DETERMINAO DO CARBONO DA BIOMASSA MICROBIANA POR DICROMATOMETRIA

PREPARANDO AS SOLUES

Soluo extratora
(Estocar por no mximo 3 dias) Pesar 87,135g de K2SO4 => Diluir em 1L de gua destilada. Soluo 2,0 litros 3,0 litros 4,0 litros gr de K2SO4 174,260 261,405 348,540

K2SO4 0,5 M - (gua destilada) => Utiliza-se 50 ml por amostra de 20 g de solo.

Soluo de Dicromato de Potssio

(tempo de estocagem indeterminado) Pesar 19,40g de K2Cr2O7 => Diluir em 1L de gua destilada. K2Cr2O7 0,066 M (gua destilada) => Utiliza-se 2 ml por amostra.

Soluo de Sulfato Ferroso Amoniacal (SFA) para a titulao com difenilamina.

(estocar por no mximo 3 horas) Pesar 11,76g de SFA => Adicionar 10mL de cido Sulfrico H 2SO4 concentrado => completar 1L de gua destilada.

Difenilamina 1% (meio cido)

(tempo de estocagem indeterminado) Pesar 1g de Difenilamina => Diluir em 100mL de cido Sulfrico (H 2SO4) concentrado.

Determinao da Atividade Microbiana por titulao Soluo de hidrxido de sdio

Pesar 40g do NaOH => diluir em 1000 mL de gua destilada. NaOH 1N - (gua destilada) => Utiliza-se 10 ml por amostra. IMPORTANTE: Esta soluo deve ser feita em um bquer de plstico.

Soluo de cido Clordrico para a respirao

Tomar 41,75 mL de cido clordrico (HCl 0,5N) concentrado => diluir em 1000mL de gua destilada. HCl 0,5N - (gua destilada) => Utiliza-se +- 20 ml por amostra.

Soluo de Cloreto de Brio

Pesar 10g do BaCl2 => diluir em 100mL de gua destilada. BaCl2 10% - (gua destilada) => Utiliza-se 2 ml por amostra.

Fenolftalena 1%
Pesar 1g de fenolftalena e diluir em 1000 mL de lcool etlico (92%). IMPORTANTE: Todas as solues, exceto a de hidrxido de sdio, devem ser feitas e armazenadas em recipientes de vidro.

METODOLOGIA PARA ANLISE DE C-BMS E ATIVIDADE MICROBIANA (C-CO2):

Carbono da Biomassa Microbiana do Solo

Procedimentos analticos: - destorroar e peneirar (malha de 2 mm) a amostra de solo, sendo, posteriormente, retirados possveis fragmentos de razes, vegetais e organismos remanescentes; - acondicionar as amostras em recipientes plsticos retangulares (com tampas); - atravs de um borrifador, abastecido com gua destilada, umedecer a amostra de solo de forma uniforme, submetendo seu recipiente a movimentos circulares no plano horizontal, at que atinja cerca de 40-60% da capacidade mxima de reteno de gua (Capacidade de Campo). - Pesar, em frascos cilndricos de vidro (snaps) e com tampa, seis subamostras de 20g (trs para Fumigada e trs para No Fumigada) derivadas da amostra original (reservada), atravs de balana semi-analtica com uma preciso de 0,1g. - acondicionar trs das seis sub-amostras anteriores em dessecador, juntamente com um frasco contendo 10mL de clorofrmio puro e analtico (CHCl3); tampar o dessecador e submet-lo aspirao (5 minutos, no mnimo) por meio de uma bomba de vcuo, at que sua presso interna atinja valores prximos a 600 mmHg, quando, ento, a vlvula do dessecador dever ser fechada (a bomba dever, ainda, estar ligada!) para que sua presso interna se mantenha reduzida (funo: acelerar a volatilizao e a saturao da fase gasosa pelo clorofrmio lquido); mant-lo por 24 horas em sala escura com temperatura ambiente. - s outras trs sub-amostras, adicionar em cada um deles 50mL de sulfato de potssio K2SO4 0,5 mol/L. - tampar os frascos e acondicion-los em suporte especfico para serem submetidos agitao (250 rpm) durante 30 minutos;

- decorridos 30 minutos, retirar os frascos do suporte, remover suas tampas, agrup-los (em triplicatas) em bancada e reserv-los para decantao por, no mnimo, vinte minutos; - separar e marcar trs erlenmeyers para cada amostra; - verter uma alquota de aproximadamente 20mL do lquido sobrenadante da amostra e transfer-la para o papel-filtro (dobrado em forma de cone) sobre o erlenmeyer; - com uma pipeta, retirar uma alquota de 8mL (observar rigorosamente o menisco) do lquido filtrado da amostra e transfer-lo para outro erlenmeyer; - preparar amostras em branco, trs amostras apenas. - as amostras em branco sero iguais o restante, porm, no haver extrato de solo, o filtrado ser substitudo por 8mL de K2SO4 0,5 mol/L. - adicionar 2mL de Dicromato de Potssio, diludo em soluo de 0,066 mol/L - adicionar 5mL de cido Fosfrico concentrado (P.A.). - adicionar 10mL de cido Sulfrico concentrado (P.A.). - levar a chapa aquecedora (+- 300C) por 5 minutos, ou at a amostra abrir fervura breve. - adicionar 80mL de gua destilada. - deixar esfriar e realizar a titulao das amostras com o sulfato ferroso amoniacal (SFA) e difenilamina utilizada como indicador. - adicionar trs gotas de difenilamina e no agitador magntico e adicionar o SFA, at mudar de cor. - para as amostras Fumigadas decorridas s 24 horas, abrir o dessecador e remover o frasco de clorofrmio, fechar novamente e com a bomba de vcuo remover o vapor de clorofrmio remanescente a partir de trs aspiraes sucessivas; cada aspirao ter durao correspondente ao tempo necessrio para que a presso atinja valores prximos a 550 mmHg; - retirar os frascos de amostras de solo do dessecador e repetir todo o processo realizado com as amostras No Fumigadas.

DETERMINAO DA ATIVIDADE MICROBIANA (LIBERAO DE CO2) POR TITULAO

Procedimento analtico: - Pesar diretamente em frascos de vidro tipo snap, 50 g do solo peneirado e limpo (livre sem material vegetal). - as sub-amostras devem ser retiradas da mesma amostra que foi utilizada para as anlises de quantificao do carbono. - Trs repeties para cada amostra. - Preparar amostras em branco (snaps sem solo). - As amostras e os brancos devero ser incubados, juntamente com o restante das amostras em frascos hermticos de 1000 mL, contendo em seu interior, frascos com 10 mL de uma soluo de NaOH (1N). Vedar bem os frascos hermticos e proceder incubao por sete dias. - Aps esse perodo de incubao, procede-se a titulao do NaOH 1N com HCl 0,5N, acrescentando-se 2 mL de soluo saturada de BaCl2 10% para precipitao do Na2CO3. Adiciona-se 2 gotas da soluo alcolica 1% de fenolftalena como indicador.