12/04/2013

Biorreatores e
Processos Fermentativos
Formas de conduo dos Bioprocessos

Aula 7 Profa. Dra Ilana L. B. C. Camargo

Cincias Fsicas e Biomoleculares
IFSC - USP

A escolha dos tipos de biorreator e bioprocesso tambm

dependem da classificao do produto microbiano

Classificao do produto microbiano

1) Metablitos primrios (associados ao crescimento)
Consistem nos compostos produzidos simultaneamente sntese
de clulas microbianas na fase de crescimento. Neste caso, a
formao do produto diretamente proporcional formao de
biomassa. Ex.: Aminocidos, nucleotdeos, produtos finais de
fermentao (etanol e cidos orgnicos), enzimas.

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A escolha dos tipos de biorreator e bioprocesso tambm

dependem da classificao do produto microbiano
Classificao do produto microbiano
2) Metablitos secundrios
(no-associados ao crescimento)
A formao do produto no est diretamente relacionada razo
de crescimento de clulas. Usualmente se acumulam durante o
perodo de limitao de nutrientes ou de produtos residuais que
segue aps fase ativa de crescimento. Estes compostos no tem
relao direta com a sntese de materiais celulares e com o
crescimento normal. Exemplo: maioria de antibiticos e
micotoxinas.

A escolha dos tipos de biorreator e bioprocesso tambm

dependem da classificao do produto microbiano

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Bioprocessos
Formas de conduo de um processo fermentativo:
Infinitas!!! -- Enorme flexibilidade de operao
Formas mais bsicas:
1.
2.
3.

Descontnuo
Com um inculo por tanque
Com recirculao de clulas
Processo por meio de cortes

- Semicontnuo
1. Sem recirculao de clulas
2. Com recirculao de clulas
-

Descontnuo alimentado

- Contnuo
1. Executado em um reator
2. Executado em vrios reatores

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Bioprocessos
Formas de conduo de um processo fermentativo:

Fermentao descontnua
Ou
Fermentao em batelada

Processo

fermentativo

caracterizado

pela

inoculao

incubao de microrganismos, de tal forma, a permitir que a

fermentao ocorra sob condies timas. Neste tipo de
produo, nada adicionado, exceto oxignio (processo
aerbio), cido ou base (controle de pH) ou antiespumante.

Bioprocessos
Formas de conduo de um processo fermentativo:

Fermentao descontnua
Ou
Fermentao em batelada

Um inculo por tanque;

Processo mais seguro quando se necessita manter as
condies de assepsia

(esterilizao ao final de cada batelada);

Fornece conhecimento bsico da cintica do processo

antes de se buscar reatores alternativos;
Base para comparaes de eficincias atingidas.

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Bioprocessos
Descontnuo simples batelada sem recirculao de clulas
Sistema fechado e de volume constante.
Na prtica dificilmente ser aplicado industrialmente
Sua baixa eficincia estimula o surgimento das formas alternativas

Nmero de biorreatores (dornas)

Processo descontnuo com fornecimento ininterrupto

Lquido fermentado

Processo
Downstream

D = nmero de dornas ou biorreatores

F = Vazo mdia de lquido fermentado para tratamento final
V = Capacidade til de cada dorna

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Nmero de dornas / biorreatores

td

Fim da
descarga

td = tc
tf
Fim da
fermentao

Fim da carga

Incio do preparo
do biorreator

tc

Tempo

td

td = tempo necessrio para se descarregar um biorreator

tc = tempo necessrio para se limpar e carregar um biorreator
tf = tempo necessrio para que haja fermentao em um biorreator

Nmero de dornas / biorreatores

td

Fim da
descarga

td

tf
Fim da
fermentao

Fim da carga

Td separa o incio de 2 biorreator consecutivos

Incio do preparo
do biorreator

td

tf

Tempo

Dorna/Biorreator D inicia seu funcionamento no instante

(D-1) x td que igual ao instante td + tf
D = nmero de dornas ou biorreatores
(D-1) x td = td + tf
F = Vazo mdia de lquido fermentado para
tratamento final
D = 2 + tf / td e ainda Td =
V = Capacidade til de cada biorreator

V/F

D = 2 + (F . tf / V)

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Bioprocessos
Descontnuo simples batelada - Sem recirculao de clulas
Vantagens:
-Fcil operao;
-Menor risco de contaminao;
-Construo e instrumentao simples e barata;
-Processo adequado para curtos perodos de tempo;
-Versatilidade de usos
Desvantagens:
-Esgotamento do meio de cultivo e acmulo de compostos txicos ou
degradao do produto;
-Menor produtividade volumtrica;
-Preparo do reator entre uma batelada e outra reduz tempo til e
aumenta custos.

Bioprocessos
Descontnuo com recirculao de clulas

H o reaproveitamento como inculo, o microrganismo da

batelada anterior (comum em destilarias de lcool):
Sedimentao no fermentador (cervejarias)
Centrifugao do meio fermentado
Tendncia em aumentar o nmero de contaminantes a cada
nova batelada
Leite de lvedo (suspenso altamente concentrada) com
gua e cido sulfrico 2 a 3 h sob agitao: elimina
contaminantes e clulas que j se apresentem em fase de
degenerao

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Bioprocessos
Descontnuo em processo por meio de cortes

out

Biorreator A foi cortado para o Biorreator B

Bioprocessos
Descontnuo em processo por meio de cortes

Cortes podem ser feitos

Fase de crescimento mais intensa

quando se deseja propagar o inculo

Aps o trmino do processo

fermentativo

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Bioprocessos
Descontnuo em processo por meio de cortes
Desvantagens:
I. Sucesso de cortes pode acarretar srias quedas no
rendimento, principalmente quando se trabalha com meio
no esterilizado
II. O nmero de cortes sucessivos no pode ser previsto o
controle do rendimento poder indicar em que momento
deve-se suspender o trabalho por meio de cortes e se iniciar
nova fermentao com inculo novo
Experincia adquirida ao longo do tempo na indstria leva o
pessoal a decidir quais modificaes que devem ser feitas no
processo, aumentando, dia a dia, o rendimento e/ou a
produtividade do mesmo

Bioprocessos
Formas de conduo de um processo fermentativo:

Formas mais bsicas:

1.
2.
3.

Descontnuo
Com um inculo por tanque
Com recirculao de clulas
Processo por meio de cortes

- Semicontnuo
1. Sem recirculao de clulas
2. Com recirculao de clulas
-

Descontnuo alimentado

- Contnuo
1. Executado em um reator
2. Executado em vrios reatores

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Bioprocessos
Semicontnuo sem recirculao de clulas
Adiciona-se o meio de fermentao e o inculo
in
Operao 1
Operao 2
Operao 3

out

Aguarda-se o trmino da fermentao;

Operao
1

Retira-se parte do meio fermentado, mantendo-se, no reator o

restante de mosto fermentado;

Operao
2

Adiciona-se ao reator um volume de meio de fermentao igual ao

volume de meio fermentado retirado anteriormente

Operao
3

Bioprocessos
Semicontnuo com recirculao de clulas
Quando o meio retirado do fermentador na operao 2,
pode-se centrifug-lo e reaproveitar as clulas
adicionando-as junto ao novo meio na operao 3

Meio + clulas

out

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Bioprocessos
Semicontnuo Vantagens:

a) Possibilidade de operar o biorreator por longos perodos de

tempo (meses) sem que seja necessrio preparar um novo
inculo;
b) Possibilidade
condies

de,
de

uma

vez

operao,

conhecidas

as

melhores

conseguir

produtividade

significativamente maior do que a obtida em processo

descontnuo

Bioprocessos
Formas de conduo de um processo fermentativo:

Formas mais bsicas:

1.
2.
3.

Descontnuo
Com um inculo por tanque
Com recirculao de clulas
Processo por meio de cortes

- Semicontnuo
1. Sem recirculao de clulas
2. Com recirculao de clulas
-

Descontnuo alimentado

- Contnuo
1. Executado em um reator
2. Executado em vrios reatores

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Bioprocessos
Descontnuo alimentado Batelada alimentada (fed-batch)

Importncia em escala
industrial

Importncia em pesquisa

Fermentao descontnua continuamente alimentada

com nutrientes

Bioprocessos
Descontnuo alimentado
Batelada alimentada
Fed-batch
1

tcnica em processos microbianos, onde um ou

mais nutrientes so adicionados ao fermentador
durante o cultivo e em que os produtos ai
permaneam at o final da fermentao.
A alimentao do meio ou substrato pode
ocorrer continuamente (1 etapa) ou em
pulsos (vrias etapas).

O volume do reator varivel

Muito utilizado para metablitos secundrios (antibiticos)

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Bioprocessos
Descontnuo alimentado Batelada alimentada (fed-batch)
Vantagens:
-

Controle de oferta de substratos s clulas:

1) Permite alta concentrao de substratos indutores;
2) Impede o efeito de represso catablica (presena de alta
concentrao de substrato inibe a sntese de compostos de
interesse ocorre muito com enzimas e antibiticos);
3) Mantm baixa concentrao de substratos inibitrios para
formao de produto (cido ctrico)

Permite obteno de alta concentrao celular

Desvantagens:
-

Maior risco de contaminao

Maior necessidade de controle do processo (adio nutrientes)

Bioprocessos
Formas de conduo de um processo fermentativo:

Formas mais bsicas:

1.
2.
3.

Descontnuo
Com um inculo por tanque
Com recirculao de clulas
Processo por meio de cortes

- Semicontnuo
1. Sem recirculao de clulas
2. Com recirculao de clulas
-

Descontnuo alimentado

- Contnuo
1. Executado em um reator
2. Executado em vrios reatores

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Bioprocessos

Contnuo
O meio adicionado de forma contnua e os produtos de
fermentao tambm so continuamente removidos
Objetivo da cultura contnua controlar o crescimento celular em um
nvel de produtividade tima
Sistema aberto
Volume mantido fixo ou constante
O produto produzido continuamente
Estado de Equilbrio: Concentrao de clulas e nutrientes so
constantes
Fatores limitantes: taxa de diluio ou fluxo e concentrao de
substrato limitante

Bioprocessos
-Contnuo sem recirculao de clulas

Agitao necessria
para distribuio rpida
dos nutrientes

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Bioprocessos
-Contnuo com recirculao de clulas

Bioprocessos
Contnuo
Mais utilizados em bancada para desenvolvimento de
processos, no so muito usados industrialmente
So mais usados no tratamento de resduos onde no h
preocupao com contaminao!!

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Bioprocessos

Contnuo
Vantagens
-

Maior produtividade volumtrica

Controle da velocidade de crescimento e manuteno da atividade

metablica celular por longos perodos de tempo;

Menor perda de tempo til.

Bioprocessos
Contnuo
Desvantagens
- Maior risco de contaminao (tempo muito longo em sistema
aberto)
- Nem sempre possvel produzir compostos no relacionados ao
crescimento em culturas contnuas;
- Dificuldade de utilizao de substratos complexos de composio
varivel;
- Surgimento de mutantes ou variantes genticas menos produtivas;
- Instabilidade de plasmdeos;
- Dificuldade

de

utilizao

de

organismos

filamentosos

(difcil

homogeneizao pelo padro crescimento e viscosidade do meio);

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Bioprocessos
Formas de conduo de um processo fermentativo:

Formas mais bsicas:

1.
2.
3.

Descontnuo
Com um inculo por tanque
Com recirculao de clulas
Processo por meio de cortes

- Semicontnuo
1. Sem recirculao de clulas
2. Com recirculao de clulas
-

Descontnuo alimentado

- Contnuo
1. Executado em um reator
2. Executado em vrios reatores

Bioprocessos
Pr-inculo

Biorreao
Biorreatores

Processo
descontnuo
simples

Inculo

Smith J E, Biotechnology, ed. Cambridge, 2004

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Bibliografia

Schmidell W, Lima UA, Aquarone E, Borzani W. Biotecnologia

Industrial: Engenharia Bioqumica. Volume 2. Ed Edgard
Blcher LTDA, So Paulo, 2001. Cap. 8-12

20