As cianobacterias desempenham importante papel ecolgico na oxigenao da

atmosfera terrestre e so capazes de produzir uma ampla variedade de

metablitos secundrios biolgicamente ativos, dentre eles as cianotoxinas.
O gnero Sphaerospermopsis torques-reginae formado por cianobactrias
filamentosas e fixadoras de nitrognio. Apresentam hetercitos em condies
heterotrficas e j foi comprovada a produo de anatoxina-a(s) pela linhagem
em estudo (Fig.1).









Embora j se tenham relatos de ocorrncia da anatoxina-a(s) em vrias partes
do mundo e inclusive no Brasil, existem relativamente poucos estudos
toxicolgicos na literatura sobre as variaes do crescimento e produo de
pigmentos frente ao nitrognio em cepas produtoras desta toxina.
INTRODUO
Apoio Financeiro
Variaes no crescimento, formao de hetercitos e produo de
pigmentos em uma linhagem de S. torques-reginae
(CYANOBACTERIA) em diferentes condies de nitrognio
Luiz Gustavo Brigago, Simone Vieira, Ernani Pinto.
Departamento de Anlises Clnicas e Toxicolgicas, Faculdade de Cincias Farmacuticas, Universidade de So Paulo, Brasil. *gustavogb@usp.br

Investigar variaes no crescimento, na formao de hetercitos e nos pigmentos
em uma linhagem txica de S. torques-reginae (ITEP 24) em diferentes condies
de cultivo.
OBJETIVO
A linhagem de S. torques-reginae ITEP 24 foi cultivada em triplicatas em meio
ASM-1 (pH 8) em 3 diferentes condies de nitrognio nitrato (NO3), amonio
(NH4) e meio sem nitrognio (S/N) - a 242

C, e ciclo de 14:10 (L:E) com uma

intensidade de luz de 100 mol fotons.m
-2
.s
-1
.
O crescimento foi avaliado por contagem celular a cada 3 dias em
hemocitmetro de Fuchs-Rosenthal sob microscopia optica durante 18 dias. A
cada 6 dias foram determinadas as porcentagens de hetercitos em relao a
clulas totais.
Foi usada regresso exponencial da variao do nmero de clulas/ml por
unidade de tempo para determinar a taxa de crescimento .
A determinao da variao de clorofila e carotenoides totais foi acompanhada
por tcnicas espectrofotomtricas, analisadas em 665 e 480 nm, respectivamente.



CRESCIMENTO CELULAR

As clulas de S. torques-reginae cresceram exponencialmente at o 15 dia de
cultivo nas condies NO3 (R=0,9803) e S/N (R
2
=0,9693), com taxas de
crescimento de 0,288 0,02 e 0,139 0,02 respectivamente (Fig. 2). O
crescimento em SN foi menor (P<0,01). Na condio NH4 no foi determinado o
crescimento exponencial pois a cepa morreu aps o 6 dia.























MATERIAL E MTODO
CONCLUSES
RESULTADO E DISCUSSES
O nmero de hetercitos foi significantemente maior na condio sem nitrognio
(P<0,01), em todos os tempos avaliados, comparado a condio com nitrato (Fig. 3). Em
presena de amnio, no foi observada formao de hetercitos.
A falta de nitrognio tem expressivo estmulo sobre a formao de hetercitos,
o que pode levar a reduo da taxa de crescimento, nas condies estudadas, em
relao a condio com nitrato. Este fato permite que a cianobactria sobreviva
mais tempo sem uma fonte de nitrognio no meio.
A exposio ao amnio inibiu a formao de hetercitos e se mostrou txica
durante o crescimento levando a morte celular a no 6 dia, nas condies
estudadas.
O aumento expressivo dos carotenoides sugere stress sobre as clulas em ambas
as condies de mudana da fonte nitrognio. O aumento de carotenoides pode
significar um gasto energtico e explicar a diminuio do crescimento na condio
S/N.
Figura 4 Variao da cota celular de pigmentos fotossintticos, clorofila-a e carotenoides em S. torques-reginae (ITEP
24) exposta a diferentes fontes de nitrognio no meio de cultura. A. Condio com nitrato; B. Condio sem nitrognio;
C. Condio com amnio.
Figura 2. Curvas de crescimento de S. torques-reginae, avaliadas a cada 3 dias por contagem celular em meio
ASM-1 com nitrato (NO3), sem nitrognio (S/N) e amnio (NH4). As barras de erro representam o desvio padro
das mdias (n=3)
Figura 3. Variao da porcentagem de hetercitos em relao a clulas totais de S. torques-reginae (ITEP 24) contados
de 30 filamentos aleatrios, em meio ASM1 com nitrato (NO3) e sem nitrognio (S/N). (n=3).
Para as condies NO3 e S/N observou-se o estmulo da sntese simultnea de
clorofila-a e carotenides totais at o tempo 6, sendo o estmulo maior para a
condio S/N (p<0,01; Fig. 4-A e B); Para ambas as condies observa-se aumento na
produo de carotenides aps o tempo 12 e queda na concentrao de clorofila-a.
Em presena de amnio houve um aumento de carotenoides em relao a clorofila-a
no incio do crescimento (Fig. 4-C). A anlise de pigmentos pode fornecer
informaes sobre o funcionamento do aparato fotossinttico em determinadas
condies. Sempre que observamos o aumento na concentrao de carotenoides em
relao clorofila-a, h indcios de limitao por luz ou por algum outro estresse
Figura 1. Sphaerospermopsis torques-reginae.
18 12 6 0
8
7
6
5
4
3
2
1
0
18 12 6 0
NO3
dias
%

d
e

h
e
t
e
r

c
i
t
o
s
S/N