DIVULGAO

A QUMICA DOS LIQUENS

Neli Kika Honda
Departamento de Qumica - Universidade Federal de Mato Grosso do Sul - CP 549 - 79070-900 - Campo Grande - MS
Wagner Vilegas
Departamento de Qumica Orgnica - Instituto de Qumica - UNESP - CP 355 - 14800-970 - Araraquara - SP
Recebido em 12/2/98; aceito em 21/8/98

THE CHEMISTRY OF LICHENS. Lichens are symbiotic associations between fungi and algae
and/or cyanobacteria. They produce common intracellular products including proteins, amino acids,
polyols, carotenoids, polysaccharides and vitamins. The secondary metabolites found in lichens are
phenolics which accumulate either on the cortex or on the cell walls of medullary hyphae and they
are mainly acetyl-polimalonyl pathway derivatives. Polysaccharides, proteins and secondary metabolites produced by lichens have attracted the attention of investigators due their biological
activities. This revision coments about the biosynthetic origin and structures of the principal classes
of compounds produced by these organisms.
Keyword: lichens; liquenic compounds; chemotaxonomy.

INTRODUO
Define-se liquens como organismos simbiticos compostos
por um fungo (micobionte) e uma ou mais algas (fotobionte)1.
Calcula-se que existam 13.500 espcies (aproximadamente
600 gneros) de fungos liquenizados, o que corresponde a 20%
dos fungos conhecidos2,3. A grande maioria (98%) dos fungos
liqunicos so Ascomicetos e 46% desses so liquenizados, de
modo que a liquenizao uma grande regra e no uma exceo
nesse grupo de fungos. Os Deuteromicetos ou fungos imperfeitos so representados por apenas uma dezena de gneros, ou
pouco mais. Os Basidiomicetos formam diversas associaes
semelhantes a liquens em regies tropicais e so encontrados
com algas azuis. Algumas espcies do gnero Dictyonema ocorrem como Basidiomiceto liquenizado2.
As algas mais comuns encontradas na associao so as
clorofceas e destas a mais freqente uma espcie de
Trebouxia, em aproximadamente 70% dos gneros de liquens.
Alm dessa, ocorrem tambm espcies de Coccomyxa e
Trentepohlia. Entre as algas verde-azuladas (cianofceas), as
mais comuns so a Nostoc e Scytonema 4.
Nos liquens, as algas constituem, com raras excees, uma
parte muito pequena do talo variando entre 5-10% da massa ou
volume e so completamente envolvidas pelos tecidos do fungo nos talos. Portanto, toda a organizao do talo liqunico se
deve ao fungo. As algas podem, ou no, estar restritas a uma
camada especial do talo e responsabilizam-se totalmente pela
fotossntese3 .
O micobionte, geralmente dominante, um organismo
heterotrfico que obtm sua fonte de carbono do fotobionte. A
liquenizao pode ser considerada uma estratgia pela qual o
fungo pode satisfazer sua necessidade de carboidrato para respirao e crescimento2. Sabe-se hoje, que poliis em liquens
com algas verdes e glucose em liquens com cianofceas so
passados do fotobionte para o micobionte 3. No estado liquenizado a parede celular do fotobionte se torna mais permevel
perda de carboidratos, resultando em benefcio para o
micobionte5. Alm disso, em cianoliquens o micobionte ganha
uma fonte de nitrognio 6.
Com relao alga, as vantagens no esto associadas a ganhos metablicos em si, mas a benefcios, de alguma maneira,
relativos hidratao, evitando dessecao. Alm disso, as hifas
opacas protegem a alga de alta intensidade luminosa, e a

110

liquenizao um mecanismo que permite ao fotobionte se desenvolver em ambientes de alta luminosidade7.

Como resultado da simbiose, tanto fotobionte e micobionte
tm se espalhado em muitos habitats, das regies tropicais s
polares, onde separadamente, na condio de organismos de
vida livre, no existiriam, ou seriam raros. Por exemplo, as
algas de vida livre e cianofceas, em sua maioria, ocorrem em
ambientes aquticos ou bastante midos, mas como parte de
liquens ocorrem abundantemente em habitats que so freqentemente secos8,9 .
Os liquens so encontrados desde o nvel do mar at as montanhas mais altas. Porm, so relativamente raros em altitudes
acima de 5.000 m e em matas excessivamente escuras. Podem,
tambm, ser encontrados em desertos onde a temperatura bastante varivel, e em regies polares, com temperaturas extremamente baixas. Seu limite de tolerncia s oscilaes climticas
superior a qualquer outro vegetal9. Desenvolvem-se sobre os
mais variados substratos, sendo que muitos no apresentam
especificidade: existem espcies que somente se desenvolvem
sobre crtex de rvores, outras sobre folhas e outras sobre rochas alcalinas ou cidas, necessitando ou no das caractersticas
fsicas como rugosidade, porosidade, dureza, exposio luz; h
outras, ainda, mais exigentes quanto ao pH do substrato, presena de partculas no ar, umidade, ventos e temperatura. Portanto,
a presena de liquens nos mais variados habitats e micro-habitats
depende da disponibilidade de fatores fsicos e climticos que
proporcionem as condies necessrias para seu desenvolvimento. Dessa forma, cada regio pode apresentar uma comunidade
liqunica com componentes especficos prprios em resposta s
condies ambientais10.
QUMICA DOS LIQUENS
As substncias qumicas produzidas pelos liquens so agrupadas, de acordo com a localizao no talo, em produtos
intracelulares e extracelulares. Sendo o talo liqunico uma estrutura composta, alguns produtos so sintetizados pelo fungo,
outros pela alga11. Os produtos intracelulares (carboidratos,
carotenides e vitaminas, aminocidos e protenas) esto ligados na parede celular e ao protoplasto. So freqentemente
solveis em gua e podem ser extrados com gua quente. Esses
compostos ocorrem no somente em liquens, mas em fungos e
algas de vida livre e em plantas superiores11.

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Metablitos primrios
Carboidratos
Poliis tais como glicerol, eritritol, ribitol, arabinitol, Dvolemitol, D-sifulitol e acares como glucose, sacarose,
trealose e outros, so metablitos comuns em liquens. So produtos resultantes da atividade fotossinttica do ficobionte e
ocorrem tambm em plantas superiores. Entretanto, compostos
como 3-O--D-galactofuranosil-D-manitol (peltigerosdeo) e 2O- -D-galactofuranosil-D-ribitol (umbilicina) so exemplos de
compostos restritos a liquens 12,13. Glucanas (liquenanas e
isoliquenanas) e heteropolissacardeos contendo manose esto
presentes nos liquens em quantidades relativamente altas. Variaes em estruturas qumicas de e glucanas (isoliquenanas
e liquenanas, respectivamente) so devidas s diferentes propores de ligaes 13 e 14 contidas em cada uma. Um
outro grupo, as pustulanas, contm unidades de -D-glucopiranosil com ligaes 16, e, algumas vezes, encontram-se parcialmente acetiladas14 .
Heteropolissacardeos de liquens, contm galactose, manose
e em alguns casos, cido galacturnico. Na maior parte, so
constitudos de uma cadeia principal 16 -D-Man p, substituda com vrias cadeias laterais, incluindo unidades de - e
-D-Galp, -D-Galf, e -D-Glcp e e -D-Man p. Algumas
das estruturas de heteropolissacardeos de liquens, so semelhantes quelas isoladas de leveduras14,15 .

cido snico [1]

Liquexantona [3]

cido norsttico [5]

R=H Atranorina [2]

R=Cl 5-cloroatranorina [2a]

Hemaventosina [4]

cido vulpnico [6]

Aminocidos, derivados e protenas

Aminocidos livres encontrados nos liquens so similares
aos observados em outros vegetais. Dos aminocidos que ocorrem em protenas, alanina e cido glutmico so os predominantes em liquens. Alm desses, podem ocorrer diferentes
aminocidos ou seus derivados, como sarcosina, taurina,
citrulina, cido -aminobutrico16-18 .
A natureza das protenas de liquens no est ainda bem
estabelecida e poucos so os relatos sobre o isolamento dessas
substncias. Vicente, em 198819, publicou uma reviso abordando a enzimologia de liquens, envolvendo o metabolismo de
carboidratos, lipdeos, fenis e de nitrognio nestes organismos.
Outros relatam o isolamento de urease20, celulase 21,22, manitol1-fosfato-desidrogenase23, bromoperoxidase24 . Inibidores de
serinoproteinases (tripsina e calicrena tissular) e cistenoproteinases foram isolados de Collema leptosporum 25,26 .
Glicolipdeos
Recentemente, Machado et al.27 relataram o isolamento e
identificao de trs glicolipdeos extrados de Ramalina celastri.
O principal componente foi O--D-galactopiranosil-(16)-O-D-galactopiranosil-(11)-D-glicerol esterificado com cidos
graxos de cadeia longa, sendo alguns desses insaturados.
Metablitos secundrios
Os produtos extracelulares, freqentemente chamados
metablitos secundrios, so encontrados na medula ou no
crtex, raramente em ambas as camadas. Substncias que apresentam cor, como a maior parte das antraquinonas, derivados
do cido pulvnico e cido snico [1], outras incolores como
atranorina [2] e liquexantona [3] so exemplos tpicos de substncias presentes no crtex. Entretanto, pode ocorrer que as
substncias qumicas estejam localizadas tambm em outras
partes do lquen. Nos apotcios de Haematoma ventosum est
presente a hemaventosina [4], que um pigmento vermelho
escuro28, 29, em Letraria columbina os apotcios contm cido
norsttico [5] e no talo esto presentes atranorina [2] e cido
vulpnico30 [6]. O cido taminlico [7] ocorre nos apotcios e
o cido perlatlico [8] no talo de Icmadophila ericetorum31 .

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cido taminlico [7]

cido perlatlico [8]

Em geral, em um espcime pode ocorrer de um a trs ou

mais compostos resultantes do metabolismo secundrio. Entretanto, h casos, como Pseudocyphellaria impressa da Nova
Zelndia que apresenta 41 diferentes depsdeos, depsidonas,
derivados do cido pulvnico e 17 triterpenos 32.
Atualmente, so conhecidos aproximadamente 630 compostos provenientes do metabolismo secundrio de liquens. So
cidos alifticos, meta- e para-depsdeos, depsidonas, steres
benzlicos, dibenzofuranos, xantonas, antraquinonas, cidos snicos, terpenos e derivados do cido pulvnico. Ainda que esses
compostos sejam tambm produzidos por fungos de vida livre e
por plantas superiores (50-60), a maior parte considerada exclusiva de liquens33 . Muitas espcies em que o fotobionte uma
cianobactria no produzem derivados fenlicos 34.
A concentrao de metablitos secundrios pode variar de
0,1 a 10% em relao ao peso seco do talo liqunico, embora
em alguns casos a concentrao possa ser mais alta 11,34,35. O
estudo sistemtico das substncias qumicas resultantes do
metabolismo secundrio de liquens teve incio com os trabalhos de Bebert em 1831, Alms em 1832 e Knopp em 1844 que
isolaram os cidos vulpnico [6], picroliqunico [9] e snico
[1], respectivamente, de algumas espcies liqunicas36 .
Gmelin, em 1858, publicou a primeira reviso sobre substncias isoladas de liquens36 . Entretanto, o marco inicial da
Liquenologia foi estabelecido com os trabalhos de Zopf e de
Hesse. Zopf (Friedlich Wilhelm Zopf) era botnico e publicou, em 1907, uma das mais importantes obras na rea de
Liquenologia 37. O livro Die Flechtenstoffe in chemischer,
botanischer, pharmakologischer und technischer Beziehung
uma compilao de trabalhos que foram por ele publicados

111

e descreve frmulas empricas, propriedades e ocorrncia de

150 compostos. O qumico Hesse, no perodo de 1861 a 1905,
publicou inmeros trabalhos sobre substncias isoladas de
liquens. O mais importante deles, Flechtenstoffe, foi editado em 191238 .
O cido lecanrico [10] foi o primeiro depsdeo de lquen
sintetizado em laboratrio por Emil Fischer em 191339 .

porm no so idnticos. cidos agarcico [11] e 2-decilctrico

[12] isolados de fungos so estruturalmente relacionados ao
cido capertico [13], um metablito comum em liquens45, 46 .

n=8, R=H - cido 2-decilctrico [12]; n=13, R=CH3 - cido capertico

[13]; n-14, R=H - cido agarcico [11].

cido picroliqunico [9]

cido lecanrico [10]

Durante o perodo de 1930, Asahina, qumico japons, determinou frmulas moleculares de vrias substncias liqunicas
mais comuns e estabeleceu a base para pesquisas posteriores
desses compostos 40a - 40r.
Em 1954, Asahina e Shibata, no Japo, publicaram um outro clssico da Liquenologia, o livro Chemistry of Lichen
Substances. Essa obra uma compilao de seus trabalhos e
contm as estruturas elucidadas de numerosos compostos, suas
snteses, os mtodos de isolamento e purificao e algumas
propriedades fsicas41 . Nesse trabalho incluram tambm a identificao de substncias liqunicas por microcristalizao e
descreveram a ao antibitica de vrios compostos.
Asahina e Shibata dividiram as substncias liqunicas em
alifticas e aromticas. Na srie aliftica incluram os cidos
graxos, poliis e triterpenos e na srie aromtica os derivados
do cido tetrnico (cido pulvnico), depsdeos, depsidonas,
quinonas, dibenzofuranos e derivados da dicetopiperazina. O
sistema de classificao das substncias liqunicas proposto por
Asahina e Shibata foi baseado em conhecimentos estruturais e
vias biossintticas que lhes do origem41. O sistema de classificao mais recente aquele proposto por Culberson & Elix42,
em que as substncias so ordenadas de acordo com sua provvel origem biossinttica.
Biossntese
A maior parte dos metablitos secundrios de liquens so compostos oriundos da via do acetil-polimalonil. Essa via conduz
formao de compostos alifticos como os cidos graxos de cadeia longa e as substncias aromticas do tipo cidos fenlicos.
A acetilSCoA pode sofrer ativao de tomos de hidrognio
do grupo metila por ao do stio de carter bsico presente
na enzima que toma parte no processo sinttico. A ativao
desenvolve carter bsico na molcula pela remoo de um
prton e o carbono pode ento, por um ataque nucleoflico
ao carbono carbonlico eletroflico de outra molcula de
acetilSCoA, formar o derivado acetoacetilSCoA por condensao tipo Claisen43 .
A formao do ceto-ster o ponto de partida para a
sntese de terpenos pela via do cido mevalnico. O cetoster obtido pode tambm, por reduo e repetidas condensaes, conduzir formao de cidos graxos, ou, por condensaes sem reduo, a policetdeos, os quais podem ciclizar,
dando origem a compostos aromticos 43, 44 .

Alm do cido capertico [13], podem ocorrer em liquens

outros cidos, como roclico [14], rangifrmico [15] e norrangifrmico [16]. cidos acaranico [17] e acarenico [18]
so -lactonas e os cidos liquesternico [19], nefrosternico
[20], nefrosternico [21] e protoliquesternico [22], so exemplos de cidos -lactnicos de cadeia longa.
cidos hidroxilados como 9, 10, 12, 13-tetraidroxieneicosanico e 9, 10, 12, 13-tetraidroxieicosanico so freqentes em
liquens. At 1973, cidos graxos de cadeia longa, como oleico
e linoleico no tinham sido citados como componentes de
liquens35. Mais recentemente, Dembitsky et al. analisaram cinco espcies de liquens da subclasse Gymnocarpeae47 , trs espcies do gnero Parmelia 48 , trs espcies da ordem
Lecanorales49 e identificaram, atravs da anlise por CG-EM,
cidos de cadeia longa, como palmtico, esterico, oleico,
linoleico e linolnico, alm de outros cidos de cadeia mais
longa que esses e de estruturas variadas. Xantoria parietina
apresenta cidos graxos que variam de 10 a 20 carbonos e,
entre esses, os cidos insaturados palmitoleico, oleico,
linoleico, linolnico e 11,14-eicosadienoico50. cidos palmtico,
esterico, lurico, linoleico, oleico e araqudico tambm foram
identificados em Collema leptosporum51 .

cido roclico [14]

cido acaranico [17]

R = CH3
R = H

cido rangifrmico [15]

cido norangifrmico [16]

cido acarenico [18]

cido liquesternico [19]

cido nefrosternico [20]

cido nefrosternico [21]

cido protoliquesternico [22]

Via do acetil-polimalonil
cidos graxos
Os cidos graxos que ocorrem em liquens apresentam certa semelhana com aqueles que ocorrem em fungos no liquenizados,

112

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A biossntese de cidos graxos de cadeia longa presentes

em liquens, procede de maneira semelhante quela j estabelecida em diversos organismos 19, 43, 44 52-54. Entretanto, so
poucas as informaes disponveis sobre a biossntese das
lactonas dos cidos alifticos de cadeia longa. A biossntese
do cido protoliquesternico [22] foi estudada por Blomer et
al. 54 que suplementaram talos de Cetraria islandica com
glucose e [1-14 C]acetato de sdio. Os autores sugeriram que a
biossntese do cido protoliquesternico deve envolver um
intermedirio de 3 C como o piruvato, ou de seus precursores
(como o oxalacetato) da via glicoltica, que se condensa com
o grupo -metileno de uma longa cadeia alcanoilSCoA, como
o palmitoilSCoA. A desidratao e ciclizao oxidativa do
produto resultante dessa condensao d origem ao cido protoliquesternico [22].

cido obtustico [26]

cido baeomicsico [27]

Compostos aromticos
cido fisdico [28]

cido variolrico [29]

Depsdeos e Depsidonas
Embora muitos dos compostos aromticos isolados de
liquens sejam exclusivos desse grupo vegetal, alguns podem
ser encontrados tambm em fungos no liquenizados ou em
plantas superiores.
Os compostos aromticos mais comumente presentes em
liquens so formados pela esterificao de duas ou ocasionalmente trs unidades fenlicas, como por exemplo, derivados
do cido orselnico43.
Duas unidades fenlicas derivadas do orcinol, isto , sem
substituintes na posio 3 podem formar compostos denominados depsdeos55 . Esses compostos so formados pela esterificao da carboxila da posio 1 da primeira unidade com a
hidroxila da posio 4 ou da posio 3 da segunda unidade. Os
compostos resultantes so para-depsdeos e meta-depsdeos da
srie do orcinol, como o cido lecanrico [10] e o cido
criptoclorofeico [23]. Tridepsdeos so resultantes da esterificao de trs unidades fenlicas, como no cido girofrico[24]55.
Alm dos depsdeos derivados do orcinol (cido orselnico),
ocorrem outros derivados do -orcinol (cido -metil-orselnico), como por exemplo atranorina [2], os cidos difractico
[25], obtustico [26] e baeomicsico [27].
Um outro grupo de compostos estruturalmente relacionados
aos depsdeos so as depsidonas. Alm de ligao ster presente nos depsdeos, as depsidonas apresentam tambm um heterocclo adicional resultante de uma ligao ter, geralmente
entre as posies 2 e 5 como no cido fisdico [28]. No cido
variolrico [29] a ligao ter est entre as posies 2 e 3,
sendo este o nico caso, at ento, conhecido.

Biossntese de derivados fenlicos

O cido orselnico a unidade fundamental da biossntese
de depsdeos e depsidonas. O processo biossinttico inicia-se,
como no caso dos cidos graxos, com a condensao de 1 mol
de acetilSCoA e 1 mol de malonilSCoA. A acetoacetilSCoA,
resultante da condensao da acetilSCoA com malonilSCoA,
pode condensar com duas outras molculas de malonilSCoA
em etapas sucessivas, formando um policetdeo de 8 carbonos.
Este ltimo pode ciclizar atravs de dois processos distintos:
um deles por condensao aldlica produzindo cido orselnico, e o outro por condensao tipo Claisen, produzindo floroacetofenona 52 (Fig. 1).

cido orselnico

Floroacetofenona

Figura 1. Reaes biossintticas de formao de cido orselnico e

floroacetofenona por condensao de acetilSCoA e malonilSCoA.

cido criptoclorofeico [23]

cido difractico [25]

cido girofrico[24]

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A reao biossinttica de formao de cido orselnico

catalisada pela enzima cido orselnico sintase 19. O mecanismo
de formao desse cido envolve reao de desidratao somente na etapa final quando ocorre a ciclizao da cadeia para
formar o cido orselnico, diferente do que acontece na biossntese do cido 6-metilsaliclico, caracterstico de outras espcies de fungos de vida livre. A reao de obteno do cido 6metilsaliclico catalisada pela enzima cido aromtico
sintase 19 . A enzima cido orselnico sintase tem sido caracterizada como um complexo enzimtico contendo duas atividades
transacetilases, uma protena transportadora de grupos acil, uma
enzima de condensao, uma de ciclizao e uma atividade
hidrolase. Embora os liquens produzam cido orselnico em
concordncia com essa via, o sistema multienzimtico no est
ainda totalmente elucidado19 .

113

O cido orselnico o precursor de depsdeos derivados do

orcinol. A formao desses compostos ocorre por esterificao
entre unidades derivadas desse cido. Vrias esterases podem
estar envolvidas nesse processo. Entretanto, essas enzimas no
foram ainda isoladas56 .
Os para-depsdeos da srie do orcinol apresentam hidroxilas
substituintes nas posies 2 e 4 do primeiro anel e 2 do segundo anel, exceto no cido planico [30] em que 2 e 2 se
encontram metoxiladas. No cido confluntico [31] as metoxilas se encontram nas posies 4 e 2, enquanto que no cido
divarictico [32] a metoxila se encontra na posio 4.

cido planico [30]

cido confluntico [31]

cido divarictico [32]

Vrios depsdeos derivados do orcinol contm outros grupos

substituintes ligados s unidades de cido orselnico. Esses
depsdeos so biossintticamente derivados do cido 6-alquil2,4-diidrxibenzico ou do cido 6-alquil--ceto-2,4-diidrxibenzico. Devido s variaes da cadeia alquila nas unidades do
cido orselnico, o nmero de depsdeos bastante elevado52.
Cadeias laterais de um ou mais carbonos (-CH3, -CH2 CH2
CH 3, -C5H 11, -C 7H 15) localizam-se nas posies 6 e 6. Pode
ocorrer que a cadeia lateral apresente grupo cetnico na posio , como no cido confluntico [31].
Visando determinar se as unidades de 1 Carbono so introduzidas antes ou aps a ciclizao de policetdeos para formao
de derivados do -orcinol, foram realizados experimentos utilizando talos de Parmotrema tinctorum que produzem cido
lecanrico [10], atranorina [2] e 5-cloroatranorina [2a]57,58. Os
talos foram suplementados com [1- 14C ]acetato e [1-14C]formiato.
Aps uma semana de incubao os compostos foram isolados e
a medida da atividade especfica de cada um deles indicou que
[1- 14C]acetato o precursor dos trs depsdeos, enquanto que
[1- 14C]formiato incorporado somente em atranorina [2b] e em
5-cloroatranorina [2c] participando na formao dos grupos CHO (C 8) e CH 3 (C 8) desses compostos 43 .

cido lecanrico [10a]

Meta-depsdeos
A ligao ster se estabelece entre a posio 1 do anel A e a
posio 3 do anel B. As unidades fenlicas da srie do orcinol,
que intervm na formao de depsdeos, no possuem hidroxila
na posio 3. Em princpio, no se poderia pensar em uma reao de esterificao para a formao do meta-depsdeo.
Qumicamente existem 3 possibilidades distintas: a) A ligao ster (-COO-) pode se estabelecer em posio meta do
anel B por reagrupamento de um para-depsdeo, que atuaria
como precursor; b) O grupo -COOH da primeira unidade
fenlica pode transformar-se em carboxilato, o qual poderia
formar a ligao entre as unidades por ataque direto sobre o C3 do anel B; c) A segunda unidade fenlica (anel B) pode ser
hidroxilada prviamente como unidade mononuclear no carbono 3 e a formao do meta-depsdeo segue os passos normais
de esterificao, como no caso dos para-depsdeos.
Na hiptese a, o reagrupamento consistiria em uma hidroxilao secundria do carbono formador da ligao ster no metadepsdeo (C3), quebra da ligao ster do para-depsdeo seguida de um giro de 60o do anel B, de modo que a nova ligao se formaria na posio 3, ficando uma hidroxila regenerada na posio 455.
A hiptese b consiste em um ataque direto do grupamento
carboxlico da primeira unidade fenlica (anel A) sobre a posio 3 da segunda unidade (anel B). Qumicamente o sistema possvel, dada a alta reatividade da espcie ArCOO-.
Considerando do ponto de vista biolgico, devem haver reaes enzimticas que realizariam mais facilmente a formao
da ligao55 .
A hiptese c a mais aceita atualmente. Baseia-se na hidroxilao prvia da posio 3 do anel B (para os derivados do
orcinol, 5 para os derivados do -orcinol) e estabelecimento da
ligao ster.
Elix et al.59 forneceram evidncias de que os meta -depsdeos
podem se originar por hidroxilao do C 3 de para-depsdeos,
seguida de rpido rearranjo forma termodinmicamente mais
estvel. Essas concluses foram obtidas a partir de estudos
realizados com uma mistura de compostos isolados de Lobaria
escrobiculata, consistindo de m-escrobiculina [33], cido
snico, cidos esttico, norsttico e consttico. Verificaram por
cromatografia em camada delgada que a substncia mescrobiculina sempre estava acompanhada de um composto
relacionado de Rf levemente maior. A anlise cromatogrfica e
os dados espectroscpicos do composto isolado indicaram que
se tratava de uma mistura em equilbrio dinmico de mescrobiculina com seu ismero p-escrobiculina [34]. Para verificar a consistncia dessas observaes, os autores procederam
a sntese de p-escrobiculina e concluram que a hidroxilao
do para-depsdeo seguida por rpido rearranjo intermolecular ao meta-depsdeo termodinmicamente mais estvel.

R = H Atranorina [2b]
R = Cl 5-cloroatranorina [2c]

Quando o cido orselnico marcado nos carbonos 2,4 e 6

com 14 C foi suplementado aos talos de P.tinctorum somente o
cido lecanrico [10a] apresentou-se radioativo. A ausncia de
atranorina [2b] e 5-cloroatranorina [2c] levou concluso de

114

que a introduo de unidades de 1 Carbono ocorre antes da

ciclizao do policetdeo19, 43, 52.
Nos para-depsdeos derivados do -orcinol, a posio 3
(anel A) apresenta substituinte de uma unidade de carbono,
que pode ser -CH3, -CHO, -COOH, enquanto que na posio 3
o substituinte sempre -CH3 . As posies 6 e 6 esto sempre
metiladas, e a carboxila da posio 1 est na forma de ster
metlico somente na atranorina [2] e na 5-cloroatranorina [2a].

m-escrobiculina [33]

p-escrobiculina [34]

QUMICA NOVA, 21(6) (1998)

A co-ocorrncia de cido divarictico[32] e cido sequicico

[35] em vrias espcies de Ramalina fornece evidncias para
essa proposta59 .

cido divarictico [32]

para-depsdeo

e 5, como no cido fisdico [28]. Entretanto, no cido

variolrico [29] a ligao ter est entre as posies 2 e 3,
sendo este o nico caso, at ento, conhecido.

cido sequicico [35]

meta-depsdeo
cido fisdico[28]

Os meta-depsdeos apresentam cadeias laterais de mais de 1

Carbono, como no caso dos para-depsdeos, porm, com a diferena de que as cadeias so absolutamente reduzidas. Estes
substituintes se encontram sempre nas posies 6 do anel A e
6 do anel B. No primeiro caso o substituinte no C 6 -C3H 7,
exceto no cido criptoclorofeico [23], que n-C5H 11 . A cadeia
lateral na posio 6 sempre n-C5H 11, exceto no meta- e paraescrobiculina [33] e [34] e no cido sequicico [35], que C3H 752, 55.
Os meta-depsdeos da srie do -orcinol so menos abundantes na natureza, sendo conhecidos os cidos hemataminlico
[36], hipotaminlico [37], taminlico [38] e decarboxitaminlico [39]. Este ltimo considerado por alguns autores como
sendo um artefato resultante da descarboxilao do cido
taminlico [38] na posio 1 durante os processos de extrao, no sendo, portanto, um produto natural55. Recentemente
Elix et al.,60 isolaram de Heterodermia dissecta, um novo metadepsdeo derivado do -orcinol que foi denominado cido
disstico [40].

cido hemataminlico [36]

cido taminlico [38]

cido hipotaminlico [37]

cido variolrico[29]

Embora a origem biossinttica das depsidonas ainda no

esteja esclarecida, a existncia de depsdeos e depsidonas estruturalmente relacionados no mesmo lquen indica que esses
compostos podem ter relao biogentica 61 . Como exemplos,
tem-se os cidos olivetrico [41] e fisdico [28] isolados de
Cetraria ciliaris61 .

cido olivetrico [41]

cido fisdico [28]

Nesse caso, a formao de depsidonas, tendo para-depsdeos

como precursores, ocorre por uma ciclizao oxidativa. A
hidroxila da posio 2 do anel A e a posio 5 no substituda
do anel B do formao ligao ter. Entretanto, a reao
energticamente desfavorvel e no se realiza com facilidade
em condies de laboratrio 62.
Uma outra rota possvel para a biossntese de depsidonas
aquela sugerida por Sala et al. 63, em que as depsidonas so
derivadas de depsdeos atravs de acoplamento fenlico de
benzofenonas, tendo como intermedirio espirobenzofurano-3ona. Entretanto, nenhum desses intermedirios ocorre naturalmente em liquens, embora seja um processo energticamente
favorvel 62, 63 (Fig. 2).

cido decarboxitaminlico [39]

[O]
Depsdeo

cido disstico [40]

Depsidonas
Representam um grupo de compostos estruturalmente relacionados aos depsdeos, sendo estes considerados seus precursores59 . Alm de ligao ster presente nos depsdeos, as
depsidonas apresentam tambm um heterociclo adicional, resultante de uma ligao ter, geralmente entre as posies 2

QUMICA NOVA, 21(6) (1998)

Figura 2. Formao de depsidonas a partir de depsdeos por acoplamento fenlico de benzofenonas, segundo Sala et al.63 .

115

Embora no sejam conhecidos para-depsdeos contendo uma

cadeia lateral oxidada no anel B, ocorrem alguns exemplos desse tipo de substituinte ligado ao anel A, como o caso do paradepsdeo cido olivetrico[41]13. Se essa oxidao ocorre na
posio 3, subseqentes rearranjos do para-depsdeo formado
conduzem a meta-depsdeos por migrao do grupo acila 59. Se
ocorrer oxidao na posio 5 seguida por uma migrao de
acila e subseqente rearranjo tipo Smiles do meta-depsdeo formado, isso poder conduzir s correspondentes depsidonas derivadas do orcinol64 (Fig. 3). Os autores consideraram que tal rota
poderia estar envolvida na biossntese desses compostos.

As depsidonas originrias do -orcinol so mais complexas

do que aquelas derivadas do orcinol. Pode ocorrer em alguns
compostos um anel heterocclico com oxignio entre os substituintes das posies 1 e 6, se estes forem grupamentos
carboxila e aldedo, respectivamente. Esse tipo de ciclizao
ocorre nos cidos salaznico [44], esttico [45] e norsttico [5].

cido fumarprotocetrrico [42]

cido protocetrrico [43]

para-depsdeo
hidroxilao em C 3

hidroxilao em C 5
cido salaznico [44]

cido esttico [45]

Dibenzofuranos

migrao de acila

migrao de acila

A caracterstica estrutural desse grupo de substncias a

ligao carbono-carbono e uma ligao ter entre duas unidades fenlicas. A ligao ter formada a partir de grupos
hidroxilas nas posies 11 e 10 da primeira e segunda unidades fenlicas, respectivamente. Os dibenzofuranos podem ser
divididos em dois grupos: um deles engloba os compostos que
apresentam grupo carboxila na posio 5 do primeiro anel,
como os cidos panrico [46] e chizopltico [47], e o outro em
que esse grupo no est presente nessa posio, como nos cidos ddimico [48] e hipostrepislico [49]33, 65, 66.

meta-depsdeo
Rearranjo de Smiles

depsidona

cido panrico[46]

cido chizopltico[47]

cido ddimico[48]

cido hipostrepislico[49]

Figura 3. Reaes de obteno de meta -depsdeos e depsidonas a

partir da hidroxilao e rearranjo de para-depsdeos64 .

cidos snicos
Diferenas estruturais entre depsdeos e depsidonas no ocorrem necessariamente aps a ciclizao. Por exemplo, o cido
fumarprotocetrrico [42] pode ser originado por insero do
cido fumrico na posio 3 do cido orselnico (na forma de
cido 3-metil-orselnico) dando origem ao anel B do cido fumarprotocetrrico, ou por esterificao direta do grupo -CH2OH
do anel B do cido protocetrrico19 [43] com o cido fumrico.

116

Uma das substncias originadas de liquens mais conhecida o

cido snico. Foi isolado pela primeira vez de Ramalina calicaris, de Usnea barbata e de outras espcies de liquens, em 1834,
por Rochleder et al.67. Apresenta-se em duas formas isomricas:
cido (+)-snico []D 20 + 495o e (-)-snico []D20 - 495o.
Em 1967, Shibata et al. 68 isolaram de Cladonia mitis e
Cladonia arbuscula o cido (+)-isosnico []D 20 + 510o e de

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Cladonia pleurosta o cido (-)-snico []D 20 - 490o . Os cidos

snicos [1a] e [1b] so largamente distribudos em liquens,
enquanto que os cidos isosnicos [1c] e [1d] so de distribuio restrita55.
Embora muitos autores classifiquem os cidos snicos como
um grupo de dibenzofuranos, considera-se que sejam formados
pela ciclizao do tipo floroglucinol e no do tipo orselnica,
tpica de dibenzofuranos 46, 55 .

(+) - (12R) - Acido snico [1a]

unidades fenlicas. Porm, quando o precursor era floroacetofenona marcada na mesma posio, o cido snico isolado no era
radioativo em nenhum dos seus carbonos 43 .
Entretanto, quando se administrava ao lquen floroacetofenona e formiato, ambos radioativos, o cido snico formado
apresentava radioatividade (Fig. 5). Esse fato indicou que a
formao do anel furnico entre as duas unidades fenlicas
requer a adio prvia de uma unidade de 1 Carbono, visto que
os fenis no substitudos no so substratos da reao enzimtica de ciclizao. Ambos os substituintes metila aparecem
marcados nos cidos snicos quando o lquen dispe de
formiato radioativo administrado de forma exgena (Fig. 5).

(-) - (12S) - cido snico [1b]

H*COOH

(+) - (12R) - cido isosnico [1c]

(-) - (12S) - cido isosnico [1d]

A cadeia policetdica (cido 3,5,7-tricetoctanico ligado a

uma enzima) resultante da condensao de 1 mol de acetilSCoA
e 3 moles de malonilSCoA, por uma condensao do tipo
Claisen, d origem ao acetilfloroglucinol (metilfloroacetofenona), que precursor dos cidos snicos52 .
A biossntese do cido snico foi estudada por Taguchi et
al.69 usando vrias espcies liqunicas e quatro precursores
marcados: [1-14C]-acetato, [2- 14C]-malonato, [ 14CH 3-CO]-floroacetofenona e [14 CH 3-CO]-metilfloroacetofenona (Fig. 4).
Quando [1-14 C]-acetato foi usado, o cido snico incorporou radioatividade nas posies 2, 4, 7, 9, 11, 12, 15 e 17,
enquanto que ao usar [2-14C]-malonato os grupos metila das
posies 15 e 15 no estavam marcados. Isto significa que o
grupo CO-CH3 em cada unidade fenlica deriva do acetato.
Resultados coincidentes com esses foram encontrados por Fox
et al. 70 para a sntese do cido snico por Cladonia sylvatica
suplementada com14 CO 2 .
2 *CH3 - COSCoA + 6 HOOC - *CH 2 - COSCoA

cido snico [1]

Figura 4. Biossntese do cido snico [1] a partir de [1-14 C]acetato
e [2-14 C] malonato.

A utilizao alternativa de floroacetofenona ou metilfloroacetofenona radioativas como precursores, resolveu outro ponto
importante no quadro biossinttico dos cidos snicos. Quando
se empregava [14CH 3-CO]-metilfloroacetofenona, o cido snico
isolado apresentava-se marcado nos grupos CO-CH3 das duas

QUMICA NOVA, 21(6) (1998)

Figura 5. Reao biossinttica de obteno cido snico [1] a partir

de fluoroacetofenona e formiato radioativos.

A formao da ligao C - C ocorre de maneira idntica

como na formao de outros dibenzofuranos, envolvendo possivelmente a formao de radicais livres. Uma reao subseqente de desidratao conduz formao da ligao ter do
anel furnico 43 . A reao catalisada por fenol-oxidases ou
por peroxidases 43 .
Cromonas, xantonas, naftoquinonas, antronas
e antraquinonas
Compostos pertencentes a essas classes tambm ocorrem em
liquens, porm no so exclusivos desses organismos. So compostos freqentemente idnticos a produtos biossintetizados por
fungos de vida livre ou por plantas superiores.
As rotas biossintticas propostas envolvem a formao de um
policetdeo intermedirio resultante da condensao de 1 mol de
acetilSCoA com um nmero varivel de molculas de
malonilSCoA. Cromonas podem ser formadas pela condensao
de 1 mol de acetilSCoA com 4 ou com 8 moles de malonilSCoA,
resultando na rupicolina [50] e sifulina [51]43, 52.

Rupicolina [50]

Sifulina [51]

Xantonas e antronas so resultantes da condensao de 1

mol de AcetilSCoA com 6 e 7 moles de malonilSCoA, respectivamente 43, 44, 52.
As antronas so facilmente oxidadas s antraquinonas. As
antraquinonas e seus derivados so produtos do metabolismo
de fungos ( Aspergillus e Penicillium sp.), liquens, basidiomicetos e plantas superiores. Clivagens oxidativas do anel B de

117

Liquexantona [3]

Emodina antrona [52]

Emodina antraquinona [53]

antraquinonas produzem derivados da benzofenona que so

transformados em xantonas44. A dimerizao de xantonas produzindo os cidos secalnicos ocorre, provavelmente, via fenoloxidases, ou por radicais derivados de peroxidases44 (Fig. 6).
Hemaventosina [4], cido quiodectnico [54] e canariona
[55] so exemplos de naftoquinonas que ocorrem em liquens.
Hemaventosina [4] um pigmento vermelho presente nos apotcios de Haematomma ventosum 28, 29. cido quiodectnico
[54] e canariona [55] foram isolados de Chiodecton sanguineum
(Sw.)Vain. e de Usnea canariensis, respectivamente71 .
As antraquinonas so pigmentos amarelos, vermelhos ou de
cor laranja encontrados em liquens, particularmente nos gneros Xanthoria e Caloplaca.
Atualmente, so conhecidas cerca de 40 antraquinonas isoladas de liquens, embora algumas ocorram tambm em fungos
no liquenizados 11.
A substncia mais conhecida desse grupo a parietina ou
fisciona [56], encontrada no s em liquens, mas tambm em
fungos e em plantas superiores.

Hemaventosina [5]

Canariona [55]

Hematomona [58]

118

cido norsorolnico [59]

Sordidona [60], sifulina [51] e cido leprrico [61] so as

cromonas conhecidas como componentes de algumas espcies
liqunicas. Sifulina apresenta dois derivados, oxisifulina [62] e
protosifulina [63], que foram isolados de Siphula ceralites73, 74 .

Oxisifulina [62]

Figura 6. Reaes envolvidas na biossntese de xantonas. A primeira

etapa mostra a formao de xantonas por clivagem oxidativa do anel
B de antraquininas pela ao de deidroxilases e a segunda etapa a
obteno de cido secalnico por dimerizao de xantonas.

Parietina ou fisciona [56]

Recentemente, Huneck et al.72 isolaram dos apotcios(i) de

Haematomma puniceum um pigmento vermelho que foi denominado hematomona [58] e que se assemelha ao cido
norsolornico [59].

Sordidona [60]

cido secalnico [57]

cido quiodectnico [54]

cido leprrico [61]

Protosifulina [63]

Em liquens ocorrem tambm alguns glicosdeos. De

Rocellaria mollis (Hampe) Zahlbr., Schismatomma accedens
(Nyl.) Zahlbr. e Roccella galepagoensis Follm. foram isolados
os glicosdeos rocelina [64], molina [65] e galapagina [66],
cuja aglicona uma cromona 75.
(i)

Apotcios so estruturas de reproduo de liquens em que o fungo

um ascomiceto. So frutificaes abertas em forma de disco ou
taa 45 .

QUMICA NOVA, 21(6) (1998)

Rocelina [64]
R = H; R, R = Ac
Molina [65]
R, R= H; R = Ac
Galapagina [66] R = CH3 ; R= H; R= Ac.

As xantonas isoladas de liquens so derivadas da norliquexantona35 [67]. Seis desses compostos variam somente em relao ao grupo de O-metilao e presena de cloro no anel.
Entretanto, uma delas, a eritromona [68], isolada de Haematomma erytromma, o primeiro exemplo de xantona liqunica
O-acetilada76 .
Alm da norliquexantona [67], as xantonas conhecidas, so
a turigiona [69], cido tiofnico [70], cido tiofannico [71],
artotelina [72], liquexantona [3], 2,4-dicloronorliquexantona
[73], 2,7-dicloronorliquexantona [74] e outras.

Divaricatinato de peroxiergosterila [75]

Triterpenos constituem o maior nmero de compostos entre

os terpenos isolados de liquens. Nesta classe de compostos
esto includos zeorina [76], o mais conhecido triterpeno isolado de liquens, leucotilina [77], que difere da zeorina pela presena de uma hidroxila com configurao na posio 16 e
diversos compostos derivados desses por hidroxilao, acetoxilao e oxidao do grupo metila 76 .

Zeorina[76]
Norliquexantona [67]

Leucotilina [77]

Eritromona [68]

Turingiona [69]

cido tiofnico [70]

cido tiofannico [71]

Artotelina [72]

Compostos como cido urslico, taraxeno e friedelina ocorrem tambm em liquens76 .

Embora no tenham sido relatados estudos da biossntese
desses compostos em liquens, considera-se que esse processo
segue o modelo estabelecido, envolvendo a formao de cido
mevalnico a partir de 3 molculas de acetilSCoA que ativado pela ao de ATP em cido mevalnico pirofosfato, e por
descarboxilao e desidratao transforma-se em pirofosfato de
isopentenila, precursor biossinttico dos compostos derivados
do isopreno 43, 53.
A condensao entre unidades de pirofosfato de isopentenila
(isopreno) conduz formao de monoterpenos, sesquiterpenos,
diterpenos, triterpenos e outros 43, 44,53 .
At o momento, foram isolados de liquens aproximadamente 70 compostos derivados da via do cido mevalnico, incluindo diterpenos, sesquiterpenos e triterpenos. Alm desses, so
conhecidos tambm 41 esteris 33.
Via do cido chiqumico
Derivados do cido pulvnico

2,4-dicloronorliquexantona [73]

2,7-dicloronorliquexantona [74]

Os derivados do cido pulvnico so pigmentos amarelos ou

de cor laranja. Nesse grupo esto includos compostos como
calicina [78], epanorina [79], cido leprapnico [80], cido
vulpnico [6] e outros.

Derivados da via do mevalonato

Esteris e terpenos
Esteris e terpenos no so to freqentes em liquens quanto em plantas superiores. Ergosterol, fitosterol e -sitosterol
so exemplos de esteris conhecidos por ocorrerem em algumas espcies de liquens. Fungisterol foi isolado de Pseudoevernia furfuraceae77 .
Outros compostos derivados do ciclopentanoperidrofenantreno tambm so conhecidos, incluindo divaricatinato de peroxiergosterila [75] isolado de Haematomma ventosum78 .

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Calicina [78]

Epanorina [79]

119

- Reaes de Colorao

cido leprapnico [80]

cido vulpnico [6]

Dos compostos obtidos de liquens, somente dois pertencem

classe classe das terfenilquinonas e 12 so derivados do cido pulvnico. So compostos biossintetizados pela via do cido
chiqumico. Seus intermedirios geram fenilpropanides, que
se condensam, dando origem a compostos como os cidos
poliprico [81] e telefrico [82] ou os derivados do cido
pulvnico calicina [78], epanorina [79], cido leprapnico [80],
cido vulpnico [6] e outros43, 79.

cido poliprico [81]

cido telefrico [82]

Os derivados do cido pulvnico so pigmentos amarelos

encontrados em alguns liquens, como em Letraria vulpina,
Rhizocarpum geographicum e Bryoria fremontii. As terfenilquinonas so pigmentos de cor vermelha e prpura e, at o
momento, foram isolados somente de liquens da famlia
Peltigerales80 .
Taxonomia e Quimiotaxonomia
Liquens so identificados aos nveis de gneros e espcies
por vrias combinaes de caracteres morfolgicos dos apotcios e talos.
Dados relativos apenas anlise morfolgica muitas vezes
no elucidam a identificao de um dado espcime, mas aliados s informaes obtidas sobre a provvel composio qumica do espcime em estudo, podem conduzir a uma identificao mais segura.
A anlise qumica, para fins de taxonomia, realizada utilizando reaes de colorao no talo, microcristalizao, anlise cromatogrfica, anlise por fluorescncia e anlise por espectrometria de massas. Dependendo da natureza do material
em estudo, pode-se obter informaes pelo uso de apenas uma
das tcnicas, ou se necessrio, pelo conjunto delas. As reaes
de colorao no talo so as mais utilizadas pelos liquenologistas
e podem, em geral, fornecer informaes suficientes, que somadas quelas de anlise morfolgica, conduzem identificao de uma dada espcie.
O uso de informaes qumicas para fins de taxonomia de
liquens, deve-se ao fato de que esses organismos produzem
metablitos secundrios, os quais so em grande parte exclusivos do referido grupo vegetal. Alm desses, muitos outros
compostos, tanto do metabolismo primrio, quanto do secundrio, so obtidos de liquens. Porm, muitos deles so comuns
em fungos ou em plantas superiores.
A elucidao estrutural de compostos liqunicos resulta
principalmente da combinao de mtodos qumicos clssicos
e de tcnicas espectroscpicas modernas. Entretanto, um grande nmero de informaes disponveis sobre a ocorrncia de
substncias liqunicas baseado em mtodos microqumicos
de anlise33 .

120

Reagentes como hidrxido de potssio e hipoclorito de clcio, so usados para caracterizao de vrias substncias
liqunicas. O uso desses reagentes em taxonomia de liquens
foi iniciado em 1886, por Nylander81. As reaes so conduzidas aplicando a soluo do reagente com um capilar a um fragmento do talo liqunico, e a variao de cor melhor observada em microscpio estereoscpico. As coloraes observadas
dependem da natureza das substncias presentes.
O hidrxido de potssio promove a hidrlise da ligao ster
de depsdeos e de depsidonas, dando formao a compostos
cujas coloraes variam de amarelo a vermelho intenso. Alm
de depsdeos e depsidonas, pigmentos quinoidais presentes no
lquen podem apresentar reao positiva, enquanto que derivados do cido pulvnico, xantonas e cido snico no reagem.
A reao com hipoclorito de clcio positiva com compostos
que apresentam configurao meta-diidroxi. A ao de oxidantes
moderados sobre compostos meta-diidroxi promove a formao
de derivados quinoidais. A cor apresentada pelas quinonas, laranja e vermelho vivo, provavelmente modificada pela presena de outros grupamentos ligados ao anel aromtico, como no
3,5-diclorolecanorato de metila e outras substncias que apresentam reaes positivas com hipoclorito de clcio11.
Depsdeos derivados do orcinol do aparecimento colorao vermelha intensa pela ao de hipoclorito. Esse procedimento permite separar os depsdeos em dois grupos, um deles
constitudo por derivados metaidroxilados, que reagem positivamente com hipoclorito, e outro, constitudo por derivados
meta-substitudos metoxilados, que em sua maior parte do
reao negativa11.
As depsidonas no apresentam reao com hipoclorito de
clcio. No entanto, esses compostos podem apresentar reao
positiva com esse reagente se forem tratados inicialmente com
KOH. A reao combinada desses reagentes sobre depsidonas
pode dar aparecimento colorao vermelha82 .
Alm desses, podem ser utilizados outros reagentes para
deteco de outros grupos funcionais, como por exemplo grupamento aldedo. Solues de benzidina, p-fenilenodiamina,
anilina, o-toluidina e outras podem ser utilizadas para deteco
de grupo aldedo. A reao ocorre pela formao de bases de
Schiff de colorao amarela, laranja ou vermelha.
As reaes em que se utilizam hidrxido de potssio,
hipoclorito de clcio e p-fenilenodiamina, so empregadas
amplamente pelos liquenlogos em trabalhos de taxonomia.
Entretanto, no so reaes especficas no sentido de permitir
a identificao precisa dos componentes presentes no lquen.
Isto porque diferentes substncias podem apresentar os mesmos grupamentos qumicos, que ao reagirem produzem a mesma variao de cor, no sendo possvel distingu-las quando se
encontram em mistura. Alm disso, muitos cidos liqunicos
no produzem qualquer variao de cor pela ao desses
reagentes, requerendo, portanto, a utilizao de outras tcnicas
de deteco dessas substncias.
Outros reagentes tambm so usados, como por exemplo,
soluo de Cloramina T e de Cloreto de Titnio para deteco
de cido snico e reagente de Dimroth para xantonas82 .
- Microcristalizao
A tcnica de microcristalizao utilizada em taxonomia de
liquens para a identificao de vrias classes de compostos
provenientes do metabolismo secundrio de liquens. Esses compostos em condies adequadas de cristalizao apresentam
formas cristalinas caractersticas que observadas ao microscpio permitem a identificao quando comparadas padres ou
a dados da literatura83-86.
Um pequeno fragmento do lquen extrado com um solvente orgnico (clorofrmio ou acetona ou sequencialmente
clorofrmio e acetona). O extrato obtido colocado sobre uma

QUMICA NOVA, 21(6) (1998)

lmina de microscpio de maneira a formar uma mancha contendo o resduo aps evaporao do solvente. Sobre esse resduo se coloca uma gota da soluo para cristalizao e a mistura coberta com uma lamnula. Algumas misturas so
aquecidas mais intensamente e outras levemente. Solues para
cristalizao contendo derivados nitrogenados exigem pouco
ou nenhum aquecimento82, 86 .
Dependendo da substncia, a formao de estruturas cristalinas
pode ocorrer imediatamente, aps alguns minutos, ou aps algumas horas. Em alguns casos as formas cristalinas podem ser melhor observadas aps 24 horas. As formas cristalinas so visualizadas em microscpio e a identificao dos compostos feita por
comparao com substncia padro tratada nas mesmas condies
e por comparao com fotos mostradas na literatura83-86 .
Asahina, em 1936, desenvolveu essa tcnica para identificao de cidos liqunicos. O mtodo foi gradativamente aperfeioado e continua sendo utilizado pelos liquenlogos em trabalhos de taxonomia83.
As solues usadas para cristalizao podem conter compostos nitrogenados como o-toluidina, quinolina, anilina,
piridina e outras. A formao de estruturas cristalinas pelo uso
dessas solues depende da formao de sais e, no caso da
presena de grupos aldedo no cido liqunico, pode ocorrer
formao de base de Schiff. As solues que no contm compostos nitrogenados na composio, no promovem qualquer
reao, sendo apenas meios de cristalizao45, 86.
Alm das solues mencionadas, o uso de certos reagentes
inorgnicos, tais como solues de hidrxido de brio, carbonato de potssio e hidrxido de potssio, podem conduzir
identificao de cidos liqunicos pela observao dos cristais
dos sais formados 45, 83 - 86.
Pelo uso da tcnica de microcristalizao possvel identificar
um grande nmero de cidos liqunicos das sries dos depsdeos,
depsidonas e dibenzofuranos, xantonas, antraquinonas, cidos
alifticos (cidos capertico [13], protoliquesternico [22],
rangifrmico [15], roclico [14] e outros) e terpenos ( friedelina,
leucotilina [77], cido urslico, zeorina [76] e outros), que tambm formam estruturas cristalinas nas condies citadas86.
- Cromatografia
A cromatografia uma das tcnicas mais utilizadas na identificao de substncias liqunicas.
Wachtmeister87 e Mitsuno88 foram os primeiros a utilizar a
cromatografia em papel para a deteco e identificao de
substncias liqunicas. Entretanto, a cromatografia em camada fina tem sido mais extensivamente usada no s pela
aplicabilidade geral, como tambm por ser uma tcnica sensvel, rpida e simples.
Numerosos trabalhos foram publicados sobre a separao
de substncias liqunicas por cromatografia em camada fina8992
. Tabulaes de dados e referncias so encontrados nos trabalhos de Huneck93 e Santesson94.
A cromatografia de extratos liqunicos utilizando placas
de cromatografia em camada delgada de alta performance tem
permitido detectar com mais preciso um nmero de compostos presentes nos extratos devido maior resoluo do mtodo95 . O emprego da cromatografia gasosa para anlise de misturas de substncias liqunicas de uso limitado devido
baixa volatilidade e labilidade trmica da maioria dos compostos conhecidos.
A cromatografia lquida de alta resoluo (clae) para anlise de extratos liqunicos foi empregada pela primeira por vez
por Culberson96 .
Estudos sobre a composio e proporo de cidos liqunicos
em espcies do gnero Cladonia empregando clae tm sido realizados por Huovinen et al.97-103. Feige et al.104 analisaram por
clae 331 compostos obtidos de liquens e Yoshimura et al. 105
utilizaram a tcnica de anlise por clae com detector de arranjo

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de fotodiodos. Yoshimura et al. 105 tabelaram dados relativos a

80 diferentes compostos liqunicos e determinaram a composio de extratos de 15 espcies de liquens.
A identificao de liquens aos nveis de gneros e espcies
tem sido conduzida pela anlise morfolgica, reaes de colorao no talo, cromatografia, microcristalizao e em alguns
casos anlise por espectrometria de massas de micro-extratos.
Mais recentemente, tem sido sugerida a utilizao de dados
espectrais de RMN 13C de heteropolissacardeos para identificao de liquens 106-108.
Importncia dos compostos liqunicos
O interesse na qumica de polissacardeos de liquens est na
possibilidade de sua atividade antitumoral. Esses estudos tiveram incio no final da dcada de 60 109-113 . Recentemente,
Hirabayashi et al.114 relataram a atividade inibitria de um
polissacardeo sulfatado, GE-3-S, contra a replicao de HIV
in vitro.
Vrios cidos liqunicos tm sido estudados do ponto de vista farmacolgico. A ao antibitica de extratos liqunicos tem
sido investigada h algumas dcadas. Burkholder et al.115,116
publicaram os primeiros estudos qualitativos das propriedades
antibiticas dos liquens. Foram testadas 100 espcies liqunicas
em relao Staphylococcus aureus e Bacillus subtilis; 52% das
espcies inibiram o crescimento de um, de outro, ou de ambos
microorganismos. Os compostos liqunicos exercem sua ao
antibitica preferencialmente sobre bactrias gram-positivas117 .
A atividade antibitica est relacionada presena de derivados fenlicos nos extratos liqunicos. Os mecanismos da ao
antibitica de cidos liqunicos, mais precisamente do cido
snico [1] e seus derivados, sugerem que esses compostos modificam a estrutura das protenas. Essas modificaes resultam
em alteraes de certas capacidades metablicas das clulas
infectantes (permeabilidade de parede, permeabilidade de membrana, atividade enzimtica, etc.), causando-lhes, s vezes, alteraes irreversveis e at mesmo conduzindo morte celular 55.
Tentativas de relacionar estrutura qumica e atividade antibitica tm sido realizadas desde 1948. Shibata et al. 118 estudaram os efeitos de substituies nos anis A e B do cido
snico [1] na ao antibitica destes. Verificaram que esterificando as duas hidroxilas livres do primeiro anel com cido
actico a atividade do cido snico se reduz em 50% sobre
Mycobacterium tuberculosis avium. A hidrogenao da dupla
ligao, convertendo o cido snico em diidrosnico, reduz a
1/4 sua capacidade antibitica. Essas observaes indicam que
as duas hidroxilas livres (C-8 e C-10) no primeiro anel, so
fundamentais como suporte da atividade antibitica dos cidos
snicos. Tal concluso reafirmada pelo fato de que o cido
usnico, resultante da oxidao da hidroxila em C-10, em funo cetona, tem uma atividade 1/6 menor que a do cido snico.
O grau de oxidao do segundo anel tambm importante na
atividade antibitica.
O cido (-)-snico [1b] interfere nos processos de fosforilao oxidativa e, provavelmente, intervm de algum modo na
estrutura das paredes bacterianas. Sabe-se, tambm que esse
cido atua sobre o metabolismo do DNA em clulas animais
inibindo a fuso nuclear 119 .
O cido (-)-snico [1b] atua tambm como agente
antitumor 120, 121. Os cidos snicos apresentam tambm atividade antiistamnica, espasmoltica e antiviral. So usados em
cremes antisspticos encontrados no comrcio europeu como
Usno 122 e Evosin122. Usno o derivado hidrxido de
benzilidimetil-(2-[2[9p-1,1,3,3) tetrametilbutilfenoxietoxi]
etilamonio. Esse produto apresenta bons resultados para combater doenas da pele e em usos veterinrios no tratamento de
mastite em vacas. Na Alemanha so encontrados os produtos
Evosin I e Evosin II. O primeiro contm cidos snico e
evrnico e o segundo cidos snico, fisdico e fisodlico 122.

121

Dibenzofuranos estruturalmente relacionados aos cidos snicos tambm possuem atividade antibitica frente a uma ampla
gama de bactrias. O cido ddimico [56] mostra atividade quando na presena de Staphylococcus aureus e M. tuberculosis.
Cain 123-126 estudou a ao do cido poliprico [81] e seus
derivados como agentes antitumoral, e Hirayama et al. 127 testaram extratos de liquens, cidos liqunicos e seus produtos de
degradao quanto atividade antitumoral frente aos carcinomas ascite e de Erlich. Verificaram que os cidos nefrosternico
[21] e protoliquesternico [22] foram efetivos contra o carcinoma de Erlich. Essas substncias so exemplos de lactonas
metilnicas, um grupo de compostos com muitos outros representantes que exibem atividade antitumoral, como o caso de
vernolepina e elefantopina, que so lactonas sesquiterpnicas5.
cido vulpnico [6], cidos secalnicos e seus derivados
so metablitos altamente txicos. O cido vulpnico o princpio txico de Letharia vulpina e foi usado tradicionalmente
no norte da Europa como veneno para lobos. um metablito
no somente venenoso para carnvoros, mas tambm para insetos e moluscos. Entretanto, no causa o mesmo efeito em
coelhos e ratos 33.
O cido secalnico D, um metablito teratognico, inibidor
da protena quinase C e protena quinase dependente de AMP
cclico. Inibidores dessas protenas podem interferir no desenvolvimento normal128 .
Harada et al. 129 observaram que o cido secalnico A causa
peritonite em ratos, e verificaram que o aumento da permeabilidade vascular na cavidade abdominal dos mesmos comparvel quela causada pelo cido actico, porm difere quanto
ao tempo de durao do processo inflamatrio .
Wennersten 130 estudou o comportamento de 13 diferentes
substncias liqunicas quanto s suas capacidades de induzir
leses foto-oxidativas de membranas, confirmando que os compostos liqunicos investigados tm capacidade de induzir
fotossensibilizao. Atranorina [2] e cido esttico [45] so capazes de fotossensibilizar a pele humana, sendo, portanto,
alergenos de contacto5, 11.
Hidalgo et al. 131 investigaram a atividade antioxidante de
atranorina [2], cido divarictico [32], panarina [83] e 1cloropanarina [84], empregando como modelo a auto-oxidao
de homogenato de crebro de rato e -caroteno em uma suspenso de cido linolnico. Dos compostos testados, o 1cloropanarina [84] foi o mais ativo, seguido da panarina [83].
Atranorina [2] e cido divarictico [32] foram menos ativos
em relao aos dois primeiros.

Panarina [83] R = H
1- Cloropanarina [84] R = Cl

Essas observaes so de interesse, considerando que as

substncias liqunicas (cidos liqunicos) esto geralmente
presentes nos liquens em concentraes relativamente altas e,
devido atividade antioxidante, provvel que contribuam s
defesas antioxidantes desses organismos131 .
Shibamoto et al. 132 testaram os cidos snico[1] e fisodlico
[85] quanto mutagenicidade no teste de Ames: o ltimo exibiu mutagenicidade dependente da dose.
Os cidos snico [1] e difractico [25] apresentam tambm
atividade analgsica e antipirtica quando testados em ratos133 .

122

cido fisodlico [85]

Um dos importantes usos de liquens, hoje, na indstria de

perfumes. Duas espcies: Evernia prunastri e Pseudevernia
furfuraceae so colhidas no sul da Frana, Marrocos e Iugoslvia,
em grandes quantidades, na faixa de 8.000 a 10.000 toneladas/
ano. O lquen misturado com a casca das rvores, subseqentemente extrado com um solvente orgnico e tratado com etanol. O
concentrado dessa soluo contm uma mistura de leos essenciais e derivados de depsdeos (produtos de degradao). O extrato
final com seu odor caracterstico de musgo usado como fixador
de alguns perfumes. A maior parte constituda de borneol, cineol,
geraniol, citronelol, derivados da cnfora, naftaleno, orcinol,
steres do orselinato e seus homlogos5.
Os cidos liqunicos freqentemente contm grupos polares
tais como OH, COOH, e CHO que favorecem a complexao
de ctions134 . A complexao de metais por cidos liqunicos
tem significado importante em processos de desgaste de minerais e rochas que atuam como substrato de liquens. Devido a
isso os liquens podem extrair de seus substratos de crescimento os minerais que so necessrios ao seu metabolismo. Os
ctions inorgnicos podem ser provenientes no somente de
substratos de crescimento, mas, tambm, da contribuio atmosfrica e de precipitaes. Essas trs fontes de elementos
so de importncia e variam entre stios, entre espcies de
liquens e entre elementos. Entretanto, a maior parte dos
oligoelementos so necessrios em concentraes catalticas,
como cofatores de enzimas ou como integrantes de metaloprotenas ou de cromforos. A excessiva concentrao de ons
pode ser prejudicial ao lquen, conduzindo em alguns casos
diminuio do tamanho do talo e, em outros, a malformaes55.
Devido capacidade dos liquens em acumular minerais em
nveis superiores s suas necessidades, ao fato de que muitas espcies tm larga distribuio geogrfica, e a constatao de que a
morfologia no varia de maneira marcante ao longo das estaes,
esses organismos so usados como bioindicadores de poluio135,
136
. Foi sugerido, tambm, que as propriedades antimicrobianas
apresentadas pelos cidos liqunicos envolvem um mecanismo de
complexao de metais, face a forte correlao que existe entre
propriedades antibacterianas e a capacidade de complexao de
metais em compostos orgnicos sintticos137 .
Uma outra hiptese considera que os cidos liqunicos,
semelhana de taninos e flavonides, nas fanergamas se comportam como agentes inativantes de enzimas com funes
metablicas primrias nos organismos invasores55.
Estudos relacionados atividade da urease, enzima de origem estritamente vegetal, difundida tanto em bactrias, algas e
fungos, como em fanergamas, indicam que os cidos liqunicos bloqueiam grupos SH na protena e promovem inibio
impedindo a formao do complexo enzima-substrato. Alm
disso, polimerizam a protena, sendo que a solubilidade do
polmero formado decresce inversamente ao peso molecular.
Isto significa que existem ao menos duas classes de stios
ligantes de fenis na molcula da urease55.
A enzimologia de liquens foi pioneira na biotecnologia de
enzimas e clulas imobilizadas. Mosbach & Mosbach138 descreveram uma tcnica simples de fixao de enzimas e clulas
de liquens usando matriz de poliacrilamida. Verificaram que a
enzima cido orselnico descarboxilase produzia orcinol sem
qualquer perda significante de atividade, aps 14 dias a 20oC.
Quando clulas de liquens eram fixadas na matriz do gel, elas

QUMICA NOVA, 21(6) (1998)

retinham parte de sua atividade descarboxilase aps 3 meses a

20oC. Com esse mtodo possvel fixar enzimas de uma dada
seqncia biossinttica e isolar intermedirios em grandes quantidades. Esse processo importante para a produo de substncias de interesse qumico e bioqumico19 . Estudos relacionados imobilizao de clulas de liquens e enzimas para
bioproduo de metablitos vm sendo realizados por Vicente
et al. 139,140 e Pereira et al 141, 142.
A bioproduo de metablitos de liquens tem sido desenvolvida, tambm, atravs de cultura de clulas de liquens ou
de clulas do micobionte143 - 145.
Muitos compostos liqunicos apresentam potencial aleloptico, ou seja, podem agir como molculas mensageiras, afetando no somente liquens, mas outras espcies. Nesse sentido,
tem-se observado a inibio do crescimento de micorrizas(ii),
inibio do desenvolvimento de outros liquens e musgos vizinhos que seriam os competidores. Embora existam demonstraes experimentais da potncia de vrios compostos liqunicos, as interaes alelopticas em ecossistemas no so ainda
bem compreendidas146, 147.
Substncias cclicas com grupos -OH livres so geralmente
txicas para os seres vivos4 e as substncias liqunicas (cidos
liqunicos) esto includas nesse grupo148 .
AGRADECIMENTOS
A Pr-Reitoria de Pesquisa de Pesquisa e Ps-Graduao da
UFMS pelo apoio para a realizao deste trabalho.
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ii)Alguns fungos vivem nas razes de plantas superiores em uma relao simbitica denominada micorriza 2.

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Fuzikawa, F.; Ber. Dtsch. Chem. Ges. 1932, 65, 1665; e)
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Yanagita, M.; Ber. Dtsch. Chem. Ges. 1933, 66, 1217; h)
Asahina, Y.; Hashimoto, A.; Ber. Dtsch. Chem. Ges. 1934,
67, 416; I) Asahina, Y.; Tukamoto, T-T.; Ber. Dtsch.

123

41.
42.

43.
44.
45.
46.
47.
48.
49.
50.
51.
52.
53.
54.
55.
56.
57.
58.
59.
60.
61.
62.
63.
64.
65.
66.
67.
68.
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124

Chem. Ges. 1934, 67, 416; j) Asahina, Y.; Fuzikawa, F.;

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