1.

INTRODUO
Existem inmeros mtodos de identificao e separao de substncias , e entre esses se encontra a cromatografia, que consiste em separar os componentes de uma mistura por meio de um processo fsico de arraste, onde existem duas fases uma estacionria (lquido ou slido sobre uma superfcie) e uma mvel (lquida ou gasosa, responsvel pelo arraste do componente da mistura)
[1]

. Esse mtodo pode ser aplicado de diferentes formas, tais

como a cromatografia em papel, em camada delgada, gasosa de alta eficincia, em coluna, etc. Os dois primeiros citados so os mais comumente empregados em escala laboratorial. A cromatografia em papel uma das tcnicas mais simples, sendo necessrios poucos instrumentos para sua utilizao. Neste processo cromatografico, o lquido da fase estacionria flui sobre o papel adsorvente, e o solvente organico arrasta o soluto, por intermdio de sua solubili dade, at um ponto do papel que no continha este
[1]

. As marcas

deixadas sobre o papel podem ser verificadas por meio de raios UV ou por contato com alguma substncia, como o vapor de iodo por exemplo. A cromatografia em papel uma tcnica simples, sendo amplamente empregada em laboratrios de bioqumica, menos eficiente que a cromatografia em camada delgada e empregada quando os compostos analisados so polares. A cromatografia em camada delgada consiste em um processo onde a adsoro ocorre entre lquido e slido, e a separao entre as fases ocorre por diferena de afinidade entre os compostos. As placas empregadas nesse tipo de anlise so normalmente de vidro e pulverizadas com slica-gel, que passa por um processo de secagem, e conseqente ativao
[2]

. Para uma anlise cromatogrfica preciso adicionar pequenas gotas da

substncia a ser analisada em uma extremidade da placa, coloc-la em contato com o eluente, porm abaixo do nvel da marca da amostra. Este mtodo tambm simples, rpido e econmico, por isso muito utilizado para a purificao de substncias ou para a identificao de fraes coletadas atravs de cromatografia clssica. Alm disso, o mtodo possui um fator importantssimo que o fator de reteno, o qual a razo entre a dist ncia percorrida pela substncia em questo e a distncia percorrida pela fase mvel.

Ao se realizar uma cromatografia, devemos considerar a escolha do dos solventes que compe o eluente, ou seja, do solvente (parte mvel) que empregado para transportar os componentes da mistura
[3]

. Neste caso importante que haja um equilibrio de polaridade

entre os solventes empregados, isso porque se empregarmos um solvente pouco polar a fase estacionria no seria arrastada com eficincia, e caso um solvente muito p olar seja aplicado o arraste pode ocorrer de maneira muito forte, sendo a fase estacionria levada at o topo da placa [2] . As manchas das placas podem ser reveladas por meio de raios UV, radiotividade, vapores de iodo, entre outros, e caracterizam mtodos denominados

destrutivos (oxidao dos compostos sobre a placa) e no destrtutivos (atravs de fluorescencia ou complexao com iodo)
[2]

2. OBJETIVOS
2.1. Estudar o comportamento das substancias orgnicas em termos da partio

cromatogrfica estrutura qumica v ersus fenmeno de adsoro cromatogrfica; 2.2. Demonstrar experimentalmente princpios fundamentais de cromatografia; Empregar

tcnica de cromatografia em camada delgada na anlise de uma amostra e utilizar o RF na identificao de compostos orgnicos .

3.

PARTE PROCEDIMENTAL

3.1. Materiais Lpis; Rgua; Esptula; Tesoura; Provetas de 25 e 100 mL; Bqueres; Papel sulfite e papel de filtro; Canetas coloridas; Funil simples; Almofariz com pistilo; Erlenmeyer; Funil de seprao de 250mL; Suporte universal; Argola para funil; Pote de vidro mdio, com tampa; Balana analtica ;

Chapa de aquecimento;

Placa cromatogrfica;

3.2. Reagentes gua destilada; Alcool 92%; Hexano; Etanol; Acetona; Sulfato de sdio anidro; Pimento (verde, amarelo e vermelho) .

3.3. Procedimento Experimental 3.3.1. Cromatografia em Papel Preparou-se uma cuba cromatogrfica com tampa. Cortou -se o papel sulfite e o papel de filtro com uma dimenso de 7cm x 4cm. Com o lpis traou-se linhas nos papis (1cm abaixo e acima do papel). Com as canetas coloridas, marcou -se quatro pontos, 0,5 cm acima da linha feita, nos papis. Preparou -se o eluente (mistura de 7mL de etanol e 7mL de gua), e colocou-se ele no interior da cuba cromatogfica de forma a obter uma altura de aproximadamente 1cm. Colocou -se as tiras e papel no interior da cuba, de forma que o eluente ficasse abaixo da linha delimitada por lpis. Tapou -se a cuba e reservou-se at o eluente atingir o top o do papel. Anotaram -se os resultados obtidos.

3.3.2. Cromatografia em camada fina Cortaram-se pequenos pedaos de pimento verde e pesou -se cerca de 30g deste na balana analtica, transferindo posteriormente a amostra para um almofariz. Em um bquer, misturou-se 10 mL de acetona e 50mL de hexano. Transferiu -se uma pequena quantidade desse volume para o almofariz que continha o pimento e macerou -se at a formao de uma pasta homegnea. Aps a formao da pasta, adicionou -se o restante da mistura e reservou-se por 1 hora. Decorrido este tempo, iniciou-se o processo de filtrao comum da mistura, adicionando lentamente esta para que o hexano fosse filtrado primeiro. Transferiu se o filtrado para um funil de separao e separou -se a fase aquosa da fase orgnica. A ps

a separao adicion aram-se 15 mL de gua destilada no funil, agitando e aliviando a presso. Descartou-se novamente a fase aquosa. Repetiu -se novamente a mesma operao. Ao fim desta etapa, coletou-se a fase orgnica em um erlenmeyer e adicionou -se cerca de 2g de sulfato de sdio anidro. Reservou -se por 15 minutos. Decorrido este tempo, filtrou-se a soluo obtida por meio de filtrao comu m. Ao fim deste processo, aqueceu -se o filtrado sobre uma chapa de aquecimento, agitando o bquer sobre esta de for ma que evaporasse cerca de 1mL do volume obtido. Com o auxlio de um capilar, aplicou -se a fase final sobre a placa cromatogrfica e colocou -se esta na cuba cromatogrfica, previamente preparada com soluo de hexano e acetona. Tapou -se o vidro de deixou -se o eluente agir. Anotaram-se os resultados obtidos.

4.

RESULTADOS E DISCUSSES

4.1. Cromatografia em papel A cromatografia em papel consiste em separar os solutos submetidos ao mesmo, por diferena de pro priedades e afinidades da substancia com o solvente orgnico e o solvente polar (gua) que est adsorvido no papel. Aps preparada a cuba cromatogrfica e o pedaos de papel filtro e sulfite com dimenses 7 cm X 4 cm, marcaram-se duas linhas a lpis com espaamento de um centmetro da s bordas do papel, e marcaram-se tambm quatro circunferncias de aproximadamente 0, 3 cm de dimetro com as tonalidades de canetas: azul, marrom, verde e roxo com espaamento de 1,5 cm da borda inferior. Preparou-se o eluente com 7 mL de lcool 92% e 7 mL de gua destilada. A gua que compe o eluente faz parte da fase estacionria junto com o papel , enquanto o solvente orgnico compe a fase mvel. Adicionou-se o eluente a cuba e imergiram-se as extremidades inferiores dos papis filtro e sulfite, tomando cuidado para que a amostra nos papis no entrasse em contato com o solvente. Aps aproximadamente 15 minutos observou -se que o solvente havia se movido at a linha superior do papel filtro.

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Tabela 1: Valores de fator de reteno (Rf) das coloraes que compem as tintas de caneta

COR DE CANETA AZUL ARRON VERDE ROXO

PARTIO AZUL AZUL VER ELHO AZUL A ARELO ROSA AZUL

Rf 0,11 0,04 1 0,11 0,88 1 _

Possivelmete as tintas de caneta roxa e marrrom so compostas por uma mesma substancia, ou substancias de mesmas propriedades , visto que o Rf tem valores aparentemente iguais [3] . As substancias de cor amarela, rosa e vermelho, no fica ram retidas na fase estacionaria por terrem mais afinidades com o solvente solvente organico , sendo arrasradas por ele, ao contrrio da substancia de colorao azul, que desmonstrou-se pouco solvel na fase mvel [2].

4.2. Cromatografia em camada fina Uma placa de camada delgada foi preparada pelo espalhamento de uma suspenso aquosa de slica
[4]

, um slido finamente pulverizado , sobre uma superfcie de um vidro. A

extrao dos pimentes com hexano e acetona, 5:1, forneceu extratos contendo seus principais pigmento s: carotenos, criptoxantinas, capsantinas e capsorubina
[5]

. Esses

extratos foram separados e identificados atravs d e cromatografia de camada fina , e aps serem submetidos a cuba cromatogrfica, por aproximadamente 20 minutos, com o eluente composto por hexano e cetona, 19:1, foi possvel obter os seguintes dados:

Tabela 2: Valores de fator de reteno (Rf) das coloraes de substancias do pimento.

PIMENTO VERDE VER ELHO

PARTIO A ARELO VER ELHO LARANJA

Rf 1 0,6 *
*Valor no mensurado, porm abaixo de 0,6

O processo de movimentao da fas e mvel atravs da fase esttica para a cromatografia de camada delgada similar a o da tcnica anterior, porm nesse caso o processo de movimentao do eluente pode ser chamado de desenvolvimento da placa
[4]

As substancias com Rf prximos de 0 tem carter polar, uma vez que ficam retidas na fase esttica atravs de interaes de hidrognio. Enquanto as substancias que apresentam Rf prximos de 1, tem carter apolar e tendem a serem arrastadas pelo solvente
[5]

. Assim,

com base na tabela, o corante amarelo que compe uma das cores do pimento menos polar que as substancias que compem a colorao vermelha do mesmo.

5.

CONCLUSO A cromatografia uma tcnica muito empregada em indstrias de medicamentos e em

laboratrios clnicos devido ao baixo custo e a rapidez com que a separao e identificao de compostos podem ser feitas. A separao de compostos acontece pela diferena de solubilidade dos componentes da amostra com a fase mvel e estacionria. Assim, atravs da cromatografia em papel pode-se separar os componentes das tintas de caneta e determinar o fator de reteno de cada substancia. Analogamente, porm em cromatografia de camada delgada, obtiveram-se os Rfs dos componentes das coloraes dos pimentes. Foi possvel perceber que em ambos os materiais (tinta de caneta e colorao dos pimentes respectivamente) a movimentao das coloraes semelhantes aconteceram de forma parecida, porm essas no tem semelhanas de composio, visto que uma sinttica (tintas de caneta) e outra orgnica (corantes dos pimentes) .

6.

QUESTES

a. Com base no experimento realizado responda as seguintes questes: i. Apresente o desenho do cromatograma e diga quantos componentes foram detectados em cada amostra aplicada? R: Quanto as substancias componentes da s tintas de caneta: Amostra de tinta azul: 1 componente ; Amostra de tinta marrom: 2 componentes ; Amostra de tinta verde: 2 componentes ; Amostra de tinta roxa: 2 componentes; Amostra de pimento verde: 2 componentes Amostra de pimento vermelho: 2 componentes

ii. Determine o Rf para todas as substancias utilizadas no experimento. R: COR DE CANETA AZUL ARRON VERDE ROXO PARTIO AZUL AZUL VER ELHO AZUL A ARELO ROSA AZUL Rf 0,11 0,04 1 0,11 0,88 1 _

PIMENTO VERDE VER ELHO

PARTIO A ARELO VER ELHO LARANJA

Rf 1 * 0,6
*Valor no mensurado, porm abaixo de 0,6

iii. O que voc pode inferir inequivocadamente sobre as amostras de pimento vermelho e verde? Explique.

R: Que as substancias de colorao avermelhadas com Rfs menores de 0,6 so as mais polares, e predominam nessa partio as caspantina s, capsorubina e xantofilas polares. As substancias de cor laranja so um pouco menos polares, e apresentam Rf maior que 0,6, sendo as substancias predominantes nessa partio as criptoxantinas e xantofila s menos polares. As substancias de colorao amarela tendem a serem apolares, uma vez que apresentam Rfs muito prximos ou iguais a 1, predominando nessa partio os carotenos.

iv. Supondo que voc precisa emitir um parecer tcnico em relao s amostras anal isadas, com base na tcnica empregada e nas literaturas que falam sobre a composio do pimento, o que voc poderia inferir no seu parecer? R: Comparando os resultados com os formulrios de especificaes do fabricante, pode -se inferir que a tcnica empregada eficiente para ser utilizada em emisses de parecer tcnico, pois reproduz valores compatveis com o s existentes em literaturas tcnicas. Ver:

http://www.lasallista.edu.co/fxcul/media/pdf/RevistaLimpia/Vol4n1/17-26.pdf.

b. Sobre a tcnica cromatografia em camada delgada, responda: i. Quais os fundamentos bsicos? Cite o uso mais consagrado dessa tcnica.

R: Cromatografia uma tcnica utilizada para a separao e identificao dos componentes de uma mistura. A separao cromatogrfica baseada na distribuio dos componentes entre uma fase estacionria e uma fase mvel. Esta separao resulta das diferenas de velocidade dos componentes arrastados pela fase mvel devido com a fase estacionria . Na cromatografia em camada delgada (TLC), a fase estacionria uma camada fina formada por um slido granulado (slica, alumina, poliamida, etc.) depositado sobre uma placa de vidro, ou outro suporte inerte. Pequenas gotas de soluo das amostras a serem analisadas so aplicadas em um ponto prximo ao extremo inferior da placa. Deixa -se a placa secar e, ento coloca -se a mesma em um recepiente contendo a fase mvel (solvente ou mistura de solventes). A polaridade do solvente dever ser de acordo com a substncia s diferentes interaes

que se deseja separar. Como somente a base da placa fica submersa, o solvente comea a molhar a fase estacionria e subir por capilaridade. A cromatografia em camada delgada uma a tcnica de uso geral na indstria de medicamentos para todas as determinaes de pureza de produtos. Tambm encontra ampla utilizao nos laboratrios clnicos e sustenta de muitos estudos bioqumicos e biolgicos.

i.

Enumere as vantagens e as desvantagens da tcnica.

R: As vantagens de se empregar esse procedimento so a velocidade e o baixo custo dos experimentos exploratrios em camada delgada. As desvantagens so o alargamento da banda, o uso limitado, a degradao de compostos devido e a dificuldade na quantificao. ii. Que caractersticas deve ter um solvente para ser considerado um bom eluente de desenvolvimento? R: A fase mvel geralmente constituda por uma mistura de solventes. Como a fase estacionaria extremamente polar, o solvente no pode ser apolar ou pouco polar , pois poderia no remover os compostos nos pontos de aplicao. O solvente tambm no poderia ser polar porque no conseguiria remove r o soluto da fase estacionaria. grande superfcie de exposio

iii.

Que artifcios podemos utilizar quando suspeitamos que os componentes da amostra no pode ser visualizada a olho nu?

Quando a amostra na placa no pode ser visualizada a olho nu, esta exposta a vapores de iodo, pois quase todas as classes de substncias orgnicas (exceto alcanos e haletos alifticos) formam complexos de transferncia de carga com o iodo. Estes complexos revelam-se como manchas marrom. E ficaram tanto mais escuras quanto maior o tempo de exposio e a concentrao da amostra.

7.

REFERNCIAS

[1] PERES, T. B. Noes Bsicas de Cromatografia. Revista Biolgico, So Paulo, v.64, n.2, p.227-229, 2002. Disponvel em:

<http://www.biologico.sp.gov.br/docs/bio/v64_2/peres.pdf>. Acesso em: 05 de junho de 2011.

[2] DEGANI, A. L. G.; CASS, Q. B.; VIEIRA, P. C. Cromatografia: um breve ensaio. Revista Qumica Nova Na Escola. Cromatografia N 7, 1998.

[3] FRACETO, L. F.; LI A, S. L. T. de. Aplicao da cromatografia em papel na separao de corantes de pastilhas de ch ocolate. Revista Qumica Nova Na Escola n 18, 2003. Disponvel em: <http://qnesc.sbq.org.br/online/qnesc18/ >. Acessado em 08 de jun de 2011.

[4] SKOOG, D. A. Fundamentos de qumica analtica. So Paulo: Pioneira Thomson Learning, 2006.

[5] RIBEIRO, N.

.; NUNES, C. R. Anlise de Pigmentos de Pimentes por

Cromatografia em Papel. Revista Qumica Nova na Escola So Paulo, n. 29, p. 34 -37, 2008.