Dissertacao Michele Issa

UNIVERSIDADE DE SO PAULO
FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS

Programa de Ps-Graduao em Frmaco e Medicamentos
rea de Produo e Controle Farmacuticos
Avaliao do impacto de diferentes variveis no ensaio de

dissoluo intrnseca de metronidazol
Michele Georges Issa
Dissertao para obteno do grau de

MESTRE
Orientador:
Prof. Dr. Humberto Gomes Ferraz
So Paulo
2011
Michele Georges Issa
Avaliao do impacto de diferentes variveis no ensaio de dissoluo

intrnseca de metronidazol
Comisso Julgadora
da
Dissertao para obteno do grau de Mestre
Prof. Dr. Humberto Gomes Ferraz

orientador/presidente
____________________________
1. examinador
____________________________
2. examinador
So Paulo, _________de_____.
Ao meu pai Georges,

que apesar de to pouco tempo juntos,
tenho a alegria de carregar o seu nome em cada conquista.
minha me Huguette,
pelo seu imenso esforo na minha criao e educao,
pelo seu amor e apoio incondicionais.
minha irm Marie e

aos meus sobrinhos Patricia, Felipe e Alexandre,
por sempre estarem ao meu lado.
Ao meu esposo Marcelo,

pela grande contribuio na concluso desse trabalho e principalmente,
pelo seu amor e pacincia durante esse perodo.
Obrigada por tudo.
AGRADECIMENTOS
Ao Prof. Dr. Humberto Gomes Ferraz pelo exemplo, confiana e oportunidade de
todo o aprendizado ao longo desses anos.
Profa. Dra. Letcia Norma Carpentieri Rodrigues pela sua contribuio com as
anlises de difratometria de Raios X e infravermelho. Pela sua disponibilidade de
sempre, amizade e confiana.
Ao Professor Dr. Roberto Guardani pela disponibilidade do equipamento Malvern
Mastersizer e pelos seus ensinamentos sobre anlise de tamanho de partcula.
Aos funcionrios da secretaria do Departamento de Farmcia, da secretaria de PsGraduao e da Biblioteca da Faculdade de Cincias Farmacuticas pela ateno
sempre dispensada.
Micro Service Ind. Qumica Ltda. pela matria-prima gentilmente cedida para a
realizao desse trabalho.
Aos queridos Eremita Santos, Bruno Camardella e Cintia Alves pelo auxlio nas
anlises de microscopia ptica, pelo companheirismo e alegria.
Ao ps-doutorando Jos Eduardo Gonalves pela disponibilidade e contribuio nas
anlises de microscopia ptica.
Ao Fagner Magalhes pela imensa ajuda no preparo dos meios de dissoluo.
Aos colegas do grupo de pesquisa Leandro Giorgetti, Roxana Flores, Ana Paula
Zerbini, Felipe Nambu, Ana Lucia Nobusa, Arthur Lopes Jr., Fbio Ikuno, Missael
Silva e Vanessa Paiva pelas valiosas discusses e apoio.
Aos colegas e professores do Laboratrio de Farmacotcnica Doralice Santos e
Edgar Muniz, Profa. Dra. Vladi Consiglieri, Profa. Dra. Cristina Serra e Prof. Andr
Baby pelo apoio e incentivo.
Aos colegas de ps-graduao Gabriele Ruas, Andr Dezzani, Thaisa Pereira,

Robson Gama, Tatiana Balogh e Marize Gouveia pela convivncia e amizade.
Aos meus amigos de Faculdade Ana Paula Darini, Camila Achur, Fernando Lopes,
Camila Testa e Selma Oliveira pela torcida e apoio nas minhas escolhas.
s amigas da Libbs, Patricia Kachan, Fabiana Moskovici, Sandra Rigoleto, Adriana
Lara, Aline Arita e Fernanda Pereira pelo aprendizado e amizade.
s amigas Olga Alexopoulus, Elaine Moraes e Katia Nami, pelos momentos
compartilhados, pelas nossas longas conversas, pelo apoio e torcida para que tudo
desse certo.
Aos amigos Patricia Rivas, Trcio Martins, Vivian Zague, Claudinia Pinto, Andrea
Takahashi e Janisse Miranda, pelo incentivo, carinho e alegrias em todos os
momentos.
s amigas Katherine Ruz, Daniella Pimentel e Adriana Duarte por me incentivarem
a sempre seguir em frente.
Expresso meu profundo agradecimento a todos que de certa forma contriburam
para a realizao desse trabalho.
RESUMO
ISSA, M. G. Avaliao do impacto de diferentes variveis no ensaio de
dissoluo intrnseca de metronidazol. 2011. 78p. Dissertao (Mestrado)
Faculdade de Cincias Farmacuticas, Universidade de So Paulo, So Paulo,
2011.
O objetivo do presente trabalho foi avaliar o impacto de diferentes variveis no
ensaio de dissoluo intrnseca de metronidazol. Inicialmente, as amostras, com
diferentes graus de micronizao, foram submetidas caracterizao fsico-qumica,
sendo realizados ensaios de solubilidade, tamanho de partcula, anlise trmica
(DSC/ TG), infravermelho por transformada de Fourier (FTIR), difratometria de raios
X (DRX), anlise de rea superficial pelo mtodo BET, microscopia ptica,
densidade verdadeira e densidade compactada. Na sequncia, foram realizados os
ensaios de dissoluo intrnseca segundo um planejamento experimental do tipo
fatorial fracionado, sendo cada fator avaliado em trs nveis. Para o delineamento,
utilizou-se o programa Statistica 8.0. e os fatores estudados foram: velocidade de
rotao, presso utilizada na formao do compactado do frmaco, meio de
dissoluo e grau de micronizao. Os resultados mostraram alterao nas
propriedades reolgicas do material conforme o aumento do grau de micronizao,
enquanto as demais propriedades no foram afetadas. Entre os fatores estudados
no delineamento, a velocidade de rotao e o meio de dissoluo, foram aqueles
que exerceram influncia significativa na dissoluo intrnseca do metronidazol.
Embora a solubilidade do frmaco no sofra influncia do tamanho de partcula,
valores superiores foram observados em HCl 0,1 M, meio em que tambm foram
obtidas as mais elevadas velocidades de dissoluo intrnseca (VDIs).
Palavras Chave: Sistema de Classificao Biofarmacutica. Dissoluo intrnseca.
Metronidazol. Micronizao. Solubilidade.
ABSTRACT
ISSA, M. G. Evaluation of the impact of different variables in the intrinsic
dissolution test for metronidazole. 2011. 78p. Dissertao (Mestrado) Faculdade
de Cincias Farmacuticas, Universidade de So Paulo, So Paulo, 2011.
The purpose of this study is to evaluate the impact of different variables in the
intrinsic dissolution test of metronidazol. Initially, the samples, with different levels of
micronization, underwent physicochemical characterization, whereby they were
tested for solubility, particle size, thermal analysis (DSC/TG), Fourier transform
infrared (FTIR) spectroscopy, X-ray diffractometry (DRX), surface area analysis by
the BET method, optical microscopy, true density and tapped density. Then, intrinsic
dissolution tests were carried out according to fractional factorial experimental
planning, with each factor being evaluated on three levels. The Statistica 8.0
software program was used for design, and the factors studied were: rotational
velocity, pressure used in the formation of the compressed drug, dissolution medium
and level of micronization. The results indicated alterations in the rheological
properties of the material, as the level of micronization increased, while the remaining
properties were unaffected. Among the factors studied in the design, the rotation
speed and the dissolution medium were the factors that exercised the most
significant influence on the intrinsic dissolution of metronidazol. Although the
solubility of the drug is not influenced by particle size, higher values were observed in
HCl 0.1 M, the medium in which the highest intrinsic dissolution rates (IDRs) were
also obtained.
Keywords:
Biopharmaceutics
Classification
Metronidazol. Micronization. Solubility.
System.
Intrinsic
dissolution.
SUMRIO
Captulo 1: Dissoluo intrnseca como ferramenta para a avaliao da

solubilidade de frmacos de acordo com o Sistema de Classificao
Biofarmacutica ...................................................................................................... 12
RESUMO................................................................................................................... 13
1. INTRODUO ...................................................................................................... 14
2. SISTEMA DE CLASSIFICAO BIOFARMACUTICA (SCB) ........................... 16
2.1. MTODOS UTILIZADOS PARA DETERMINAO DA SOLUBILIDADE E
PERMEABILIDADE DE FRMACOS ........................................................................ 21
2.1.1. Solubilidade ................................................................................................... 21
2.1.2. Permeabilidade .............................................................................................. 21
2.2. EXTENSO DO SCB ......................................................................................... 22
3. DISSOLUO INTRNSECA................................................................................ 23
3.1. APARATOS UTILIZADOS NA DETERMINAO DA VDI ................................. 25
3.1.1. Sistema de disco rotativo ............................................................................. 26
3.1.2. Sistema de disco fixo .................................................................................... 26
3.2. CLCULO DA VDI E ANLISE DOS DADOS OBTIDOS NO ENSAIO .............. 29
3.3. DETERMINAO DA CLASSE DA SOLUBILIDADE PELO VALOR DE VDI .... 30
3.4. SOLUBILIDADE VERSUS DISSOLUO INTRNSECA................................... 32
4. CONCLUSO ....................................................................................................... 33
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ......................................................................... 33
Captulo 2: Influncia da granulometria nas propriedades fsico-qumicas do

metronidazol ............................................................................................................ 39
RESUMO................................................................................................................... 40
1. INTRODUO ...................................................................................................... 41
2. MATERIAL E MTODOS ..................................................................................... 42
2.1. MATERIAL ......................................................................................................... 42
2.1.1. Frmaco ......................................................................................................... 42

2.2. MTODOS ......................................................................................................... 43
2.2.1. Ensaio de solubilidade.................................................................................. 43
2.2.2. Anlise de tamanho de partcula ................................................................. 43
2.2.3. Calorimetria exploratria diferencial (DSC) ................................................ 44
2.2.4. Anlise termogravimtrica (TG) e termogravimetria derivada (DTG) ....... 44
2.2.5. Infravermelho por transformada de Fourier (FTIV)..................................... 45
2.2.6. Difratometria de raios x no estado slido (DRX) ..................................... 45
2.2.7. Anlise de rea superficial ........................................................................... 45
2.2.8. Densidade verdadeira ................................................................................... 45
2.2.9. Microscopia ptica ........................................................................................ 45
2.3.0. Avaliao do fluxo dos ps .......................................................................... 46
2.3.0.1. Densidade compactada ................................................................................ 46
2.3.0.2. ndice de compressibilidade (IC) razo de Hausner (RH) ........................... 46
3. RESULTADOS E DISCUSSO ............................................................................ 47
4. CONCLUSO ....................................................................................................... 58
Captulo 3: Avaliao do impacto de diferentes variveis na dissoluo

intrnseca de metronidazol ..................................................................................... 61
RESUMO................................................................................................................... 62
1. INTRODUO ...................................................................................................... 63
2. MATERIAL E MTODOS ..................................................................................... 65
2.1. MATERIAL ......................................................................................................... 65
2.1.1. Frmaco ......................................................................................................... 65
2.2. MTODOS ......................................................................................................... 65
2.2.1. Planejamento experimental .......................................................................... 65
2.2.2. Dissoluo intrnseca ................................................................................... 67

3. RESULTADOS E DISCUSSO ............................................................................ 67
4. CONCLUSO ....................................................................................................... 77
ANEXOS
I Cpia do documento Informaes para os Membros de Bancas Julgadoras
de Mestrado/ Doutorado
II Currculo Lattes
III Ficha de Aluno atualizada
12
Captulo 1
Dissoluo intrnseca como ferramenta para a avaliao da

solubilidade de frmacos de acordo com o sistema de classificao
biofarmacutica
13
RESUMO
O Sistema de Classificao Biofarmacutica (SCB) uma ferramenta criada
para dividir os frmacos em diferentes grupos conforme as suas caractersticas de
solubilidade e permeabilidade. Pela combinao desses fatores com parmetros
fisiolgicos, possvel obter o panorama de absoro de um frmaco pelo trato
gastrintestinal, contribuindo assim, para a reduo de custos e tempo no processo
de desenvolvimento de um medicamento, bem como na diminuio da exposio de
indivduos nos estudos in vivo.
A obteno da solubilidade baseada na
determinao do equilbrio sob condies de pH fisiolgico, enquanto que para a

avaliao da permeabilidade, diferentes mtodos podem ser empregados. Por outro
lado, a velocidade de dissoluo intrnseca (VDI), que definida como a velocidade
de dissoluo de uma substncia pura sob condies constantes de temperatura, pH
e rea superficial, entre outras, pode apresentar maior correlao com a dinmica da
dissoluo in vivo do que o ensaio de solubilidade. O presente captulo teve como
finalidade abordar a utilizao do ensaio de dissoluo intrnseca como ferramenta
na determinao da solubilidade de frmacos, no mbito do Sistema de
Classificao Biofarmacutica.
14
1. INTRODUO
A biodisponibilidade de um determinado frmaco contido em sua forma
farmacutica um aspecto de grande importncia para o sucesso do tratamento,
que depende de uma srie de fatores, incluindo caractersticas fsico-qumicas da
formulao e o estado fisiolgico do trato gastrintestinal (ZHU; ZHOU; SEITZ, 2009).
Dentre os aspectos relevantes, destacam-se propriedades que envolvem o
processo de absoro: biofarmacotcnicas (solubilidade, dissoluo, estabilidade
qumica, permeabilidade e efeito de primeira passagem), farmacocinticas
(depurao renal, meia-vida biolgica, ligao a protenas e volume de distribuio),
farmacotcnicas (formulao e forma farmacutica) e fisiolgicas (pH, enzimas,
motilidade intestinal e variabilidade inter-individual), que controlam a velocidade e a
extenso do frmaco para alcanar o stio de ao (DOKOUMETZIDIS;
MACHERAS, 2006; PANCHAGNULA; THOMAS, 2000; PELKONEN; BOOBIS;
GUNDERT-REMY, 2001).
Muitas indstrias farmacuticas tm levado em considerao as propriedades
de solubilidade e permeabilidade, alm de parmetros fsico qumicos, na escolha
de candidatos a novos frmacos. Essa avaliao conhecida como uma triagem
(screening biofarmacotcnico), na etapa inicial do desenvolvimento, que tem
ajudado a diminuir o nmero de molculas novas a serem trabalhadas nas etapas
seguintes, com significativa reduo de custos (LINDENBERG; KOPP; DRESSMAN,
2004; PANCHAGNULA; THOMAS, 2000; VARMA et al., 2004).
Para facilitar esse trabalho, em 1995 foi proposto o Sistema de Classificao
Biofarmacutica (SCB), elaborado por Amidon e colaboradores. Esse sistema
considera que a dissoluo e permeabilidade intestinal da substncia ativa, so os
parmetros fundamentais na velocidade e extenso da absoro. Os frmacos so
organizados em quatro classes conforme as caractersticas solubilidade e
permeabilidade (AMIDON et al., 1995; LENNERNS; ABRAHAMSSON, 2005;
LIPKA; AMIDON, 1999; LBENBERG; AMIDON, 2000).
Diferentes mtodos podem ser utilizados para a avaliao da solubilidade,
permeabilidade intestinal e dissoluo in vitro na classificao de frmacos segundo
15
o SCB e alguns deles so recomendados pelo Food and Drug Administration (FDA)
(LIPKA; AMIDON, 1999; UNITED STATES, 2000).
Para a determinao da solubilidade do frmaco, recomenda-se a avaliao
do equilbrio da solubilidade sob condio de pH fisiolgico, ou seja, esse valor deve
ser determinado temperatura de 37 1 C, em diferentes solues, variando-se a
faixa de pH de 1,0 a 7,5. A classe da solubilidade obtida calculando-se o volume
de soluo necessrio para dissolver a maior dose do medicamento em todas as
faixas de pH avaliadas (UNITED STATES, 2000).
O mtodo utilizado o da solubilidade de fase, onde um excesso de frmaco
colocado em contato direto com a soluo. No entanto, levando-se em
considerao que nas etapas iniciais de desenvolvimento, geralmente na etapa de
pr-formulao, a quantidade de material disponvel muitas vezes restrita, a
realizao desse estudo pode ser inviabilizada (RAO; SANGHVI; ZHU,2009;
STEELE, 2001).
Outro fator a ser considerado a dificuldade na determinao correta da
solubilidade, seja pelas variveis experimentais, como variao de temperatura,
filtrao e quantidade de material ou fatores inerentes a prpria substncia, que
podem afetar o resultado e gerar uma alta disperso dos dados. Entre esses fatores,
podem ser citados alteraes de forma cristalina (solvatos, hidratos e polimorfos) ou
formao de sal durante o ensaio (BAKA; COMER; TAKCS-NOVK, 2007; RAO;
SANGHVI; ZHU,2009; YU et al., 2004).
Uma alternativa que vem sendo discutida nos ltimos anos para a
determinao da solubilidade o ensaio de dissoluo intrnseca, onde a classe da
solubilidade a qual certo frmaco pertence, seria determinada pelo valor da
velocidade de dissoluo intrnseca (VDI). Para a realizao desse ensaio, a
quantidade requerida de material bem inferior em relao ao ensaio de
solubilidade e possveis interferncias nos resultados por fatores como transio de
forma cristalina ou formao de sal, podem ser verificadas pela presena de
curvatura nos grficos obtidos (SEHIC et al.,2010; STEELE, 2001; UNITED STATES
PHARMACOPEIA, 2009; YU et al., 2002, 2004; ZAKERI-MILANI et al., 2009).
16
Sendo assim, o objetivo da presente reviso foi abordar a utilizao do ensaio

de dissoluo intrnseca para avaliao da solubilidade de frmacos no contexto do
Sistema de Classificao Biofarmacutica.
2. SISTEMA DE CLASSIFICAO BIOFARMACUTICA (SCB)

O Sistema de Classificao Biofarmacutica foi desenvolvido para promover a
utilizao do conhecimento cientfico na avaliao das substncias ativas, como uma
predio do comportamento in vivo, auxiliando as atividades das agncias
regulatrias na aprovao de medicamentos, bem como as indstrias farmacuticas
na obteno de seus registros.
O objetivo principal do SCB foi a criao de uma ferramenta regulatria para
a substituio de alguns ensaios de bioequivalncia por testes de dissoluo in vitro,
possibilitando a reduo dos custos e tempo no processo de desenvolvimento de um
medicamento, alm da exposio desnecessria de indivduos nos estudos in vivo.
Dados observados por Cook (2004) indicam que a utilizao do SCB nas etapas de
desenvolvimento pode refletir em considervel economia de recursos para as
indstrias farmacuticas (LENNERNS; ABRAHAMSSON, 2005; LIPKA; AMIDON,
1999).
Atualmente, o SCB tem sido empregado para a iseno de testes clnicos em
formulaes de uso oral, principalmente para aquelas de liberao imediata,
enquanto que para formulaes de liberao modificada, a sua utilizao ainda vem
sendo estudada (KU, 2008; LENNERNS; ABRAHAMSSON, 2005; LIPKA;
AMIDON, 1999).
importante considerar que a resposta clnica decorrente da administrao
oral de determinado medicamento, somente ocorrer aps uma srie de eventos,
sendo dessa forma um processo complexo, que pode ser afetado por fatores
relacionados ou no ao indivduo (KARALIS et al., 2008; MARTINEZ; AMIDON,
2002).
17
Conforme observado na Figura 1, a dissoluo pr-requisito para a

absoro de frmacos administrados por via oral e, consequentemente, para a sua
resposta clnica. Sendo a dissoluo evento dependente da solubilidade do frmaco
e a absoro, dependente da permeabilidade intestinal, a unio dessas propriedades
resulta nos principais fatores que governam a velocidade e a extenso da absoro
de um frmaco a partir de uma formulao slida de administrao oral, ou seja, a
sua biodisponibilidade (AMIDON et al., 1995; LIPKA; AMIDON, 1999; UNITED
STATES, 2000; VARMA et al., 2004).
Figura 1 Eventos que ocorrem desde a administrao do medicamento at a ao do

frmaco no stio de ao (MARTINEZ; AMIDON, 2002).
Baseado nesse conceito, no SCB so definidos trs nmeros adimensionais

para caracterizar as substncias e a combinao deles com os parmetros fsicoqumicos e fisiolgicos, representa o panorama da absoro de um frmaco pelo
18
trato gastrintestinal (AMIDON et al., 1995; LIPKA; AMIDON, 1999; LBENBERG;

AMIDON, 2000; VARMA et al., 2004):
Nmero de Dose (Do): Razo da concentrao da dose pela solubilidade.
Do =
M / Vo
Cs
(Equao 1)
M = dose
Vo=volume
de
gua
ingerido
para
administrao do medicamento (250 mL)
Cs=solubilidade
Nmero de Dissoluo (Dn): Tempo necessrio para dissoluo.

D=coeficiente de difuso
r=raio inicial
frmaco
Tsi
3D Cs
Dn = 2 Tsi =
Tdiss
r
da
partcula
do
Cs=solubilidade
=densidade
Tsi=tempo de trnsito intestinal
(Equao 2)
Tdiss=tempo de dissoluo
Nmero de Absoro (An): Tempo necessrio para absoro da dose

administrada.
Peff=permeabilidade
An =
Tsi
Peff
x Tsi =
R
Tabs
(Equao 3)
R=raio do intestino
Tsi= tempo de trnsito intestinal
Tabs=tempo de absoro
Assim, para que a absoro do frmaco seja completa, esta deve apresentar
Do<1, Dn>1 e An>1. Pela definio desses nmeros, fica claro que a solubilidade e
a permeabilidade so os parmetros chave no controle da absoro e, no SCB, os
frmacos so divididos em quatro classes (Figura 2) conforme a intensidade
19
(alta/baixa) dos parmetros de solubilidade e permeabilidade (AMIDON et al., 1995;

MARTINEZ; AMIDON, 2002; VARMA et al., 2004).
Para que um frmaco seja considerado de alta solubilidade, a sua maior dose
deve ser solvel em volume igual ou menor que 250 mL de um meio aquoso, em pH
entre 1,0 e 7,5. O volume estimado de 250 mL baseado nos protocolos de estudos
de bioequivalncia, que prescrevem a administrao do medicamento a voluntrios
em jejum com um copo de gua (UNITED STATES, 2000; YU et al., 2002).
A classificao dos frmacos em relao permeabilidade baseada
indiretamente na extenso da absoro em humanos, pela avaliao da frao da
dose absorvida ou diretamente, pela medida de velocidade de transferncia de
massa atravs da membrana intestinal humana ou de membranas epiteliais. O
frmaco considerado de alta permeabilidade quando apresenta pelo menos 90%
de absoro da dose administrada (UNITED STATES, 2000; YU et al., 2002).
CLASSE I
S
O
L
U
B
I
L
I
D
A
D
E
CLASSE III
Alta solubilidade
Alta solubilidade
Alta permeabilidade
Baixa permeabilidade
CLASSE II
CLASSE IV
Baixa solubilidade
Baixa solubilidade
Alta permeabilidade
Baixa permeabilidade
PERMEABILIDADE
Figura 2 - Sistema de Classificao Biofarmacutica (AMIDON et al., 1995).
20
De acordo com a Figura 2, os frmacos podem ser divididos em quatro

grupos, conforme a sua solubilidade e permeabilidade, apresentando cada um
desses, caractersticas peculiares, conforme discutido a seguir.
Classe I: Os frmacos dessa classe possuem boa permeabilidade, a

menos que sejam instveis no trato gastrintestinal ou sofram metabolismo
de primeira passagem. Como tambm possuem boa solubilidade, o fator
limitante para a sua absoro o tempo de esvaziamento gstrico. As
formas slidas de liberao imediata que contm frmacos com essas
caractersticas, so potenciais candidatas iseno de estudos de
bioequivalncia (AMIDON et al., 1995; ASHFORD, 2002; LIPKA; AMIDON,
1999).
Classe II: Apesar da boa permeabilidade, os frmacos pertencentes a
essa classe , apresentam problemas de solubilidade e, dessa maneira, a
dissoluo torna-se o fator limitante para a absoro. A utilizao de
formulaes bem delineadas ou ferramentas farmacotcnicas como a
complexao do frmaco com ciclodextrinas ou reduo do tamanho de
partcula, entre outras, pode facilitar a dissoluo e consequentemente a
biodisponibilidade oral. No entanto, os ensaios de dissoluo in vitro
devem refletir ao mximo as caractersticas da dissoluo in vivo
(AMIDON et al., 1995; ASHFORD, 2002).
Classe III: constituda por frmacos que apresentam boa solubilidade e
permeabilidade reduzida, sendo esta ltima, considerada o fator limitante
para a absoro.
importante que as formas farmacuticas que
contenham esse tipo de frmaco liberem-no de modo rpido, a fim de

maximizar o tempo de contato com o epitlio intestinal, porm, a absoro
poder ser afetada pela influncia de variveis fisiolgicas, tais como o
tempo de residncia intestinal e o contedo luminal (AMIDON et al., 1995;
ASHFORD, 2002).
Classe IV: a classe que mais desafia o trabalho dos pesquisadores, pois
esses frmacos apresentam problemas de biodisponibilidade oral, uma
21
vez que tanto a solubilidade como a permeabilidade so reduzidas

(AMIDON et al., 1995; ASHFORD, 2002).
2.1. MTODOS UTILIZADOS PARA DETERMINAO DA SOLUBILIDADE E

PERMEABILIDADE DE FRMACOS
2.1.1. Solubilidade
A avaliao da solubilidade para a classificao biofarmacutica da
substncia, baseia-se na determinao do equilbrio sob condies de pH fisiolgico.
O FDA sugere que a realizao do ensaio ocorra em temperatura de 37 1 C em
meios aquosos variando-se a faixa de pH de 1,0 a 7,5. O tradicional mtodo de
solubilidade de fase o mais indicado, podendo ser substitudo por outro, como por
exemplo, a titulao, desde que seja capaz de fornecer o equilbrio de solubilidade
do frmaco (UNITED STATES, 2000; VARMA et al., 2004; YU et al., 2002).
2.1.2. Permeabilidade
Existem diferentes mtodos que podem ser utilizados para a classificao das
substncias conforme a permeabilidade, sendo que alguns envolvem o estudo de
parmetros
farmacocinticos
em
humanos
outros
determinao
da
permeabilidade do trato gastrintestinal (UNITED STATES, 2000).

Conforme
FDA,
entre
os
mtodos
empregados
para
estudo
farmacocintico, encontram-se o estudo de balano de massas com a utilizao de

istopos estveis ou substncias marcadoras e os estudos de biodisponibilidade
absoluta, sendo a absoro do frmaco avaliada em comparao com a absoro
de uma substncia referncia. Entre os mtodos de permeabilidade intestinal esto:
estudos de perfuso intestinal em humanos; estudos in vivo ou in situ de perfuso
intestinal em modelos animais; estudos de permeao in vitro em tecido intestinal
humano ou animal e estudos de permeao in vitro em monocamadas de clulas
epiteliais (UNITED STATES, 2000).
22
Embora o estudo farmacocintico em humanos seja o padro ouro para a

determinao da permeabilidade, o seu uso na etapa de desenvolvimento no
vivel, principalmente pela alta variabilidade, necessidade de administrao atravs
de uma formulao e pelos custos envolvidos. Dessa forma, os estudos de
permeabilidade intestinal tornam-se uma alternativa interessante (VARMA et al.,
2004).
As tcnicas in vitro baseadas na utilizao de cultura de clulas tm sido
muito exploradas nos ltimos anos. Entre os tipos celulares, as da linha Caco-2 so
as mais empregadas em razo da sua similaridade com as clulas intestinais e pela
capacidade de expresso de transportadores e enzimas intestinais (JUNG et al.,
2006; VARMA et al., 2004).
2.2. EXTENSO DO SCB
Desde a sua criao, o Sistema de Classificao Biofarmacutica tem sido
objeto de diversos estudos e discusses da comunidade cientfica, e algumas
sugestes foram propostas na tentativa de tornar a classificao menos restrita e
com maior aplicao (YU et al., 2002).
Em relao avaliao da solubilidade, so sugeridas a alterao da faixa de
avaliao do pH de 1,0 a 7,5 para 1,0 a 6,8, considerando que o pH de 7,5
corresponde ao da regio do leo onde o frmaco j chegaria dissolvido e a
alterao do volume de 250 mL para 500 mL, sendo esse um volume mdio, uma
vez que o volume do intestino pode variar de 50 a 1100 mL (WORLD HEALTH
ORGANIZATION, 2006; YU et al., 2002).
Para a permeabilidade, tem-se sugerido a alterao do valor de 90% para
85% para frmacos de alta permeabilidade, pois pela avaliao de diferentes
frmacos considerados de alta absoro, a frao da dose absorvida determinada
experimentalmente tem mostrado valores inferiores a 90% (WORLD HEALTH
ORGANIZATION, 2006; YU et al., 2002).
Alm dessas sugestes, novos mtodos para a classificao das substncias
tm sido propostos, tais como o ensaio de dissoluo intrnseca para a avaliao da
solubilidade e a utilizao de novos tipos celulares e membranas para avaliao da
23
permeabilidade intestinal, assim como a utilizao de mtodos computacionais ou in

silico (DOKOUMETZIDIS; VALSAMI; MACHERAS, 2007; YAZDANIAN et al., 2004;
YU et al., 2002).
Muito embora tais sugestes sejam alvo de discusses entre pesquisadores,
o FDA ainda considera o sistema como ele foi proposto inicialmente, enquanto que a
Organizao Mundial da Sade (OMS) j preconiza novos critrios de avaliao
(BENET et al., 2008; PAPADOPOULOU et al., 2008; WORLD HEALTH
ORGANIZATION, 2006).
3. DISSOLUO INTRNSECA
Skinner e Kanfer (1992) sugeriram que os principais aspectos fsico-qumicos
pertinentes para absoro de um frmaco seriam a velocidade de dissoluo
intrnseca e a solubilidade. Como esses dois parmetros so altamente dependentes
de pH, a influncia dos mesmos na absoro poderia ser facilmente determinada por
toda a faixa de pH do trato gastrintestinal.
Por dissoluo intrnseca entende-se o comportamento de dissoluo de uma
substncia ativa pura e a determinao da sua velocidade pode ser de grande
importncia durante o desenvolvimento de novas molculas, uma vez que com
pequenas quantidades de material possvel realizar o teste e prever potenciais
problemas
(AYRES
et
al.,
2007;
STEELE,
2001;
UNITED
STATES
PHARMACOPEIA, 2009; VIEGAS, et al., 2001).

Dessa maneira, a velocidade de dissoluo intrnseca (VDI) definida como a
velocidade de dissoluo de uma substncia ativa pura, quando so mantidas
constantes as condies de rea superficial, temperatura, agitao, pH e fora inica
do meio. Deste modo possvel obter dados acerca da pureza qumica e
equivalncia de frmacos provenientes de diferentes fontes. O conhecimento dessas
informaes est relacionado com a variabilidade de matrias-primas disponveis no
mercado, resultantes de distintos processos de sntese, principalmente nas etapas
finais de cristalizao e que podem acarretar em diferentes tamanhos de partcula,
24
graus de hidratao, hbitos e formas cristalinas para um mesmo frmaco (LEHTO

et al., 2008; SEHIC et al., 2010; VIEGAS et al., 2001; ZAKERI-MILANI et al., 2009).
A VDI pode ser obtida empregando-se um acessrio especfico para tal, onde
o frmaco compactado exposto a um meio de dissoluo sob uma rea superficial
constante, e o seu valor expresso em mg cm-2 s-1 (AZARMI; ROA; LBENBERG,
2007; EUROPEAN PHARMACOPOEIA, 2008; PELTONEN et al. 2003; UNITED
STATES PHARMACOPEIA, 2009).
As aplicaes do ensaio de dissoluo intrnseca esto relacionadas com a
sua utilizao como ferramenta na caracterizao de frmacos no estado slido,
como a determinao de parmetros termodinmicos associados transio de
fases cristalinas, graus de hidratao, investigao do fenmeno de transferncia de
massa no processo de dissoluo, avaliao da velocidade de dissoluo de um
frmaco em diferentes meios (variao de pH e/ou utilizao de tensoativos) e a
relao entre a velocidade de dissoluo de uma substncia ativa e a sua forma
cristalina, entre outros (BARTOLOMEI et al.; 2006; YU et al., 2004).
Entretanto, estudos recentes tm demonstrado a utilizao da VDI para a
determinao
da
solubilidade
no
mbito
do
Sistema
de
Classificao
Biofarmacutica. Como esse ensaio no est relacionado a um equilbrio e sim

velocidade, espera-se que haja uma correlao maior com a dinmica da dissoluo
in vivo do que o ensaio de solubilidade. Em um ensaio de solubilidade convencional,
onde uma quantidade de frmaco mantida sob agitao e temperatura constantes
at a saturao da soluo, a determinao da real solubilidade do material pode ser
comprometida, devido s possveis ocorrncias de recristalizaes durante o ensaio,
que podem provocar alterao de forma cristalina, formao de hidratos e solvatos
(YAZDNIAN et al., 2004; YU et al., 2002, 2004; ZAKERI-MILANI, 2009).
Mudanas do material na superfcie do compactado durante o ensaio de
dissoluo intrnseca tambm podem ocorrer como, por exemplo, a converso de
atorvastatina amorfa em sua forma cristalina (KIM et al., 2008); a transformao do
sal de diclofenaco em sua forma cida (BARTOLOMEI et al., 2006); a hidratao das
formas anidras de carbamazepina e teofilina (LEHTO et al., 2008; SEHIC et al.,
25
2010) e a converso da rifampicina para o polimorfo mais estvel (AGRAWAL, et al.,

2004).
No entanto, como a velocidade de dissoluo intrnseca determinada
atravs da correlao entre os resultados de massa dissolvida por unidade de rea e
os tempos de coleta, possvel realizar um monitoramento durante o ensaio e pela
anlise do perfil obtido (presena de curvatura positiva ou negativa), determinar a
solubilidade antes da ocorrncia dessas transformaes (YU et al., 2004; UNITED
STATES PHARMACOPOEIA, 2009).
Outro aspecto bastante vantajoso da dissoluo intrnseca, a utilizao de
pequenas quantidades de frmaco, o que facilita o seu emprego na avaliao da
solubilidade durante a etapa de pr-formulao (molculas novas), quando
quantidades mnimas de frmaco so disponibilizadas para a realizao dos ensaios
(STEELE, 2001; WANG; FLANAGAM, 2009).
3.1. APARATOS UTILIZADOS NA DETERMINAO DA VDI
Dois tipos de aparatos utilizados no ensaio de dissoluo intrnseca so
citados em farmacopias: o sistema de disco fixo, descrito apenas na Farmacopia
Americana e o sistema de disco rotativo, conhecido como Woods apparatus,
tambm descrito na USP e nas farmacopias Europia e Britnica (BRITTISH
PHARMACOPOEIA,
2009;
EUROPEAN
PHARMACOPOEIA,
2008;
UNITED
STATES PHARMACOPEIA, 2009; VIEGAS et al., 2001).

A utilizao do sistema de disco rotativo mais comum, porm boa
correlao dos resultados observada em comparao com o sistema de disco fixo
e at com outros sistemas no descritos em farmacopias, mas j testados em
alguns estudos para a determinao da velocidade de dissoluo intrnseca, como o
mtodo da clula de fluxo e um aparato em miniatura (Mini-IDRTM) semelhante ao
disco rotativo (BERGER et al., 2007; LEHTO et al., 2008; PELTONEN et al., 2003;
TSINMAN et al., 2009; VIEGAS et al., 2001).
Entre as caractersticas desses aparatos podem ser citadas (UNITED
STATES PHARMACOPEIA, 2009): a utilizao em equipamentos de dissoluo
convencionais; possuem uma cavidade para a colocao do frmaco, sendo
26
necessrio o uso de uma prensa para a formao do compactado; a superfcie de

exposio do frmaco de geometria e dimenso conhecidas; os aparatos quando
colocados no equipamento de dissoluo, permitem que o compactado do frmaco
fique exposto em um local de menor variabilidade hidrodinmica.
A VDI sofre influncia de vrios fatores, que podem ser divididos em dois
grupos: fatores internos e externos. Os fatores internos esto relacionados s
propriedades do estado slido do frmaco e os externos, com a rea superficial,
condio hidrodinmica e composio do meio de dissoluo, viscosidade, pH e
fora inica do meio.
3.1.1. Sistema de disco rotativo
Esse sistema composto por um puno de ao, matriz, haste, um anel de
neoprene e a base de apoio (Figura 3a). A base possui trs entradas de parafusos
para a fixao da matriz e auxlio na fabricao do compactado.
A matriz possui
uma cavidade com dimetro de 0,8 cm, onde o frmaco e o puno so inseridos e
submetidos a uma presso de compactao. Dessa maneira, aps a separao da
base, o material fica exposto na face da matriz que acoplada na haste responsvel
pelo movimento (Figura 3b) (UNITED STATES PHARMACOPEIA, 2009; VIEGAS et
al., 2001).
3.1.2. Sistema de disco fixo
O sistema possui um puno de ao, matriz, anel de neoprene, base de apoio
e suporte (Figura 4a). O esquema de formao do compactado semelhante ao
aparato fixo, entretanto, nesse caso h necessidade de um suporte para
sustentao da matriz e do puno sobre uma cuba de fundo plano, de modo que a
rea do frmaco fique fixa e exposta para cima, sendo o movimento rotacional de
responsabilidade de uma p do aparato dois (Figura 4b) (UNITED STATES
PHARMACOPEIA, 2009; VIEGAS et al., 2001).
.
27
(b)
Figura 3 - Sistema de disco rotativo (aparato de Wood): (a) aparato desmontado e (b)
configurao do sistema no equipamento de dissoluo (UNITED STATES
PHARMACOPEIA, 2009; MAUGER, 1996).
28
Figura 4 - Sistema de disco fixo: (a) aparato desmontado e (b) configurao do sistema no
equipamento de dissoluo (USP, 2009).
29
3.2. CLCULO DA VDI E ANLISE DOS DADOS OBTIDOS NO ENSAIO

Para o clculo da VDI, utiliza-se a equao derivada da equao de Noyes e
Whitney, sendo retiradas desta equao, duas informaes: a velocidade de
dissoluo, expressa geralmente pela massa de amostra dissolvida por unidade de
tempo e o fluxo de dissoluo, quando a rea superficial levada em considerao,
expresso em velocidade de dissoluo por unidade de rea (UNITED STATES
PHARMACOPEIA, 2009; CARSTENSEN, 2001; YU et al., 2004):
j=
Vdc 1
dt
A
(Equao 4)
Onde,
j = fluxo de dissoluo (mg cm-2 s-1)
V = volume do meio de dissoluo (mL)
c = concentrao do frmaco dissolvido no meio (mg mL-1)
A = rea superficial da amostra (cm2)
t = tempo (s)
Assim, quando o clculo do fluxo de dissoluo (j) utilizado para um frmaco
puro mais comum cham-lo de velocidade de dissoluo intrnseca (UNITED
Durante o ensaio, a quantidade cumulativa do frmaco dissolvida em cada
intervalo de tempo deve ser corrigida considerando os volumes de amostragem
retirados para leitura. Para o clculo da VDI necessrio construir um grfico da
quantidade acumulada de frmaco dissolvido em funo do tempo e, pela regresso
linear dos pontos, com a obteno da equao da reta, tem-se a velocidade de
dissoluo em unidade de massa por segundo, representada pelo valor do
coeficiente angular. A velocidade de dissoluo intrnseca determinada dividindose esse valor pela rea superficial do compactado em centmetros quadrados, sendo
30
reportada em unidade de massa cm-2 s-1 (UNITED STATES PHARMACOPEIA,

2009).
Vale lembrar que a maioria dos resultados
resultados de dissoluo intrnseca
encontrados na literatura expressa em mg min-1 cm-2 , forma utilizada por muitos
autores e indicada pela Farmacopeia Americana at 2008.
O grfico obtido de quantidade de frmaco dissolvido em funo do tempo
pode apresentar
entar curvatura (alterao da inclinao da reta) e, neste caso, deve-se
deve
considerar apenas a regio linear inicial para o clculo da velocidade de dissoluo.
A presena da curvatura positiva pode indicar algum problema experimental,
enquanto que a negativa
a pode estar relacionada transio da forma do cristal na
superfcie do compactado ou quando a saturao do meio de dissoluo
inadvertidamente alcanada (LEHTO et al., 2008; SEHIC et al.,
al. 2010; UNITED
50
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
Quantidade dissolvida (mg)
1000
2000
Tempo (min)
(a
a)
3000
18
16
14
12
10
8
6
4
2
0
0
1000
2000
Tempo (min)
3000
(
(b)
Figura 5: Curvaturas que podem aparecer no grfico de velocidade de dissoluo (a)

positiva e (b) negativa.
3.3. DETERMINAO DA CLASSE

CLAS
DE SOLUBILIDADE A PARTIR DA VDI
Conforme mencionado anteriormente, estudos vm sendo realizados para
demonstrar a viabilidade da utilizao da velocidade de dissoluo intrnseca para a
31
determinao
da
classe
de
solubilidade
no
Sistema
de
Classificao
Biofarmacutica.
Yu e colaboradores (2004), determinaram que para frmacos onde possvel
obter uma boa correlao entre a dissoluo intrnseca e a solubilidade, o valor
limtrofe para a diviso das classes seria 0,1 mg min-1 cm-2/ 0,0017 mg cm-2 s-1, ou
seja, frmacos com velocidade de dissoluo intrnseca acima desse valor seriam
considerados de alta solubilidade e velocidades abaixo desse limite, indicariam
frmacos de baixa solubilidade.
-1
-2
Tabela 1 Valores de VDI (mg min cm ) e classificao de solubilidade segundo o SCB

de alguns frmacos conforme proposta de Yu e colaboradores (2000). Ensaio de dissoluo
intrnseca realizado com o sistema de disco rotativo, em 900 mL de tampo fosfato pH 6,8
sob velocidade de rotao100 rpm.
Frmaco
VDI
(mg min-1 cm-2)
ranitidina
metoprolol
propranolol
nortriptilina
atenolol
nadolol
labetolol
cetoprofeno
furosemida
naproxeno
hidroclorotiazida
piroxicam
carbamazepina
griseofulvina
43,1 0,1
27,0 0,4
17,8 0,3
6,5 0,2
2,56 0,13
1,44 0,04
0,70 0,02
0,57 0,03
0,50 0,02
0,26 0,02
0,11 0,01
0,088 0,002
0,029 0,002
0,0022 0,0002
Classificao de
solubilidade conforme
SCB
Alta
Alta
Alta
Alta
Alta
Alta
Baixa
Baixa
Baixa
Baixa
Baixa
Baixa
Baixa
Baixa
Recentemente, Zakeri-Milani e colaboradores (2009), em trabalho realizado

com os mesmos frmacos e condies de ensaio empregados por Yu e
colaboradores em 2000 (sistema rotativo, 900 mL de tampo fosfato pH 6,8 e 100
rpm), sugeriram o valor de 1 mg min-1 cm-2/ 0,017 mg cm-2 s-1 para ser tomado como
base na diviso das classes de solubilidade.
32
Embora os valores limites indicados nos dois trabalhos sejam diferentes,

provavelmente devido a diferenas nos aparatos utilizados (rea superficial de
frmaco exposto), a ordem de classificao das substncias avaliadas foi a mesma.
Dessa forma, para frmacos que no apresentam dose muito elevada ou muito
baixa, onde no h discrepncias entre os resultados de solubilidade e dissoluo
intrnseca, a VDI pode ser utilizada como ferramenta para a classificao da
solubilidade (YU et al., 2004; ZAKERI-MILANI et al., 2009).
3.4. SOLUBILIDADE VERSUS DISSOLUO INTRNSECA
Sendo a dissoluo intrnseca uma alternativa vivel para a determinao da
classe de solubilidade, verifica-se que, conforme apresentado na Tabela 2, esse
ensaio possui algumas vantagens em relao ao mtodo da solubilidade de fase,
principalmente em relao ao tempo, quantidade de material e manuseio das
amostras.
Tabela 2 Condies e fatores relacionados aos ensaios de solubilidade pelo mtodo da
solubilidade de fase e dissoluo intrnseca.
Condies
Equipamento
Aparatos
Solubilidade
Shaker (Incubadora)
Dissoluo intrnseca
Equipamento de dissoluo
Frascos
Disco fixo/rotativo
Necessrio para
Quantidade de material
Tempo
saturao
At 72 h (at saturao)
100 mg a 200 mg
De 30 min at 24h at
obteno de uma reta.
Influncia de reduo da
temperatura
Sim
No
Sim
No
No
Sim
Necessidade de filtrao ou
centrifugao
Possibilidade obteno do
resultado antes de uma
transio de forma cristalina
da amostra.
33
4. CONCLUSO
Com a utilizao do SCB na avaliao das caractersticas de solubilidade e
permeabilidade dos frmacos possvel fazer uma predio do comportamento in
vivo das substncias, prevenindo assim, eventuais problemas de formulao e o
gasto desnecessrio com estudos de bioequivalncia. Entre os mtodos utilizados
para a classificao, a obteno da velocidade de dissoluo intrnseca uma
ferramenta que vem ganhando destaque, onde, com quantidades mnimas de
frmaco e menor tempo, pode-se determinar de modo mais preciso, a solubilidade
das substncias.
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cap. 15, p. 341-361.
39
Captulo 2
Influncia da granulometria nas propriedades fsicoqumicas do

metronidazol
40
RESUMO
O objetivo do presente trabalho foi avaliar a influncia da micronizao e,
consequentemente, da distribuio granulomtrica nas propriedades fsico-qumicas
do metronidazol. Foram realizadas anlises de solubilidade, tamanho de partcula,
calorimetria exploratria diferencial (DSC), termogravimetria e termogravimetria
derivada (TG/DTG), infravermelho por transformada de Fourier (FTIV), difratometria
de raios X (DRX), anlise de rea superficial pelo mtodo BET, densidade
verdadeira, microscopia ptica e caracterizao do fluxo dos ps. Os resultados
indicaram que a solubilidade do metronidazol
no alterada pela reduo do
tamanho de partcula e pelo aumento da rea superficial, entretanto influenciada

pelo pH. As curvas termoanalticas apresentaram dois eventos caractersticos, em
160 C e 290 C, correspondendo, respectivamente, fuso e degradao do
metronidazol, no havendo alterao da forma cristalina. Para os demais ensaios,
com exceo do ndice de compressibilidade e razo de Hausner, que indicaram que
o fluxo do material prejudicado com o processo de micronizao e a densidade
compactada, no foram observadas diferenas entre as amostras analisadas.
41
1. INTRODUO
Apesar de muitos problemas que ocorrem na etapa de produo de uma
forma farmacutica estarem relacionados com o processo de fabricao e/ou
excipientes empregados, grande parte deles tambm influenciada pelas
caractersticas fsico-qumicas do frmaco utilizado. Dessa forma, de extrema
importncia a avaliao das propriedades fsico-qumicas do frmaco a ser
manipulado, bem como o seu impacto no comportamento do produto final
(CARSTENSEN, 2001).
A chamada etapa de pr-formulao proporciona o conhecimento detalhado
das propriedades de uma determinada substncia, o que essencial para minimizar
problemas de formulao nos estgios finais de desenvolvimento e, principalmente,
reduzir custos com o frmaco e diminuir o tempo para o medicamento chegar ao
mercado (NIAZI, 2007).
Tal conhecimento fornecido pela investigao de uma srie de informaes
como: solubilidade, dissoluo intrnseca, ponto de fuso, polimorfismo, estabilidade,
microscopia, densidade, tamanho de partcula, propriedades reolgicas do p e
compatibilidade com excipientes (ALLEN JR., 2008; WELLS, 2002).
Por outro lado, a micronizao uma prtica muito utilizada na indstria
farmacutica para a reduo do tamanho das partculas de frmacos e
homogeneizao da granulometria do lote. Entretanto, algumas alteraes no
material podem ocorrer, como a perda da estabilidade da molcula e amorfizao da
amostra, pela energia envolvida no processo, bem com a alterao das
caractersticas
de
fluxo
do
(CARSTENSEN,
2001;
GOVINDARAJAN;
SURYJANARAYANAN, 2006; KIM et al., 2007; LIU et al., 2008).

Alm disso, observa-se na prtica que com a reduo do tamanho das
partculas de um frmaco, possvel aumentar a sua solubilidade (ALLEN JR.,
2008).
O metronidazol, cuja estrutura qumica apresentada na Figura 1, um
frmaco antimicrobiano, empregado no combate s formas intestinais e extra-
42
intestinais de amebase e tricomonase, alm de infeces bacterianas.

classificado como frmaco pertencente classe I do Sistema de Classificao
Biofarmacutica (SCB), ou seja, apresenta alta solubilidade e alta permeabilidade
(IDKAIDEK; NAJIB, 2000; LINDENBERG; KOPP; DRESSMAN, 2004).
(C6H9N3O3)
Figura 1 - Estrutura qumica do metronidazol (UNITED STATES PHARMACOPEIA, 2009).
Em relao forma cristalina, no relatada a ocorrncia de polimorfismo,

sendo reconhecida a estrutura monoclnica para o metronidazol livre. No entanto,
conforme a polaridade do solvente empregado na etapa de cristalizao, trs tipos
distintos de hbito cristalino podem aparecer: acicular, prismtico e isomtrico (DI
MARTINO et al., 2007a).
Dessa forma, o presente trabalho tem por objetivo avaliar a influncia da
micronizao e, consequentemente, de diferentes granulometrias nas propriedades
fsico-qumicas do metronidazol.
2. MATERIAL E MTODOS
2.1. MATERIAL
2.1.1. Frmaco
A matria-prima de grau farmacutico, foi doada pela Micro Service Ind.
Qumica Ltda., apresentando-se em trs fraes diferentes de tamanho de partcula:
metronidazol base amostra bruta (no micronizada), metronidazol base micro 01
(amostra micronizada) e metronidazol base micro 02 (amostra submetida dupla
micronizao).
43
2.2. MTODOS
2.2.1. Ensaio de solubilidade
Para a avaliao da solubilidade das amostras de metronidazol utilizou-se o
mtodo da solubilidade de fase, onde um excesso do frmaco foi adicionado em 25
mL de meio para promover sua saturao. As amostras foram deixadas sob agitao
a 150 rpm em incubadora orbital TE - 420 (Tecnal, Piracicaba, SP, Brasil) durante 72
horas em temperatura constante de 37 C.
A quantificao do frmaco dissolvido em cada amostra foi realizada atravs
da leitura em espectrofotmetro UV-Vis Cary 50 (Varian Inc. Palo Alto, CA, Estados
Unidos) das absorbncias das respectivas solues filtradas e clculo das
concentraes obtidas pelas equaes de reta geradas conforme as curvas
analticas construdas no mesmo equipamento. Para as solues de HCl o
comprimento utilizado foi de 275 nm, enquanto que para as demais solues foi de
320 nm.
Cada amostra foi analisada em triplicata, sendo a solubilidade do frmaco
avaliada em gua (pH ~ 6,5) e nos meios HCl 0,1 M (pH ~ 0,9), HCl 0,01 M (pH ~
2,0), tampo acetato pH 4,5, tampo fosfato pH 5,8, tampo fosfato pH 6,8 e tampo
fosfato pH 7,2. Todas as solues foram preparadas de acordo com a Farmacopia
Americana (UNITED STATES, 2000; UNITED STATES PHARMACOPEIA, 2009).
2.2.2. Anlise de tamanho de partcula
As anlises foram realizadas em equipamento de difrao de raios laser
Malvern Mastersizer X (Malvern Instruments Ltd. Malvern, Worcestershire, Reino
Unido) no mdulo de via mida. Para a conduo das anlises utilizou-se lente de
300 mm abrangendo a faixa de leitura de 1,2 m a 600 m e os resultados
expressos por curvas de distribuio relativa dos valores obtidos.
O meio dispersante utilizado para a leitura e preparo das amostras foi uma
soluo aquosa saturada do frmaco. Antes da sua utilizao, a soluo foi filtrada
para remoo do frmaco no solubilizado.
44
Todas as amostras foram preparadas da mesma maneira: pesando-se cerca

de 1,5 gramas de metronidazol que foram colocados em 50 mL do meio dispersante
e deixadas sob agitao durante cinco a dez minutos, seguida de trinta segundos de
ultrassom, tempo suficiente para permitir a disperso adequada das partculas.
2.2.3. Calorimetria exploratria diferencial (DSC)
A caracterizao por calorimetria exploratria diferencial foi realizada
empregando-se a clula TA-2920 (TA-Instruments, New Castle, DE, Estados
Unidos) previamente calibrada com ndio metlico
( ponto de fuso: 156,4 C/
Hfuso: 28,50 J g-1) , no intervalo de temperatura de 25 C a 320 C. Cerca de 3,0

mg de amostra foram colocados em cadinho de alumnio hermeticamente fechado e
submetidos razo de aquecimento de 10 C min-1 e atmosfera dinmica de
nitrognio com vazo de 50 mL min -1.
2.2.4. Anlise termogravimtrica (TG) e termogravimetria derivada (DTG)
As curvas de TG/ DTG foram avaliadas utilizando-se cadinho de platina em
analisador termogravimtrico 2950 (TA-Instruments, New Castle, DE, Estados
Unidos) no intervalo de temperatura de 25 a 350 C, razo de aquecimento 20 C
min-1 e atmosfera dinmica de nitrognio com vazo de 100 mL min-1. A calibrao
do equipamento foi realizada com padro de oxalato de clcio sob razo de
aquecimento de 20 C min-1 at 800 C.
Para averiguar se h impacto da reduo de tamanho de partcula sobre a
estabilidade do metronidazol, realizou-se um estudo de cintica de degradao entre
as amostras de tamanhos de partcula mais afastados, mais especificamente as
amostras: bruta e micro 02. O mtodo utilizado foi o no-isotrmico, tambm
conhecido como mtodo de Ozawa e descrito em CIDES et al. (2006), onde as
amostras foram submetidas a diferentes razes de aquecimento que variaram de 2,5
C min-1 a 20,0 C min -1, sendo os valores dos picos de degradao resultantes de
cada curva, utilizados nos clculos para obteno da energia de ativao das
amostras (Ea).
Para a comparao das curvas obtidas adotou-se uma massa fixa, em torno
de 14 mg, para todos os ensaios de cintica de degradao.
45
2.2.5. Infravermelho por transformada de Fourier (FTIV)

Os espectros de absoro na regio de infravermelho foram registrados entre
400 cm
-1
e 6000 cm
-1
, em espectrofotmetro SCINCO S-1000 (Scinco, Seoul,
Coria do Sul), utilizando-se cubeta de quartzo com caminho ptico de 1 cm. Para
facilitar a comparao dos espectros, os resultados foram plotados em um nico
grfico, com auxlio do software OriginPro 6.1.
2.2.6. Difratometria de raios x no estado slido (DRX)
Os difratogramas de raios X de p foram obtidos em um difratmetro
Shimadzu, modelo XD-6000 (Shimadzu Corporation, Kyoto, Japo), operando-se
nas condies de 40KV e 40 mA, com velocidade de varredura de 2 min
-1
(em 2
theta), utilizando-se silcio (Si) policristalino como padro. Os resultados foram

plotados e organizados com auxlio dos softwares X-Pert e OriginPro 6.1.
2.2.7. Anlise de rea superficial
A determinao da rea superficial especfica das amostras foi realizada em
analisador de adsoro gasosa NOVA 2200e (Quantachrome Corporation, Boyton
Beach, FL, Estados Unidos) pela metodologia de anlise de superfcie e porosidade
de materiais slidos (BET) sob atmosfera inerte de nitrognio.
2.2.8. Densidade verdadeira
A densidade verdadeira das amostras foi obtida em picnmetro de gs Hlio
Ultrapycnometer 1000 (Quantachrome Corporation, Boyton Beach, FL, Estados
Unidos), onde cerca de 1,5 a 3,0 gramas de cada amostra foram submetidas a
cinco medies de volume e densidade, determinando-se ao final a densidade
mdia.
2.2.9. Microscopia ptica
A morfologia dos cristais foi avaliada em microscpio ptico invertido
Olympus CKX41(Olympus Imaging America Inc.), com iluminao proveniente de
lmpada de halognio, sendo as imagens obtidas por meio de cmera digital Fujifilm
FinePix S5100 (Fujifilm Corporation).
46
2.3.0. Avaliao do fluxo dos ps

A avaliao do comportamento de fluxo das amostras foi realizada pela
determinao dos parmetros densidade compactada, ndice de compressibilidade
(IC) e razo de Hausner (RH).
2.3.0.1. Densidade compactada
A densidade compactada (dc) foi determinada conforme mtodo descrito na
Farmacopia Americana (2009), onde 100 gramas de p foram pesados e
transferidos para proveta de 250 mL aps a tamisao. Inicialmente obteve-se o
volume aparente (Vo) e na sequncia, os volumes aps 500 batidas (V500) e 1250
(V1250), at no haver variao de mais de 2% entre os resultados inicial e final.
Dessa maneira, a densidade compactada foi calculada utilizando-se a Equao 1 e o
resultado expresso em g mL-1.
d=
massa
vf
(Equao 1)
2.3.0.2. ndice de compressibilidade (IC) e razo de Hausner (RH)

O ndice de compressibilidade e a razo de Hausner foram calculados de
acordo com a Farmacopia Americana (2009), a partir dos valores de densidade
aparente (do) e compactada (dc), utilizando-se as Equaes 2 e 3.
IC (%) =
dc do
x100
dc
(Equao 2)
Onde:
IC (%) = ndice de compressibilidade
dc = densidade aps a compactao
do = densidade aparente
RH =
df
do
(Equao 3)
47
Onde:
RH = Razo de Hausner
df = densidade aps a compactao
do = densidade aparente
3. RESULTADOS E DISCUSSO
A Figura 2 mostra a solubilidade do metronidazol frente aos meios utilizados,
nas trs faixas de tamanho de partcula disponveis. Os resultados variaram de 12,7
mg mL-1 a 32,3 mg mL-1, sendo os maiores valores encontrados para as amostras
analisadas em HCl 0,1 M, em conformidade com os dados literatura, que relatam
que o frmaco uma base fraca com solubilidade elevada em valores de pH
menores que 2 (WU; FASSIHI, 2005). Os demais meios resultaram em valores
bastante semelhantes entre si, com exceo da gua que proporcionou solubilidade
um pouco mais elevada.
48
50,00
Solubilidade (mg mL-1)
40,00
32,32 31,93
31,44
30,00
20,00
14,90 15,26 14,85
14,01 13,98 13,93
14,51 14,62 14,36
13,87 13,77 13,83
14,01 13,98 14,02
13,49 13,23
12,71
HCl 0,01 M
Acetato 4,5
Fosfato 5,8
Fosfato 6,8
Fosfato 7,2
10,00
0,00
HCl 0,1M
amostra bruta
micro 01
micro 02
Figura 2 - Solubilidade (mg mL-1) das amostras de metronidazol nos diferentes meios estudados.
gua
49
Em geral, com a reduo do tamanho de partcula, observa-se um aumento

da solubilidade do frmaco, seja pelo aumento da rea superficial exposta ao
solvente,
melhorando
dessa
forma
interao
slido-lquido
ou
pela
descaracterizao da forma cristalina, ocasionada pela amorfizao do material no

processo de micronizao. Pela comparao dos valores de solubilidade das
amostras do metronidazol em todos os meios, para os diferentes tamanhos de
partcula, verificou-se que no h influncia da micronizao na solubilidade desse
frmaco. De fato, a reduo do tamanho de partcula capaz de impactar, de modo
significativo, na solubilidade de frmacos pouco solveis, mas, como aqui
demonstrado, no promove efeito em uma substncia de alta solubilidade como o
metronidazol (ALLEN JR., 2008; FLORENCE; ATTWOOD, 2003; LINDENBERG;
KOOP; DRESSMAN, 2004).
De acordo com a distribuio de tamanho de partcula obtida (Figura 3),
confirmou-se que as amostras encontram-se em trs faixas granulomtricas distintas
e que as suas amplitudes diminuem conforme o aumento do grau de micronizao.
16
14
Volume %
12
10
8
Amostra Bruta
Micro 01
Micro 02
2
0
0
100
200
300
400
Tamanho de partcula (m)
Figura 3 - Distribuio de tamanho de partcula para as trs amostras obtidas pelo mtodo
de disperso lquida em equipamento de difrao de raios laser.
Porm, ao observar os valores de dimetros a 10 %, 50 %, 90 % e tamanho

mdio das partculas (Tabela 1), altos valores de desvio padro foram encontrados
para as repeties da amostra micro 01. Tal resultado pode estar relacionado com o
50
grau de micronizao, uma vez que a amostra bruta apresenta uma faixa mais
ampla distribuio granulomtrica, com a primeira micronizao, pode ter ocorrido a
formao de partculas de tamanhos bem variados, que, aps a segunda reduo,
apresentaram uma distribuio mais homognea, com a diminuio da amplitude da
curva e dos valores de desvio padro.
Tabela 1 Dimetros a 10 %, 50 % , 90% e tamanho mdio das partculas obtidos na
anlise realizada em equipamento de difrao de raios laser. Os valores so expressos em
mdia (m) desvio padro de duas determinaes.
d (0.1)
d (0.5)
d (0.9)
Tamanho
mdio
Bruta
38,5 0,8
83,8 1,0
169,1 0,8
102,9 0,2
Micro 01
19,7 3,0
49,1 8,1
72,6 18,9
49,60 6,0
Micro 02
8,7 0,8
26,7 1,4
58,0 2,2
35,1 1,2
Amostra
As curvas de DSC, TG e DTG (Figura 4) indicaram que no houve alterao

no comportamento trmico do frmaco aps a micronizao. Na DSC, as curvas
apresentaram dois eventos bem caractersticos: o primeiro, endotrmico, relacionado
fuso do metronidazol em torno de 160 C e o segundo exotrmico, relacionado
sua decomposio em torno de 290 C, representado pela perda de massa nas
curvas de TG/DTG. Na Tabela 2 so apresentados os valores numricos que
comprovam o comportamento semelhante entre as amostras.
Os resultados de resduo e incio da perda de massa (Tonset de degradao)
da TG mostrados na Tabela 3, indicam que houve diminuio dessas temperaturas
para as amostras micro 01 e micro 02 quando comparadas curva da amostra
bruta, bem como a diminuio de resduo final da amostra micro 02, indicando dessa
forma, uma possvel influncia da micronizao no processo de degradao. Para a
avaliao dessa hiptese, realizou-se o estudo da cintica de degradao pelo
mtodo no-isotrmico (mtodo de Ozawa) para as amostras mais distintas em
tamanho de partcula: amostra bruta e
micro 02, sendo as curvas de TG
apresentadas na Figura 5 e os valores de temperatura de incio de degradao

(Tonset) e pico mximo obtidos, mostrados na Tabela 4 .
51
Figura 4 - Curvas de DSC e TG/DTG de metronidazol das amostras bruta (a), micro 01 (b) e
micro 02 (c) obtidas sob atmosfera dinmica de nitrognio e razo de aquecimento de 10 C
min-1 na temperatura de 25 C a 320 C (DSC) e 20 C min-1 na temperatura de 25 C a 350
C (TG/DTG).
Tabela 2 - Resultados de Tonset (C), pico mximo de fuso (C) e pico mximo de
degradao (C) obtidos pela anlise das curvas de DSC.
Amostra
Tonset
Pico mx.
Degradao
bruta
160,15
161,70
289,18
micro 01
160,09
161,73
291,46
micro 02
160,11
162,52
289,39
52
Tabela 3 - Resultados de Tonset (C), resduo e pico mximo de perda de massa (C)
obtidos a partir das curvas de TG/DTG das trs amostras.
Amostra
Massa (mg)
Tonset
Resduo (%)
Pico mximo
bruta
20,701
231,88
2,056
292,09
micro 01
18,101
222,53
2,280
288,47
micro 02
13,171
213,63
0,633
276,74
Tabela 4 - Valores de Tonset de degradao (C) e pico mximo (C) obtidos no estudo de
cintica de degradao.
Amostra
bruta
Razo de aquecimento
micro 02
Pico
Pico
(C min -1)
Tonset
mximo
Tonset
mximo
2,5
175,39
219,55
181,32
216,65
187,79
236,30
186,88
234,40
7,5
196,07
250,13
191,89
244,14
10
206,26
259,19
205,28
259,64
15
206,26
272,56
213,18
268,88
20
219,84
279,63
218,11
278,54
53
bruta
micro 02
Figura 5 - Curvas de TG das amostras submetida a diferentes razes de aquecimento, de

25 C a 350 C sob atmosfera inerte de nitrognio fluxo de 100 mL min-1.
Os valores de Ea obtidos foram de 33 kJ mol-1 para a amostra bruta e 31,9 kJ

mol
-1
para a amostra micronizada. Observa-se, deste modo, que no h diferenas
de energia de ativao entre as amostras e, consequentemente, no h influncia

da micronizao na estabilidade do metronidazol. As diferenas mostradas na
54
Tabela 3, provavelmente esto relacionadas s diferentes massas empregadas em

cada corrida.
O espectro vibracional (FTIV) obtido para as trs amostras de metronidazol
so apresentados na Figura 6. Pela comparao, verificou-se que o processo de
micronizao no gerou alterao nas bandas de absoro do frmaco.
M e tro n id a z o l - A m 0 1
M e tro n id a z o l - A m 0 2
M e tro n id a z o l - A m B ru ta
120
Absorvncia
100
80
60
40
20
0
6000
5000
4000
3000
2000
1000
-1
(c m )
Figura 6 - Espectros de IV obtidos para as amostras de metronidazol. Varreduras realizadas

na faixa de 400 a 6000 cm -1 em equipamento FTIR SCINCO S-1000.
Na Figura 7 so apresentados os difratogramas das amostras estudadas e do

padro do cristal monoclnico do metronidazol. Segundo anlise dos difratogramas
obtidos com auxlio do programa X- Pert (Figura 8), verificou-se que as amostras
avaliadas
apresentaram
reflexes
semelhantes
ao
cristal
monoclnico
de
metronidazol. Conforme dados da literatura, no h informaes sobre a ocorrncia

de polimorfismo para o frmaco, sendo a forma monoclnica a nica reconhecida (DI
MARTINO et al., 2007a).
Assim, o que se verifica que a estrutura cristalina mantida e no h
amorfizao do frmaco aps a micronizao, fato tambm evidenciado pelas curvas
de DSC (Figura 4).
55
Pela comparao das intensidades de reflexo entre as amostras de

diferentes granulometrias (Figura 8), verifica-se que os picos so preservados,
porm a intensidade menor para as amostras micronizadas, principalmente para a
primeira reflexo (em torno de 12). Entretanto, tal fato pode ser atribudo
granulometria menos uniforme da amostra bruta em relao s demais (maior
amplitude de faixa granulomtrica), que pode gerar um efeito de orientao
preferencial no preparo da amostra, que minimizado com a reduo de tamanho
de partcula (CAMPBELL ROBERTS et al.,2002).
Figura 7 - Difratograma das amostras analisadas plotadas com o difratograma do cristal

monoclnico de metronidazol presente na base de dados do programa X-Pert.
56
Metronidazol - amostra 01
100000
80000
Intensity
Metronidazol - amostra 02
60000
40000
Metronidazol - amostra bruta
20000
0
0
10
20
30
40
2 (degrees)
Figura 8 - Difratograma das trs amostras analisadas, plotadas em planilha do OriginPro

6.1., evidenciando picos mais pronunciados para a amostra bruta.
Na Tabela 5 so apresentados os resultados obtidos na anlise de rea

superficial e densidade verdadeira. Verifica-se que, com aumento do grau de
micronizao do metronidazol, e consequentemente reduo do tamanho das
partculas, ocorre aumento dos valores de rea superficial, volume e tamanho de
poro. Por outro lado, tal fato parece no mostrar influncia sobre a densidade
verdadeira do p.
Tabela 5 - Resultados de rea superficial, volume e tamanho de poro e densidade
verdadeira, sendo os trs primeiros obtidos em analisador de rea superficial sob atmosfera
de nitrognio e o ltimo em picnmetro de gs Hlio. Os resultados de densidade so
apresentados pelos valores mdios e desvio padro de trs determinaes.
ASBET
V poro
Tamanho
Densidade verdadeira
Amostra
(m2 g-1)
(cm3 g-1)
poro (nm)
(g mL-1)
bruta
0,827
1,322E-03
3,196
1,4765 0,01
micro 01
1,070
2,371E-03
4,429
1,4787 0,00
micro 02
1,441
4,483E-03
6,220
1,4739 0,01
57
Com as imagens obtidas a partir da visualizao por microscopia ptica das

amostras (Figura 9) foi possvel visualizar o impacto do grau de micronizao na
reduo do tamanho das partculas e na homogeneidade
granulomtrica do
frmaco.
Figura 9 Imagens obtidas na microscopia ptica pelo aumento de 10x: a amostra bruta, b
amostra micro 01, c amostra micro 02.
Outro aspecto importante a ser considerado o comportamento reolgico de

um p, que pode ser afetado por diversos parmetros, entre os quais, o tamanho
das partculas (CARSTENSEN, 2001). O metronidazol conhecido por ser um
frmaco de difcil compresso (DI MARTINO et al., 2007b), sendo tal fato
comprovado pelos valores de IC e RH encontrados para a amostra bruta, 26,55 % e
1,36
respectivamente. Segundo a Farmacopia Americana (2009), ps que
apresentam IC entre 26 e 31 % e RH entre 1,35 e 1,45 so caracterizados pobres

em fluxo e valores acima dessas faixas, prejudicam ainda mais este comportamento.
Dessa forma, conforme observado na Figura 10, a reduo do tamanho das
partculas prejudica o fluxo do metronidazol, como observado pelo aumento do
ndice de compressibilidade e da razo de Hausner.
Em relao aos dados de densidade compactada, tambm apresentados na
Figura 10, verificou-se que a amostra micro 02, de granulometria mais reduzida,
aquela que apresenta o menor valor, podendo assim, ocupar maior volume em
relao s demais amostras.
1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
0,72
micro
01
0,57
micro
02
razo de Hausner
bruta
0,73
ndice de
compressibilidade (%)
densidade g mL -1
58
50
40
33,63
38,85
26,55
30
20
10
0
bruta
micro
01
micro
02
2,5
2
1,51
1,64
micro
01
micro
02
1,36
1,5
1
0,5
0
bruta
Figura 10 Resultados densidade compactada, ndice de compressibilidade e razo de

Hausner para as amostras de metronidazol.
Pelos resultados apresentados,

apresentados verificou-se
se que o processo de micronizao
tem influncia nas propriedades reolgicas do metronidazol, sendo assim, a reduo
das partculas desse frmaco para a produo de formas slidas deve ser avaliada,
uma vez que tal processo pode intensificar os problemas no momento da fabricao.
4. CONCLUSO
A partir dos resultados obtidos, o que se observa que embora ocorra um
aumento da rea superficial, no h alterao da solubilidade do metronidazol pela
reduo do tamanho de partcula. O processo de micronizao no gerou alterao
de forma cristalina, nem a perda da estabilidade do frmaco. Por outro lado, na
avaliao das propriedades reolgicas, pde-se
pde
verificar que o fluxo do metronidazol
prejudicado.
59
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61
Captulo 3
Avaliao do impacto de diferentes variveis na dissoluo

intrnseca de metronidazol
62
RESUMO
A dissoluo intrnseca uma ferramenta que permite a obteno da dissoluo do
frmaco puro, independente dos efeitos inerentes aos demais componentes de uma
formulao ou tipo de forma farmacutica. O objetivo desse trabalho foi avaliar o
impacto de diferentes variveis na dissoluo intrnseca de metronidazol, frmaco
antimicrobiano que possui solubilidade e permeabilidade elevadas. Os ensaios, bem
como a seleo das variveis independentes, foram realizados conforme um
delineamento experimental do tipo fatorial fracionado. De acordo com anlise
estatstica realizada, as variveis que apresentam impacto na velocidade de
dissoluo intrnseca (VDI) do frmaco so a velocidade de rotao e o meio de
dissoluo, enquanto o tamanho de partcula e a presso utilizada na formao do
compactado, demonstraram no apresentar influncia nos resultados.
63
1. INTRODUO
O ensaio de dissoluo intrnseca consiste na avaliao da dissoluo de um
frmaco puro, mantendo constantes condies como rea superficial, temperatura,
velocidade de rotao, pH e fora inica do meio. uma ferramenta que permite a
avaliao do frmaco, independente dos efeitos inerentes formulao de um
medicamento ou a sua forma farmacutica (AULTON, 2002; TENHO et al., 2007;
VIEGAS et al., 2001).
A velocidade de dissoluo de uma substncia pura pode ser afetada por
fatores intrnsecos e extrnsecos ao frmaco, sendo os primeiros relacionados s
propriedades do estado slido como polimorfismo, amorfismo, solvatao, tamanho
de partcula e rea superficial especfica. Entre os extrnsecos podem ser citados
aqueles relativos ao meio de dissoluo (tampo, utilizao de tensoativo,
temperatura, viscosidade e fora inica do meio), bem como a rea superficial e
condies hidrodinmicas (STEELE, 2001; UNITED STATES PHARMACOPEIA,
2009).
No ensaio de dissoluo intrnseca, o frmaco compactado em uma matriz,
de modo que a sua rea superficial exposta ao meio seja sempre constante, e,
assim, os efeitos relacionados ao tamanho de partcula, podem ser minimizados.
Entretanto, estudos sugerem que, dependendo do tipo de hbito cristalino do
frmaco, a compactao deste pode ser mais organizada ou no (texturizao de
acordo com a orientao preferencial do cristal), podendo gerar diferenas de
velocidade de dissoluo intrnseca (VDI). O processo de micronizao pode
acarretar em diminuio da texturizao do frmaco, gerando um comportamento
direcional aleatrio dos cristais no compactado com a presena de arestas, o que
pode resultar em dissoluo mais rpida do frmaco (VIEGAS et al., 2001; TENHO
et al., 2007).
Embora muitos estudos j tenham sido relatados na literatura, poucos so
aqueles que discorrem sobre a influncia das condies empregadas no ensaio e o
impacto das variveis utilizadas na velocidade de dissoluo intrnseca (VDI).
64
Entre as aplicaes desse tipo de ensaio podem ser mencionadas a sua

utilizao como ferramenta na caracterizao de frmacos no estado slido e a
avaliao da velocidade de dissoluo de um frmaco em diferentes meios
(BARTOLOMEI et al.; 2006; PEREIRA et al., 2007; YU et al., 2004).
Recentemente discute-se sobre a utilizao do ensaio de dissoluo
intrnseca para a determinao da solubilidade de frmacos, uma vez que para a
determinao da VDI, a quantidade requerida de material bem inferior em relao
ao ensaio de solubilidade convencional e possveis alteraes na estrutura cristalina
do material podem ser detectadas (SEHIC et al.,2010; STEELE, 2001; UNITED
STATES PHARMACOPEIA, 2009; YU et al., 2002, 2004; ZAKERI-MILANI et al.,
2009).
O metronidazol, cuja estrutura qumica apresentada na Figura 1, um
frmaco antimicrobiano de classe I no Sistema de Classificao Biofarmacutica
(SCB) alta solubilidade e alta permeabilidade. Embora pertencente classe I, um
frmaco pH dependente, com solubilidade aumentada em pH abaixo de 2
(IDKAIDEK; NAJIB, 2000; LINDENBERG; KOPP; DRESSMAN, 2004; WU; FASSIHI,
2005).
(C6H9N3O3)
Figura 1 - Estrutura qumica do metronidazol (UNITED STATES PHARMACOPEIA, 2009).
Dessa forma, o metronidazol mostra-se um modelo interessante, sendo o

objetivo do presente trabalho, avaliar o impacto de diferentes variveis no ensaio de
dissoluo intrnseca para um frmaco de alta solubilidade.
65
2. MATERIAL E MTODOS
2.1. MATERIAL
2.1.1. Frmaco
A matria-prima utilizada foi doada pela Micro Service Ind. Qumica Ltda.,
apresentando-se em trs fraes diferentes de tamanho de partcula: metronidazol
base amostra bruta (no micronizada) , metronidazol base micro 01 (amostra
micronizada) e metronidazol base micro 02 (amostra submetida dupla
micronizao).
2.2. MTODOS
2.2.1. Planejamento experimental
Para o desenvolvimento do mtodo e avaliao das variveis no ensaio de
dissoluo intrnseca do metronidazol, realizou-se um delineamento experimental do
tipo fatorial contemplando quatro fatores em trs nveis (Tabela 1), sendo o volume
de meio mantido constante (900 mL).
Tabela 1 - Variveis empregadas no planejamento experimental fatorial e os diferentes
nveis estudados.
Fatores
Nveis
Presso de compactao (psi)
1000
2000
3000
Velocidade de rotao (rpm)
50
75
100
Meio de dissoluo
HCl 0,1 M
(101)
gua
(102)
Tp. Fosfato pH 7.2

(103)
Grau de micronizao
O planejamento fatorial do tipo 34 indicou a necessidade de executar 81

experimentos. Dessa forma, buscou-se, por um delineamento fracionado, otimizar o
estudo, com a diminuio do nmero de experimentos. Sendo o fatorial da srie 3k,
pela avaliao das variveis em trs nveis, o seu fracionamento pode ser realizado
para 1/3, 1/9, 1/27 (MONTGOMERY, 2001). Nesse caso, optou-se pela reduo em
66
1/3, totalizando 27 experimentos, o que foi possvel com a utilizao do programa

Statistica 8.0 (Tabela 2).
Tabela 2 - Fatorial fracionado 1/3 de 34 (34-1 ), resultando em 27 experimentos que foram
distribudos aleatoriamente pelo programa Statistica 8.0.
Ordem dos
ensaios
27
21
22
10
23
3
25
7
18
17
16
12
14
13
5
11
9
24
1
8
15
2
20
4
6
19
26
3 (4-1) fatorial fracionado, 1 bloco, 27 experimentos

Presso de Velocidade
Meio de
Grau de
de
rotao
compactao
dissoluo
micronizao
3000
100
Fosfato 7,2
0
3000
50
Fosfato 7,2
2
3000
75
HCl 0,1 M
0
2000
50
HCl 0,1 M
2
3000
75
gua
2
1000
50
Fosfato 7,2
1
3000
100
HCl 0,1 M
2
1000
100
HCl 0,1 M
1
2000
100
Fosfato 7,2
1
2000
100
gua
2
2000
100
HCl 0,1 M
0
2000
50
Fosfato 7,2
0
2000
75
gua
0
2000
75
HCl 0,1 M
1
1000
75
gua
1
2000
50
gua
1
1000
100
Fosfato 7,2
2
3000
75
Fosfato 7,2
1
1000
50
HCl 0,1 M
0
1000
100
gua
0
2000
75
Fosfato 7,2
2
1000
50
gua
2
3000
50
gua
0
1000
75
HCl 0,1 M
2
1000
75
Fosfato 7,2
0
3000
50
HCl 0,1 M
1
3000
100
gua
1
67
2.2.2. Dissoluo intrnseca

Para a realizao dos ensaios, utilizou-se aparatos de disco rotativo Varian
(Varian Inc. Palo Alto, CA, Estados Unidos), acoplados ao equipamento de
dissoluo VK 7010 (Varian Inc. Palo Alto, CA, Estados Unidos), onde cerca de 200
mg de cada amostra foram pesados e compactados com auxlio de uma prensa
hidrulica (American Lab., Charqueada, SP, Brasil). O volume de meio de dissoluo
foi fixado em 900 mL, sendo os ensaios realizados em triplicata, com os intervalos
de coleta a cada 5 minutos, totalizando 40 minutos de experimento. A quantidade de
frmaco liberada foi obtida pela leitura das alquotas em espectrofotmetro UV-VIS
Cary 50 (Varian Inc. Palo Alto, CA, Estados Unidos), no aplicativo Simple reads.
Para realizao dos clculos utilizou-se as equaes de reta geradas pelas curvas
analticas previamente construdas em 275 nm (para HCl) e 320 nm (para os demais
meios utilizados).
Os resultados foram expressos pelos valores de velocidade de dissoluo
intrnseca (VDI). Para os clculos, realizados conforme a farmacopeia americana
(USP 2009), foi construdo um grfico da quantidade de frmaco dissolvida (mg)
versus o tempo (segundos) e atravs da regresso linear, obteve-se o valor da
velocidade de dissoluo do frmaco pela inclinao da reta em mg s-1. Dividindo
esses resultados pelo valor da rea superficial de frmaco exposta na matriz (0,5
cm2), chegou-se aos valores de velocidade de dissoluo intrnseca (VDI) do
metronidazol em mg cm-2 s-1. A avaliao do impacto das variveis estudadas foi
realizada pelo tratamento estatstico dos dados com a utilizao do programa
Statistica 8.0.
3. RESULTADOS E DISCUSSO
Na Tabela 3 e na Figura 2 so apresentados os resultados obtidos para os 27
experimentos realizados. Conforme os valores de coeficientes de determinao (R2)
obtidos, verificou-se que h linearidade entre os resultados de velocidade de
dissoluo do metronidazol, no sendo observadas alteraes nesse perfil ao longo
dos experimentos.
68
Tabela 3 - Valores de velocidade de dissoluo (VD), coeficiente de determinao (R2), velocidade de dissoluo intrnseca
(VDI) obtidos e as condies utilizadas em cada experimento.
Odem de
execuo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
Experimento
27
21
22
10
23
3
25
7
18
17
16
12
14
13
5
11
9
24
1
8
15
2
20
4
6
19
26
VD
(mg/s)
0,0127
0,0095
0,0437
0,0372
0,0127
0,0096
0,0525
0,0500
0,0136
0,0146
0,0536
0,0097
0,0128
0,0448
0,0126
0,0105
0,0134
0,0119
0,0376
0,0147
0,0119
0,0104
0,0102
0,0437
0,0116
0,0397
0,0146
R
0,9998
0,9994
0,9993
0,9987
0,9996
0,9980
0,9995
0,9991
0,9996
0,9997
0,9996
0,9997
0,9992
0,9998
0,9994
0,9996
0,9996
0,9996
0,9994
0,9997
0,9997
0,9993
0,9970
0,9989
0,9996
0,9991
0,9993
VDI
2
(mg/cm /s)
0,0254
0,0190
0,0874
0,0744
0,0254
0,0192
0,1050
0,1000
0,0272
0,0292
0,1072
0,0194
0,0256
0,0896
0,0252
0,0210
0,0268
0,0238
0,0752
0,0294
0,0238
0,0208
0,0204
0,0874
0,0232
0,0794
0,0292
Amostra
Bruta
Micro02
Bruta
Micro02
Micro02
Micro01
Micro02
Micro01
Micro01
Micro02
Bruta
Bruta
Bruta
Micro01
Micro01
Micro01
Micro02
Micro01
Bruta
Bruta
Micro02
Micro02
Bruta
Micro02
Bruta
Micro01
Micro01
Presso de
compactao (psi)
3000
3000
3000
2000
3000
1000
3000
1000
2000
2000
2000
2000
2000
2000
1000
2000
1000
3000
1000
1000
2000
1000
3000
1000
1000
3000
3000
Rotao
(rpm)
100
50
75
50
75
50
100
100
100
100
100
50
75
75
75
50
100
75
50
100
75
50
50
75
75
50
100
Meio de
dissoluo
Tp. Fosfato pH 7.2
Tp. Fosfato pH 7.2
HCl 0,1M
HCl 0,1M
gua
Tp. Fosfato pH 7.2
HCl 0,1M
HCl 0,1M
Tp. Fosfato pH 7.2
gua
HCl 0,1M
Tp. Fosfato pH 7.2
gua
HCl 0,1M
gua
gua
Tp. Fosfato pH 7.2
Tp. Fosfato pH 7.2
HCl 0,1M
gua
Tp. Fosfato pH 7.2
gua
gua
HCl 0,1M
Tp. Fosfato pH 7.2
HCl 0,1M
gua
69
140,00
120,00
100,00
80,00
60,00
40,00
20,00
0,00
0
500
1000
1500
2000
2500
Tempo (s)
E1
E2
E3
E4
E5
E6
E7
E8
E9
E10
E11
E12
E13
E15
E16
E17
E18
E19
E20
E21
E22
E23
E24
E25
E26
E27
E14
Figura 2 - Regresso linear dos pontos de quantidade dissolvida (mg) pelos tempos de coleta (s) para obteno da velocidade de dissoluo
(VD).
70
A anlise de varincia das interaes principais (Tabela 4) e o grfico de

Pareto (Figura 3) indicaram que, dentre os fatores estudados, a velocidade de
rotao e o meio de dissoluo, demonstraram impacto significativo na VDI do
metronidazol. Tal observao tambm foi evidenciada em trabalho realizado por Yu
e colaboradores (2004), na avaliao da dissoluo intrnseca de diferentes
frmacos.
Tabela 4 - Anlise de varincia (ANOVA) dos resultados obtidos de VDI os resultados em
vermelho so considerados significativos (p< 0,05).
Teste de significncia para VDI (mg.cm-2.s-1)

Efeito
Intercepto
Velocidade de rotao
(rpm)
Presso
de
compactao (psi)
Meio de dissoluo
Micronizaes
Erro
Soma dos
quadrados
0,056911
Graus de
liberdade
1
0,000948
0,000474
19,193
0,000006
0,025682
0,000000
0,000445
2
2
2
18
0,000003
0,012841
0,000000
0,000025
0,128 0,880700
519,889 0,000000
0,009 0,991226
Porcentagem de variao explicada (R
2
ajustado)
Mdia dos
F
p
quadrados
0,056911 2304,175 0,000000
0,000034
= 97,63.
Figura 3 Grfico de Pareto para os efeitos das variveis sobre a VDI do metronidazol
(ANOVA) os resultados direita da linha vermelha so considerados significativos.
71
De acordo com a Figura 4, a anlise dos resduos permitiu verificar que os

erros apresentam-se de modo aleatrio e independente, assumindo dessa forma
uma distribuio normal, o que indica a viabilidade do modelo de anlise utilizado.
Figura 4 Anlise de resduos para a varivel dependente VDI.
Na Tabela 5 apresentada a avaliao da significncia entre as interaes

dos nveis estudados e a estimativa dos coeficientes de regresso pelas variveis
escalonadas. A partir destes resultados possvel obter a equao geral do modelo
que explica o impacto das variveis estudadas na velocidade de dissoluo
intrnseca do metronidazol. De acordo com a Equao 1 e o grfico de Pareto
(Figura 3) verifica-se que a contribuio da varivel independente velocidade de
rotao est relacionada apenas interao linear , enquanto que a contribuio da
varivel meio de dissoluo relaciona-se s interaes linear e quadrtica,
apresentando dessa forma, maior influncia na velocidade de dissoluo intrnseca
do frmaco.
72
Tabela 5 Estimativas por ponto, por intervalo e teste de significncia para os coeficientes.
Fatores
Interaes
Limite de
Confiana
- 95%
Limite de
Confiana
+ 95%
Coeficientes
Erros
Padro
0,000000
0,045911
0,000956
0,043902
0,047921
0,000008
0,007256
0,001171
0,004795
0,009717
0,884096
-0,000150
0,001014
-0,002281
0,001981
Presso
de
0,715753
compactao L
0,000433
0,001171
-0,002028
0,002894
Presso
de
compactao Q 0,734086
0,000350
0,001014
-0,001781
0,002481
Meio
de
0,000000
dissoluo L
-0,033211
0,001171
-0,035672
-0,030750
Meio
de
0,000000
dissoluo Q
-0,015583
0,001014
-0,017715
-0,013452
0,947794
-0,000078
0,001171
-0,002539
0,002383
0,000117
Micronizaes Q 0,909716
Em vermelho - resultados com p < 0,05.
0,001014
-0,002015
0,002248
Intercepto
Velocidade
rotao L
de
Velocidade
rotao Q
de
Micronizaes L
VDI
metronidazol
= 0,045911 + 0,007256 velocidade de rotao 0,033211 meio de
dissoluo 0,015583 (meio de dissoluo) 2
(Equao 1)
Nos grficos de superfcie de resposta (Figura 5), feita a comparao da

influncia de dois fatores sobre a varivel dependente (VDI). Pode-se verificar que
os grficos que contemplam a varivel meio de dissoluo apresentam curvatura.
As interpretaes desses grficos de superfcie, assim como dos grficos de
contorno obtidos (Figura 6) so apresentadas na Tabela 6.
73
Figura 5 - Superfcies de resposta para a VDI (mg cm-2 s-1) em funo dos fatores estudados.
74
Tabela 6 Interpretao dos grficos de superfcie de resposta e contorno obtidos para a

VDI em funo das variveis independentes.
Variveis
Interpretao
Presso de compactao
X
Velocidade de rotao
A VDI influenciada apenas pela velocidade

de rotao, uma vez que diferentes presses
de
compactao
levam
a
resultados
semelhantes.
Meio de dissoluo
X
Velocidade de rotao
O aumento da rotao para nveis mais altos

induz a valores mais elevados de VDI em
qualquer
um
dos
meios
utilizados,
principalmente no nvel mais baixo de meio de
dissoluo, o HCl 0,1M.
Grau de micronizao
X
Velocidade de rotao
A varivel grau de micronizao no

demonstra impacto na VDI do frmaco, que
alterada apenas com a mudana da rotao
empregada.
Meio de dissoluo
X
Presso de compactao
Quanto maior o nvel do meio de dissoluo

produzido um efeito redutivo na VDI do
frmaco, que no se altera pela variao da
presso de compactao.
Grau de micronizao
X
Presso de compactao
Embora a varivel presso de compactao

no tenha influncia significativa na resposta,
observa-se alterao na VDI de acordo com o
nvel utilizado.
Grau de micronizao
X
Meio de dissoluo
Como nos grficos anteriores o grau de

micronizao no tem efeito sobre a VDI do
frmaco, que sofre grande influncia do meio
de dissoluo.
75
Figura 6 Curvas de contorno para a VDI (mg cm-2 s-1) em funo dos fatores estudados.
Na Figura 7 so apresentados os grficos das mdias de VDI em funo dos

nveis das variveis estudadas. Como apresentado nos grficos de superfcie de
resposta e contorno, o meio de dissoluo aquela que apresenta o maior impacto
na dissoluo intrnseca do metronidazol, sendo encontrados valores bem distintos
de VDI entre o nvel mais baixo utilizado no delineamento (HCl 0,1M) e os demais
76
nveis empregados (gua e tampo fosfato pH 7,2), fato explicado pela maior
solubilidade do metronidazol em pH abaixo de 2 (WU; FASSIHI, 2005).
Segundo os resultados j apresentados, a outra varivel que tem impacto
significativo na dissoluo intrnseca do frmaco, porm em menor intensidade, a
velocidade de rotao, uma vez que, embora as mdias de VDI em cada nvel (50,
75 e 100 rpm) sejam diferentes, os resultados so muito prximos e valores iguais
de VDI podem ser obtidos com rotaes diferentes.
Em relao presso de compactao e ao grau de micronizao, verifica-se
resultados muito prximos entre os nveis estudados, bem como uma falta de
tendncia, que demonstra a falta de influncia significativa na dissoluo intrnseca
do metronidazol.
Figura 7 - Grfico das mdias de VDI obtidas entre os nveis dos fatores avaliados.
77
Apesar de no apresentar impacto, as presses utilizadas possibilitaram a

manuteno da rea superficial constante do compactado durante todo o ensaio.
Dessa forma, qualquer uma delas (1000, 2000 e 3000 psi) pode ser empregada na
realizao do ensaio.
4. CONCLUSO
As variveis presso de compactao e grau de micronizao, que representa
o tamanho de partcula do frmaco, no tm influncia na dissoluo intrnseca de
metronidazol, sendo a VDI dependente apenas do meio de dissoluo e da rotao
empregados.
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UNIVERSIDADE DE SO PAULO

FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS

Avaliao do impacto de diferentes variveis no ensaio de

Michele Georges Issa

Dissertao para obteno do grau de

Michele Georges Issa

Avaliao do impacto de diferentes variveis no ensaio de dissoluo

Prof. Dr. Humberto Gomes Ferraz

Ao meu pai Georges,

minha irm Marie e

Ao meu esposo Marcelo,

Aos colegas de ps-graduao Gabriele Ruas, Andr Dezzani, Thaisa Pereira,

Metronidazol. Micronization. Solubility.

Captulo 1: Dissoluo intrnseca como ferramenta para a avaliao da

Captulo 2: Influncia da granulometria nas propriedades fsico-qumicas do

2.1.1. Frmaco ......................................................................................................... 42

Captulo 3: Avaliao do impacto de diferentes variveis na dissoluo

2.2.2. Dissoluo intrnseca ................................................................................... 67

Dissoluo intrnseca como ferramenta para a avaliao da

A obteno da solubilidade baseada na

determinao do equilbrio sob condies de pH fisiolgico, enquanto que para a

Sendo assim, o objetivo da presente reviso foi abordar a utilizao do ensaio

2. SISTEMA DE CLASSIFICAO BIOFARMACUTICA (SCB)

Conforme observado na Figura 1, a dissoluo pr-requisito para a

Figura 1 Eventos que ocorrem desde a administrao do medicamento at a ao do

Baseado nesse conceito, no SCB so definidos trs nmeros adimensionais

trato gastrintestinal (AMIDON et al., 1995; LIPKA; AMIDON, 1999; LBENBERG;

Nmero de Dissoluo (Dn): Tempo necessrio para dissoluo.

Nmero de Absoro (An): Tempo necessrio para absoro da dose

(alta/baixa) dos parmetros de solubilidade e permeabilidade (AMIDON et al., 1995;

Figura 2 - Sistema de Classificao Biofarmacutica (AMIDON et al., 1995).

De acordo com a Figura 2, os frmacos podem ser divididos em quatro

Classe I: Os frmacos dessa classe possuem boa permeabilidade, a

importante que as formas farmacuticas que

contenham esse tipo de frmaco liberem-no de modo rpido, a fim de

vez que tanto a solubilidade como a permeabilidade so reduzidas

2.1. MTODOS UTILIZADOS PARA DETERMINAO DA SOLUBILIDADE E

permeabilidade do trato gastrintestinal (UNITED STATES, 2000).

farmacocintico, encontram-se o estudo de balano de massas com a utilizao de

Embora o estudo farmacocintico em humanos seja o padro ouro para a

permeabilidade intestinal, assim como a utilizao de mtodos computacionais ou in

PHARMACOPEIA, 2009; VIEGAS, et al., 2001).

graus de hidratao, hbitos e formas cristalinas para um mesmo frmaco (LEHTO

Biofarmacutica. Como esse ensaio no est relacionado a um equilbrio e sim

2010) e a converso da rifampicina para o polimorfo mais estvel (AGRAWAL, et al.,

STATES PHARMACOPEIA, 2009; VIEGAS et al., 2001).

necessrio o uso de uma prensa para a formao do compactado; a superfcie de

3.2. CLCULO DA VDI E ANLISE DOS DADOS OBTIDOS NO ENSAIO

reportada em unidade de massa cm-2 s-1 (UNITED STATES PHARMACOPEIA,

Quantidade dissolvida (mg)

Quantidade dissolvida (mg)

STATES PHARMACOPEIA, 2009).

Figura 5: Curvaturas que podem aparecer no grfico de velocidade de dissoluo (a)

3.3. DETERMINAO DA CLASSE

Tabela 1 Valores de VDI (mg min cm ) e classificao de solubilidade segundo o SCB

Recentemente, Zakeri-Milani e colaboradores (2009), em trabalho realizado

Embora os valores limites indicados nos dois trabalhos sejam diferentes,

PAPADOPOULOU, V.; VALSAMI, G.; DOKOUMETZIDIS, A.; MACHERAS, P.

Influncia da granulometria nas propriedades fsicoqumicas do

no alterada pela reduo do

tamanho de partcula e pelo aumento da rea superficial, entretanto influenciada

SURYJANARAYANAN, 2006; KIM et al., 2007; LIU et al., 2008).

intestinais de amebase e tricomonase, alm de infeces bacterianas.

Em relao forma cristalina, no relatada a ocorrncia de polimorfismo,