cIDO lINOlIcO cONjuGADO / clA

CIDO LINOLICO CONJUGADO

O cido linolico conjugado, em ingls Conjugated Linoleic Acid, ou CLA, refere-se a uma famlia composta por alguns ismeros do cido linolico. Encontram-se principalmente na carne e em produtos lcteos oriundos de ruminantes.
INTRODuO
cido linolico conjugado (CLA) o nome dado ao grupo de ismeros posicionais e geomtricos do cido octadecadienico (18:2). As duplas ligaes no CLA so conjugadas e no separadas por um grupo metileno (-CH2-), como no cido linolico (LA, 18:2n-6), um cido graxo essencial. O CLA no substitui o LA como um cido graxo essencial. Os ismeros do CLA ocorrem naturalmente em alimentos derivados de animais ruminantes (vaca, cordeiro, etc.), devido ao processo de biohidrogenao bacteriana do LA, que est presente nos alimentos destes animais, no rmen. O CLA tambm encontrado naturalmente em uma variedade de outros produtos alimentcios, no oriundos de animais ruminantes, tais como mariscos, perus e leos vegetais. As gorduras e as carnes de animais ruminantes so as mais ricas fontes naturais de ismeros do CLA. Esses ismeros so encontrados em miligramas por grama de gordura nas carnes de cordeiro, vitela e gado. As maiores concentraes de CLA nos alimentos so encontradas em diversos produtos lcteos. Na maioria dos casos, o ismero cis-9, trans-11, ainda chamado de cido rumnico, o ismero predominante do CLA encontrado em alimentos, exceto nos leos vegetais que podem conter vrios outros ismeros. Estimativas de necessidade de ingesto de CLA variam de 0,3 a 1,5g/pessoa/dia, dependendo do sexo e da ingesto de alimentos de origem animal e vegetal. A presena de CLA em gorduras lcteas conhecida h anos. A descoberta de que o CLA isolado da carne grelhada inibe o cncer quimicamente induzido chamou a ateno da comunidade cientfica e, por isso, passou-se a estudar suas propriedades fsicas e biolgicas. A ampla literatura sobre o CLA sugere que estes cidos graxos isometricamente conjugados possuem potentes atividades bioqumicas e fisiolgicas que podem beneficiar a sade humana e proteger contra doenas crnicas.

CLA
OU

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QumIcA E NOmENclATuRA
A sigla CLA usada para descrever uma famlia de ismeros do cido octadecadienico (18:2), que possui um par de ligaes duplas conjugadas ao longo da cadeia alquila. Teoricamente, as ligaes duplas podem existir em qualquer local dos carbonos C2 a C18, para produzir inmeras estruturas possveis de ismeros. Foram relatadas formas isomricas de cido octadecadienico contendo ligaes duplas conjugadas nas posies 7,9; 8,10; 9,11; 10,12; 11,13; e 12,14 (contando a partir do final carboxila da molcula), em misturas de CLA quimicamente preparadas ou em produtos naturais. Cada um dos referidos ismeros posicionais de dienos conjugados pode ocorrer em uma ou mais das quatro seguintes configuraes geomtricas: cis-trans; trans-cis; cis-cis; ou trans-trans, o que daria 24 possveis ismeros de CLA. Muitos desses ismeros esto contidos em preparaes comercialmente disponveis de suplementos de CLA, produzidas sob condies alcalinas, a partir de leos vegetais contendo alta concentrao de LA (girassol e crtamo). O ismero mais comum de CLA encontrado na carne de ruminantes e em produtos alimentcios de leite bovino o cido octadeca-c9, t11dienico. A presena de componentes secundrios, como os ismeros t7, c9, t8, c10, t10, c12, t11, c13, e t12,t14, e seus ismeros cis,cis, trans,trans, tambm foram encontrados em produtos naturais. Dois nomes triviais foram propostos para o ismero c9,t11, cido bovnico e cido rumnico. O nome cido bovnico foi considerado demasiado restritivo para o CLA, porque o ismero c9,t11 no produzido somente no rmen bovino, mas produzido tambm por outros animais ruminantes pelo mesmo mecanismo. O nome cido rumnico recebeu maior aceitao, sendo encontrado repetidas vezes na literatura tcnica relativa ao assunto. A ocorrncia natural de CLA na carne de ruminantes e em laticnios

ESTRUTURA DOS ISMEROS 1) CLA (10t,12c) 2) CLA (9c,11t) 3) cido linolico (C18:2 (9c, 12c))

pode ser formada por isomerizao bacteriana do LA e, possivelmente, cido -linolnico de gros e plantas forrageiras para c9,t11 18:2 no rmen desses animais. O CLA tambm pode ser formado durante o cozimento e processamento de alimentos. O pesquisador Yeong L. H, do Food Research Institute, da University of Wisconsin-Madison, e seus colegas, mediram o teor de CLA em queijos processados e sugeriram que a formao do CLA proveniente de uma oxidao por radicais livres do LA, que pode ter sido afetada pelo envelhecimento, tratamento trmico e/ou qualidade da protena. Segundo esta hiptese, os radicais alila so produzidos a partir da oxidao do LA em lipdios de glicerol, incluindo fosfolipdios, durante o tratamento trmico em condies anaerbias. O CLA derivado aps a estabilizao dos radicais alila por reprotonao das protenas, atuando como doadores de hidrognio.

AlImENTOS ENRIQuEcIDOS cOm clA

Atualmente, o consumo humano estimado de CLA, pela dieta normal, no suficiente para exercer o potencial benfico bioqumico, mo-

modifique um pouco o contedo de CLA, essa variao relativamente pequena em comparao com a grande variao natural encontrada principalmente nos produtos lcteos. Vrios fatores, tais como o tipo de alimentao (fator nutricional), estao do ano, variao gentica, e fatores de gesto podem influenciar

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lecular e fisiolgico contra o cncer, aterosclerose e obesidade, com base em estudos com diversos animais. Estima-se, com base em estudo efetuado em ratos, que um homem com peso de 70 kg deve consumir 3,0g de CLA/dia para usufruir de seus efeitos benficos. Portanto, os benefcios sade que o CLA pode promover s sero alcanados com a ingesto de complementos alimentares ou alteraes na qualidade e tipo de alimentos ingeridos. Uma vez que os suplementos so menos apreciados do que os prprios alimentos como fonte de nutrientes, nutracuticos e fitoqumicos, uma abordagem muito melhor seria o aumento da ingesto de CLA pelo enriquecimento de alimentos com CLA. A primeira abordagem , obviamente, consumir mais alimentos ricos em CLA. A segunda aumentar o teor de CLA em ovos, leite e carnes de origem animal. uma abordagem mais prtica, uma vez que no depende de mudanas nas prticas alimentares e no ir elevar o consumo dirio de colesterol e gordura saturada. Aumentar o teor de CLA de produtos alimentcios, como o leite e a carne, tambm tem potencial de aumentar o seu valor nutricional e teraputico, e pode ter um peso mercadolgico aprecivel, acrescentando valor a produtos tradicionais. O contedo de CLA nos alimentos afetado por vrios fatores, durante todas as fases, do campo at o seu consumo, incluindo a produo de matrias-primas, processamento, embalagem, armazenamento e preparo dos alimentos antes de servir. O teor original de CLA da matriaprima determinado no momento da coleta ou aps um processamento mnimo. Embora o posterior processamento, armazenamento e preparo

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TEOR DE CLA EM ALIMEnTOS nO COzIDOS Alimento Carne bovina moda Lingia bovina defumada Carne de vitela Carne de cordeiro Carne de porco Frango Carne de peru moda Frutos do mar Salmo Truta Camaro Leite homogeneizado Manteiga Coalhada Iogurte natural Sorvete Queijo Cheddar Queijo Mussarela *n.d. no detectvel. Fonte: (10). Queijo Cottage Algodo Girassol Canola Milho 0,3 0,5 0,6 Laticnios 5,5 4,7 4,6 4,8 3,6 3,6 4,9 4,5 leos vegetais 0,7 0,4 0,5 0,2 44 38 44 39 92 88 90 84 86 93 95 83 n.d*. n.d.* n.d.* Total de CLA (mg/g de gordura) Carnes 4,3 3,8 2,7 5,6 0,6 Aves domsticas 0,9 2,5 84 76 85 84 84 92 82 Ismero 9c, 11t (%)

CLA tambm pode agir no controle da obesidade, na reduo do risco de diabetes, e na modulao do metabolismo sseo. Alguns estudos indicam que os efeitos biolgicos do CLA so influenciados pela dieta e, particularmente, a ingesto de cidos graxos n-3 de cadeia longa. Intensas pesquisas tm sido realizadas para determinar as propriedades anticarcinognicas do CLA. Foi observado que os ismeros do CLA reduziam a tumorignese induzida quimicamente em glndula mamria e no clon de ratos. Fontes de CLA tambm inibiram o crescimento das clulas tumorais humanas, em cultura e em imunodeficincia combinada severa (SCID).

O clA E O cNcER
Experimentos em animais tm sistematicamente mostrado que o CLA promove benefcios para a sade - anticarcinognico, antiaterosclertico, antidiabtico -, melhoria do sistema imune e provoca aumento da massa muscular com diminuio da massa gordurosa. O CLA de ocorrncia natural (9c,11t-18:2) est mais relacionado com a preveno do cncer enquanto que o sinttico (10c,12t-18:2) com as mudanas da composio corporal. A pesquisadora francesa Anne de La Torre, em 2006, estudou as propriedades antitumorais das misturas de CLA provenientes de produtos originrios dos ruminantes. Foram estudados os efeitos antiproliferativos in vitro de uma mistura de CLA originaria da carne de boi, em culturas de clulas de cncer de mama, pulmo, clon, melanoma e ovrio. As clulas foram expostas a apenas 100 micromoles de CLA durante 48 horas e a proliferao foi determinada pelo contedo de DNA na cultura. Constatou-se reduo da proliferao celular, variando de 25 a 67% dependendo da linhagem celular neoplsica. O efeito antiproliferativo variou com a posio e configurao das duplas ligaes. O ismero do CLA mais potente foi o ismero natural (9c,11t-18:2). O autor concluiu

na concentrao de CLA na gordura de ruminantes, produtos crneos e laticnios.

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AES bIOlGIcAS E OS pOTENcIAIS bENEfcIOS SADE DO clA

O CLA o nico antioxidante e anticarcinognico associado a alimentos de origem animal. Yeong L. H e sua equipe foram os primeiros a observar que o CLA da carne apresentava efeito protetor contra o cncer quimicamente induzido. Nesse estudo, o CLA isolado a partir de extratos de carne moda grelhada

reduziu os tumores de pele, em ratos com carcinognese quimicamente induzida pelo 9,10-dimetil-1,2-benzantraceno (DMBA), um conhecido agente cancergeno. Desde ento, diversos pesquisadores tm relatado os potenciais benefcios sade e os efeitos biolgicos dos ismeros de CLA. As pesquisas sobre o CLA se basearam quase que inteiramente em modelos com animais e vrios sistemas de cultura de clulas, empregando misturas de ismeros de CLA. As propriedades do CLA incluem efeitos anticarcinognicos e antiaterosclerticos. Outros efeitos do CLA so sua ao antioxidante e imunomodulatria. Dados preliminares mais recentes sugerem que o

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que as misturas de CLA derivadas da carne bovina inibem a proliferao celular de vrias linhagens de cncer humano. Cncer de clon. Laticnios com elevado teor de gordura contm quantidades razoveis do agente anticarcinognico CLA. Em estudo envolvendo 60.708 mulheres com idade variando entre 40 e 76 anos, verificou-se o consumo de laticnios com alto teor de gordura por meio de questionrios e dosagens. No perodo de 15 anos diagnosticou-se 798 casos de cncer colo-retal. As mulheres que consumiam quatro ou mais pores de laticnios com alto teor de gordura (leite integral, manteiga, creme de leite, creme azedo, coalhada de leite integral) apresentaram risco significantemente menor deste cncer, quando comparadas com as mulheres que consumiam apenas uma poro destes produtos lcteos. Cada incremento de duas pores de produtos lcteos com alto teor de gordura corresponderam a 13% de reduo do risco de cncer colo-retal. Os cidos biliares funcionam como promotores do cncer de clon, ativando a protena com alto teor de gordura quinase C (PKC) e o fator de transcrio nuclear NF-B. Pesquisadores do Montagu Hospital,

em Mexborough, UK, mostraram, em 2006, que o tratamento de longo prazo com CLA inibe a ativao da protena quinase C (PKC) e a ativao do NF-B provocada pelo cido biliar mais importante, o cido deoxiclico (DOA). O tratamento agudo no possui efeito. O CLA tambm previne o cncer de clon por diminuir a expresso do gene APC--cateninaTCF-4 e por diminuir a sinalizao do PPAR-.
Nf-b (fator nuclear kappa b) um complexo protico que desempenha funes como fator de transcrio. NF-B pode ser encontrado em quase todos os tipos de clulas animais e est envolvido na resposta celular a estmulos, como o estresse, citocinas, radicais livres, radiao ultravioleta, oxidao de LDL e antignios virais e bacterianos. NF-B desempenha um papel fundamental na regulao da resposta imunitria infeco. Consistente com este papel, a regulao incorreta de NF-B tem sido ligada ao cancro, a doenas inflamatrias e auto-imunes, choque sptico, infeco viral e tambm a desenvolvimento imunitrio imprprio. NF-B tambm tem sido implicado em processos de plasticidade sinptica e memria.

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A ampla literatura sobre o CLA sugere que estes cidos graxos isometricamente conjugados possuem potentes atividades bioqumicas e fisiolgicas que podem beneficiar a sade humana e proteger contra doenas crnicas.

O NAG-1 (Non-steroidal Anti-inflammatory drug-activated Gene-1) pode ser induzido por vrios componentes da dieta e pertence superfamlia dos TGF-, genes associados com a atividade antitumoral e com a apoptose. O ismero sinttico do CLA capaz de induzir a expresso do gene antitumoral NAG-1 em clulas do cncer colo-retal. O ismero natural do CLA no apresenta este efeito. O CLA reduziu a incidncia de tumor de clon em rato provocado pelo carcingeno qumico dimetilhidrazina (DMH). Estudos in vitro mostraram que o ismero sinttico (10t,12c) inibe a proliferao de clulas do cncer de clon humano HT-29 e Caco-2 , enquanto que o ismero natural (9c,11t) no possui nenhum efeito. O tratamento das clulas do cncer de clon humano com o ismero sinttico aumentou substancialmente a expresso protica e o acmulo de RNA mensageiro do CDK inibidor p21 (CIP1/WAF1) e diminuiu a fosforilao da protena retinoblastoma, fatores que provocaram a parada do ciclo celular na fase G1. No houve mudanas da ciclina A, ciclina D, ciclina E e das CDK2 e CDK4, ciclinas dependentes da quinase 2 e 4 . A proliferao de clulas MKN28 do cncer gstrico humano e clulas Colo320 do cncer de clon humano foram suprimidas pelo CLA de uma maneira dose-dependente e observou-se aumento da apoptose. O CLA inibiu significantemente a invaso da membrana coberta por colgeno tipo IV destes dois tipos de clulas malignas, firmando seu papel como antimetasttico. O tratamento com CLA diminuiu significantemente os focos de metstases e aumentou a sobrevida dos camundongos inoculados com estes dois tipos de tumores. Deste experimento concluiu-se que o CLA inibe metstases de cncer gstrico e de cncer de clon. O ismero sinttico, mas no o natural, inibe a sntese de DNA e induz apoptose em clulas HT-29 do cncer de clon humano. Tal ismero diminui os nveis de Erb1, Erb2 e Erb3 de uma maneira dose-dependente

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Estima-se, com base em estudos efetuados em ratos, que um homem com peso de 70 kg deve consumir 3,0g de CLA/dia para usufruir de seus efeitos benficos. Portanto, os benefcios sade que o CLA pode promover s sero alcanados com a ingesto de complementos alimentares ou alteraes na qualidade e tipo de alimentos ingeridos.

o que leva a inibio da ativao da via Akt. A via Akt proliferativa. O PPAR- possui atividade antineoplsica e sua ativao reduz a inflamao do epitlio, diminuindo o risco de cncer de clon. A sua ativao pelos CLAs naturais ou sintticos induz muitas linhagens de clulas cancerosas humanas a se diferenciarem, isto , o fentipo maligno reverte para fentipo normal. Cncer de mama. Enquanto o cido linolico (LA) exerce diferentes efeitos na carcinognese, indo da inibio a neutro ou mesmo promovendo a proliferao, o CLA sempre mostra efeitos inibitrios sobre a proliferao celular maligna em todas as linhagens de clulas cancerosas humanas testadas (clon, mama, prstata, fgado, bexiga, glioblastoma) e ele particularmente eficaz contra as clulas mais malignas. No cncer de mama o contrrio, quanto mais maligno menor o seu efeito. O mecanismo de ao principal do CLA em todas essas linhagens de clulas foi aumentar muito o PPAR- e diminuir o PPAR-/, o que provoca apoptose ou necrose das clulas

malignas. Quando o PPAR- diminuiu houve drstica queda da proliferao celular maligna. Robert T. Dauchy, pesquisador chefe e diretor do laboratrio de oncologia crono-neuroendocrina do Bassett Healthcare Institute, em Cooperstown, NY, relatou, em 2006, que os agentes anticncer, melatonina, cido eicosapentaenico (EPA) e o CLA inibem a proliferao de vrios tumores animais, suprimindo a captao tumoral de cido linolico, principal cido graxo promotor da proliferao celular maligna, e diminuindo a produo do agente mittico cido 13-hidroxi-octadecadienico (13-HODE). Usando um elegante modelo de perfuso de tumor de mama humano (MCF7) implantado em camundongo, o autor mostrou que a captao de cido linolico pelo tumor era de 1,06+/-0,28 microgramas/min/g e que a produo de 13-HODE era de 1,38+/-0,02 nanogramas/min/g de tecido tumoral. Tanto a captao de cido linolico como a produo de 13-HODE caiu a zero em 5 minutos de perfuso quando se utilizou em separado cada um dos agentes, me-

latonina, EPA ou CLA. Em clulas do cncer de mama no responsivo a estrgenos (MDAMB-231) o CLA provocou reduo da proliferao celular com acmulo de clulas na fase S do ciclo celular e apoptose. Verificou-se reduo da ERK1/2 e aumento da protena pr-apopttica Bak. Estes eventos se associaram com a diminuio dos nveis da protena antiapopttica Bclx(L), translocao do citocromo c da mitocondria para o citoplasma e da clivagem da pr-caspase-9 e da pr-caspase-3, todos fatores envolvidos com a via mitocondrial de apoptose. Em clulas do cncer de mama humano responsivas aos estrgenos (MCF-7 ER+) o CLA possui uma atividade antiestrognica direta. O CLA 9cis,11cis e, com menor efeito, o 9cis,11trans, diminui a expresso do ERalfa a nvel de RNA mensageiro e de protena. Clulas MCF-7 do cncer de mama humano foram submetidas a concentraes crescentes do ismero natural do CLA: 25, 50, 100 e 200 micromole/l e o autor observou inibies tambm crescentes da proliferao celular, respectivamente: 6%, 45%, 99% e 99,4%. Tambm houve aumento crescente da apoptose. As clulas MCF-7 normalmente apresentam diminuio da expresso da protena p53. Quando foram submetidas ao CLA houve drstico aumento da protena p53 que pr-apopttica. Sabe-se que o CLA protege as mulheres do cncer de mama. O CLA inibe a proliferao de clulas MCF-7 do cncer de mama de um modo concentrao dependente e tempo dependente. O CLA diminui a produo de Raf-1 e assim diminui os nveis de fosfo-ERK1/2 ( ERK1/2 i.e. Extracelular signal-Regulated Kinase 1/2), diminui a expresso do c-mic e aumenta a expresso do PP2A (Protein Phosphatase 2A). Neste processo a PP2A participa na desativao ou diminuio da atividade do ERK1/2, sendo este um novo mecanismo de ao do CLA como antiproliferativo. O aumento da expresso da ciclooxigenase-2 (COX-2) um dos fatores

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que inicia a formao de tumores de mama. Clulas MCF-7 do tumor de mama humano tratadas com CL A apresentam atenuao da transcrio da COX-2 induzida por agentes inflamatrios, via reduo da ativao do AP-1 (Activator Protein-1). O ismero sinttico mais eficaz do que o natural. O cido linolico provoca efeitos inversos, isto , ele aumenta a ativao do AP-1 e, conseqentemente, acentua a transcrio da COX-2 e aumenta a produo do tumor de mama. O cido 5-hidroxi-eicosatetraenico (5-HETE) derivado da via lipoxigenase das prostaglandinas e est implicado na carcinognese mamaria. Os CLAs, tanto o sinttico como o natural, reduzem a produo de 5-HETE em clulas MDAMB-231 do cncer de mama humano. A protena tirosina fosfatase gama (PTPgama) conhecida como um gene supressor de tumores de pulmo e de rim. O estradiol induz a supresso do PTPgama e pode provocar o aparecimento de tumores de mama. Estudando tecido mamrio retirado de neoplasias ou de cirurgias plsticas, observou-se que a expresso do PTPgama menor no tecido com cncer do que no tecido mamrio normal. Os dois principais ismeros do CLA aumentam significativamente os nveis do RNAm do PTPgama em clulas do estroma normais e em clulas malignas epiteliais, porm no em clulas malignas do estroma. O ismero sinttico o mais ativo. O VEGF-A (Vascular Endothelial Growth Factor-A) um fator promotor da neoangiognese ativada por cininas. Em clulas MCF-7 do estroma do cncer de mama humano, o CLA diminuiu significantemente o RNAm do VEGF-A e os seus nveis de protenas, isto , diminuiu a expresso do VEGF-A. O autor concluiu que o CLA da dieta (produtos de ruminantes e laticnios) serve como agente quimiopreventivo no cncer de mama humano, diminuindo a expresso de agente promotor da neoangiognese maligna, o VEGF-A Na fase de proliferao, o estres-

se oxidativo dobra a incorporao do CLA nas clulas do adenocarcinoma mamrio (MCF-7) e reduz a incorporao nas clulas mamrias normais. O CLA provoca nas clulas tumorais o aumento da expresso do 4-hidroxi-2-nonenal (4HNE), produto da lipoperoxidao e diminui a proliferao das clulas malignas. A diminuio da proliferao induzida pelo CLA coincide com o aumento da ativao da protena p53, agente prapopttico. Pode ser que o aumento da p53 observado seja secundrio ao estresse oxidativo. Ratos com cncer de mama alimentados com manteiga rica em 9c,11t-CLA por 4 semanas apresentaram reduo da expresso das ciclinas D e A do epitlio mamrio, que so protenas-chaves envolvidas, a primeira, na facilitao da entrada das clulas no ciclo celular, e a segunda, na progresso para a fase S de sntese de DNA . O CLA tambm afeta outras ciclinas e as CDKs (Cyclin-Dependent Kinases) do ciclo celular. Cncer de prstata. Em clulas do cncer de prstata LNCap, o CLA natural, mas no o sinttico, aumenta significantemente a apoptose provocada pelo TNF- o que se correlaciona com a reduo da atividade transcripcional do NF-B (35%), a diminuio da atividade ligadora do NF-B (15%) e a diminuio da fosforilao do I-kappaB-alfa (36%). Outro mecanismo do CLA aumentando a apoptose e diminuindo a proliferao do cncer de prstata aumentando a protena quinase- (PKC- ) e diminuindo a PKC-. Foi mostrado em clulas PC-3 do cncer de prstata humano que o CLA diminui a expresso do gene Bcl-2 e aumenta o inibidor do ciclo celular, p21(WAF1/Cip1). O ismero sinttico o mais potente provocando 55% da inibio proliferativa. Cncer de crebro. O CLA modula o metabolismo lipdico atravs da ativao dos receptores do PPAR (Peroxisome Proliferator-Activated Receptors). A famlia dos PPAR

constituda por 3 genes intimamente relacionados, PPAR alfa, beta/delta e gama. A ativao do PPAR-gama provoca inibio da proliferao celular e a diferenciao de clulas transformadas. O glioblastoma multiforme, tumor freqente do crebro, pouco sensvel quimioterapia. Sabe-se que o CLA e os agonistas do PPAR-gama inibem fortemente o crescimento celular e a velocidade de proliferao tumoral e induzem apoptose. Ademais, os dois elementos diminuem a migrao celular e a invasividade tumoral. Demonstrou-se que o CLA, direta ou indiretamente, funciona como agonista do PPAR-gama, sugerindo que este cido graxo possa ser usado no tratamento dos tumores cerebrais como coadjuvante do tratamento convencional ou para diminuir as recorrncias. Como concluso pode-se dizer que muitos estudos em animais e in vitro revelam o valor do CLA como potente agente antiproliferativo e apopttico em todas as linhagens de clulas tumorais humanas que foram testadas. Os diferentes tipos de mecanismos de ao mostram que o CLA, por ser muito verstil, em breve poder se constituir em importante droga coadjuvante no tratamento do cncer humano.

clA E DOENAS cARDIOVASculARES

Os benefcios potenciais para a sade do CLA incluem a preveno de doenas cardiovasculares congestivas, uma vez que foi mostrado que estes ismeros de cidos graxos reduzem a aterognese, em estudos com animais. Esses estudos avaliaram o efeito do CLA sobre a aterosclerose em coelhos, que receberam uma suplementao de 0,5g/animal/dia durante 22 semanas. Comparado com os coelhos do grupo controle, que receberam uma dieta semelhante contendo 14% de gordura e 0,1% de colesterol, sem CLA, o colesterol total e LDL, bem como os nveis de triglicrides no sangue foram significativamente inferiores nos coelhos

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que receberam a suplementao com CLA. Ao mesmo tempo, as relaes LDL/HDL e colesterol total/ HDL foram significativamente reduzidos no grupo que recebeu CLA. Os coelhos que receberam CLA tambm mostraram menos aterosclerose na aorta. Em outro estudo, examinou-se os efeitos do CLA sobre as lipoprotenas plasmticas e aterosclerose da aorta. No estudo, 50 hamsters foram distribudos em cinco grupos de 10 e receberam 0% (controle), 0,06% (baixo), 0,11% (mdio) e 1,1% (alto) da dieta total de CLA, ou 1,1% da dieta total de LA. Animais que receberam a dieta contendo CLA tiveram significativa reduo dos nveis de colesterol plasmticos total, colesterol no-HDL (combinado com lipoprotenas de baixa densidade ou VLDL e LDL) e triacilgliceris, com nenhum efeito sobre o colesterol HDL, quando comparados com os controles. A anlise morfomtrica da aorta revelou um aparecimento mais tardio de aterosclerose nos hamsters que tiveram suplementao com CLA, em comparao ao grupo controle. Curiosamente, nesse estudo, o tratamento com LA mostrou um efeito semelhante em comparao com o tratamento com CLA. Esses dois estudos levaram a concluso que o CLA tinha efeito hipocolesterolmico e antiaterognico. No entanto, um estudo recente com camundongos C57BL/6, utilizando dietas aterognicas com adio de 0,5% e 0,25% CLA, mostrou aumento do desenvolvimento de estrias gordurosas na aorta, apesar de uma mudana do perfil das lipoprotenas sricas, que poderia ser considerada menos aterognico. Embora seja evidente que o CLA exerce efeitos benficos sade em animais na melhora do metabolismo plasmtico de lipoprotenas e na preveno de aterosclerose, no h informaes suficientes sobre seus efeitos em humanos, tornando difcil predizer os efeitos da suplementao com CLA em longo prazo. Alm disso, os estudos com CLA em humanos so difceis de interpretar porque

utilizam diferentes parmetros de medio e h variao nas dosagens, durao da administrao e caractersticas individuais dos objetos de estudo (idade, grau de obesidade, padres de dieta, nvel de atividade fsica). A suplementao com ismeros de CLA pode apresentar benefcios ou riscos sade humana, portanto mais estudos controlados, usando ismeros de CLA, precisam ser realizados para determinar sua segurana e eficcia, antes de serem recomendados. Alm disso, o CLA mostrou ter efeito positivo sobre a aterosclerose em coelhos, mas no em camundongos, o que pode indicar uma diferena de espcies para a resposta suplementao de CLA na dieta.

O clA E O mETAbOlISmO DA GORDuRA cORpORAl E DE lIpDIOS

Numerosos estudos com animais sugerem que o CLA pode reduzir a deposio de gordura e o aumento da massa corporal magra. Quando foi dado CLA (0,5% a 1% da dieta) a ratos do sexo masculino AKR/J (com 39 dias de idade), houve uma rpida e acentuada diminuio da acumulao de gordura e um aumento no acmulo de protenas, sem maiores efeitos sobre o consumo alimentar. Em outro estudo, foi dada uma dieta com menor nvel de CLA (5% de leo de milho + 0,5% de CLA) para camundongos de seis semanas, do tipo ICR; observou-se uma reduo significativa no contedo de gordura corporal de 57% (machos) e 60% (fmeas), bem como aumento da massa magra, em relao aos ratos do grupo controle que somente receberam 5,5% de leo de milho. Efeitos similares foram observados tambm em ratos. O reparticionamento de gordura para massa magra tambm foi observado em sunos em crescimento. Porm, os estudos em humanos

no indicaram a mesma eficincia obtida em animais. Veja o exemplo do estudo publicado por Blankson et. al. em dezembro de 2000, no qual, os autores analisaram o efeito do CLA na reduo da gordura em seres humanos obesos, usando para avaliao corporal o Dual-Energy X-ray Absorptiometry (DEXA). Depois de 12 semanas o grupo que utilizou CLA (3,4 g/d) teve uma reduo significativa da gordura corporal, comparado com o grupo placebo, porm no relataram alteraes na massa corporal magra. Nesse estudo, o CLA se mostrou eficiente para reduzir a gordura corporal em seres humanos obesos. Os resultados pareciam prometedores, porm a amostra era relativamente pequena e isto, em cincia, pode ser considerado um fator limitante em concluses gerais. Os efeitos do CLA em seres humanos com obesidade abdominal foram investigados durante quatro semana, no qual 24 homens obesos com sndrome metablica fizeram parte da amostra. Catorze deles receberam 4,2 g CLA/d e 10 receberam placebo. Ao trmino do estudo verificou-se uma significativa reduo no permetro abdominal com a suplementao de CLA, porm outras medidas antropomtricas no mostraram nenhuma diferena significativa entre os grupos. Os resultados indicaram que a suplementao de CLA por 4 semanas em homens obesos com sndrome metablica pode diminuir a gordura abdominal. Mas por que ser que as outras medidas no diminuram? J em indivduos de peso normal que se exercitavam regularmente o CLA no se mostrou eficaz na reduo da gordura corporal. Novamente, Blankson et. al. (2000) analisou 66 indivduos obesos (com IMC acima de 25-35 kg/m2) divididos em cinco grupos: 1) placebo (9g de leo de oliva), 2) 1,7g de CLA, 3) 3.4g de CLA, 4) 5.1g de CLA e 5) 6.8 g de CLA. Ao final de 12 semanas, todos os grupos que receberam CLA apresentaram reduo significativa do percentual de gordura, em

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comparao com o grupo placebo e dentre os grupos que receberam CLA a reduo da gordura corporal foi significativamente maior nos grupos que receberam 3,4 e 6,8 gramas por dia, sugerindo que doses dirias acima de 3,4 gramas de CLA so desnecessrias. Acredita-se que a suplementao com CLA promova modificaes na membrana do tecido adiposo, alterando assim a expresso gnica do adipcito, atravs da diminuio da atividade da enzima stearoylCoA desaturase. Outra hiptese que os efeitos do CLA sobre a composio corporal podem estar relacionados reduo do tecido adiposo pelo aumento da liplise. Os melhores resultados em humanos na diminuio da gordura corporal aconteceram naqueles que tinham deficincia de CLA no organismo, como por exemplo pessoas vegetarianas. Os obesos tambm conseguiram melhores resultados no uso do cido linolico conjugado na reduo da gordura corporal. No Brasil, a ANVISA, no dia 29/03/2007, publiclou a resoluo RE n 833 que determina a apreenso de todos os lotes do produto cido Linolico Conjugado (CLA). Nenhuma empresa no Brasil tem autorizao da ANVISA para fabricar, importar ou comercializar esse produto. O cido linolico conjugado tem sido vendido para praticantes de atividade fsica com alegaes de que o produto auxilia na queima de gordura e no aumento de massa muscular. No entanto, ainda no existem dados que confirmem essas indicaes.

dos tecidos e no metabolismo de eicosanides, e afetar a expresso e a ao de citoquinas e fatores de crescimento. J que a maioria dos estudos mencionados acima foram conduzidos com misturas de diversos ismeros de CLA (principalmente c9,t11-18:2 e t10,c12-18:2), os mecanismos de ao propostos podem ser especficos. Ao antioxidante. Antioxidantes provenientes tanto de fontes naturais como sintticas, com estruturas diversas apresentam alguma atividade anticarcinognica. Uma vez que o CLA possui ao antioxidativa, pode ser um importante mecanismo para o efeito anticarcinognico do CLA. Diversos estudos tm sido realizados, utilizando sistemas tanto in vivo quanto in vitro, para esclarecer o papel do CLA como um antioxidante, no entanto, os resultados obtidos a partir de diferentes sistemas de testes so conflitantes. Em estudo in vitro, foi mostrado que o CLA um potente antioxidante. Em uma concentrao muito baixa de 0,375 mol, o CLA inibe a formao de perxido em mais

de 90%, em uma mistura reagente composta por 375 mol de LA, 10ml de 0,2 M de fosfato tampo (pH 8), 4,5ml de gua, e 10,5ml de etanol. O CLA mostrou ser um antioxidante mais potente do que o -tocoferol e comparvel ao butil-hidroxitolueno, em condies de ensaio. Curiosamente, neste estudo, uma maior concentrao de CLA no aumentou a eficcia, mas teve um efeito antioxidativo reduzido, em concentrao de 37,5 mol. Um estudo in vivo, mostrou que o CLA foi to eficaz como a vitamina E em inibir a formao de substncias reativas ao cido tiobarbitrico na glndula mamria, mas no no fgado. Todas as doses testadas produziram uma inibio de 30% a 40% na formao de perxido, ou seja, no foi dose-dependente. Em outro estudo, ratos fmeas receberam dietas contendo diferentes tipos de lipdios (20% de leo de milho ou banha) ou quantidades de uma mistura de gordura (de 10% a 20% do peso), com ou sem 1% de CLA. Os resultados mostram que o CLA reduziu o malondialdedo (produto da peroxidao), produzido

medida que as pesquisas sobre o CLA se desenvolvem, vrios modos de ao so propostos. Os ismeros de CLA tm demonstrado possuir propriedades antioxidantes, inibir a formao de DNA carcingeno, induzir a apoptose, modular a composio de cidos graxos

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mEcANISmOS DE AO DO clA

Embora seja evidente que o CLA exerce efeitos benficos sade em animais na melhora do metabolismo plasmtico de lipoprotenas e na preveno de aterosclerose, no h informaes suficientes sobre seus efeitos em humanos, tornando difcil predizer os efeitos da suplementao com CLA em longo prazo.

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O cido linolico conjugado tem sido vendido para praticantes de atividade fsica com alegaes de que o produto auxilia na queima de gordura e no aumento de massa muscular. No entanto, ainda no existem dados que confirmem essas indicaes.

na glndula mamria de ratos, com maior reduo em ratos alimentados com alto teor de PUFA (35% de leo de milho), do que nos ratos que receberam dieta com gordura altamente saturada (25% de banha). No entanto, o CLA no demonstrou qualquer efeito inibitrio no nvel de 8-hidroxideoxiguanosina (8-OHdG, um marcador de dano oxidativo ao DNA). Embora o CLA mostre-se um antioxidante em estudos in vitro e in vivo, o efeito anticancergeno do CLA nesses estudos no pode ser explicado satisfatoriamente com base nesta constatao. Primeiro, a concentrao mxima de CLA em inibir a formao de perxido no est de acordo com a concentrao mais eficaz na inibio do tumor. Em segundo lugar, nenhum dos estudos demonstraram uma relao dose-dependente entre a concentrao de CLA e sua eficcia antioxidante, a que geralmente ocorre para os nutrientes antioxignicos estudados at agora. Outra pesquisa foi realizada sobre a propriedade antioxidante do CLA, usando um sistema de membrana lipdica constituda por

1-Palmitoil-2-linoleolil fosfatidilcolina. Os resultados deste estudo indicam que o CLA no demonstrou qualquer efeito protetor nas condies de ensaio e foi mais suscetvel a danos oxidativos do que o LA; foi comparvel com o cido araquidnico. De acordo com as concluses de pesquisas anteriores, um recente estudo mostrou tambm que o CLA mais propenso a oxidao do que o LA; nenhum efeito antioxidante significativo de CLA foi detectado nos modelos testados. Aparentemente, o CLA e seus metablitos se comportam como cidos graxos poliinsaturados (PUFA), em condies de estresse oxidativo. Em contraste com as propriedades antioxidantes do CLA, os resultados de experimentos utilizando clulas de cncer humano, sugeriram que o CLA, devido sua suscetibilidade a danos oxidativos, pode se comportar como um pr-oxidante em sistemas de cultura celular. Alm disso, o CLA pode criar um ambiente de estresse oxidativo, que citotxico para as clulas cultivadas. Em experimento foi utilizado CLA dissolvido em etanol, adicionado

a uma cultura de clulas humanas (clulas de cncer de mama MCF-7 e clulas de cncer de clon SW-480), nas concentraes de 0, 5, 10, 15, 20 e 30ppm, incubadas por 4, 8 e 12 dias. O tratamento com 20ppm de CLA aumentou a peroxidao lipdica e induziu a expresso e a atividade de enzimas antioxidantes (superxido dismutase, catalase e glutationa peroxidase) em ambas as clulas. Na concentrao de 20ppm de CLA tambm reduziu a incorporao de H-leucina na protena em 83% a 91%, a incorporao de H-uridina e H-timidina em DNA e RNA em 49% a 91% e 86 a 98%, respectivamente, em comparao com as clulas controle no tratadas. Aparentemente, pelo menos em parte, o sistema enzimtico antioxidante induzido falhou em proteger as clulas da citotoxicidade peroxidativa. O efeito controverso do CLA como um antioxidante ou pr-oxidante, parece ir de encontro ao conhecimento prvio de que o equilbrio entre atividades antioxidantes e pr-oxidantes uma funo complexa, dependente da concentrao e da presso parcial de oxignio.

cONSIDERAES fINAIS
Desde a identificao do CLA, as pesquisas tm enfatizado a sua propriedade anticarcinognica. Todavia, no final da dcada de 90, houve uma alterao nas linhas de pesquisas sobre este composto, relacionando-o com a estimulao da ao de insulina, reduo de gordura corporal, reduo de leptina srica, modulao do sistema imune e diminuio de colesterol srico. Embora o CLA seja associado a muitos potenciais efeitos benficos, alguns estudos tm demonstrado a existncia de efeitos colaterais em modelos animais, como diminuio de marcadores biolgicos que atuam na formao ssea e diminuio nos nveis de HDL. Por outro lado, outras pesquisas tm revelado ausncia de toxicidade do CLA, classificando-o como substncia segura (GRAS).

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Portanto, novos estudos so necessrios para investigar os efeitos e mecanismos de ao do CLA sobre o metabolismo humano. At que ponto a suplementao com CLA pode ser utilizada sem riscos sade? Essa uma pergunta difcil de responder devido escassez de estudos sobre o consumo de suplemento de CLA durante longos perodos de tempo. A maioria dos estudos apresenta tempos de suplementao relativamente curtos, com mdia de quatro a seis semanas, de forma que so raros os estudos com meses de durao. Existem evidncias em animais e, mesmo que controversas e um tanto quanto escassas, em humanos de que o CLA promove efeitos benficos em curto prazo, mas a grande questo a seguinte: esses efeitos se prolongam por quanto tempo? E os efeitos adversos do consumo de CLA em longo prazo? Alguns pesquisadores tentaram responder essas perguntas planejando ensaios cujo tempo de suplementao com CLA foram considerados longos. Os pesquisadores Jean-Michel Gaullier (Conjugated linoleic acid supplementation for one year reduces body fat mass in healthy overweight humans), Leah D. Whigham (Safety profile of conjugated linoleic acid in a 12-month trial in obese humans) e Thomas Meinert Larsen (Conjugated linoleic acid supplementation for 1 y does not prevent weight or body fat regain) suplementaram indivduos de ambos os sexos, com sobrepeso e/ ou obesidade, com concentraes que variaram entre 3,4g/dia e 6g/ dia durante um ano. De acordo com o protocolo experimental desses estudos, nenhum efeito adverso sobre o metabolismo de lipdios e glicose foi observado nos indivduos. No entanto, no estudo de Jean-Michel Gaullier, 68% dos participantes relataram 264 eventos adversos, entre os quais 30 foram considerados pelos pesquisadores relacionados com o CLA. Desconforto, dores abdominais e dispepsia foram o efeitos mais relatados. Leah D. Whigham e cole-

gas, embora no tenham observado nenhum efeito adverso, no recomendam o consumo de suplemento de CLA por mulheres grvidas ou em perodo de lactao, para evitar alteraes quantitativas e qualitativas no leite. Diferentemente de Gaullier e Whigham, Thomas Meinert Larsen e colegas avaliaram tambm o efeito da suplementao em longo prazo com CLA na recuperao do peso e da gordura corporal perdidos, e chegaram concluso de que o CLA no previne essa recuperao, pois os indivduos apresentaram recuperao de 4,0kg (Desvio padro DP = 5,6) e 2,1kg (DP = 5,0) de peso e gordura corporal, respectivamente, a qual no foi diferente do grupo placebo. Recentemente, Gaullier e colegas publicaram os resultados da continuidade de seu trabalho anterior (Supplementation with conjugated linoleic acid for 24 months is well tolerated by and reduces body fat mass in healthy, overweight humans). O estudo mais recente foi conduzido por mais 12 meses (com cerca de 70% dos indivduos do estudo inicial) completando um perodo total de 24 meses de suplementao com CLA, caracterizando o perodo mais longo de suplementao da histria das pesquisas com CLA. Os autores, alm de conclurem que a suplementao com misturas de ismeros de CLA reduziu significativamente a gordura e o peso corporal e que esta reduo no teve relao com a dieta ou exerccio, tambm concluem que a suplementao foi segura, visto que as alteraes observadas esto dentro do normal. A despeito do que os autores acima citados demonstraram sobre a segurana do CLA, ainda existem declaraes de efeitos adversos com srias conseqncias, as quais devem ser consideradas. Entende-se que a melhor soluo para reduzir a incidncia de obesidade e doenas associadas a preveno e, neste sentido, o consumo de alimentos enriquecidos com CLA ao longo da vida, com quantidades necessrias para que haja a modulao dos efeitos benficos e a inexistncia dos

efeitos adversos, parece ser uma alternativa vivel. Este grupo de pesquisa nos ltimos trs anos tem demonstrado que este composto capaz de reduzir significativamente a gordura corporal, alm de promover aumento do contedo de minerais em ratos, o que pode indicar aumento da mineralizao ssea. A influncia do CLA sobre o processo de antioxidao dos lipdios biolgicos tambm tem sido identificada nestas pesquisas. Dependendo do indicador biolgico utilizado para avaliar este processo, os resultados tm demonstrado que o CLA pode funcionar como um antioxidante e, conseqentemente, atuar como coadjuvante na preveno e no controle de inmeras doenas relacionadas com estresse oxidativo. Por outro lado, sendo o CLA um dieno conjugado, o aumento da suscetibilidade ao estresse oxidativo no est descartado, como observado em alguns indicadores determinados nos experimentos dos autores deste trabalho, que tiveram seus valores aumentados aps suplementao com CLA. As perspectivas daqui em diante so de aprofundamento das investigaes sobre a ao do CLA em humanos, no sentido de reforar as pesquisas brasileiras sobre o tema em questo e tornar disponvel para a populao, com o respaldo da legislao vigente, um produto seguro que possa ser utilizado como coadjuvante na preveno e no controle da obesidade e de doenas associadas. Por fim, as mais recentes investigaes sobre os mecanismos moleculares de ao do CLA reforam cada vez mais o conceito da nutrigenmica. A biologia molecular moderna tem contribudo com fortes avanos no que diz respeito modulao da expresso gnica induzida por compostos presentes na alimentao humana, sejam eles convencionalmente considerados nutrientes ou no. Os resultados tm sido surpreendentes e, ao mesmo tempo, promissores buscando preencher lacunas da medicina e da nutrio clnica.

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