CROMATOGRAFIA

INTRODUO:
A cromatografia envolve uma srie de
processos de separao de misturas, acontece
pela passagem de uma mistura atravs de duas
fases: uma estacionria (fixa) e outra mvel.
A interao dos componentes da mistura com
estas duas fases influenciado por diferentes
foras intermoleculares, incluindo inica,
bipolar, apolar, e especficos efeitos de
afinidade e solubilidade.

A cromatografia pode ser utilizada

para a identificao de compostos, por
comparao com padres previamente
existentes, para a purificao de
compostos, separando-se as substncias
indesejveis e para a separao
dos componentes de uma mistura.

As diferentes formas de cromatografia

podem ser classificadas considerandose diversos critrios:

1. Classificao pela forma fsica do

sistema cromatogrfico
2. Classificao pela fase mvel
empregada
3. Classificao pela fase

1. Classificao pela forma fsica do

sistema cromatogrfico

Em relao forma fsica do sistema,

a cromatografia pode ser subdividida
em cromatografia em coluna e
cromatografia planar.
EM COLUNA: cromatografia lquida,
gasosa e supercrtica.
PLANAR: Centrfuga, em papel e camada
delgada.

2. Classificao pela fase mvel

empregada
So de 3 tipos: a cromatografia gasosa,
a cromatografia lquida e a cromatografia
supercrtica (CSC). A cromatografia lquida
apresenta uma importante subdiviso: a
cromatografia lquida clssica (CLC) e a
cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE). No
caso de fases mveis gasosas, separaes podem
ser obtidas por cromatografia gasosa (CG) e por
cromatografia gasosa de alta
resoluo (CGAR).

3. Classificao pela fase

estacionria utilizada
Quanto fase estacionria, distingue- se entre
fases estacionrias slidas, lquidas e
quimicamente ligadas. No caso da fase
estacionria ser constituda por um lquido, este
pode estar simplesmente adsorvido sobre um
suporte slido ou imobilizado sobre ele.
Suportes modificados so considerados
separadamente, como fases quimicamente
ligadas, por normalmente diferirem dos outros
dois em seus mecanismos de separao.

4. Classificao pelo modo de

separao

Separaes cromatogrficas se devem

adsoro, partio, troca inica, excluso ou
misturas desses mecanismos.

CROMATOGRAFIA

PLANAR

CENTRFUGA

COLUNA

CCD

CSC

GASOSA

CP

CG

LQUIDA

CLSSICA

CLAE

CGAR

Cromatografia planar
A cromatografia em papel (CP) uma tcnica
de partio lquidolquido. Baseia-se na
diferena de solubilidade das substncias em
questo entre duas fases imiscveis, sendo
geralmente a gua um dos lquidos. Este mtodo
muito til para a separao de compostos
polares, sendo largamente usado em bioqumica.

A cromatografia em camada delgada (CCD) uma

tcnica de adsoro lquidoslido. Nesse caso, a
separao se d pela diferena de afinidade dos
componentes de uma mistura pela fase estacionria.

Cromatografia em coluna
A cromatografia lquida clssica muito
utilizada para isolamento de produtos naturais
e purificao de produtos de reaes qumicas.
As fases estacionrias mais utilizadas so slica
e alumina, entretanto estes adsorventes podem
servir simplesmente como suporte para uma
fase estacionria lquida. Fases estacionrias
slidas levam separao por adsoro e fases
estacionrias lquidas por partio.

A Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE)

uma tcnica analtica usada para separar e
quantificar componentes numa mistura lquida. A
utilizao de suportes com partculas diminutas so os
responsveis pela alta eficincia desse mtodo de
cromatografia.
A fase mvel (lquida) movimenta-se continuamente
atravs da coluna contendo a FASE ESTACIONRIA
(slido). O soluto interage com as fases estacionria
e mvel por adsoro, partio, excluso molecular,
troca inica.
As separaes em CLAE podem se dar por adsoro
(separao slido-lquido), partio (separao lquidolquido) ou ambos.

INSTRUMENTAO BSICA DA CLAE

O detector mais utilizado para separaes por

CLAE o detector de ultravioleta (Absoro da
luz na faixa UV visvel), sendo tambm
empregados detectores de fluorescncia, de
indce de refrao, e eletroqumicos, entre outros.

Cromatografia Gasosa

Tcnica de separao e anlise de misturas por

interao dos seus componentes entre uma fase
estacionria e uma fase mvel.

Mecanismo de separao
A amostra injetada (injetor de
amostra) e arrastada pela fase
mvel (gs arrastador) atravs
da coluna que contm a fase
estacionria (coluna CG
aquecida), onde ocorre a
separao da mistura. As
substncias separadas saem da
coluna dissolvidas na fase mvel
e passam por um detector que
gera um sinal eltrico
proporcional quantidade de
material separado.

Mas o que um detector?

um dispositivo que indica os componentes separados
pela coluna. Examinam continuamente o material,
gerando um sinal na passagem de substncias que foram
separadas.
3 tipos:
Universais geram um sinal para qualquer composto.
Seletivos geram um sinal apenas para compostos
com determinadas caractersticas.
Especficos geram um sinal para compostos que
tenham um determinado elemento na sua estrutura.

Caractersticas da fase mvel ou gs de

arraste:

Inerte No interage nem com a amostra, nem com a

fase estacionria, apenas transporta a amostra
atravs da coluna.
Puro Isento de impurezas que possam contaminar a
amostra, ou gerar rudo no sinal.
Compatvel com o detector.
Exemplo: H2, N2, He

Caractersticas da fase estacionria:

Caractersticas prximas das dos solutos a serem
separados.
Seletividade, deve ser um bom solvente diferencial
dos componentes da amostra.
Quimicamente inerte relativamente amostra.
Volatilidade baixa.
Estabilidade trmica.
Pouco viscoso.
Puro.

Fases estacionrias utilizadas:

Parafinas apolares
Poliglicis polares
Polisteres - polares
Silicones cobrem ampla faixa de polaridade.

Fase estacionria Mecanismo de

separao
A amostra atinge a fase
estacionria sendo parte
absorvida e estabelece-se o
equilbrio entre esta parte e
uma outra que permanece na
fase gasosa, que por sua vez
continua no gs de arraste at
estabelecer o equilbrio. O gs
de arraste atinge a fase
estacionria, o que leva a
amostra a entrar novamente
neste para restabelecer o
equilbrio.

Aplicaes prticas da Cromatografia

Gasosa:
Qumica:
- Determinao de antioxidantes, nutrientes ou contaminantes em
alimentos.
Indstria:
- Monotorizao de processos industriais.
Sade:
- Anlises dos constituintes do sangue.
- Anlise forense.
Ambiente:
- Determinao de resduos de pesticidas em produtos
alimentares, guas ou esgotos.
- Determinao de gases e solventes orgnicos na atmosfera, solos
ou rios.

Cromatografia gasosa de alta

resoluo (CGAR)
O principal mecanismo de separao da
cromatografia gasosa est baseado na partio
dos componentes de uma amostra entre a fase
mvel gasosa e a fase estacionria lquida. A
utilizao de fases estacionrias slidas, as
quais levariam separao por adsoro,
apresenta poucas aplicaes.

A cromatografia gasosa uma das

tcnicas analticas mais utilizadas. Alm
de possuir um alto poder de resoluo,
muito atrativa devido possibilidade de
deteco em escala de nano a picogramas.

A diferena entre CG e CGAR est na

coluna (tubos longos de metais como ao
ou cobre, vidro ou teflon). Colunas de
CGAR so maiores em comprimento,
menores em dimetro, possuem a fase
lquida como um filme aplicado diretamente
s paredes do tubo da coluna e so mais
eficientes.

Referncias Bibliogrficas
COLLINS, C.H.; BRAGA, G.L. e BONATO, P.S. Introduo
a mtodos cromatogrficos. 5 ed. Campinas: Editora da
Unicamp, 1993.
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