Quim. Nova, Vol. 30, No.

3, 535-540, 2007
A
r
t
i
g
o
*e-mail: aneves@ufv.br
OTIMIZAO E VALIDAO DA TCNICA DE EXTRAO LQUIDO-LQUIDO COM PARTIO EM BAIXA
TEMPERATURA (ELL-PBT) PARA PIRETRIDES EM GUA E ANLISE POR CG
Heulla Pereira Vieira, Antnio Augusto Neves* e Maria Eliana Lopes Ribeiro de Queiroz
Departamento de Qumica, Universidade Federal de Viosa, 36570-000 Viosa MG, Brasil
Recebido em 20/1/06; aceito em 2/8/06; publicado na web em 19/1/07
OPTIMIZATION AND VALIDATION OF LIQUID-LIQUID EXTRACTION WITH THE LOW TEMPERATURE PARTITION
TECHNIQUE (LLE-LTP) FOR PYRETHROIDS IN WATER AND GC ANALYSIS. The liquid-liquid extraction with the low
temperature partition technique was developed for the analysis of four pyrethroids in water by CG. Using a factorial design the
extraction technique was optimised evaluating the effect of the variables ionic strength, contact time and proportion between sample
and solvent volumes. The validation parameters sensitivity, precision, accuracy and detection and quantification limits were evaluated.
The LOD and LOQ of the method varied from 1.1 to 3.2 g L
-1
and 2.7 to 9.5 g L
-1
, respectively.
Keywords: pyrethroid; validation; gas chromatography.
INTRODUO
Piretrides so inseticidas sintticos, que apresentam estrutu-
ras semelhantes piretrina. A piretrina, componente ativo extrado
das flores do Chrysanthemum cinerariaefolium, tem sido utilizada
h mais de dois sculos no controle de inmeras espcies de inse-
tos. Economicamente, as piretrinas constituram-se no inseticida
ideal em funo de ser praticamente no txico para mamferos,
ter amplo espectro de atividade, apresentar baixo poder residual e
alta eficincia em doses baixas
1
. Em razo disso, relativamente
grande o uso de piretrides no controle de pestes em ambientes
domsticos com possveis riscos de contaminao do homem
2
.
De acordo com o International Programme on Chemical
Safety (IPCS)
3
, os piretrides cipermetrina, deltametrina, -
cialotrina e permetrina so classificados como moderadamente t-
xicos. Apesar da baixa toxicidade verificada para mamferos, estu-
dos toxicolgicos recentes mostraram que os piretrides esto en-
tre os pesticidas mais txicos para organismos aquticos, como
peixes e crustceos, sendo ainda, altamente txicos para abelhas
4
.
A frmula dos piretrides mostrada na Figura 1, juntamente com
os radicais de cada um dos quatro piretrides que foram estudados.
Vrias tcnicas tm sido usadas para determinao e
quantificao dos resduos de piretrides em amostras ambientais.
Dentre elas destacam-se a cromatografia gasosa (CG) acoplada a
detector seletivo de captura de eltrons (DCE)
1,5,6
ou acoplada ao
detector de massas no modo de seleo de ons
7-9
e a cromatografia
lquida de alta eficincia (CLAE), acoplada a detector ultravioleta
(UV)
10
. Atualmente so encontrados inmeros trabalhos de
monitoramento de resduos de piretrides em guas
4,11,12
, solos
13-15
e alimentos
10,16,17
utilizando as mais diversas tcnicas de extrao e
anlise.
Nos ltimos anos, foram desenvolvidas tcnicas de extrao e
purificao de resduos de piretrides, com uma demanda menor de
solventes, como a extrao em fase slida
11-13
e a microextrao em
fase slida
4,18
. Apesar do desenvolvimento das tcnicas de extrao e
microextrao em fase slida, a extrao lquido-lquido continua sendo
a mais empregada por ser uma tcnica simples, que no exige
instrumentao sofisticada, e de fcil execuo. Assim, vrios traba-
lhos foram realizados com o objetivo de otimizar e minimizar o con-
sumo de solventes utilizados nesta tcnica.
A extrao lquido-lquido de analitos lipoflicos em amostras
gordurosas tem o inconveniente da necessidade de purificao dos
extratos. Mesmo assim, uma boa quantidade do material gorduro-
so encontrada nos extratos
19
.
Uma variao da tcnica de extrao lquido-lquido foi, no
passado, desenvolvida para extrao de pesticidas em plantas e
matrizes animais, em que os materiais gordurosos eram separados
por precipitao em baixa temperatura. O abaixamento da tempe-
ratura a valores to baixos como o recomendado (-70
0
C) impedia
o uso intensivo da tcnica
20
. Recentemente, Goulart
16
descreveu o
emprego da tcnica de extrao em baixa temperatura para
piretrides em leite. A tcnica aplicada em amostras de leite con-
sistiu na adio de acetonitrila amostra em uma proporo de 2:1
(v/v). Com a adio da acetonitrila formada uma fase nica lqui-
da contendo gua e solvente. A mistura formada pela fase lquida e
o material slido do leite resfriada a -20
0
C. Com o abaixamento
da temperatura, o material slido precipitado e aprisionado na
fase aquosa congelada. A acetonitrila, de temperatura de congela-
mento igual a -46
0
C, fica lquida e retirada facilmente. As taxas
de recuperao dos piretrides ficaram prximas de 90%, no sen-
do necessrios outros processos de purificao.
Neste trabalho procurou-se adaptar, otimizar e validar a tcni-
ca de extrao lquido-lquido e partio em baixa temperatura
(ELL-PBT) de quatro piretrides em amostras de gua. As melho-
res condies de extrao e anlise simultnea dos quatro piretrides
foram otimizadas e posteriormente validadas com relao s prin-
Figura 1. Estrutura qumica de piretrides sintticos
536 Quim. Nova Vieira et al.
cipais figuras de mrito: exatido, preciso, limites de deteco e
quantificao, linearidade, sensibilidade e seletividade. A tcnica
otimizada e validada foi utilizada para avaliar a persistncia desses
piretrides em guas.
PARTE EXPERIMENTAL
Reagentes e solues
As solues empregadas foram preparadas a partir de padres
de -cialotrina (86,5% m/m Syngenta), permetrina (92,2% m/m
Syngenta), cipermetrina (92,4%m/m Chem Service),
deltametrina (99,0% m/m Chem Service) utilizando como solvente
acetonitrila (Mallinckrodt/ HPLC). Uma soluo de bifentrina
(92,2% m/m FMC do Brasil), tambm em acetonitrila, foi prepa-
rada com a finalidade de ser usada como padro interno nas anli-
ses cromatogrficas dos piretrides.
Amostras de gua
Na otimizao e validao do mtodo de extrao lquido-l-
quido e partio em baixa temperatura (ELL-PBT) foi utilizada
gua destilada e deionizada.
Do Ribeiro So Bartolomeu, corpo dgua que corta a cidade
de Viosa, MG, foram coletadas 3 amostras. A primeira amostra a
montante da cidade, a segunda no centro da cidade e a terceira a
jusante da cidade. As amostras foram coletadas, em triplicata, s
margens do Ribeiro, em frascos de vidro com capacidade de 100
mL e levadas ao laboratrio para anlise, em caixa trmica. No
laboratrio as amostras foram guardadas em geladeira e no rece-
beram nenhum tratamento antes de serem submetidas ao processo
de extrao e anlise cromatogrfica.
Planejamento fatorial
A tcnica de ELL-PBT foi otimizada para a extrao simult-
nea de quatro piretrides: -cialotrina, permetrina, deltametrina e
cipermetrina, em amostra de gua previamente contaminada com
padres dos piretrides. Na otimizao foi empregado um planeja-
mento fatorial completo, 2
3
, para avaliao do comportamento si-
multneo de trs fatores: proporo entre o volume de gua e
acetonitrila, adio de sal e tempo de extrao. Os trs fatores fo-
ram estudados em dois nveis (Tabela 1) e as anlises foram reali-
zadas em duplicata. Os nveis dos trs fatores utilizados no plane-
jamento fatorial foram estabelecidos em experimentos prvios.
Verificou-se que a proporo entre os volumes de gua e acetonitrila
afetava a eficincia da extrao e que existia uma tendncia de
melhora nos rendimentos quando a proporo era aumentada. A
adio de sal foi utilizada no nvel mximo que permitia ainda a
existncia de uma fase nica entre os solventes, gua e acetonitrila,
e que no afetasse severamente o congelamento da fase aquosa
quando a mistura era resfriada.
Em frasco de vidro transparente com tampa e septo de Teflon

,
de 22 mL de capacidade, foram adicionados 4,00 mL de gua
fortificada com padres dos quatros piretrides em concentrao
de 1000 g L
-1
. A fora inica das amostras foi mantida em nveis
iguais aos previstos no planejamento (Tabela 1), pela adio de
NaCl. Foram adicionados volumes de 4,00 ou 8,00 mL de
acetonitrila, correspondentes aos nveis () e (+) do planejamento
fatorial, (Tabela 1). Essa soluo foi mantida sob agitao mecni-
ca, em mesa agitadora (Tecnal TE 420), por 15 ou 30 min corres-
pondentes aos nveis () e (+) do planejamento fatorial (Tabela 1),
temperatura ambiente e sob agitao suave.
Essas amostras foram deixadas em freezer a aproximadamente
-20 C por 12 h. Aps esse perodo, a fase orgnica lquida foi
passada por um papel de filtro com sulfato de sdio anidro (Nucle-
ar P.A.), sendo o papel de filtro previamente lavado com
acetonitrila. Os volumes dos extratos foram ajustados para 8,00
mL de acetonitrila e armazenados em frascos de vidro em freezer
at o momento da anlise cromatogrfica.
Polaridade do solvente extrator
Foi avaliado tambm o efeito da modificao da polaridade do
solvente extrator na porcentagem de recuperao dos piretrides.
Mantendo-se o volume da mistura extratora igual a 8,0 mL, foi
avaliado o efeito da adio de 0,5; 1,0 e 1,5 mL de acetato de etila
acetonitrila. Em condies semelhantes foi avaliada tambm a
adio de metanol ao solvente extrator, acetonitrila, em quantida-
des iguais a 0,2 e 0,5 mL.
Validao do mtodo
A tcnica otimizada foi validada com relao aos seguintes
parmetros: seletividade, linearidade, limite de deteco e quantifi-
cao, preciso (repetibilidade e preciso intermediria) e exatido
(ensaio de recuperao e comparao de mtodos), de acordo com
recomendaes do Instituto Nacional de Metrologia, Normalizao e
Qualidade Industrial (INMETRO)
21
e de outras publicaes
22,23
.
A seletividade foi avaliada pela aplicao da tcnica ELL-PBT
otimizada em amostras de gua do Ribeiro So Bartolomeu sem e
com adio de padres dos piretrides a 1000 g L
-1
.
A linearidade de resposta foi avaliada submetendo-se amostras de
gua destilada fortificada com padres dos piretrides entre 10,0 e
750,0 g L
-1
e submetidas tcnica de ELL-PBT. Os limites de deteco
e quantificao foram calculados pelos coeficientes linear e angular
das curvas analticas de extratos de amostras de gua fortificadas com
piretrides entre 2,0 e 12,0 g L
-1
, submetidas ELL-PBT.
A preciso do mtodo foi determinada em amostras de gua
fortificadas com padres dos piretrides (1000 g L
-1
), com sete
repeties e submetidas ao mtodo de ELL-PBT. A preciso inter-
mediria foi determinada avaliando-se os valores dos coeficientes
de variao de resultados da ELL-PBT de amostras de gua
fortificadas com os piretrides (1000 g L
-1
). A extrao e anlise
feitas com sete repeties pelo mesmo analista aconteceram em
trs datas diferentes (1 dia; 1 semana e 1 ms).
A exatido do mtodo foi avaliada, em triplicata, por ensaios
de recuperao em trs nveis de concentrao (20,0; 40,0 e 200,0
g L
-1
) e por comparao com outros mtodos de extrao
24
.
Tabela 1. Planejamento fatorial 2
3
para amostras de gua fortificadas
(1000 g L
-1
)
Fatores Fatores
codificados originais
(1) Proporo (2) Adio de (3) Tempo
Ensaios F(1) F(2) F(3) H
2
O:CH
3
CN NaCl (mol L
-1
) (min)
(v:v)
1 e 2 - - - 1:1 0,020 15
3 e 4 + - - 1:2 0,020 15
5 e 6 - + - 1:1 0,100 15
7 e 8 + + - 1:2 0,100 15
9 e 10 - - + 1:1 0,020 30
11 e 12 + - + 1:2 0,020 30
13 e 14 - + + 1:1 0,100 30
15 e 16 + + + 1:2 0,100 30
537 Otimizao e validao da tcnica de extrao lquido-lquido Vol. 30, No. 3
Anlise cromatogrfica
A identificao e quantificao dos piretrides nos extratos fo-
ram realizadas em cromatgrafo a gs (Shimadzu GC 17A) com
detector por captura de eltrons, usando como padro interno solu-
o de bifentrina a 500,0 g L
-1
. Na anlise cromatogrfica foi
utilizada uma coluna capilar Agilent Technologies HP-5 de 30 m
de comprimento, 0,25 m de d. i. e 0,1 m de espessura de filme.
As condies cromatogrficas de anlise simultnea foram: tem-
peratura do injetor igual a 280
o
C; temperatura da coluna a 220
o
C
com rampa de aquecimento de 10
o
C por min at 280
o
C, sendo
esta temperatura mantida por 2 min e temperatura do detector de
300
o
C. O volume do extrato injetado foi de 1,0 L, a vazo do gs
de arraste (N
2
) de 1,2 mL min
-1
e diviso de fluxo de 1:5.
Persistncia dos piretrides em gua
No estudo da persistncia dos quatro piretrides em gua foram
preparados 500,0 mL de soluo aquosa contendo 1000 g L
-1
de
cada piretride. Essa mistura foi mantida sob condies ambientais,
25-35 C aproximadamente, durante 80 dias. Em datas pr-definidas
(1
o
, 5
o
, 10
o
, 15
o
, 20
o
, 40
o
, 50
o
, 60
o
e 80
o
dia), foram coletados 4,00 mL
dessa soluo e os piretrides foram extrados pelo processo de ELL-
PBT otimizado e os extratos analisados por CG-DCE. Os experi-
mentos foram realizados em triplicata.
RESULTADOS E DISCUSSO
Anlise cromatogrfica
Na Figura 2 est representado um cromatograma de uma solu-
o padro destes piretrides, em acetonitrila, a 500 g L
-1
. O segun-
do pico, com tempo de reteno (t
R
) igual a 3,6 min corresponde ao
padro interno, bifentrina. Os demais picos, com t
R
iguais a 4,2; 4,8;
5,5 e 6,8 min correspondem -cialotrina, permetrina, cipermetrina
e deltametrina, respectivamente. A presena de picos duplos para os
piretrides est relacionada com a converso em ismeros durante a
injeo no cromatgrafo
25
. A quantificao desses piretrides foi feita
considerando-se a soma das reas dos picos dos ismeros, tanto nos
cromatogramas das amostras como dos padres.
As curvas analticas e os dados da regresso linear, Tabela 2,
indicam que a resposta do detector por captura de eltrons (DCE)
linear para todos os compostos estudados, no intervalo de 10,0 a
750,0 g L
-1
. Alm disso, possvel verificar pelos valores dos
coeficientes angulares das curvas analticas que o detector por cap-
tura de eltrons (DCE) mais sensvel -cialotrina que aos de-
mais piretrides. Esta sensibilidade est relacionada com a presen-
a e o nmero de grupos eletroflicos presentes na molcula.
Otimizao da tcnica de extrao lquido-lquido e partio
em baixa temperatura
No processo de otimizao da tcnica de extrao e anlise dos
quatro piretrides, os efeitos de trs fatores foram avaliados simul-
taneamente: a proporo entre volume de amostra e acetonitrila, a
adio de NaCl e o tempo de agitao e contato da mistura. Nessa
avaliao, um planejamento fatorial 2
3
foi conduzido e os efeitos
avaliados pelas porcentagens de recuperao. Os ensaios, realiza-
dos em duplicata, geraram 16 respostas que permitiram estimar os
erros experimentais associados determinao de cada resposta
mdia. Com essas repeties foi possvel, usando o programa esta-
tstico Statistica

, calcular as porcentagens de recuperao mdia,

os efeitos de cada fator e as interaes entre os fatores na extrao
de cada um dos piretrides. Os erros associados a cada efeito e
suas interaes foram avaliados pelo teste t para 95% de probabili-
dade ( = 0,05) e 8 repeties (n = 8). Alguns resultados da anlise
estatstica so apresentados na Tabela 3.
Os resultados da Tabela 3 permitem concluir que, nos nveis
avaliados, no houve interao entre os fatores estatisticamente
significativos em nvel de 95% de probabilidade pelo teste t. Con-
clui-se, no entanto, que pelo menos dois fatores isolados afetam
significativamente os resultados. O aumento da proporo do vo-
lume do solvente acetonitrila em relao ao volume de amostra, de
1:1 para 1:2 (v/v) (amostra:acetonitrila), aumentou o rendimento
de extrao de 11% para -cialotrina e de 7% para cipermetrina.
Para os demais piretrides, permetrina e deltametrina, os aumen-
tos de 1 e 4%, respectivamente, no foram significativos. Isto sig-
nifica que, isoladamente, o aumento da proporo de amostra:
acetonitrila (de 1:1 para 1:2 v/v) contribui para o aumento na por-
Tabela 3. Porcentagens de recuperao mdia, efeitos de cada fator
e interaes entre os fatores ( estimativa do erro experimental) na
extrao de cada um dos piretrides, obtidos nos experimentos do
planejamento fatorial para amostras de gua, pelo mtodo ELL-PBT
-cialotrina cipermetrina deltametrina permetrina
Recup. Mdia 57 0,8 65 1 66 1 81 1
(1) Volume 11 2
*
7 2 4 2 1 3
(2) Adio sal - 8 2
*
- 4 2 - 6 2
*
- 2 3
(3) Tempo - 2 2 - 4 2 - 4 2 6 3
(1) e (2) 3 2 1 2 1 2 1 2
(1) e (3) 3 2 1 2 2 2 - 5 3
(2) e (3) - 3 2 - 3 2 - 2 2 - 3 3
*
(P>0,05) Os nmeros em negrito correspondem a resultados
significativos em nvel de 95% de probabilidade pelo teste t.
Tabela 2. Linearidade de resposta do detector (DCE) na faixa de 10,0
a 750,0 g L
-1
para os quatro piretrides com os valores dos coeficientes
angular (sensibilidade), linear e de regresso r (linearidade)
Piretride Coef. angular x 10
3
Coef. linear Coef. correlao,
(sensibilidade) x 10
2
r (Linearidade)
-cialotrina 3,7 2,64 0,9984
cipermerina 2,5 4,48 0,9956
deltametrina 2,2 7,43 0,9911
permetrina 1,0 3,34 0,9992
Figura 2. Cromatograma de uma soluo padro de 500,0 g L
-1
dos
piretrides estudados, onde: t
R
= 3,6 min: bifentrina (padro interno), t
R
=
4,2 min: -cialotrina, t
R
= 4,8 min: permetrina, t
R
= 5,5 min: cipermetrina e t
R
= 6,8 min: deltametrina
538 Quim. Nova Vieira et al.
centagem de extrao de pelo menos dois piretrides em amostra
de gua.
Pode-se notar, tambm, o efeito negativo da adio de sal. O
rendimento da extrao cai de 8% em mdia para -cialotrina e de
6% para deltametrina. Permetrina e cipermetrina tambm apresen-
taram efeito negativo, 2 e 4%, respectivamente, no significativo.
Com o aumento da fora inica da soluo aquosa pela adio de
NaCl esperava-se um efeito positivo devido solvatao dos ons
pelas molculas de gua, facilitando a migrao dos piretrides
para a fase orgnica. Os resultados, no entanto, indicam que a adi-
o de sais pode dificultar a formao de uma fase nica, diminu-
indo a porcentagem de extrao dos compostos. Os aumentos dos
tempos de contato e de agitao dos piretrides na gua no pro-
porcionaram aumento significativo na porcentagem de recupera-
o de extrao desses compostos.
Pelos resultados obtidos da anlise estatstica, Tabela 3, os en-
saios 3 e 4 (Tabela 1) que correspondem aos fatores proporo
amostra:acetonitrila 1:2 v/v, concentrao de NaCl igual a 0,020
mol L
-1
e tempo de extrao de 15 min foram os escolhidos para
dar continuidade ao desenvolvimento e otimizao da tcnica de
ELL-PBT para determinar os piretrides cipermetrina, deltametrina,
-cialotrina e permetrina em gua.
Usando uma proporo de volumes amostra:acetonitrila de 1:2
v/v, pequenas modificaes na polaridade do solvente extrator fo-
ram avaliadas com a adio de acetato de etila e de metanol.
Na Figura 3 esto apresentadas as porcentagens de recupera-
o dos quatro piretrides estudados, aps extrao com acetonitrila
e 0,00; 0,20; 0,50; 1,00 e 1,50 mL de acetato de etila. O valor
mximo de acetato de etila que foi adicionado mistura
amostra:acetonitrila sem romper a fase nica foi de 1,50 mL.
O acetato de etila menos polar que a acetonitrila, e como os
piretrides so hidrofbicos, a adio de acetato de etila favorece as
extraes. Pode-se observar que a mistura de 1,50 mL de acetato de
etila e 6,50 mL de acetonitrila proporcionou o melhor rendimento na
extrao dos piretrides gua, apresentando resultados que variaram
de 82 a 90% para -cialotrina, 87 a 98% para permetrina, 88 a 97%
para cipermetrina e 80 a 86% para deltametrina. Os demais volumes
adicionados apresentaram maior disperso dos resultados obtidos,
alm de menor eficincia de extrao.
A adio de 0,50 mL de metanol acetonitrila, com a finalida-
de de alterar a polaridade da mistura extratora, causou uma queda
acentuada na eficincia de extrao para os quatro piretrides, com
porcentagens de recuperao menores que 15%. A adio de 0,20
mL de metanol acetonitrila somente apresentou resultados
satisfatrios para a extrao de permetrina em gua. O uso de
metanol como modificador da polaridade da mistura extratora no
contribuiu para maior eficincia no processo de extrao. O au-
mento da polaridade da mistura extratora alm de diminuir a efici-
ncia da extrao, dificultou o congelamento da fase aquosa.
Na otimizao do tempo de congelamento no processo de ex-
trao simultnea dos piretrides por ELL-PBT observou-se que
em um tempo menor que 6 h o congelamento da gua no ocorreu
totalmente e que a partir de 6 h, no houve diferenas significati-
vas nas porcentagens de recuperao de -cialotrina, permetrina,
cipermetrina e deltametrina.
Validao do mtodo
A validao da tcnica de extrao e anlise simultnea dos
quatro piretrides foi executada determinando os principais
parmetros, seguindo recomendaes descritas em publicaes
especficas
21-23
.
Os limites de deteco e quantificao do mtodo (LD e LQ)
foram calculados pelos parmetros da curva analtica. Para este
clculo, foram feitas curvas analticas utilizando solues padro
contendo estes piretrides em concentraes decrescentes (12,0;
10,0; 8,0; 6,0; 4,0 e 2,0 g L
-1
) e prximas ao limite de deteco. O
LD e o LQ foram considerados como 3 e 10 vezes, respectivamen-
te, a razo entre a estimativa dos coeficientes linear e angular da
curva analtica
21
. Segundo orientaes do INMETRO
21
o limite de
deteco e de quantificao do mtodo pode ser determinado pela
razo dos coeficientes linear e angular da curva analtica.
onde: s = coeficiente linear da curva analtica; S = coeficiente an-
gular da curva analtica.
Os coeficientes linear e angular da curva analtica, bem como
os valores de LD e LQ obtidos para os piretrides so apresentados
na Tabela 4.
Verificou-se que os valores do LD obtidos para anlise dos
piretrides -cialotrina, permetrina, cipermetrina e deltametrina
utilizando CG-DCE esto entre 1,1 e 3,2 g L
-1
. Esses resultados
so concordantes com resultados de anlises de piretrides em lei-
te

obtidos por outros pesquisadores
16
, que de 1,0 g L
-1
. Valores
um pouco menores, entre 0,02

e 0,2 g L
-1
de piretrides em urina,
foram encontrados por outros pesquisadores usando CG/MS
25
.
Os valores de LQ do mtodo, obtidos para os piretrides estuda-
dos esto entre 3,3 e 9,6 g L
-1
apresentando coeficiente de variao
(CV) de 2,7 a 9,5%, valores menores que 10% como recomendado
21
.
A preciso do mtodo de ELL-PBT para os quatro piretrides
estudados em amostras de gua, sob condies de repetibilidade, foi
avaliada pelo clculo da estimativa do desvio padro relativo ou coe-
ficiente de variao (CV) de sete repeties do procedimento anal-
tico otimizado. As porcentagens de recuperao obtidas (%R) e os
coeficientes de variao (CV) esto apresentados na Tabela 5.
Tabela 4. Coeficientes linear (s) e angular (S) das curvas analticas
obtidas de amostras de gua fortificada com piretrides (2,0 a 12,0
g L
-1
), em triplicatas, submetidas ELL-PBT e os respectivos
limites de deteco (LD) e quantificao (LQ)
Piretride s S LD (g L
-1
) LQ (g L
-1
)
-cialotrina 0,00142 0,00419 1,1 7,6
cipermetrina 0,00163 0,00289 1,9 2,7
deltametrina 0,00171 0,00197 2,9 5,5
permetrina 0,00200 0,00207 3,2 9,5
Figura 3. Porcentagens de recuperao de -cialotrina, permetrina,
cipermetrina e deltametrina na gua, pela ELL-PBT, em condies otimizadas
e com adio de 0,00; 0,20; 0,50; 1,00 e 1,50 mL de acetato de etila ao
solvente extrator (acetonitrila)
539 Otimizao e validao da tcnica de extrao lquido-lquido Vol. 30, No. 3
Os coeficientes de variao obtidos esto entre 3,7 e 4,9%, va-
lores bem menores que os aceitveis para amostras complexas que
podem ser de at 20%
23
. Esses valores so equivalentes preciso
observada em anlises de piretrides em outras matrizes
25,26
.
A preciso intermediria refere-se s variaes ocorridas dentro
de um mesmo laboratrio, quando um ou mais fatores so altera-
dos
23
. Neste trabalho, procurou-se determinar a variao na porcen-
tagem de recuperao (%R) de -cialotrina, permetrina, cipermetrina
e deltametrina extradas de amostras de gua pela tcnica ELL-PBT
em diferentes dias. A preciso intermediria do mtodo foi avaliada
pelos valores da porcentagem de recuperao (%R) e do coeficiente
de variao (CV), obtidos de anlises executadas em diferentes dias,
pelo mesmo analista. Os resultados obtidos para extrao dos com-
postos estudados na gua bem como os respectivos coeficientes de
variao esto apresentados na Tabela 5.
Os resultados confirmaram que a tcnica de extrao e anlise
dos piretrides em gua no sofre influncias quando realizada no
mesmo laboratrio, pelo mesmo analista, em diferentes dias. A
preciso intermediria do mtodo satisfatria, mostrando que os
resultados de recuperao so estatisticamente iguais, em nvel de
95% de probabilidade.
Neste estudo, foram realizados ensaios de recuperao (Tabela 6)
e comparao de mtodos (Tabela 7) para avaliar a exatido do mto-
do ELL-PBT. A porcentagem de recuperao foi calculada segundo as
recomendaes do INMETRO
21
. Os piretrides foram adicionados em
concentraes iguais a 20,0; 40,0 e 200,0 g L
-1
. Assim, os ensaios de
recuperao foram feitos extraindo-se os compostos em estudo, pre-
sentes em matrizes de gua, segundo a tcnica proposta. Os resultados
obtidos para extrao dos piretrides l-cialotrina, permetrina,
cipermetrina e deltametrina gua, bem como os respectivos coeficien-
tes de variao esto apresentados na Tabela 6.
Os resultados, dispostos na Tabela 6, para extrao dos
piretrides em gua nas concentraes especificadas no diferem
entre si (em nvel de 95% de probabilidade), mostrando que a re-
cuperao independe do nvel de concentrao dos analitos na
amostra. Esses resultados so equivalentes aos obtidos nos clcu-
los da preciso intermediria, Tabela 5, comprovando a exatido e
preciso do mtodo.
Os resultados obtidos empregando-se a ELL-PBT foram com-
parados com os obtidos por dois mtodos usados como referncia
24
,
para extrao de pesticidas -cialotrina, permetrina, cipermetrina e
deltametrina na gua. (Tabela 7).
Os mtodos 1 e 2 consistem basicamente de uma extrao l-
quido-lquido utilizando como solvente extrator acetato de etila e
diclorometano, respectivamente. Os resultados obtidos da porcen-
tagem de recuperao para cada piretride pelos mtodos 1 e 2
foram equivalentes, sendo observado um coeficiente de variao
menor no mtodo 1, de 1,8 a 9,2%.
Avaliando-se o grau de proximidade entre os resultados obtidos
pelos mtodos 1 e 2 e o mtodo de ELL-PBT pode-se concluir que as
porcentagens de recuperao obtidas para -cialotrina, permetrina e
deltametrina foram estatisticamente iguais nos trs mtodos estuda-
dos, com exceo da cipermetrina em que a ELL-PBT apresentou
maior eficincia de extrao que o mtodo 1.
Os mtodos 1 e 2 apresentaram como vantagem o fator de pr-
concentrao das amostras de gua, aproximadamente igual a 3 e
12 vezes, respectivamente. Entretanto a ELL-PBT apresenta me-
nor consumo de solvente (8 mL) em relao aos mtodos 1 e 2
(135 e 20 mL) e no necessita de etapas de evaporao e troca de
solvente. Com isso so reduzidos os riscos de contaminao e per-
das de amostras, proporcionando recuperaes com resultados
repetitivos, o que pode ser percebido pela comparao com os co-
eficientes de variao do mtodo 2, de 11,2 a 19,2%. O mtodo 2
apresenta como principal desvantagem o uso do solvente
diclorometano que, alm de no ser compatvel com o detector por
captura de eltrons utilizado na anlise cromatogrfica, apresenta
alta toxicidade, inflamabilidade e riscos ambientais.
O mtodo de extrao lquido-lquido e partio em baixa tem-
peratura, depois de otimizado e validado, foi tambm aplicado em
amostras de guas coletadas no Ribeiro So Bartolomeu, com o
objetivo de aplicar o mtodo em amostras naturais e avaliar a
seletividade do mesmo. Esse ribeiro recebe quase todo o esgoto
domstico da cidade e dele foram coletadas 3 amostras. Nessas amos-
tras no foi detectada a presena de nenhum dos quatro piretrides,
uma vez que a meia-vida dos piretrides avaliados relativamente
pequena. Essas amostras, que se mostravam bastante turvas em ra-
zo do material em suspenso, foram contaminadas com quantida-
des conhecidas dos quatro piretrides. Sem nenhum tratamento pr-
vio as amostras foram submetidas ao mtodo de extrao e anlise
para avaliar a seletividade e se algum efeito de matriz poderia ser
observado. Comparativamente, as taxas de recuperao e os coefici-
entes de variao das anlises (Tabela 8) so estatisticamente seme-
lhantes, no havendo efeito de matriz nos resultados.
Persistncia dos piretrides em gua
A persistncia dos piretrides em gua foi avaliada por 80 dias
e os resultados (Figura 4) mostram que a estabilidade dos piretrides
Tabela 5. Porcentagens de recuperao, (%R), e coeficientes de
variao, CV (%), obtidos da aplicao do mtodo ELL-PBT, com
sete repeties, em amostras de gua fortificadas com piretrides,
(1000 g L
-1
), em diferentes dias
- cialotrina cipermetrina deltametrina permetrina
%R CV(%) %R CV(%) %R CV(%) %R CV(%)
Dia 1 87,0 4,6 93,1 4,4 82,1 3,0 93,4 4,6
1 semana 86,0 4,8 93,1 3,5 85,5 3,9 93,6 4,6
1 ms 86,1 2,9 88,4 4,5 81,2 3,3 91,9 4,6
Tabela 6. Porcentagens de recuperao, (%R), e coeficientes de
variao, CV (%), obtidos da extrao de piretrides em amostras
de gua fortificadas (1000 g L
-1
), em triplicata, pela tcnica de
ELL-PBT
Conc. - cialotrina cipermetrina deltametrina permetrina
(g L
-1
) % R CV(%) % R CV(%) % R CV(%) % R CV(%)
20,0 89,3 6,1 92,1 5,2 86,9 4,5 91,2 12,6
40,0 86,7 4,3 88,8 5,0 83,1 9,4 89,6 06,6
200,0 87,4 6,8 87,0 5,8 83,4 4,7 89,5 04,1
Tabela 7. Porcentagens de recuperao (%R) e coeficientes de
variao, CV (%), obtidos de extraes dos piretrides em amostras
de gua fortificadas (1000 g L
-1
), em triplicata, usando a ELL-
PBT e dois mtodos de referncia
24
- cialotrina cipermetrina deltametrina permetrina
%R CV(%) %R CV(%) %R CV(%) %R CV(%)
Mtodo 1 81,8 03,0 76,5 03,2 82,3 01,8 83,1 09,2
Mtodo 2 89,8 15,7 87,6 19,2 75,5 11,2 80,3 14,1
ELL-PBT 87,2 03,7 92,2 04,9 82,3 04,5 93,4 04,6
540 Quim. Nova Vieira et al.
em soluo aquosa muito pequena. Nos primeiros 10 dias, ocorre
uma rpida degradao dos piretrides com uma perda de aproxi-
madamente 80% do total. Posteriormente, entre o 10
0
e 60
0
dia,
ocorre uma degradao lenta dos piretrides, permanecendo em
mdia 3% de permetrina, cipermetrina, deltametrina e -cialotrina,
aps 80 dias.
A condio a que a soluo contendo os piretrides foi submetida
bastante diferente daquela no campo. A soluo foi exposta luz,
sem incidncia direta dos raios solares, pH igual a 6,5. Conseqente-
mente, os resultados de meia-vida obtida diferem um pouco dos j
publicados. A meia-vida estimada para os quatro piretrides de ape-
nas 5 dias. Para a -cialotrina, esse resultado bastante diferente do
encontrado na publicao da OMS (WHO)
27
, que foi de 30 dias em
soluo aquosa de pH igual a 5. Em WHO
28
, a meia-vida da permetrina
foi de 4 dias e para deltametrina exposta luz solar a meia-vida de
47,7 dias
29
. A meia-vida da cipermetrina descrita em WHO
30
em guas
naturais foi de 14 dias. Essa diferena nos resultados pode estar relacio-
nada com as condies em que foram avaliadas.
CONCLUSES
O mtodo de extrao e anlise simultnea desenvolvido para
piretrides em gua mostrou-se com algumas vantagens em rela-
o aos demais. O mtodo prtico e com nmero de etapas bas-
tante reduzido. Isto o torna de fcil execuo, apesar do tempo
necessrio para congelamento das misturas ser relativamente lon-
go. Os extratos so limpos, mesmo em matrizes aquosas mais com-
plexas, no sendo necessria nenhuma etapa posterior de clean
Tabela 8. Porcentagens de recuperao (%R) e coeficientes de
variao, CV (%), obtidos de extraes de piretrides em amostras
de gua destilada e de gua do Ribeiro So Bartolomeu fortificadas
com piretrides (1000 g L
-1
), em triplicata, usando o mtodo de
ELL-PBT
-cialotrina cipermetrina deltametrina permetrina
%R CV(%) %R CV(%) %R CV(%) %R CV(%)
gua dest. 87,2 3,7 92,2 4,9 82,3 4,5 93,4 4,6
Amostra 1 87,4 2,1 85,0 5,7 83,4 5,8 95,3 7,9
Amostra 2 87,2 1,6 84,0 3,2 85,3 2,0 87,2 0,8
Amostra 3 85,9 2,9 85,6 3,4 86,0 2,7 90,2 7,1
up. O mtodo de extrao e anlise foi otimizado com resultados
que podem ser considerados como timos. O nico inconveniente
do mtodo no permitir a pr-concentrao da amostra, a no ser
que seja includa uma etapa de evaporao do solvente. Mesmo
nessas condies e considerando os limites mximos permitidos
de piretrides em guas estabelecidos pela portaria 1.469/2000 que
de 20 g L
-1
, o mtodo adequado. Na validao do mtodo os
parmetros avaliados so satisfatrios com LD e LQ para os quatro
piretrides entre 1,1 e 3,2 e 3,3 e 9,6 mg L
-1
, respectivamente.
AGRADECIMENTOS
FAPEMIG pelo apoio financeiro, ao CNPq pela bolsa conce-
dida, aos Profs. R. N. C. Guedes, do Departamento de Biologia
Animal/UFV pelos padres dos piretrides, e C. Reis do DQ/UFV,
pela constante discusso sobre o assunto.
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Figura 4. Persistncia dos piretrides -cialotrina, permetrina, cipermetrina
e deltametrina na gua pelo perodo de 80 dias