacardio redutor: redu4 o o$ c[prico do reati9o de SO/OXYH a
3ido cuproso: em meio alcali$o e a que$te5 m seguida: o 3ido cuproso
reage com o a$io$ arse$oAmoli,dato do reati9o de N7SON produ4i$do um
composto de colorao a4ul +3idos de moli,dM$io: /o
*
O
3
: com ma3 G @"0
$m-5
#e$tro de certos limites: a i$te$sidade da colorao a4ul 8 diretame$te
proporcio$al F qua$tidade de lactose $a amostra5
A$tes da reao qua$titati9a: a amostra de leite de9e ser desprotei$i4ada e
clari'cada: media$te precipitao de i$ter!ere$tes com Ba+O6-
*
e j$SO
"
5
M+ )A&ERIAL E )F&ODOS
M+3+ E<uipae!tos e :idrarias
0 spectro!otKmetro
A Ce$tr!uga de mesa
A Ba$0oAmaria +e,ulio-
A Balo 9olum8trico de &00 m7
A sta$te com N tu,os de e$saio e * tu,os de ce$tr!uga
A (ipetas
M+1+ Reage!tes
A 6idr3ido de ,rio 0:3N
A Sul!ato de 4i$co @J
A %eati9o de SomogOi= dissol9er *N gramas de !os!ato mo$ocido de sdio
e "0 gramas de tartarato duplo de sdio e potssio em .00 ml de gua5
Adicio$ar &00 ml de NaO6 &N5 XoteEar: so, agitao co$sta$te: N0 ml de
CuSO
"
5@6
*
O a &0J5 Adicio$ar &N0 gramas de sul!ato de sdio a$idro e
completar a & litro5 #ei3ar em repouso por * dias e 'ltrar5 Xuardar em !rasco
escuro a cerca de 3.
o
C5 )iltrar a$tes do uso5
A %eati9o de Nelso$= dissol9er *@ gramas de moli,dato de amK$io em "@0
ml de gua destilada5 Cuidadosame$te: adicio$ar *C ml de cido sul![rico
co$ce$trado5 Adicio$ar 3 gramas de arse$iato di,sico de sdio dissol9ido em
*@ ml de gua5 /a$ter em repouso em !rasco escuro dura$te * dias a$tes de
uso5
0 (adro de lactose= dissol9er 0:&00 gramas de lactose pura em um litro de
gua5 sta soluo co$ter &00 gIml5
MM+ Reta Padr>o
a- Tomar C tu,os de e$saio e $umerAlos de 0 a @5 Adicio$ar 0: 05*: 05":
05C: 05N e &50 m7 da soluo padro de lactose co$te$do +&00
microgramasIm7 G &00 gIm7- e completar o 9olume a &50 m7 com gua
destilada5
,8 Acresce$tar em cada tu,o &50 m7 do %ATH2O # SO/OXYH e agitar5
#ei3ar em ,a$0oAmaria !er9e$te por &0 mi$utos5 s!riar em gua corre$te5
c- Adicio$ar &50 ml do %ATH2O # N7SON e agitar5 Completar o 9olume
a &0 m7: adicio$a$do . ml de gua destilada5
18
d- )a4er leitura em espectro!otKmetro em @"0 $m5 (ree$c0er a ta,ela
a,ai3o=
&U$O
7N
o
8
'.UA
7l8
Lacto
se
7L8
"o!c+
O/tida
7gDL
8
Reat+
Soog
V 7L8
$a!Ko
)aria
7i!8
Reat+
Nelso
!
7L8
"opl+
Vol+ 732
L8
&ra!sit
+
7&O8
A/sor
/+
W
A/sor/+
0 &50 0 &50 &0 &50 . m7 0
& 05N 05* &50 &0 &50 . m7
* 05C 05" &50 &0 &50 . m7
3 05" 05C &50 &0 &50 . m7
" 05* 05N &50 &0 &50 . m7
@ 0 &50 &50 &0 &50 . m7
M+N+ Preparo das aostras de leite
Cada grupo rece,er * amostras de leite= uma arma4e$ada em geladeira e
outra ma$tida F temperatura am,ie$te5
a- Tra$s!erir & m7 +com pipeta 9olum8trica- da amostra de leite para
,alo 9olum8trico de &00 m7 e completar o 9olume com gua destilada5
Agitar ,em5
,- Tra$s!erir & m7 +com pipeta 9olum8trica- da soluo diluda de leite
para tu,o de ce$tr!uga5 !etuar a remoo dos i$ter!ere$tes pela adio de
&:0 m7 de j$S0
"
a @J +agitar- e acresce$tar &:0 m7 de 0idr3ido de ,rio
0:3N5 Agitar5 Completar a &0 m7 adicio$ado . m7 de gua destilada5 Agitar5
Ce$tri!ugar a 300 3 g dura$te @ mi$utos +35000 rpm-5
M+S+ Deteri!a=>o do teor de lactose !o leite

#etermi$ar os teores de lactose $as duas amostras de leite: prepara$do
as amostras como segue $a ta,ela a,ai3o=
&U$O Volu
e
7L8
Reat+
SoogV
7L8
$a!Ko
)aria
7 i!+
8
Reat+
Nelso
!
7L8
"opleta
r Vol+732
L8
&ra!sit
+
7&O8
A/sor
/+
X
A/sor
/+
"o!ce!tra
=>o++gI
&00
m7 G
J-
7eite
Am,ie$t
e
&50 &50 &0 &50 . m7
7eite
Xeladeir
a
&50 &50 &0 &50 . m7
N+ RESUL&ADOS
"5&5 Co$struir um gr'co com as co$ce$tra;es de lactose $a a,scissa +g de
lactose por tu,o- e as leituras de A,sor,<$cia dos padr;es +te$do su,trado o
9alor da leitura da pro9a em ,ra$co: ou seEa do tu,o $
o
0-: $a orde$ada5
"5*5 #etermi$ar os teores de lactose $as duas amostras de leite utili4a$do os
dados de X A,sor,<$cia: !a4e$doAse a i$terpolao $a reta padro o,tida $o
item acima5 Colocar $o gr'co os resultados de co$ce$trao de lactose
e$co$trados5
"535 3pressar os resultados em gI&00 m7 de leite +J-: o,ser9ar que a
amostra de leite a$alisada !oi diluda &=&005
19
"5" )a4er os clculos escritos $o espao a,ai3o=
S+ DIS"USSO DOS RESUL&ADOS
a5 #iscutir os resultados o,tidos de acordo com a co$ce$trao de lactose
e$co$trada $as amostras de leite ma$tidas em temperatura am,ie$te e
re!rigerada5 Os resultados o,tidos !oram os esperadosQ
,5 Pual ou quais as ra4;es para que os resultados da co$ce$trao de lactose
$o leite ma$tido $a temperatura am,ie$te e re!rigerada $o serem iguaisQ
Como a temperatura a!eta a qualidade do leiteQ
U+ $I$LIO.RA*IA USADA
7istar as ,i,liogra'as utili4adas para preparar o relatrio +opcio$al-5
*u!dae!tos de $io<uBica EGperie!tal A Uose %aul Cister$as: Uose
2arga e Osmar /o$te5 d5 At0e$eu &BBB: *.C pg5
)?todos de La/orat%rio e $io<uBica > Adelar Brac0t e mO 7ui4a Hs0iiA
HVamoto5 d5 /a$ole: *003 "3B pg5
H9o /5 #emiateR X5 gosiachiR Cristi$a C4elus$iah e Alessa$dro Nogueira5
Deteri!a=>o de a=ucares redutores e totais e alie!tos@
copara=>o e!tre ?todo colorietrico e tituloetrico5 Soil Scie$ce
N+&- p5 C@A.N: *00*5
%o,erto N5 Sil9aR 2aldire$e: N5/o$teiroR Uoa$a #5k5 Alca$!orR lai$e /5 AssisR
duardo %5 Asquieri "opara=>o de ?todos para deteri!a=>o de
a=ucares redutores e totais e el+ Cie$c5 Tec5 Alim5 *3+3- p5 33.A3"&:
*0035
lisa /5 HseEimaR Uose A5B5 CostaR #a$iel H5S5 Uu$ior )?todo de deteri!a=>o
de a=ucares redutores aplicA:el !o sistea de pagae!to de ca!a de
a=Ccar5 (esq5 Agropec5 Brasil5 25 3. +@- p5.*BA.3": *00*5
Questio!Ario=
& > Pual !oi a '$alidade deste tra,al0o praticoQ
* > Cite algumas aplica;es da metodologia empregada $este tra,al0o
pratico5
3 > H$dique atra98s de clculos como !oram preparadas as solu;es=

20
Aula Pratica NL M @ "RO)A&O.RA*IA E) PAPEL DE *IL&RO
I!trodu=>o@
"roatograHa+
A croatograHa 8 um processo de separao de a$lise qualitati9a: atra98s
do qual permite separar co$stitui$tes de uma mistura de9ido F sua
distri,uio por duas !ases uma estacio$ria +'3a- e outra m9el5 O m8todo
que utili4a di9ersas t8c$icas que tem como o,Eeti9o pri$cipal a separao de
su,st<$cias de uma mistura: com '$s a$alticos ou preparati9os: muito
utili4ado em la,oratrios i$dustriais: de pesquisa e de e$si$o5 Todas as
t8c$icas cromatogr'cas utili4am uma !ase estacio$ria e uma !ase m9el5 A
!ase estacio$ria 8 !ormada de um material escol0ido para reter de !orma
di!ere$ciada os compo$e$tes da amostra que se deseEa separar5 A !ase m9el
8 o material que se desloca pela !ase estacio$ria: arrasta$do os
compo$e$tes da amostra5 Aps tra$sitar pela !ase estacio$ria: por um
percurso de dist<$cia adequadame$te escol0ida: os compo$e$tes da amostra
se separam e so assi$alados pelo sistema detector $a seqbM$cia= do primeiro
compo$e$te me$os retido: ao [ltimo compo$e$te mais retido pela !ase
estacio$ria5 A escol0a do processo a usar depe$de do tipo de equil,rio
esta,elecido e$tre as !ases estacio$ria e m9el e a mistura que se quer
separar5 Se$do o mais importa$te o equil,rio e$tre a !ase estacio$ria e a
mistura5 sta separao resulta das di!ere$as de 9elocidade dos
compo$e$tes arrastados pela !ase m9el de9ido Fs di!ere$tes i$tera;es com
a !ase estacio$ria5 Os pri$cipais m8todos cromatogr'cos so= cromatogra'a
em papel +C(-: cromatogra'a de camada delgada +CC#-: cromatogra'a
gasosa +CX- e cromatogra'a lquida de alta e'ciM$cia +C7A-5
C%O/ATOX%A)HA / (A(7=
A cromatogra'a em papel +C(- 8 uma das t8c$icas mais simples e que requer
me$os i$strume$tos para sua reali4ao: por8m 8 a que aprese$ta as maiores
restri;es para sua utili4ao em termos a$alticos5 Neste tipo de
cromatogra'a: uma amostra lquida cui por uma tira de papel adsor9e$te
disposto 9erticalme$te5
O papel 8 composto por mol8culas de celulose que possuem uma !orte
a'$idade pela gua prese$te $a mistura de sol9e$te: mas muito pouca
a'$idade pela !ase org<$ica: atua$do como suporte i$erte co$te$do a !ase
estacio$ria aquosa +polar-5 A medida que o sol9e$te co$te$do o soluto cui
atra98s do papel: uma partio deste composto ocorre e$tre a !ase m9el
org<$ica +pouco polar- e a !ase estacio$ria aquosa5 #esta !orma: parte do
soluto dei3a o papel e e$tra $a !ase m9el5
Pua$do a !ase m9el alca$a uma seo do papel que $o co$t8m soluto: o
!e$Kme$o de partio ocorre $o9ame$te: s que agora o soluto 8 tra$s!erido
da !ase m9el para a !ase estacio$ria5 Com o cu3o co$t$uo de sol9e$te: o
e!eito desta partio e$tre a !ases m9el e estacio$ria possi,ilita a
tra$s!erM$cia do soluto do seu po$to de aplicao $o papel: para um outro
po$to locali4ado a alguma dist<$cia do local de aplicao $o se$tido do cu3o
de sol9e$te5
CA/A#A #7XA#A
Na cromatogra'a em camada delgada +T7C-: a !ase estacio$ria 8 uma
camada '$a !ormada por um slido gra$ulado +slica: alumi$a: poliamida: etc5-
depositado so,re uma placa de 9idro: alum$io ou outro suporte i$erte5
(eque$as gotas de soluo das amostras a serem a$alisadas so aplicadas
em um po$to pr3imo ao e3tremo i$!erior da placa5 #ei3aAse a placa secar e:
e$to se coloca a mesma em um recipie$te co$te$do a !ase m9el +sol9e$te
ou mistura de sol9e$tes-5 A polaridade do sol9e$te de9er ser de acordo com
a su,st<$cia que se deseEa separar5
21
Como some$te a ,ase da placa 'ca su,mersa: o sol9e$te comea a mol0ar a
!ase estacio$ria e so, por capilaridade5 #ei3aAse secar a placa aps o
deslocame$to da !ase m9el so,re ela5 A re9elao da placa 8 !eita com a
aplicao de um reati9o que de cor Fs su,st<$cias de i$teresse5
C%O/ATOX%A)HA XASOSA
A cromatogra'a gasosa +CX- 8 uma t8c$ica com poder de resoluo
e3cele$te: possi,ilita$do a a$lise de 9rias su,st<$cias em uma mesma
amostra5 #epe$de$do do tipo de su,st<$cia a ser a$alisada e do detector
empregado: co$segueAse detectar cerca de &0A&* g do composto por m7 de
soluo5 ssa se$si,ilidade permite que peque$as qua$tidades de amostra
possam ser a$alisadas5 A !ase estacio$ria da cromatogra'a gasosa 8 um
material: lquido ou slido: que propicia a separao da mistura atra98s de
processos !sicos e qumicos5 A !ase estacio$ria lquida 8 um lquido pouco
9oltil que reco,re um suporte slido: separa$do as su,sta$cias prese$tes $a
amostra atra98s das di!ere$as de solu,ilidade
e 9olatilidade5 Como !ase m9el 8 utili4ado um gs: de$omi$ado gs de
arraste: que tra$sporta a amostra atra98s da colu$a de separao at8 o
detector: o$de os compostos separados so detectados5
Os gases mais utili4ados so o 08lio +6e-: 0idrogM$io +6-: $itrogM$io +N- e
argK$io +Ar-5 Como o 6e 8 de di!cil o,te$o e alto custo 8 pouco utili4ado $o
Brasil5 A pure4a do gs de arraste i$ter!ere $o resultado: acusa$do impure4as
$a ordem de partes por mil0o +ppm- ou partes por ,il0o +pp,-5
As colu$as cromatogr'cas utili4adas podem ser de $quel: ao i$o3 ou de
9idro5 #e acordo com o aparel0o: as colu$as 9ariam de !ormato: mas $a
maioria das 9e4es elas so espirais5 O comprime$to e o di<metro da colu$a a
ser usada ir depe$der do material a ser a$alisado5
As colu$as rec0eadas a$alticas possuem di<metro i$ter$o +d5i5- de cerca de
&:0 a ":0 mm e comprime$to de &:0 a 3:0 m: e$qua$to que as colu$as
rec0eadas preparati9as aprese$tam d5i5 de @:0 a &00:0 mm: possi,ilita$do a
i$Eeo de maior 9olume de amostra5 U: as colu$as capilares tMm d5i5 9aria$do
de 0:&@ a 0:.@ mm e comprime$to de &0:0 a &00:0 m: se$do as mais
utili4adas as de slica !u$dida: pois esta 8 altame$te i$erte e ce39el5
Os detectores so dispositi9os que tra$s!ormam as 9aria;es $a composio
do gs de arraste em si$ais el8tricos5
3iste di!ere$tes tipos de detectores= &- detector de co$duti9idade t8rmica
+#CT-: usado para compostos org<$icos: i$org<$icos: deri9ados
de petrleo etc5 Os #CT possuem dois ou quatro 'lame$tos de plati$a +(t-:
tu$gstM$io +g-: $quel +Ni- ou (t A g: os quais so aquecidos por corre$te
el8trica5 Co$!orme o gs passa pelos 'lame$tos 0 tra$s!erM$cia de calor e: o
tempo da passagem do gs: Eu$tame$te com a co$duti9idade t8rmica so
registrados: e!etua$doAse assim: a a$lise5 sta a$lise 8 !eita compara$doAse
o gs de arraste puro +que passa por um co$Eu$to de 'lame$tos- com o gs
de arraste com a amostra +que passa por outro co$Eu$to de 'lame$tos-5 *-
detector de io$i4ao de c0ama +#HC-: utili4ados ape$as para compostos
org<$icos com ,ai3a se$si,ilidade para !ormaldedo e cido !rmico: co$siste
de um campo el8trico +*00 A 300 9- e uma c0ama o$de a amostra 8
queimada5 A com,usto resulta em radicais li9res que so io$i4ados pelo
campo el8trico: aume$ta$do a corre$te $os eletrodos5 3- detector de captura
de el8tro$s +#C-: usado pri$cipalme$te $a deteco de pesticidas e drogas5
Neste detector
0 uma !o$te de radiao ,eta em corre$te co$sta$te5 O gs de arraste passa
com uma amostra o$de 0 su,stituio de um el8tro$ por um o$ $egati9o: o
que dimi$ui a corre$te el8trica5 O gs de arraste com a amostra 8 comparado
com o gs de arraste puro +corre$te de !u$do-: que qua$to maior seu 9alor
maior 8 a se$si,ilidade do detector5 A dimi$uio do 9alor da corre$te de
!u$do 8 si$al de impure4a: 9a4ame$to da !o$te: suEeira ou colu$a mal
co$dicio$ada5 O gs de arraste usado 8 o N* li9re de 6* e O*: isto 8: gs N*
ultrapuro5 @- detector !otom8trico de c0ama +#)C- aprese$ta alta esta,ilidade
para compostos sul!urados e !os!orados5 6 uma com,usto $o campo
el8trico com emisso de lu4 de di9ersos comprime$tos de o$das5 )iltros
22
elimi$am as radia;es des$ecessrias: selecio$a$do as de i$teresse: em
especial as que te$0am e$3o!re +S- e !s!oro +(-5 O gs de arraste 8 o N* e da
c0ama 8 o 6* com ar ultrapuro e seco5A pure4a dos reage$tes de9e ser $a
ordem de partes por tril0o +ppt-5
C%O/ATOX%A)HA 7lPUH#A # A7TA )HCHmNCHA
A Cromatogra'a 7quida de Alta 'ciM$cia +C7A ou 6(7C- se dese$9ol9eu
muito $os [ltimos a$os: rece,e$do o $ome de cromatogra'a lquida por que a
sua !ase m9el 8 um sol9e$te5
Os compo$e$tes de um cromatgra!o lquido so= ,om,a: colu$a
cromatogr'ca: detector e o registrador5 W um m8todo utili4ado para
separao de esp8cies iK$icas ou macromol8culas e compostos termol,eis5
A !ase m9el da C7A de9e ser um sol9e$te que respeite algumas
caractersticas impostas por esse m8todo a$altico5 A pri$cipal caracterstica 8
que a !ase m9el dissol9a a amostra sem qualquer i$terao qumica e$tre
am,as5 sta !ase de9e ter alto grau de pure4a ou ser de !cil puri'cao: para
que se possam !a4er a$lises de alta se$si,ilidade: pois as impure4as podem
i$ter!erir $a deteco do a$alito por ultra9ioleta +U2-5 A !ase m9el de9e ser
compat9el com o detector empregado e: tam,8m possuir polaridade
adequada para permitir uma separao co$9e$ie$te dos compo$e$tes da
amostra5 m,ora e3istam 9rios sol9e$tes: trMs deles so mais utili4ados=
gua: meta$ol e aceto$itrila5
Como !ase estacio$ria utili4amAse slidos ou semirgidos: cuEas partculas
porosas es!8ricas ou irregulares aprese$tam di!ere$tes di<metros e suportam
presso at8 3@0 ,ar5
A colu$a cromatogr'ca 8 !eita de um material i$erte que resiste a todas as
press;es em que ela 9ai ser usada5 A capacidade da colu$a 8 determi$ada
pelo comprime$to: di<metro e pelo material de rec0eio5 As colu$as
geralme$te utili4adas so= octadecil +C&N: %(&N: O#S-: octil +CN: %(N-: CN
+cia$opropil- e N6* +ami$a-5 Pua$to aos detectores: $o e3iste um que
aprese$te todas as propriedades para que ele seEa ideal para C7A5 No so
9ersteis: ou u$i9ersais: mas e3istem detectores que aprese$tam ampla !ai3a
de aplica;es5 A se$si,ilidade de um detector 8 determi$ada a partir da
relao e$tre o si$al produ4ido e a qua$tidade de amostra que gera este si$al5
A li$earidade 8 a !ai3a li$ear do sistema: o$de o si$al do detector 8
diretame$te proporcio$al F co$ce$trao do soluto5
Os detectores mais usadas $a C7A so os !otom8tricos: ,aseados $a
a,sor,<$cia $o ultra 9ioleta e $o 9is9el5 Os detectores de cuorescM$cia:
utili4ados como m8todo de deteco espec'ca: so se$s9eis para
su,st<$cias que cuorescem5 ste tipo de detector pode detectar qua$tidades
de ordem picograma5 Tam,8m so utili4ados detectores por $dice de
re!rao: os quais acompa$0am co$ti$uame$te a di!ere$a $o $dice de
re!rao e$tre a !ase m9el pura e o ecue$te que sai da colu$a co$te$do os
compo$e$tes da amostra5 A resposta deste detector 8 moderada: geralme$te
de ordem micrograma5
&?c!icas croatogrAHcas@
A0 "roatograHa de adsor=>o
Nesta a !ase estacio$ria 8 slida e a !ase m9el pode ser lquida ou gasosa5
sta ,aseiaAse $as di!ere$tes a'$idades adsor9e$tes da super!cie da !ase
estacio$ria pelas mol8culas da su,st<$cia a separar5
$0 "roatograHa de parti=>o
Nesta !ase a !ase estacio$ria 8 lquida5 ste processo 8 ,aseado $a di!ere$te
solu,ilidade dos compo$e$tes da mistura $as duas !ases lquidas5
23
"roatograHa e caada H!a +pla$a- +T7C-= a rete$o das su,st<$cias
de9eAse F adsoro so!rida $a super!cie da !ase estacio$ria: colocada so,re
um dos lados de uma placa de 9idro ou metal5
"roatograHa e colu!a= utili4aAse uma colu$a de 9idro a,erta $a parte
superior e mu$ida de uma tor$eira $a e3tremidade i$!erior: por o$de sai o
lquido +eludo-5 #e$tro da colu$a e$co$traAse a !ase estacio$ria co$stituda
por um e$c0ime$to slido $o caso da cromatogra'a de adsoro: ou por uma
!ase lquida $o caso da cromatogra'a de partio5 A !ase m9el 8 lquida em
am,os os casos5
"roatograHa e papel +pla$a-= a rete$o das su,st<$cias 8 de9ida F
partio das duas !ases lquidas: uma m9el e outra estacio$ria: se$do esta
co$stituda pelo lquido a,sor9ido $o papel5 $co$traAse ,asta$te di9ulgada
de9ido F sua !acilidade e3perime$tal e ao seu ,ai3o custo5
ste 8 o tipo que ser utili4ado $a aula prtica5 Usualme$te: tra,al0aAse com
papel g0atma$$: com a de9ida especi'cao +$[mero " por e3emplo-5
(ara e!eito de !acilidade 9amos e$umerar algu$s termos de uso
corre$te=
a8 "roatograHa 0 co$sta de papel de9idame$te tratado: ou seEa: corta$do
de acordo com as dime$s;es da c<mara o$de ser colocado: $o qual '4emos
\ma$c0as] de solu;es padr;es ou de solu;es pro,lemas5
/8 "Paras croatogrAHcas 0 so os recipie$tes: 0ermeticame$te
!ec0ados: o$de os cromatogramas so dese$9ol9idosR
c8 Li!Ka /Asica 0 8 a li$0a traada: geralme$te a trMs ce$tmetros do ,ordo
i$!erior do papel: so,re o qual distri,umos as \ma$c0as] de solutos5
Algu$s cuidados que de9em ser tomados=
a- a$tes de ser i$iciar o processo cromatogr'co: a c<mara: co$te$do a
mistura de sol9e$te: E de9e estar saturada de seus 9apores:
,- o sol9e$te $o de9e correr at8 o ,ordo superior do papel +cuidado com o
$[mero de 0oras de processame$to- e $em tampouco uma peque$a
dist<$cia5 #e pre!erM$cia at8 u$s * a 3 cm do ,ordo superior5
Os tipos de c<mara cromatogr'ca 9ariam de tama$0o e !orma: desde
as mais ,em tra,al0adas: at8 a um simples tu,o de e$saio ou pro9eta5
As modalidades de cromatogra'a em papel so as mais 9ariadas
poss9eis5 Temos cromatogra'a asce$de$te e desce$de$te: mo$o e
,idime$sio$al: 9ertical e 0ori4o$tal5 /ais orie$ta;es a respeito sero
!or$ecidas pelo pro!essor dura$te a aula5
"Alculo de R9 7 *ator de Rete!=>o8
Hmagi$emos o segui$te diagrama

limite at8 o$de o sol9e$te
ati$giu
se$tido em que ,n
o cromatograma cn 3
!oi dese$9ol9ido dn
an
24

cn
a , c d li$0a ,sica

C0amaAse de %! a relao e3iste$te e$tre a dist<$cia percorrida pelo
soluto +at8 o ce$tro da ma$c0a-: pela dist<$cia total percorrida pelo sol9e$te5
Assim= %!a G anI3 %!, G ,nI3 %!c G cnI3 %!dG dnI3
Os 9alores de %! !or$ecem uma orie$tao qua$to F distri,uio dos
sol9e$tes ao lo$go do papel5
&eoria so/re R9 +equao de /arti$ e SO$ge-
C0amaAse de %! a relao=
Al

Al o a As
o$de= a = coe'cie$te de partio
As G rea ocupada pelo soluto $a !ase estacio$ria
Al G rea ocupada pelo soluto $a !ase m9el
Sol:e!tes usados e croatograHa@
#e acordo com as su,st<$cias a serem cromatogra!adas: utili4amos sol9e$te
os mais di9ersos
*e!ol 0 'gua 762@ 128
Usado para cromatogra'a de ami$ocidos5 (odeAse i$clusi9e adicio$ar "0 mg
de NA0idro3iqui$oli$a de & ml de N6
"
O6 co$ce$trado por &00 ml de sol9e$te5
$uta!ol@ ,
1
O 7N@ 3@ 38
Tam,8m empregado $a cromatogra'a de ami$ocidos: a[cares etc5
$e!zol@ /uta!ol@ Piridi!a@ ,
1
O 7S@ M@ M@ 38
EGiste /asicae!te tr#s odos de re:ela=>o
a8 Pelo uso da luz ultra0:ioleta@ empregado qua$do os compostos
possuem $[cleo que re9elam o comprim:e$to de o$da ao $9el do U52R
/8 Uso de reage!tes@ comume$te utili4aAse para a[cares e imerso $a
segui$te soluo= & ml de a$ili$a o &g de di!e$ilami$a o &00 ml de aceto$a
o &0 ml de 6
*
(O
"
a N@J5
(ara ami$ocidos pul9eri4aAse o papel com soluo de $i$0idri$a a 0:3J em
lcool +usado $esta aula-
(ara cidos org<$icos pul9eri4aAse o papel com a segui$te soluo= &g de
3ilose o 3 ml de gua o & ml de a$ili$a o &00 ml de lcool metlicoR
c8 Detectores especiais
PAR&E PR'&I"A
38 Prepara=>o do papel de Hltro
3ami$ar a c<mara cromatogr'ca e pla$eEar as dime$s;es do papel5 Tome
muito cuidado para $o tocar o mesmo com os dedos: 9isto que 0
co$tami$ao com ami$ocidos da mo5 Cada grupo mo$tar um
cromatograma5
18 PadrIes de ai!oAcidos@ argi$i$a: cido glut<mico5 leuci$a e proli$a
25
(reparar padr;es de ami$ocidos 0:0& / e guardAlos $o co$gelador5
Cada grupo rece,er trMs padr;es di!ere$tes com a '$alidade de comparar
estas trMs ma$c0as com as produ4idas pela amostra pro,lema +esta ser
!or$ecida pelo pro!essor-5
)o!tage do croatograa
Traar $uma li$0a ,sica a 3 cm da ,ase do papel e dei3ar * cm de ,ordadura
#istri,uir as solu;es a serem a$alisadas $o papel de$tro $os po$tos
marcados
m seguida !a4er ma$c0as de rea apro3imada de 0:@ cm
*
utili4a$do um
9olume de "0A@0 microlitros usa$do micropipetas5
Secar as ma$c0as co$!orme i$stru;es dadas pelo pro!essor
Adaptar o cromatograma F c<mara toma$do sempre o cuidado de $o tocAlo
com os dedos5

*ro!t

/istura aa& aa* aa3 aa "
3 cm
#ei3ar o cromatograma corre$do at8 que o sol9e$te ati$Ea u$s * ou 3 cm
a,ai3o do ,ordo superior do papel
m seguida retireAo e dei3e secar5 Aps a secagem pul9eri4ar !i!idri!a a
0:3J em soluo alcolica5 7e9ar o cromatograma F estu!a F temperatura de
C0 A C@
o
C at8 aparecime$to de ma$c0as coloridas
Deteri!a=>o do R9@
/arcar o limite at8 o$de o sol9e$te ati$giu +!ro$t-5
/edir a dist<$cia da li$0a ,sica at8 o \!ro$t]+3- : marcar o ce$tro das
ma$c0as A: B: C e #5 2eri'car as dist<$cias d A: d B: d C: e d #: que 9o desde
a li$0a ,sica at8 o ce$tro de A: B: C e #5
Calcular os %!s
dA dB
%!a G %!, G
3 3
RESUL&ADOS E DIS"USSO
&5 scre9er quais os ami$ocidos estudados em classe e a colorao deles $a
reao com $i$idri$a
*5 Aprese$tar %! dos ami$ocidos utili4ados $o e3perime$to
35 Pual ami$ocido aprese$tou maior %! e porqueQ
"5 Pual ami$ocido aprese$tou me$or %! e porqueQ
@5 Os ami$ocidos aprese$taram colorao di!ere$teQ (orqueQ
C5 Puais ami$ocidos esto prese$te $a misturaQ
.5 Puais as aplica;es da metodologia da cromatogra'aQ
26
$I$LIO.RA*IA
NOES BSICAS DE CROMATOGRAFIA Terez!"# B$!#!"$ %ere&
Ce!'r$ (e %e&)*&# e De&e!+$,+-e!'$ (e %r$'e./$ A-0e!'#,1I!&''*'$ B$,234$ 5 S/$ %#*,$5
+6645 !625 7622712295 8*,69(ez65 2002
CO::INS5 C6;6< BRAGA5 G6:6< BONATO5 %6S6 I!'r$(*./$ # -='$($& 4r$-#'$3r>?4$&6 66 E(6
C#-7!#&@ E('$r# ANICAM%519956
CIO:A5 R6 I!'r$(*./$ B 4r$-#'$3r#?# e- ?#&e 3#&$&#6 S/$ %#*,$@E(3#r( B,C4"er5 19736
CIO:A R6 F*!(#-e!'$& (# 4r$-#'$3r#?# # ,D)*($ (e #,'$ (e&e-7e!"$ ;%:C6 1E6 E(6 S/$ %#*,$@
E(3#r( B,C4"er519986
27
Aula Pratica NL N @ DE&ER)INA4O DO &EOR DE PRO&E(NAS NO LEI&E
+(7A %A^_O #O BHU%TO-
3+ *UNDA)EN&O DA )E&ODOLO.IA
As prote$as podem ser dosadas em di9ersos materiais ,iolgicos por
9rias metodologias5 A reao do \$iureto]: que 8 utili4ada para a
caracteri4ao de prote$as: pode ser empregada para a qua$ti'cao das
mesmas media$te a colorimetria5
O !u$dame$to da metodologia se ,aseia $o !ato de que as prote$as
!ormam um comple3o com o o$ c[prico +Cu
oo
- em meio alcali$o: e tal
comple3o aprese$ta um pico de a,soro a @"0 $m5 A reao 8 positi9a para
peptdios co$stitudos de $o m$imo de trMs ami$ocidos5 Tal comple3ao
tam,8m ocorre com o /iureto +6
*
NACOAN6ACOAN6
*
-: da o $ome da reao5
+)igura &-
)igura &= Comple3o de cor 9ioleta +p[rpura-
1+ )A&ERIAL E )F&ODOS@
E<uipae!tos e Vidrarias@
S(CT%O)OTp/T%O +@"0 $m-
sta$te com . tu,os de e$saio
& pipeta graduada de @ m7
* pipetas graduadas de &0 m7
Reage!tes@
Reage!te do $iureto
(esar &5@ g de CuSO
"
5@6
*
O e Cg de tartarato duplo de sdio e potssio:
dissol9MAlos em gua destilada completa$do o 9olume a apro3imadame$te
@00 ml5 Uu$tar: so, agitao: 300 m7 de NaO6 &0J e completar a & litro5
Padr>o de "aseB!a 7S gDL8 A
dissol9er *:@g de case$a em @00 m7 de NaO6 0:& N
M+ PRO"EDI)EN&O ANAL(&I"O
&5 Tra$s!erir & ml de leite +pipeta 9olum8trica- para tu,o de e$saio e
completar o 9olume com B ml de gua destilada +esta soluo correspo$de ao
leite diludo &=&0-5 Agitar ,em5
28
*5 m . tu,os de e$saio: e$umerados de 0 a C: pipetar os compo$e$tes
co$!orme o quadro a,ai3o5
35 Aps a adio do reati9o do Biureto: agitar os tu,os e dei3ar em repouso
por 30 mi$utos5 A colorao p[rpura !ormada i$dicati9o da prese$a de
prote$as5
"5 )a4er leitura de Tra$smit<$cia a @"0 $m em espectroto!Kmetro e co$9erter
em A,sor,<$cia com au3lio de ta,ela +A, G * A log T-5
@5 Com os dados o,tidos dos tu,os 0 a @: !a4er um gr'co em papel
milimetrado co$te$do $o ei3o Y os 9alores de A,sor,<$cia ou 7eitura e $o
ei3o k as co$ce$tra;es de case$a e3pressas em mgItu,o5
C5 H$terpolar o 9alor de leitura da amostra de leite diludo e calcular a
co$ce$trao de case$a $o leite e3pressa$do o 9alor em mgI&00 m7 de leite5
&U$O
7N
O
8
'.UA
DES&IL+
"ASE(NA
7U gDL8
"ASE(NA
7gDtu/o
8
REA&IVO
$IURE&O
&ra!sitP
!cia
7O8
A$SOR$+
SN2 !

A$SOR$+
SN2 !
0 "50 050 @ 0
& 35@ 05@ @
* 350 &50 @
3 *5@ &5@ @
" *50 *50 @
@ &5@ *5@ @
C & m7 leite diludo
+&=&0-
3 @
N+ RESUL&ADOS E DIS"USSO@
&5 Completar ta,ela
*5 Xr'co com os 9alores de a,sor,<$cia +O- e co$ce$trao +3-
35 #etermi$ar o 9alor da co$ce$trao de case$a $o leite atra98s do gr'co
e dar o resultado em mgI&00m7 de leite
"5 #iscutir o 9alor e$co$trado em relao ao 9alor $utricio$al do leite5
@5 O quM ocorre com a case$a do leite qua$do o 9alor de p6 'ca a,ai3o de
C5@Q

A$SOR$+
7SN2 !-
U+ $I$LIO.RA*IA
AOAC5 Associatio$ o! Oqcial A$alOtical C0emists5 Oqcial met0ods o! a$alOsis
o! AOAC H$ter$atio$al5 &Ct0 ed5 Xait0eers,urg: &BB.5 Cap5 3B: p5 CA.5
B%A#)O%#: /5 /5 A rapid a$d se$siti9e met0od !or qua$titatio$ o! microgram
qua$tities o! protei$ utili4i$g pri$ciple o! protei$ dOe ,i$di$g5 A$alOtical
Bioc0em5: 95 .*: p5 *"NA*@": &B.C5
29
C$!4e!'r#./$
F-39'*0$G
7A//7H: U5 15 Clea9age o! structural protei$s duri$g t0e assem,lO o! t0e
0ead o! ,actiop0age t"5 Nature: 95 **.: p5 CN0ACN@: &B.05
%AX6UNAT6: /5%5R SAN1A%: T525R A//U: 15R #2A#ASAN: 15 Bioc0emical a$d
$utritio$al c0a$ges i$ 's0 protei$s duri$g drOi$g5 U5 Sci5 )ood Agric5: 95 C.: $5 *:
p5 &B.A*0": &BB@5
$I$LIO.RA*IA RE"O)ENDADA
Li:ros teGtos
&A 2OT Z 2OT A Bioc0emistrO A Uo0$ gileO a$d So$s: NeV Yorh5 &BB@5
*A 2OT: 2OT Z (%ATT > )u$dame$tos de Bioqumica > Artmed ditora: So
(aulo5 *0005
3A CA/(B77 A Bioc0emistrO A 6arcourt Brace College (u,lis0ers: NeV Yorh5
&BB"5
"A CA/(B77 > Bioqumica > Artmed ditora: 3a ed5: So (aulo5 &BBB5
@A 76NHNX%: N7SON Z COk A (ri$ciples o! Bioc0emistrO A *a ed5 gort0
(u,lis0ers: NeV Yorh5 &BB35
CA 76NHNX% > (ri$cpios de Bioqumica A ditora Sar9ier: So (aulo5 &BN@5
.A %AgN A Bioc0emistrO A Neil (atterso$ (u,lis0ers A Burli$gto$: Nort0 Caroli$a
NA AN#%SON Z BA%#A77 A /olecular Acti9ities o! (la$t CellsA Blach gell
Scie$ti'c pu,licatio$s: O3!ord5
BA g6HT: 6AN#7% Z S/HT6 A Bioqumica= Aspectos Xerais A ditora
Xua$a,ara$a 1ooga$: %io de Ua$eiro5
&0A S/HT6: 6H77: 76/AN: 7)1OgHTj: 6AN#7% Z g6HT A Bioqumica
/am!eros A Xua$a,ara A 1ooga$: %io de Ua$eiro5
&&A ST%Y% A Bioqumica A "a ed5 ditora %e9ert8: /adrid5 &BB@5
&*A CONN Z STU/() A H$troduo F Bioqumica A ditora dgard Bluc0er A So
(aulo5
&3A CO%%HA A Bioqumica A$imal A ditora )u$dao Calouste Xul,e$hia$5
&"A 2HH%A: XUAjjHN77H Z /A%SAXUHA A Bioqumica Celular A d5 Ate$eu: So
(aulo5
30
Aula Pratica NL S @ DE&ER)INA4TES DA "ONS&AN&E DE )I",AELIS
7Y8
E DA VELO"IDADE )'ZI)A 7V8 PARA A INVER&ASE DE LEVEDURA
3+ O$EE&IVOS
#etermi$ar os par<metros 1m e 2m da e$4ima i$9ertase utili4a$do a
sacarose como su,strato: media$te o estudo ci$8tico da reao5
1+ *UNDA)EN&OS
As rea;es qumicas co$du4idas pelos orga$ismos 9i9os so: $a sua gra$de
maioria: catalisadas e$4imaticame$te: tor$a$do a 9elocidade das mesmas
compat9eis com as e3igM$cias meta,licas5
A e$4ima escol0ida para este estudo 8 Eustame$te a i$9ertase da le9edura
que catalisa a 0idrlise da sacarose para produ4ir glicose e !rutose=
"
31
,
11
O
33
[ ,
1
O "
U
,
31
O
U
[ "
U
,
31
O
U
sacarose gua glicose !rutose

Co$0ece$doAse por colorimetria a qua$tidade +rg- de a[car redutor
!ormado: por um clculo estequiom8trico simples: podeAse determi$ar a
qua$tidade correspo$de$te +rg- sacarose 0idrolisada5
(odemos determi$ar a a'$idade de determi$ada e$4ima pelo su,strato da
reao que catalisa utili4a$do um 9alor 1
/
: que 8 a co$ce$trao de su,strato
$ecessria para se ati$gir metade da 9elocidade m3ima da reao catalisada
pela e$4ima em questo5 Um modelo da reao o$de a e$4ima i$terage com o
su,strato est !or$ecido a,ai3o=
E [ S ES E [ P

o$de 8 a e$4ima: S 8 o su,strato: S 8 o comple3o e$4imaAsu,strato e ( 8 o
produto da reao5 O,ser9e que a e$4ima 8 de9ol9ida ao meio $a mesma
proporo em que !oi utili4ada $a reao F esquerda5
)icKaelis e )e!te!: com essas co$sidera;es: dese$9ol9eram a
e3presso de 9elocidade para uma reao catalisada e$4imaticame$te e
desta !orma puderam descre9er o comportame$to de di9ersas e$4imas5
V \ VAG Q ]S^
Y
)
[ ]S^
o$de sSt 8 a co$ce$trao do su,strato e 2m3 8 a 9elocidade m3ima da
reao: em mol +de produto !ormado- por u$idade de tempo5
Assim a le9edura +Saccharomces cere!isiae): por i$term8dio da
ei$9ertasee 0idrolisa a sacarose resulta$do $uma mistura equimolecular de
glicose e !rutose: a[cares esses que so a,sor9idos pela c8lula5 A mem,ra$a
plasmtica 8 imperme9el F sacarose: e a le9edura aca,a e3creta$do a
i$9ertase +se$do: pois: uma e3oe$4ima- para a 0idrlise ocorrer !ora da c8lula
de le9edura5
31
)igura *= Saccharomces cere!isiae

)igura 35 Hmagem de le9edura +Saccharomces cere!isiae- da U$i9ersitO o!
1e$t Bioscie$ces5
0ttp=IIVVV5,io5da9idso$5eduIcoursesIge$omicsI*00"I,ossieIm!Og50tml
*igura N@ 6idrlise da sacarose catalisada pela i$9ertase5 Ta$to a glicose
qua$to a !rutose so a[cares redutores5
No prese$te e3perime$to a i$9ertase ser o,tida de le9edura de
pa$i'cao +!erme$to )leisc0ma$$- e adicio$ada F sacarose +a[car $o
redutor-: cuEa 0idrlise resulta $a !ormao de a[cares redutores +glicose e
!rutose- que sero estimados pela reao de SomogOiANelso$5
(ara tal se colocar a e$4ima !re$te F di!ere$tes co$ce$tra;es de
su,strato +sacarose-: resulta$do em di!ere$tes 9elocidades de reao
e$4imtica: permiti$do: media$te um tratame$to matemtico adequado:
determi$ar gra'came$te os 9alores de 1m e 2m para a reao e$4imtica da
le9edura5
M+ )A&ERIAL
32
A spectro!otKmetro
0 sta$te com N tu,os de e$saio +por grupo-
A * pipetas graduadas de * m7 +por grupo-
A & pipeta graduada de & m7 +por grupo-
A & pipeta 9olum8trica de & m7 +por grupo-
A Ce$tr!uga e ,a$0oA/aria para dosagem de a[cares redutores
M+1+ Reage!te
A " g de !erme$to pre$sado tipo )leisc0ma$$
A %eage$te de SomogOi
A %eage$te de Nelso$
A (adro de a[car redutor +&00 ug de glicose por *:@ m7-
A Su,strato +sacarose &*:@ m/ G ":*. gI7-
N+ PRO"EDI)EN&O
N+3+ EGtra=>o da e!zia
Tra$s!erir " g de !erme$to de pa$i'cao para tu,o de ce$tr!uga:
adicio$ar *0 m7 de gua destilada e dei3ar em estu!a a 3.
o
C por 30 mi$utos
agita$do casualme$te5 Ce$tri!ugar a &5000 3 g por &@ mi$utos recol0e$do o
so,re$ada$te que co$t8m a e$4ima i$9ertase5 )a4er uma diluio de &=&00 ou
&=*00 +a crit8rio do pro!essor-5
N+1+ E!saio e!ziAtico
m N tu,os de e$saio: e$umerados de 0 a .: pipetar os 9olumes +em
m7- das solu;es co$!orme i$dica o quadro que se segue=
&U$O
7N
O
8
SA"AROSE
31;S )
'.UA INVER&ASE
DILU(DA
0 0:0 *:0 0:@
& 0:" &:C 0:@
* 0:N &:* 0:@
3 &:* 0:N 0:@
" &:C 0:" 0:@
@ *:0 0:0 0:@
C *:0 0:@ 0:0
. *:@ m7 de
padro
co$te$do &00 ug de glicose
H$cu,ar os tu,os +e3ceto o tu,o $
o
.- a 3.
o
C: por &@ mi$utos: para que
a i$9ertase catalise a 0idrlise da sacarose: resulta$do $a !ormao de
glicose e !rutose +a[cares redutores-: os quais podem ser determi$ados pela
reao de SomogOiANelso$5
N+M+ Rea=>o para dosage de a=Ccares redutores+
To logo termi$e o perodo de i$cu,ao acresce$tar & m7 do reati9o de
SomogO +a reao e$4imtica 8 paralisada pela des$aturao da i$9ertase:
quer pela ao do Cu
oo
ou pela alcali$idade do reage$te-5
)er9er os tu,os em ,a$0oAmaria por &0 mi$utos: res!riAlos e Eu$tar & m7 do
reati9o de Nelso$5
Agitar: completar o 9olume a &0 m7 +adicio$a$do @:@ m7 de gua destilada-:
agitar $o9ame$te a !a4er leitura a @30 $m5
33
S+ AN'LISES DOS RESUL&ADOS E DIS"USSO
Coletar os dados: orga$i4a$doAos co$!orme o quadro que se segue5
&a/ela 3= #etermi$ao de +S- e +2- e &I+S- e &I+2- para a i$9ertase
TUBO
+N
O
-
TJ
@30 $m
#5O5
@30 $m
#5O5
@30 $m
sStS 2SS &
sSt
&
2
0 0 m/
& * m/
* " m/
3 C m/
" N m/
@ &0 m/
C A A A A
. A A A A
S ]S^ G co!ce!tra=>o de su/strato +sacarose- $o meio de reao
e$4imtica e3pressa em milimolaridade m/5
QQ V G :elocidade de rea=>o e!ziAtica e3pressa em g +micrograma- de
glicose +a[car redutor- !ormado por 0ora5
PARA O RELA&5RIO@
&5 (ree$c0er a &a/ela 3
*5 Tra$s!ormar as leituras de de$sidade tica em qua$tidades de a[car
redutor
35 Calcular as 9elocidades de reao +2- para cada tu,o5 Com os dados
co$struir os gr'cos 2 em !u$o de [S] e &I2 em !u$o de &IsSt5
"5 #etermi$ar a$aliticame$te os 9alores de 1m e 2m3 e discutir os seus
sig$i'cados ,ioqumicos5
@5 3plique o que ocorre $os tu,os 0 e C compara$do os resultados o,tidos $o
e3perime$to5
$I$LIO.RA*IA
A#7A% B%AC6T /Y 7UHjA HS6HHAHgA/OTO
)?todos de La/orat%rio e $io<uBica: d5 /a$ole &d d5 *003
A2%ON: /5: e/ec0a$ism o! p0otoi$duced electro$ tra$sport i$ isolated
c0loroplastse: i$ #5%5 Sa$adi +ed5-: "urre!t &opics o9 $ioe!ergetics:
&*: Academic (ress: NeV Yorh: &BC.: p5&5
6AX/AN: %565 Z #5 )7S6%5 Nitrate reductase acti9itO i$ cor$ seedli$g as
euected ,O lig0t a$d $itrate co$te$t o! $utrie$t media5 Pla!t
PKVsiologV:
3@= .00A.0N +&BC0-5
6gHTT: 5U5 PKVsiological a!d $iocKeical 9actors _KicK co!trol tKe
assiilatio! o9 i!orga!ic !itroge! supplies /V pla!ts+ I!
34
`Nitroge! Nutritio! o9 tKe Pla!te: 5A5 1irh,O +ed5-: U$5 7eeds: &B.05
p5.NA&035
UACOBS: /5B5 &Ke "Keical A!alVsis o9 *oods a!d *ood Products5 2a$
Nostra$d: NeV Yorh: &B@N: B.0 p5
7HTgAC1: X5 EGperie!tal $iocKeistrV 0 A La/oratorV )a!ual5 Uo0$
gileO Z So$s: H$c5: NeV Yorh: &BC0: 3&3p5
/A%T77H: 6575 Z (AN1: A5#5 $io<uBica EGperie!tal5 Ao 7i9ro T8c$ico:
%io de Ua$eiro: &BCN: &&*p5
2H777A: X5X5R BACH7A: /5 e TASTA7#H: 65 &?c!icas e EGperie!tos de
$io<uBica+ ditora Xua$a,ara 1ooga$: %io de Ua$eiro: &B.*: @** p5
g6A%TON: #5C5 Z /c CA%TY: %55 EGperie!ts a!d )etKods i!
$iocKeistrV5 /c/illa$ (u,lis0i$g Co: H$c5: NeV Yorh: &B.*: 3@0p5
35
Aula Pratica NL U @ REA4O DE ,ILL 7*O&5LISE DA '.UA8
3+ O$EE&IVOS
A9aliar a 0a,ilidade meta,lica do cloroplasto de promo9er a !otlise da
gua: o primeiro passo $a sequM$cia de rea;es da !otoss$tese5
1+ *UNDA)EN&OS
O processo !otossi$t8tico: que ocorre $o i$terior do cloroplasto:
compree$de * etapas=
a- *ase lui!osa= depe$de$te de lu4: ocorre$do a !otlise da gua
acoplada com as produ;es de NA#(6o6
o
+!otorreduo- e de AT(
+!oto!os!orilao-: co$!orme a equao a,ai3o5

lu4
NA#(
o
o A#( o (i o 6
*
0 NA#(6 o 6
o
o AT( ov0
*

cloroplastos
,- *ase escura= $o depe$de de lu4 e correspo$de F reduo do CO
*
ao $9el de car,oidrato Fs e3pe$sas do NA#(6o6
o
e AT(5

escuro
NADP6 o 6
o
o AT( o CO
*
NA#(
o
o A#( o (i o C+6
*
0-

cloroplastos
6ill: em &B3.: te$ta$do des9e$dar o processo !otossi$t8tico
emprega$do cloroplastos isolados de espi$a!re: prete$dia a reduo do C0
*
ao $9el de car,oidrato5 (or di'culdades t8c$icas: limitadas pela 8poca: $o
co$seguiu o seu i$te$to: mas c0egou a demo$strar a 0a,ilidade de
cloroplastos isolados de redu4ir outros compostos em um processo acoplado
F !otlise da gua com e9oluo de 0
*
=
lu4
*
)e
o3
o 6
*
0
*
)e
o*
o

*
6
o
o v0
*

cloroplastos

Assim a produo !otoqumica de o3igM$io e3ige a prese$a de um
aceptor de 6
o
eIou el8tro$s: que $ecessariame$te $o precida ser o CO
*
5
No prese$te e3perime$to ser utili4ado como aceptor de el8tro$s
+reage$te de 6ill- um i$dicador de 3idoAreduo: o *:CAdicloro!e$oli$do!e$ol:
que $a !orma o3idada 8 a4ul +com ma3 ao redor de @"0 $m- e $a !orma
redu4ida 8 i$color: o que permite o acompa$0ame$to da reao !otoqumica
mediada por cloroplastos isolados de espi$a!re5
36
M+ )A&ERIAL
A Tu,os de e$saio +" por grupo-
A Ce$tr!uga de mesa com tu,os +&0 ml-
A Ba$0o de gMlo
A Almo!ari4 com pistilo +& para cada grupo-
A 7<mpada de &00 g +*-
A )ol0a de alum$io
A Ba$0o maria +&00
o
C-
M+1+ Reage!tes
A Sacarose 0:3@/
A Tampo !os!ato 0:0@ / +p6 G C:@- co$te$do sacarose 0:3@ /
A *:CAdicloro!e$ol i$do!e$ol +&C mgI&00 ml-
A `cido ascr,ico +cristais-
N+ PRO"EDI)EN&O
N+3+ EGtra=>o dos "loroplastos
a- (icar @ g de !ol0as de espi$a!re e 0omoge$ei4ar em almo!ari4 usa$do
areia la9ada como a,rasi9o e &0 ml de sacarose 0:3@ / +adicio$ados aos
poucos- como e3trator5
,- )iltrar o 0omoge$ei4ado em gase: ou algodo5
c- Ce$tri!ugar por * mi$utos a *00 3 g: +&300 rpm- despre4ar o
precipitado e ce$tri!ugar $o9ame$te o so,re$ada$te por . mi$utos a &000 3g5
+3000 rpm-
d- %essuspe$der os cloroplastos la9ados em &0 ml de tampo !os!ato
0:0@ / +p6G C:@- co$te$do sacarose 0:3@ /5 /a$ter em ,a$0o de gelo at8 o
mome$to do uso5
N+1+ E!saio
(reparar " tu,os de colormetro co$!orme o quadro que se segue=
&U$OS
SUSPENS
O
"LOROPLA
S&O
7L8
&A)PO
*OS*A&O
7L8
1;U0D"*
7L8
O$SERVA4TES
& &:@
+o
c5ascr,ico
-
3 0:@ aEustar o \4ero]do
aparel0o
* &:@ 3 0:@ ler imediatame$te
3 &:@ 3 0:@ ler imediatame$te e
co,rir com !ol0a de
Alum$io
" &:@
+!er9er 3n-
3 0:@
Os tu,os *: 3 e " so e3postos F lu4 de l<mpada +&00 g- dura$te &
mi$uto +o tu,o $a 3
protegido da lu4- e !a4Ase a leitura de a,sor,<$cia +#50-
repeti$do a operao " 9e4es5
37
S+ AN'LISES DOS RESUL&ADOS
A$otar as leituras o,tidas e !a4er um gr'co
#iscutir os resultados=
a- Pual a !u$o do cido ascr,icoQ
,- Pual a !u$o do *:C #C)Q
c- #escre9a o o,ser9ado $os tu,os *: 3 e " dura$te as leituras5
d- Puais tu,os ocorre !otoss$teseQ (orqueQ
e- Puais tu,os $o ocorre a !otoss$teseQ (orqueQ
$I$LIO.RA*IA=
PKVsiologV:
3@= .00A.0N +&BC0-5
6gHTT: 5U5 PKVsiological a!d $iocKeical 9actors _icK co!trol tKe
p5.NA&035
2H777A: X5X5R BACH7A: /5R TASTA7#H: 65 &?c!icas e EGperie!tos de
$io<uBica5 1ooga$: %io de Ua$eiro: &B.3: @@*p5
38
Aula Pratica NL a @ ANALISE DA REDU&ASE DE NI&RA&O E) PLAN&AS
3+ O$EE&IVOS
2eri'car a 0a,ilidade de tecidos 9egetais de redu4ir o $itrato: o primeiro
passo $a utili4ao meta,lica dessa !orma $itroge$ada: a9alia$doAse ai$da o
e!eito da lumi$osidade5
1+ *UNDA)EN&OS
O $itrato +NO
3
A
- 8 a !orma $itroge$ada mais a,u$da$te $o solo e as
pla$tas dese$9ol9eram meca$ismos ,ioqumicos para a sua utili4ao5 (ara
tal o NO
3
A
8 redu4ido a NO
*
A
pela e$4ima eredutase de $itratoee a seguir o
NO
*
A
8 tra$s!ormado em amK$ia +N6
3
- pela eredutase de $itrito5 A amK$ia 8
posteriorme$te assimilada resulta$do $os compostos org<$icos $itroge$ados5
A redutase de NO
3
8 estimulada pela lu4 e 0 i$dcios de que a
ati9idade da mesma esteEa relacio$ada com a capacidade de certas pla$tas
em acumular mais prote$as: o que tem sugerido o mel0orame$to ge$8tico
mo$itorado pela medida da ati9idade e$4imtica5 Tam,8m tem sido utili4ada
$a a9aliao da $utrio $itroge$ada em di9ersas culturas5

NO
3A

o NA#6 o 6
o

NO
*

A
o NA#o o 6
*
O

+$itrato-

+redutase-
+$itrito-

A ati9idade da e$4ima pode ser estimada pela qua$tidade de N0
*
A
!ormada que 8 colorim8tricame$te dosada media$te reao com sul!a$ilamida
e A$a!tile$odiami$o: gera$do um comple3o colorido +dia4o composto- com
ma3 em @"0 $m5
M+ )A&ERIAL
A spectro!otKmetro
A Ba$0oA/aria +3.
o
C-
A (er!urador +0:@ cm de di<metro-
A (i$as
A sta$te com tu,os de e$saio +N tu,os por grupo-
A @ pipetas graduadas de @ ml +por grupo-
M+1+ Reage!tes

A Sul!a$ilamida &J em 6Cl &* N
A A$a!tile$odiami$o 0:0@J
A (adro de NaNO
*
&0 /
A Su,strato tampo$ado +1NO
3
*00 m/ em tampo !os!ato @0 m/ p6G
.5"-
39
N+ PRO"EDI)EN&O
a- (esar &00 mg de discos !oliares +0:@ cm de di<metro-: de !ol0as
ilumi$adas e de !ol0as ma$tidas ao a,rigo da lu4: tra$s!eri$do para tu,os de
e$saio5
,- H$cu,ar com @ m7 de su,strato tampo$ado a 3.
o
C por & 0ora:
ma$te$do os tu,os ao a,rigo da lu4 +e$9oltos em !ol0as de alum$io-5
c- (arali4ar a reao e$4imtica pela adio de sul!a$ilamida &J em 6Cl
*N e a seguir adicio$ar & ml de A$e!tile$odiami$o 0:0@J5
d- Agitar: aguardar @ mi$utos para a reao cromogM$ica: remo9er os
discos por 'ltrao e e!etuar a leitura em !otocolormetro com 'ltro $
o
@"5
e- (aralelame$te !a4er reta padro !a4e$doAse reao co$!orme a ta,ela
que se segue=
&U$O
N
O
,1O
DES&+
NaNO1
32 )
SUL*ANI
LA)IDA
NA*&ILEN
O DIA)INO
LEI&URA t
O SN2 !
A/s
SN2!
X A/s
SN2 !
0 @ m7 & m7 & m7 & ml
& " m7 & m7 & m7 & ml
* 3 m7 * m7 & m7 & ml
3 * m7 3 m7 & m7 & ml
" & m7 " m7 & m7 & ml
@ 0 m7 @ m7 & m7 & m7
C @ m7 !ol0a
scuro
0 & m7 & m7
. @ m7 !ol0a
Claro
0 & m7 & m7
S+ RESUL&ADOS e DIS"USSO
Com os dados o,tidos esta,elecer a reta padro +leituras $a orde$ada
co$tra co$ce$tra;es de N0
*
A
$a a,scissa- e media$te i$terpolao $a reta
calcular as ati9idades de %edutase de Nitrato: e3pressa$do os 9alores em
moles de $itrato redu4ido por 0ora por g de tecido !oliar !resco +moles5 g
A& 5
0
A&
-5
#iscutir os resultados=
&5 (orque a di!ere$a e$co$trada e$tre os resultados das !ol0as ma$tidas $o
claro em relao as !ol0as ma$tidas $o escuroQ
*5 Pual a import<$cia da lu4 $o processo de reduo do NitratoQ
RE*ERbN"IAS $I$LIO.RA*I"AS
40
PKVsiologV:
3@= .00A.0N +&BC0-5
6gHTT: 5U5 PKVsiological a!d $iocKeical 9actors _icK co!trol tKe
p5.NA&035
2H777A: X5X5R BACH7A: /5R TASTA7#H: 65 &?c!icas e EGperie!tos de
$io<uBica5 1ooga$: %io de Ua$eiro: &B.3: @@*p5
41
QUES&ION'RIO 3
ASSUNTO= CA%BO#%ATOS 7H(H#OS
&5#e'$a ligao 0emicetal demo$stra$do um e3emplo atra98s de uma cetose
e uma aldose +ciclo 0e3ose-5
*5scre9a a !rmula cclica +proEeo- dos pri$cipais mo$ossacarideos
+0e3oses-5 Co$sidere as posi;es #:7: e
35A mol8cula de #AA glicose di!ere em que de uma mol8cula de #A AglucoseQ
"53plique resumidame$te= +&- Como se !a4 a $umerao da cadeia de um
mo$ossacardeoR +*- #i!ere$cie posio #:7:+o- e +w-:
"#scre9a as !rmulas de= sacarose: maltose: lactose e celo,iose5
C5O que so liga;es glicosdicas dos tipos a + &:"- e a + &:"-Q
.5#i!ere$cie os polissacarideos amido: glicogM$io e celulose qua$to Fs
liga;es glicosdicas5
squemati4e as trMs macromol8culas e !ale de suas !u$;es5
N5Como se di9idem os polissacarideosQ #M e3emplos5
B5O que so de3tra$as: !ruta$as e 0emiceluloseQ
&05O que so NAglicosideos: oAmetlicos: a[caresAalcois e ami$oAa[cares
&&&5 Citar as !u$;es dos lipdeos $os seres 9i9os5
&*5Pual a import<$cia do $dice de sapo$i'cao e $dice de iodo +em relao
ao peso molecular e grau de i$saturao- $os cidos gra3os : gorduras e
leos5
&35scre9a a relao e$tre po$to de !uso e solu,ilidade qua$to ao peso
molecular: estrutura e grau de i$saturao de lipdeos5
&"5O que ocorre $a ra$ci'cao o3idati9aQ Pual o papel dos a$tio3ida$tesQ
Cite e3emplos5
$"#Citar as caractersticas $ecessrias para que uma mol8cula !u$cio$e como
sa,o ou deterge$te5
&C5Puais os compo$e$tes estruturais de uma cera e o tipo de ligao e$tre
elasQ
&.5Pue so cidos gra3os saturados: i$saturados e polii$saturadosQ5 #M
e3emplos5
&N5Puais as !u$;es dos triglicerdeosQ Pue tipo de ligao e3isteQ
&B5Pual a !u$o dos !os!olipideosQ scre9a um e3emplo: da$do sua
import<$cia5
*05Testostero$a e (rogestero$a perte$cem a que classe de lipideosQ (orqueQ
42
QUES&IONARIO 1
&5scre9a as classi'ca;es dos ami$ocidos de acordo com a cadeia lateral5
*5 Cite dois e3emplos de cada classe
3 scre9er a reao e$tre dois ami$oacido: ide$ti'ca$do a ligao peptidica5
"5 3plicar o que sig$i'ca po$to isoel8trico de um ami$ocido5
@ 5 Citar a carga de um ami$ocido a,ai3o e acima de seu po$to isoeletrico5
C5 %eprese$tar a ligao peptidica55
. O que 9em a ser a estrutura primaria: secu$daria: terciria e quater$ria de
uma prote$aQ
N5 Citar os tipos de ligao respo$s9eis pelas estruturas secu$daria e
terciria da prote$a
%# O que 9em a ser des$aturao de uma prote$a: e que age$tes causam
esta des$aturaoQ
&05 #e'$ir prote$a simples e co$Eugada5 #e e3emplos5
&&5O que 9em a ser 9elocidade de uma reao e$4imticaQ
&*5 Pual a e3plicao de /ic0aelis /e$tem para o modo de ao de uma
e$4imaQ
&35 Pual o co$ceito de]sitio ati9onQ
&"5scre9a gra'came$te a comparao e$tre as e$ergias de ligao de uma
reao catalisada e uma reao $o catalisada5
&@5Pue 9em a ser i$i,idor competiti9o e $o competiti9oQ
&C5O que 8 uma e$4ima alostericaQ
$&# Pual o e!eito da temperatura em uma reao e$4imticaQ
&N5Pual o e!eito do p6 em uma reao e$4imticaQ
&B5P que 8 co!ator e$4imticoQ
*05O que so coe$4imas Q de e3emplo
QUES&IONARIO M
&- scre9a gra'came$te a comparao e$tre as e$ergias de ati9ao de uma
reao catalisada e de uma reao $o catalisada5
*- Pual o co$ceito de \sitio ati9o]Q
3- Pual o sig$i'cado da co$sta$te de /ic0aelis e /e$te$Q
"- O que 8 glicliseQ
@- 7ocali4ao celular da gliclise5
C- Pual a relao e$tre i$suli$a e glicliseQ
.-A !rutose pode ser utili4ada $a glic;liseQ
N- A aldolase aprese$ta 1Aequili,rio B 3 &0
"
5 (or8m $a c8lula a reao se
desloca $o se$tido da degradao da !rutose5 (or quMQ
B-Pual o e!eito da adre$ali$a so,re a glicliseQ
&0- 3plicar o ,ala$o de AT( $o processo da gliclise5
&&- Pual a relao e$tre a,ate de a$imais e desca$soQ
&*-0 que sig$i'ca !ormao de AT( a $9el de su,stratoQ
43
&3-0 que 8 gluco$eogM$eseQ
&"- Pual a import<$cia da gluco$eoge$eseQ
&@- Como pode ser utili4ada a !erme$tao alcolica para a produo de
glicerolQ
&C- /eca$ismo de !ormao do glicerol5
&.- Puais as di!ere$as e$tre gliclise e !erme$tao alcolicaQ
&N- #estacar a import<$cia da $icoti$amida +9it5 do comple3o B- $a gliclise5
&B- Pual a import<$cia do ciclo das pe$tosesQ
*0- 7ocali4ao celular do ciclo das pe$toses5
*&- No que co$siste o ciclo das pe$tosesQ
**- Comparar gliclise com ciclo das pe$toses5
*3-#estacar a import<$cia de eleme$tos mi$erais $o ciclo das pe$toses5
*"-Como 9ocM pode determi$ar: $a prtica: se um tecido est reali4a$do
gliclise ou ciclo das pe$tosesQ
*@- (orque 0 $ecessidade do ciclo de 1re,s para a o3idao do acetilACoAQ
*C- Puais os produtos do ciclo de 1re,sQ
*.- Puais so as e$4imas regulatrias do ciclo de 1re,sQ
*N- Pual o sig$i'cado do ciclo de 1re,sQ
*B- Puais os i$i,idores do cicloQ
30- Pue sig$i'ca cadeia respiratriaQ
3&- Pual a produo de AT( atra98s da o3idao total de uma mol8cula de
glicoseQ
3*- Puais os 9e$e$os respiratriosQ
33- Pue composto ' o [ltimo aceptor de eletro$s $a cadeia respiratriaQ
3"- Pual a di!ere$a e$tre AT( e XT( Qn
QUES&IONARIO N 7.LI"5LISE; "I"LO DE YRE$S E "ADEIA
RESPIRA&ORIA8
&5 O que 9em a ser glicliseQ
*5 m que regio da c8lula se processa a gliclise e qual a sua '$alidadeQ
35 O que 9em a ser \,ala$o de coe$4imas] e por que ele 8 $ulo em
a$aero,ioseQ
"5 Puais os su,stratos e os produtos do meta,olismo a$aer,ico dos
car,oidratosQ
@5 Pual o re$dime$to e$erg8tico o,tido por uma c8lula muscular ao degradar
a$aero,icame$te a glicoseQ (or que este re$dime$to 8 superior qua$do se
utili4a glicogM$io como su,stratoQ #ados=
AT( A#( o (iR +AXGAN5000 calImol-
CC6&*0C *C36C03 +AXGA". 5000calImol-
C5 O que 9em a ser \malte] e qual a sua !u$o $a produo de eta$ol a
44
partir de cereaisQ
.5 Pual a 9a$tagem do a,ate de a$imais desca$sados F lu4 do meta,olismo
a$aer,ico $as c8lulas muscularesQ
N5 m que se !u$dame$ta a co$ser9ao de alime$tos +coal0adas: iogurtes:
e$silagem: picles: etc5- ao se propiciar a !erme$tao lticaQ
B5 Puais as !u$;es do Ciclo de 1re,sQ O$de ele se processaQ
&O5Puais as !u$;es da Cadeira %espiratriaQ O$de ela se processa e
por que a mesma est acoplada ao Ciclo de 1re,sQ
&& Pual a di!ere$a e$tre \9e$e$o respiratrio] e \desacoplador da
!os!orila<o o3idati9a]Q
&*5Pual a di!ere$a e$tre \!os!orilao o3idati9a] e \!os!orilao ao $9el de
su,strato]Q Pual a mais sig$i'cati9a em co$di;es de aero,iose: por queQ
&35 Pual o re$dime$to e$erg8tico o,tido por uma c8lula ao o3idar
completame$te a mol8cula de glicoseQ Pua$tos AT(s so produ4idos pela
!os!orilao o3idati9a e qua$tos pela !os!orilao ao $9el de su,stratoQ
#ados=
CC6&*0C C0* o 6*O R + XxGACNC5000 calImoH-
&"5Pua$tos AT(s so produ4idos pela com,usto ,iolgica completa do acetilA
CoA: piru9ato: lactato e eta$olQ
&@5Pual a 9a$tagem da mem,ra$a i$ter$a da mitocK$dria se aprese$tar
e$rugadaQ
&C5Como se e3plica a ao t3ica do c[or acetato +pri$cipio t3ico de algumas
pla$tas- so,re o Ciclo de 1re,sQ
&.5Como se e3plica a ao t3ica do cia$eto $a Cadeia %espiratriaQ
QUES&ION'RIO S@ VIA PEN&OSE *OS*A&O; )E&A$OLIS)O DOS
&RI.LI"ERIDIOS; )E&A$OLIS)O DE.RADA&3VO DAS PRO&EINAS E
A)INO'"IDOS E EZ"RE4O DO NI&RO.bNIO+
&5 Cite duas di!ere$as e duas semel0a$as e$tre gliclise e 9ia pe$tose
!os!ato5
*5 Puais as '$alidades da 9ia pe$tose !os!ato e em que regio da c8lula
ela operaQ
35 Compara$doAse as gl<$dulas mamrias e o m[sculo esquel8tico em
quais desses tecidos predomi$a a 9ia pe$tose !os!atoQ Uusti'que5 idem
para os tecidos 9egetais Eo9e$s e maduros5
"5 Pual a import<$cia e$erg8tica qua$titati9a e qualitati9a dos
triglicerdios de $ossa dietaQ
"# O que resulta da ,etaAo3idao dos cidos gra3osQ O$de ela se processa
e quais os desti$os dos seus produtosQ
(# Pua$tos AT(s seriam o,tidos por uma c8lula ao o3idar completame$te o
triglicerdio a,ai3o estruturadoQ
C6
*
A O A CO A +C6
*
-
&3
A C6
3
C6AOACOA+C6
*
-
&"
AC6
3
C6
*
A OACO A +C6
*
-
&"
A C6
3
.5 Como a c8lula e!etua a dessaturao dos cidos gra3osQ Como ela est
relacio$ada com a aclimatao de certas pla$tas em am,ie$tes mais
!rioQ
45
N5 (or que as prote$as de9em estar prese$tes em $ossa dietaQ (odem
elas: e como: ate$der a dema$da e$erg8tica de $osso orga$ismoQ
B5 O que 9em a ser ami$ocido esse$cialQ Cite 3 deles para o 0omem5
&05 0 que 9em a ser ,ala$o $troge$adoQ (or que ele 8 $ulo em a$imais
adultos e $egati9o qua$do de uma dieta de'cie$te em ami$ocidos
esse$ciaisQ
&&5 O que 9em a ser reao de tra$sami$aoQ Cite uma delas e come$te a
sua import<$cia5 Hdem para reao de descar,o3ilao de ami$ocido5
&*5 Puais as !ormas $itroge$adas de e3creo utili4adas pelos orga$ismos
a$imaisQ Pue propriedades de solu,ilidade e to3ide4 aprese$tamQ
&35 (or que a ur8ia 8 a !orma $itroge$ada de e3creo mais adequada para
os mam!erosQ Hdem qua$to ao cido [rico para as a9es5
&"5 (or que a$imais com 0a,ilidade meta,lica para e3creo de ur8ia ou
cido [rico 9oltam a e3cretar $itrogM$io amo$iacal qua$do em am,ie$te
com gra$de dispo$i,ilidade de guaQ
QUES&ION'RIO U @ IN&E.RA4O DO )E&A$OLIS)O; RE.ULA4O
)E&A$5LI"A; *O&OSSIN&ESE E "I"LO DO NI&RO.bNIO
&5Puais so as etapas +!ases- pelas quais passam polissacardios:
triglicerdios e prote$as para ate$der F dema$da de e$ergia +AT(- por
parte da c8lulaQ
*5Com que e'ciM$cia 8 aprisio$ada a e$ergia das liga;es 8steres:
glicosdicas e peptdicas $a !ase de 0idrlise dos alime$tosQ
35Puais so os 3 compostos c0a9es do meta,olismo degradati9o dos
car,oidratos: lipdios e prote$asQ Puais os seus desti$osQ
"5squemati4e a !ormao de triglicerdio a partir de car,oidrato5
"# squemati4e a !ormao dos cidos glut<mico: asprtico e ala$i$a a partir
de ur8ia e a[car de melao $o rume$ ,o9i$o5 (orque a ur8ia tem que ser
!or$ecida Eu$tame$te com uma !orma !acilme$te meta,oli49el de a[carQ
C5O que 9em a ser \ami$oacido glicogM$ico]Q Cite 3 deles5 Pual a import<$cia
deste !ato para o meta,olismo a$imalQ
.5 O que 9em a ser \corpos cetK$icos] e como so !ormados em $osso
orga$ismoQ m que co$di;es 'siolgicas tais compostos se mostram com
co$te[dos mais ele9ados $a uri$a e $o sa$gueQ
N5(odem os triglicerdios ser co$9ertidos em a[car $o orga$ismo a$imalQ (or
queQ
B5O que 9em a ser \Ciclo do Xlio3ilato]Q m que orga$ismos ocorre e
qual a sua !u$o ,ioqumicaQ (orque tal ciclo 8 particularme$te ati9o
dura$te a germi$ao de seme$tes oleagi$osasQ
&050 que 9em a ser \!eito (asteur] e como ele 8 e3plicado ,ioqumicame$teQ
&&5(or que uma adu,ao $itroge$ada e3cessi9a por acarretar o
\acamame$to] em certas culturasQ
&*5Como o e3cesso de amK$ia pode comprometer o meta,olismo das c8lulas
$er9osas +c8re,ro- le9a$do ao coma cere,ralQ Como a i$to3icao com eta$ol
le9a ao mesmo quadro cl$icoQ
46
&35(orque o dia,8tico ,e,e mais gua que o i$di9duo saud9elQ
&"5Puais os e9e$tos que depe$dem e quais os que $o depe$dem da lu4
qua$to F !ormao de glicose por uma pla$ta !otossi$teti4adoraQ
&@5(or que as lu4es de comprime$tos de o$de de )"* e ("* $m so mais
e'cie$tes para a reali4ao de !otoss$tese pelas pla$tas superioresQ
&C5Puais as !u$;es dos carote$ides $o processo !otossi$t8tico co$du4ido
pelas pla$tasQ
&.5Como se e3plicam a esse$cialidade do Cl: /$ e /g para o processo
!otossi$t8ticoQ
& N5Como so estruturados os sistemas de pigme$tos para a captao da
e$ergia radia$te para a co$duo da !otoss$teseQ
&B5Pual a !u$o da gua $o processo !otoss$t8ticoQ
*05 0 que 'ca demo$strado qua$do se o,ser9a a reduo do *:CA
dicloro!e$oli$do!e$ol por cloroplastos ilumi$ados +reao de 6ill-Q
*&5 0 que 9em a ser \!otoAreduo do NA#(
o
e \!oto!os!orilao do A#(]Q
**5 Pual o primeiro composto !ormado pela assimilao do CO
*
media$te a
9ia CA3 de '3aoQ Hdem para a 9ia CA"5 Puais as e$4imas ye$9ol9idas $esta
etapa e suas a'$idades para com o CO
*
Q
*35Pue adapta;es ocorreram $as crassulceas que l0es permitem a /e
so,re9i9M$cia em am,ie$tes que$tes e ridosQ
*"50 que 9em a ser \!otorrespirao]Q Pual o seu su,strato e porque 8 pouco
i$te$sa $as pla$tas CA"Q Pual a import<$cia da lu4 e do 0* $este processoQ
*@5Cite " di!ere$as e$tre pla$tas CA3 e CA" +e3ceto !otoArespirao-5
*C5(or que as pla$tas CA" so me$os e3ige$tes em $itrogM$io qua$do
comparadas com as CA3Q
*.5(orque as pla$tas CA" !a4em !otoss$tese com ,oa e'ciM$cia mesmo em
temperaturas mais ele9adasQ
*N5 (orque a !otoss$tese $as pla$tas CA" $o ati$ge a saturao mesmo com
gra$de i$te$sidade lumi$osaQ
*B50 que 9em a ser \po$to de compe$sao] e por que 8 me$or para as
pla$tas CA"Q
305(orque o $itrato 8 a !orma $itroge$ada mais a,u$da$te $o soloQ 3istiria
alguma 9a$tagem para as pla$tasQ
3& 5Como os 0er,icidas que ,loqueiam o tra$sporte de el8tro$s $o processo
!otossi$t8tico matam a pla$taQ
3*50 que 9em a ser \reduo do $itrato]Q Puais as participa;es do !erro e
moli,dM$io $este processoQ
3350 que 9em a ser \'3ao do $itrogM$io]Q Puais as modalidades de '3ao
do N

Q
3"5 0 que 9em a ser \assimilao da amK$ia] e quais a 9ias meta,lcas
e$9ol9idasQ
47
3@5 0que 9em a ser \$itri'cao] e qual a import<$cia agro$Kmica para essa
tra$s!ormaoQ
3C50 que 9em a ser \des$itri'cao]Q Pue orga$ismo est e$9ol9ido e com
que o,Eeti9o tal processo 8 co$du4idoQ
3.5Como que os 0er,icidas yque ,loqueiam o tra$sporte de el8tro$s $a
!ase lumi$osa da !otoss$tese +*:"A#N( e #C/U- matam a pla$taQ
48
&a/ela de "o!:ers>o
&O e A G 3+222
22 23 21 2M 2N 2S 2U 2a 26 2c
2 M+2221Ucc1+S1M1+Mc61+M231+111 1+3SS1+2ca *50"C
3 1+2223+cSc3+c133+66U 3+6SN3+61N3+acU3+aa2 3+aNS
3+a13
1 3+Ucc3+Ua63+US63+UM6 3+U123+U213+S6S3+SUc 3+SSM
3+SM6
M 3+S1M3+S2c3+NcS3+N63 3+NUc3+NS6&5"""3+NM13+N12 3+N2c
N 3+Mc63+M6a3+Maa3+M6a 3+MSa3+MNa3+MMa3+M16 3+M3c
3+M32
S 3+M233+1c13+16N3+1aU 3+1U63+1U23+1S13+1NN 3+1Ma
3+11c
U 3+1113+13S3+1263+123 3+3cN3+36a3+3623+3aN 3+3Ua
3+3U3
a 3+3SS3+3Nc3+3NM3+3Ma 3+3M33+31S3+33c3+33N 3+326
3+321
6 3+2ca3+2c1&50NC3+2633+2aU 3+2a3&50CC3+2U23+2SU 3+2S3
c &50"N&50"&3+2MU3+2M13+21a3+211 3+2363+23M3+22c &500"
32 3+2222+ccU2+cc32+c6a 2+c6M2+cac2+caS2+ca3 2+cUa
05BC3
33 cSc cSS cS3 cNa B"3 cMc cM6 cM1 c16 c1N
31 c13 c3a c3N c32 c2a c2M c22 6cU 6cM 66c
3M 66U 66M 6ac 6aU 6aM 6a2 6UU 6UM 6U2 6Sa
3N N@" 6S3 N"N N"@ 6N1 6Mc 6MU 6MM 6M2 61a
3S 61N 613 636 63S 631 632 62a N0" 623 acc
3U acU acM ac2 a66 a6S a6M a62 aaa aaS aa1
3a aa2 aUa .C" aU1 aSc aSa .C" aS1 aS2 aNa
36 aNS aNS aN1 aM6 aMS aMM aM2 a16 a1U a1N
3c a13 a3c a3a a3N a31 a32 a26 a2U a2M a23
12 Ucc Uca UcS UcM Uc2 U66 U6U U6N U61 U62
13 Ua6 UaU UaN Ua1 Ua2 U66 UUU UUN CC* CC0
11 US6 USU C@" US1 US2 UN6 C"C C"" C"* C"0
1M UM6 UMU UMS UMM UM3 U1c U1a U1S U1M U11
1N U12 U36 616 U3N U3M U33 U2c U2a U2U C0"
1S U21 U22 Scc Sca ScS S2M Sc1 Sc2 S66 S6a
1U S6S S6M S61 S62 Sa6 Saa SaS SaM Sa1 Sa2
1a SUc SUa SUS @C" SU1 SU3 SSc SS6 SSU @@"
16 SSM SS3 SS2 @"N @". @"@ @"" @"* @"& SMc
1c SM6 @3C SMS SMM SM1 SM2 S1c S1a S16 S1N
M2 S1M S13 S12 S3c S3a S3U S3N S3M S33 S32
49
M3 S2c S2a @0C @0" S2M S21 S22 Ncc Nc6 NcS
M1 NcS NcM Nc1 491 N6c N66 N6a N6S "N" N6M
MM N63 N62 Nac Na6 NaU NaS NaN Na1 Na3 Na2
MN NUc NUa NU6 NUS NUM NU1 NU3 NU2 NS6 NSa
MS NSU NSS NSM NS1 NS3 NS2 ""B NNa ""C ""@
MU NNN NN1 ""& ""0 NMc NM6 NMa NMS 33" NMM
Ma NM1 NM3 N1c N16 N1a N1U N1S N1N N1M N13
M6 N12 N3c N36 N3a N3U N3S N3M N31 N33 N32
Mc N2c N26 N2a N2U N2S N2M N21 N23 N22 Mcc
N2 Mc6 Mca McU McS 3B" McM Mc3 Mc2 M6c M66
N3 M6a 3NC M6S 3N" M6M M61 M63 M62 Mac Ma6
N1 Maa MaU MaS MaN MaM Ma1 Ma3 Ma2 MUc MU6
NM MUa MUU MUS 3C" MUM MU1 MU3 MU2 MSc MS6
NN MSa MSU MSS 3@" MSM MS1 MS3 MS2 3"B 3"N
NS 3". MNU 3"@ 3"" MNM 3"* 3"& 3"0 MMc MM6
NU MMa MMU MMS MMN MMM MMM MM1 MM3 MM2 M1c
Na M16 M1a M16 M1U M1S M1N M1M 3** M13 M12
N6 M3c M36 M3a M3U M3S M3N M3M M31 M31 M33
Nc M32 M2c M26 M2a M2U M2S M2S 30" M2M M21
S2 M23 M22 1cc 1c6 1c6 1ca 1cU 1cS *B" 1cM
S3 1c1 1c1 1c3 1c2 16c 166 16a 16a 16U 16S
S1 *N" 16M 161 163 163 162 1ac 1a6 1aa 1aa
SM 1a6 1aS 1aN 1aM 1a1 1a1 1a3 1a2 16c 1U6
SN 1U6 1Ua 1UU 1US 1UN 1UN 1UM 1U1 1U3 1U2
SS 1S2 1Sc 1S6 1Sa 1Sa 1SU 1SS 1SN 1SM 1SM
SU 1S1 1S3 1S2 1Nc 1Nc 1N6 1Na 1NU 1NU 1NS
Sa *"" 1NM 1NM 1N1 1N3 1N2 1N2 1Mc 1M6 1Ma
S6 1Ma 1MU 1MS 1MN 1MN 1MM 1M1 1M3 1M3 1M2
Sc 11c 116 116 11a 11U 11S 11S 11N 11M 11M
U2 111 113 112 112 13c 136 136 13a 13U 13S
U3 13S 13N 13M 13M 131 133 132 132 12c 126
U1 126 12a 12U 12U 12S *0" 12M 12M 121 121
UM 123 122 3cc 3cc 3c6 3ca 3ca 196 3cS 3cN
UN 3cN 3cM 3c1 3c1 3c3 3c2 3c2 36c 366 366
US 36a 36U 36U 36S &N" &N" 36M 361 361 363
UU 362 362 3ac 3a6 3a6 3aa 3aa 3aU 3aS 3aS
67 3aN 3aM 3aM 3a1 3a3 3a3 3a2 3Uc 3Uc 3U6
U6 167 3Ua 3UU 3UU 3US &C" &C" 3UM 3U1 3U1
Uc 3U3 3U3 3U2 3Sc 3Sc 3S6 3Sa 3Sa 3SU 3SU
a2 3SS 3SN &@" 3SM 3S1 3S1 3S3 3S3 3S2 3Nc
a3 3Nc 3N6 3N6 3Na 3NU 3NU 3NS &"" &"" 3NM
a1 3NM 3N1 141 3N3 3N2 3N2 3Mc 3M6 3M6 3Ma
50
aM 3Ma 3MU 3MS 3MS 3MN &3" 3MM 3MM 3M1 3M1
74 3M3 3M2 3M2 31c 316 316 31a 31a 31U 31U
aS 31S 31N 31N 31M 31M 311 313 313 312 312
aU 33c 33c 336 33a 33a 33U 33U 33S 33S 33N
aa 33N 33M 331 331 333 333 332 332 32c 32c
a6 326 32a 32a &0C 32U 32S 32S &0" 32M 32M
79 321 321 323 323 322 322 2cc 2cc 2c6 2ca
62 2ca 0BC 0BC 2cS 2cS 0B" 0B" 2cM 2cM 2c1
63 2c1 2c3 2c2 2c2 26c 26c 266 266 26a 26a
61 26U 0NC 26S 26S 0N" 0N" 26M 26M 261 263
6M 263 262 262 2ac 2ac 2a6 2a6 2aa 2aa 2aU
6N 2aU 2aS 2aS 2aN 2aN 2aM 2aM 2a1 2a1 2a3
6S 2a3 2a2 2a2 2Uc 0CB 2U6 2U6 2Ua 0C. 0CC
6U 0CC 2US 2UN 2UN 0C3 0C3 2U1 2U1 2U3 0C&
6a 0C0 2U2 2Sc 2Sc 2S6 2S6 2Sa 2Sa 2Sa 2SU
66 2SU 2SS 2SS 0@" 0@" 2SM 2SM 2S1 2S1 2S3
6c 2S3 2S2 2S2 0"B 0"B 0"N 0"N 0". 2Na 0"C
c2 0"C 0"@ 0"@ 0"" 0"" 0"3 0"3 0"* 2N1 0"&
c3 2N3 2N2 0"0 0"0 2Mc 2Mc 2M6 2M6 2Ma 2Ma
c1 2MU 2MU 2MS 2MS 03" 03" 2MM 2MM 2M1 2M1
cM 2M1 2M3 2M3 030 2M2 21c 21c 216 216 21a
cN 21a 21U 21U 21S 21S 21S 21N 21N 21M 21M
cS 211 211 213 213 212 212 212 23c 23c 236
cU 236 23a 23a 23Ud 23U 23S 23S 23S 23N 23N
97 23M 23M 231 231 233 233 233 232 232 22c
c6 22c 226 22a 22a 22a 22a 22U 22U 22S 00@
cc 22N 00" 22M 22M 22M 221 221 223 223 222
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Apostila Pratica2012

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