Reaces mono-substrato

Entre as enzimas com mecanismos mono-substrato incluem-se as isomerases como a triose-fosfato isomerase ou bisfosfoglicerato mutase, liases intramoleculares como a adenilato ciclase e a ribozima, uma liase de RNA.6 Porm, algumas enzimas que apenas tm um substrato n o se agrupam nesta categoria de mecanismos. A catalase um e!emplo, pois reage com uma molcula de substrato de per"!ido de #idrognio, o!ida-se e ent o reduzida por uma segunda molcula de substrato. Embora um $nico substrato este%a en&ol&ido, a e!istncia de um intermedi'rio que uma enzima modificada significa que o mecanismo de cat'lise um mecanismo ping-pong (tipo de mecanismo discutido mais abai!o).

Cintica de MichaelisMenten

*ur&a de satura+ o para uma enzima mostrando a rela+ o entre a concentra+ o do substrato (abcissas) e a &elocidade de reac+ o (ordenadas). As reac+,es catalisadas por enzimas s o satur'&eis, e a sua &elocidade de cat'lise n o indica uma resposta linear face ao aumento de substrato. -e a &elocidade inicial da reac+ o medida sobre uma escala de concentra+,es de substrato (denotada como .-/), a &elocidade de reac+ o ( v) aumenta com o acrscimo de .-/. 0oda&ia, 1 medida que .-/ aumenta, a enzima satura-se e a &elocidade atinge o &alor m'!imo Vma!. No modelo da cintica de 2ic#aelis-2enten de uma reac+ o mono-substrato e!iste uma reac+ o bimolecular inicial entre a enzima E e o substrato S para formar o comple!o ES. Embora o mecanismo enzim'tico para a reac+ o unimolecular possa ser bastante comple!o, #' tipicamente um passo na determina+ o da &elocidade que permite que se modele o mecanismo como um passo catal3tico simples de &elocidade constante k4. (Eq. 1). k4 tambm designado como kcat ou turnover, o &alor m'!imo de reac+,es enzim'ticas catalisadas por segundo. *om bai!as concentra+,es de substrato .-/, a enzima permanece em equil3brio entre a forma li&re E e o comple!o enzima-substrato E-5 aumentando .-/ aumenta .E-/ 1 custa de .E/, mudando o equil3brio para o lado direito. 6ma &ez que a &elocidade de reac+ o depende da concentra+ o .E-/, a &elocidade sens3&el a pequenas altera+,es de .-/. 0oda&ia, com altos &alores de .-/, a enzima fica totalmente saturada com substrato, e e!iste apenas na forma E-. Nestas condi+,es, a &elocidade (v7k4.E/tot8Vma!) insens3&el a pequenas altera+,es de .-/5 assim, .E/ tot a concentra+ o total enzim'tica

que apro!imadamente igual 1 concentra+ o .E-/ em condi+,es de satura+ o. A equa+ o de 2ic#aelis92enten: descre&e como a &elocidade de reac+ o v depende da posi+ o do equil3brio ligado ao substrato e da constante de &elocidade k4. 2ic#aelis e 2enten mostraram que se k4 for bem menor que k-; (c#amada a apro!ima+ o de equil3brio), pode obter-se a seguinte equa+ o<

(Eq. 2) Esta equa+ o de 2ic#aelis-2enten a base da maior parte da cintica enzim'tica mono-substrato. A constante de 2ic#aelis Km definida como a concentra+ o para a qual a &elocidade da reac+ o enzim'tica metade de Vma!. =sto pode &erificar-se ao substituir Km 8 .-/ na equa+ o de 2ic#aelis2enten. -e o passo de determina+ o da &elocidade for lento, quando comparado com a dissocia+ o do substrato (k4 >> k-;), ent o a constante de 2ic#aelis Km apro!imadamente 1 constante de dissocia+ o do comple!o E-, embora tal situa+ o se%a relati&amente rara. A situa+ o mais normal d'-se quando k4 ? k-; na por &ezes c#amada cintica de @riggs-Aaldane.B A equa+ o ainda se &erifica em condi+,es mais gerais, como pro&m da apro!ima+ o ao estado estacion'rio. Curante o per3odo inicial, a &elocidade de reac+ o v relati&amente constante, indicando que .E-/ tambm apro!imadamente constante (cf. equa+ o ;)<

Assim, a concentra+ o .E-/ dada pela f"rmula

em que a constante de 2ic#aelis Km definida por

(.E/ a concentra+ o de enzima li&re). Em con%unto, a f"rmula geral para a &elocidade de reac+ o v &em pela equa+ o de 2ic#aelis-2enten<

A constante de especificidade uma medida da eficincia de con&ers o pela enzima do substrato em produto. 6sando a defini+ o da constante de 2ic#aelis , a equa+ o escre&e-se na forma

sendo .E/ a concentra+ o de enzima li&re. Assim, a constante de especificidade um modo eficaz de obter a constante de segunda ordem da &elocidade para enzimas li&res na reac+ o com substrato li&re para forma+ o de produto. A constante de especificidade limitada pela frequncia com que o substrato e a enzima se encontram na solu+ o, podendo atingir ;D ;D 2E; sE;.F Esta ta!a m'!ima amplamente n o dependente da dimens o do substrato ou da enzima.;D A raz o entre constantes de especificidade para dois substratos uma compara+ o quantitati&a da eficincia da enzima na con&ers o dos substratos. G decli&e do gr'fico de 2ic#aelis-2enten com bai!a concentra+ o de substrato .-/ (i.e. .-/ >> Km) tambm resulta na constante de especificidade.

Representao da equao de Michaelis-Menten

Her artigo principal< Ciagrama de IineJea&er-@urKe Her artigo principal< Ciagrama de Eadie-Aofstee

G gr'fico de IineJea&er-@urKe ou do duplo rec3proco mostra o significado dos pontos de intercep+ o entre a recta e os ei!os de coordenadas, e do gradiente da &elocidade. G gr'fico de &elocidade face a .-/ mostrado anteriormente n o linear. Embora a bai!as concentra+,es de substrato se manten#a linear, &ai cur&ando 1 medida que aumenta a concentra+ o de substrato. Antes da c#egada dos computadores, que permitem a%ustar regress,es n o lineares de forma simples, podia c#egar a ser realmente dif3cil estimar os &alores de Km e Hma! nos gr'ficos n o lineares. =sto deu lugar a que &'rios in&estigadores concentrassem os seus esfor+os em desen&ol&er mtodos de lineariza+ o da equa+ o de 2ic#aelis-2enten, dando como resultado o gr'fico de IineJea&er-@urKe, o diagrama de Eadie-Aofstee e o gr'fico de Aanes-Loolf. *om o seguinte tutorial da cintica de 2ic#aelis-2enten realizado na 6ni&ersidade de Hirg3nia a, pode-se simular o comportamento de uma enzima &ariando as constantes cinticas. G gr'fico de IineJea&er-@urK ou representa+ o de duplo recproco a forma mais comum, e simples,de mostrar os dados cinticos, apesar de n o ser a mais fi'&el. Para tal, tomam-se os &alores in&ersos de ambos os lados da equa+ o de 2ic#aelis-2enten. *omo se pode apreciar na figura da direita, o resultado deste tipo de representa+ o uma lin#a recta cu%a equa+ o e 8 m! M c, sendo o ponto de intercep+ o entre a recta e o ei!o das ordenadas equi&alente a ;NH ma!, e o ponto de intercep+ o entre a recta e o ei!o de abcissas equi&alente a -;NKm.

E&identemente n o se podem tomar &alores negati&os para ;N.-/5 o m3nimo &alor poss3&el ;N.-/ 8

D, que corresponderia a uma concentra+ o infinita de substrato, e da3 ;N& 8 ;NH ma!. G &alor do ponto de intercep+ o entre a recta e o ei!o x uma e!trapola+ o de dados e!perimentais obtidos em laborat"rio. Oeralmente, os gr'ficos de IineJea&er-@urKe distorcem as medidas realizadas a bai!as concentra+,es de substrato e isto pode dar lugar a estimati&as n o muito e!actas de H ma! e de Km.;; 6m modelo linear muito mais e!acto o diagrama de Eadie-Aofstee, mas nas in&estiga+,es cient3ficas actuais, todo este tipo de lineariza+,es tornou-se obsoleto e foi substitu3do por mtodos mais fi'&eis baseados na an'lise de regress o n o linear. Para analisar os dados con&eniente a normaliza+ o dos mesmos, %' que isto pode a%udar 1 diminui+ o da quantidade de trabal#o e!perimental a realizar e incremento da fiabilidade da an'lise.;4

Importncia prtica das constantes cinticas

G estudo da cintica enzim'tica importante por duas raz,es principais. Em primeiro lugar, a%uda a e!plicar como as enzimas trabal#am, e, em complemento, permite pre&er o comportamento das enzimas em organismos &i&os. As constantes cinticas acima definidas, Km e Vma!, s o cr3ticas na compreens o do modo de funcionamento con%unto das enzimas para controlar o metabolismo. Pazer estas pre&is,es n o tri&ial, mesmo para sistemas simples. Por e!emplo, o o!aloacetato formado pela malato desidrogenase no interior da mitocQndria e pode ser consumido pela citrato sintase, a fosfoenolpiru&ato carbo!iquinase ou a transaminase glutRmico-o!alactica, entrando no ciclo do 'cido c3trico, gluconeognese ou bioss3ntese do 'cido asp'rtico, respecti&amente. A capacidade de pre&is o de quanto o!aloacetato segue cada &ia e!ige con#ecimento da sua concentra+ o e da concentra+ o e cintica de cada uma das enzimas. Esta capacidade prediti&a do comportamento metab"lico atinge a sua e!press o mais comple!a na s3ntese de grandes quantidades de dados cinticos e genticos em modelos matem'ticos de organismos inteiros. Embora este ob%ecti&o se%a long3nquo para qualquer eucariota, fazem-se tentati&as para atingi-lo nas bactrias, com modelos do metabolismo da Escherichia coli.;S