14/11/2012

Animais transgnicos biorreatores

Disciplina Biotecnologia 6 semestre Farmcia Profa. Fabiana

Produtos Biotecnolgicos
Segundo a Anvisa (RDC n. 55, dez /2010):

Produto farmacutico de origem biolgica, obtido por processo biotecnolgico, com finalidades profilticas, curativas, paliativas ou para fins de diagnstico in vivo.
Incluindo: soros hiperimunes, hemoderivados, biomedicamentos (obtidos por fluidos biolgicos ou de tecidos de origem animal e por procedimentos biotecnolgicos), anticorpos monoclonais, medicamentos contendo micro-organismos vivos, atenuados ou mortos.

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OGMs
(Organismos geneticamente modificados)

Toda entidade biolgica cujo material gentico (DNA/RNA) foi alterado por meio de qualquer tcnica de engenharia gentica, de uma maneira que no ocorreria naturalmente. Podem ser micro-organismos, plantas ou animais.

OGMs produtores de frmacos

Em bactrias: utiliza-se o termo recombinante e no transgnico. Ex. E. coli recombinante pode produzir insulina. Animais e plantas: termo mais adequado transgnico. Ex. Uma cabra transgnica pode produzir -1antitripsina no leite. Em animais estes frmacos no so comercializados no Brasil, mas em bactrias existem vrios comercializados.

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Animais transgnicos

Animais transgnicos com incremento de caractersticas de produo Caractersticas podem ser reforadas geneticamente, ex.: Salmo transgnico (cresce mais rpido e em maior quantidade que o comum) e vaca resistente a mastite (adoece menos por uma infeco comum nas glndulas mamrias).

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Salmo transgnico
Um promotor constitutivo foi inserido ao lado de cpias do gene do horm. crescimento de uma outra espcie de salmo (Chinook).

Construo de um transgene

Promotor

Gene a ser expresso

poli A

Promotor: ativa o gene e faz com que ele seja expresso no rgo ou tecido alvo. Existem especficos para fibras cardacas, clulas nervosas, glndulas mamrias, endotlio dos vasos sanguneos etc. Gene a ser expresso: codifica preferencialmente ter apenas xons. a protena teraputica e

Cauda de poli A: confere estabilidade ao transgene.

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Construo de um animal transgnico

Injeo Prnuclear
(faz a insero de qualquer DNA estranho (como o transgene) em um vulo fertilizado)

vulo fertilizado Agulha de microinjeo

Pipeta de suco (segura o vulo)

Tcnica de Injeo prnuclear (1980)

A agulha de microinjeo contm o transgene que ser introduzido no vulo fertilizado. Todo o procedimento feito utilizando microscpio ptico.

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Animal transgnico biorreator

Animal que fabrica protenas teraputicas (utilizadas como medicamentos) e as secretam em seus fludos (leite, sangue, smen, urina), para que sejam purificadas e comercializadas.

ANIMAIS BIORREATORES
MICROINJEO DE DNA NO ZIGOTO

DNA HUMANO

PROTENA HUMANA PRODUO DO LEITE MODIFICADO

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Utilizao de animais como fbrica de protenas (biorreatores)

VANTAGENS
Facilidade na purificao. Funcionalidade da protena teraputica do que se produzida num hospedeiro procarioto (E. coli) Maior quantidade de produo nos fluidos animais.
Bactria recombinante

DESVANTAGENS Custo no desenvolvimento (pesquisa) e produo em campo (criao).

promotor LEITE

Protena humana

Animal transgnico

Produo da protena hG-CSF* em OGMs

BACTRIAS :

1 grama de G-CSF recombinante = U$1001000,00

ANIMAIS: $
1 grama G-CSF transgnica = U$1025,00

hG-CSF*: fator de coagulao do granulcito humano pode ser utilizado para tratamento de infarte do miocrdio por ex.

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Animais biorreatores
Cabra transgnica produz

a protena humana 1antitripsina, deficiente em pacientes com enfisema pulmonar hereditrio.

Gene

da 1-antitripsina foi clonado em um vetor ao lado de um promotor ovino que se expressa apenas em glndulas mamrias de cabra.

Processo de ordenha da cabra transgnica em uma fazenda da GTC Biotherapeutics (EUA), uma fbrica de protenas farmacuticas

Quando os animais biorreatores podem ser utilizados?

o Biofrmaco deve ter alto valor agregado e a produo deve superar 1mg/ml para superar investimentos no desenvolvimento e na criao dos animais, o Toda a demanda de um medicamento pode ser suprida com poucos animais biorreatores, ao invs de milhares/milhes utilizados em litros de meios de cultura com bactrias recombinantes.
o Exemplo:
o

Demanda mundial de albumina srica (utilizada em queimaduras e hemorragias graves) 10 000 kg, Estimando o volume de leite produzido por vacas e a eficincia de purificao, apenas 5400 vacas atenderiam a demanda mundial.

Vaca holandesa: 6000 a 10 000 kg de leite por lactao (10 meses)

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Bibliografia
Captulo 4: Produtos Biotecnolgicos do livro Biotecnologia simplificada, pginas 67-88, autores Borm e Santos.