Aplicação Da Vermecompostagem

UNIVERSIDADE DE SO PAULO
INSTITUTO DE QUMICA DE SO CARLOS
APLICAO DE VERMICOMPOSTAGEM PARA A

BIORREMEDIAO DE SOLOS CONTAMINADOS POR
HIDROCARBONETOS POLICCLICOS AROMTICOS
Jussara Aparecida de Oliveira Cotta
Tese apresentada ao Instituto de

Qumica de So Carlos, da
Universidade de So Paulo, para
obteno de ttulo de doutor em
Cincias (Qumica Analtica)
ORIENTADORA: Profa Dra Maria Olmpia de Oliveira Rezende
So Carlos - SP
2008
Corao Civil
Milton Nascimento e Fernando Brant
Quero a utopia, quero tudo e mais

Quero a felicidade nos olhos de um pai
Quero a alegria muita gente feliz
Quero que a justia reine em meu pas
Quero a liberdade, quero o vinho e o po
Quero ser amizade, quero amor, prazer
Quero nossa cidade sempre ensolarada
Os meninos e o povo no poder, eu quero ver
So Jos da Costa Rica, corao civil
Me inspire no meu sonho de amor Brasil
Se o poeta o que sonha o que vai ser real
Bom sonhar coisas boas que o homem faz
E esperar pelos frutos no quintal
Sem polcia, nem a milcia, nem feitio, cad poder ?
Viva a preguia viva a malcia que s a gente que sabe ter
Assim dizendo a minha utopia eu vou levando a vida
Eu viver bem melhor
Doido pra ver o meu sonho teimoso,um dia se realizar
E Eu viver bem melhor
Dedico em especial,
ao meu marido Marcelo Henrique,
o qual me ensinou mais
do que eu pude ensin-lo.
Obrigada pelo seu amor.
Te amo.
Ao meu Deus,
por ter me dado sade e fora
principalmente nos momentos
de idas e vindas Minas Gerais.
Aqueles que so responsveis

pelo meu carter,
meus pais, Joanna e Sebastio.
s minhas irms,
Jacqueline, Janana, Julcilia,
Jnia, Josianne e Jardelli.
Tenho orgulho de vocs.
Que bom que vocs existem!!!!!
A minha querida afilhada e sobrinha

Larissa, seu sorriso me encanta
e me deixa cheia de alegria.
Agradecimentos
Profa. Dra. Maria Olmpia de Oliveira Rezende pela confiana e orientao, e
compreenso nos momento em que mais precisei.
Ao Paulo, que voc tenha aprendido algo comigo, como eu aprendi com voc.
Aos antigos colegas do laboratrio de Qumica Ambiental, Solange, Ademir,
Claudemir, Allan, Frank, Snia, Marcelo, Rossine, rica, Lurdinha e Leonardo,
que de uma forma ou outra contriburam para minha formao. Que saudades que
tenho das conversas sobre qumica durante os cafezinhos no laboratrio!!!!
No devo esquecer tambm dos colegas Elias, Almir, Paula, Raquel, Elke. E dos
atuais colegas de laboratrio Ezequiel, Maurcio, Joel, Bruno, Fabiane, Cleber,
Roberta, Regis, Lvia, Flvia.
A minha querida famlia, alicerce de toda a minha formao pessoal.
A minha nova famlia Braga e Luz, as quais me receberam de braos abertos.
As minhas eternas amigas da Repblica PA.
Aos amigos de grande convvio, Marco Braga, Sheila, Brian e Brbara.
Aos meus alunos e colegas de trabalho da Faculdade de Engenharia da
Universidade do Estado de Minas Gerais (UEMG).
Aos amigos da turma de Qumica 97 da UFV, que nossa amizade prevalea!
Aquelas que dividiram o teto, as alegrias e tristezas, Marisa, Roberta e Lucimar,

Shirley, Lia, Idaliria, principalmente pela amizade.
s secretarias da seo de Ps-Graduao, Silvia e Andria e s funcionrias da
Biblioteca pela constante disposio em ajudar-me.
Ao IQSC pelo apoio institucional.
Os funcionrios do IQSC.
Aos Funcionrios do laboratrio de Estradas, Departamento de Transporte, em
especial ao Gigante.
A Capes pelo apoio financeiro.
FAPESP, pelo apoio ao Projeto.
A todos aqueles que, direta ou indiretamente contriburam na realizao desta tese,
meu muito obrigado.
Em especial, minha querida Divininha, que me mostrou alm do seu grande
profissionalismo e de sua dedicao, a fundamental importncia entre duas pessoas:
a amizade, principalmente nos momentos mais difceis.
No sou nada diante

deste vasto universo,
mas uma partcula
que o faz por completo.
Jussara Cotta
RESUMO
Um dos principais problemas ambientais que encaramos hoje a
contaminao do solo por vazamento de tanques de armazenagem de combustveis.
Os combustveis armazenados se compem de vrios hidrocarbonetos de petrleo,
entre eles os hidrocarbonetos policclicos aromticos. Eles so selecionados pela US
EPA e pelo NIOSH como prioritrios, devido carcinogenicidade, mutagenicidade e
sua persistncia no ambiente. Este trabalho prope meios de recuperao de solos
contaminados utilizando a vermicompostagem. Investigou-se o papel da matria
orgnica durante o processo para melhorar a atividade de remoo no sistema solo,
bem como o papel da minhoca. Em diferentes caixas foi adicionado solo dopado a
2% de diesel (v/v) e quantidades estabelecidas de esterco bovino. A inoculao foi
realizada com minhoca Eisenia foetida. Foram realizadas 7 coletas durante 3 meses
e determinadas as concentraes dos HPAs por cromatografia lquida de alta
eficincia, alm de anlises que indicam a humificao e mineralizao. Verificou-se,
atravs da determinao da concentrao dos contaminantes durante o processo,
que houve a remoo desses contaminantes e que a tcnica de vermicompostagem
pode ser aplicada para remediar solos contaminados por HPAs. As vantagens da
vermicompostagem so: pode ser realizada no prprio local contaminado, um
processo natural, deixa o solo mais rico em nutrientes, alm de ser um processo
economicamente vivel. Durante o processo, percebem-se diferenas nas
caractersticas fsico-qumicas do solo devido ao processo de mineralizao e um
aumento do teor de cido hmico. Tambm foi feito o estudo da soro dos
compostos naftaleno, antraceno e benzo(a)pireno na matriz solo e no produto final
da vermicompostagem, o vermicomposto, a fim de verificar a capacidade que estes
compostos tm de sorver ou estarem disponveis para o processo de degradao.
Verifica-se que com o aumento do nmero de anis aromticos h uma maior soro
com as matrizes estudadas.
Instituto de Qumica de So Carlos - USP
ABSTRACT
One of the main environmental problems that we face today is the soil
contamination due to storage fuel tanks leakages. Fuels are comprised of a variety of
hydrocarbons, among them are the polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs). Those
are classified by US-EPA and NIOSH as prioritary contaminants, due to their
carcinogenic and mutagenic characteristics and their persistence in the environment.
This work proposes ways of recovering contaminated soil with such hydrocarbons
using vermicomposting. It was investigated the role of organic matter during the
process to improve the PAHs degradation in the soil system, as well as the influence
of the earthworms. In different boxes it was added soil doped with 2% of diesel and
established amounts of manure cast. The inoculation was carried out with Eisenia
foetida earthworm. Seven samplings were performed during three months and the
PAHs determined by HPLC, as well as analyses that indicated the humification. By
following the contaminants concentration during the process, it was observed that
vermicomposting can be applied to clean up contaminated soils by degrading the
contaminants, proving the vermicomposting is an useful tool for soil remediation. The
advantages of the vermicomposting are: it can be carried out in situ; it is a natural
process that leaves the soil enriched with nutrients; and it is economically viable.
During the process, differences in the physico-chemical characteristics of the soil
were observed due to the mineralization process and an increase in the humic acid
content. The sorption of naphthalene, antracene and benzo(a)pirene in soil and in
vermicompost was also studied, in order to verify the ability and availability of those
compounds for the degradation process. The increase of the number of aromatic
rings takes to a greater sorption in the environmental matrices soil and
vermicompost.
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Esquema mecanstico para a formao de HPAs por meio de pirlise
(LOPES e ANDRADE, 1996).
24
Figura 2 - Regio K, L e baia do benzo[a]antraceno (BRAGA et al., 1999).
28
Figura 3 Estrutura dos HPAs estudados (NIOSH, 1989).
31
Figura 4 Cromatografo lquido utilizado.
34
Figura 5 - Espectro UV-Vis do naftaleno, acenaftileno, acenafteno e fluoreno.
49
Figura 6 - Espectro de fluorescncia do naftaleno, acenaftileno, acenafteno e

fluoreno.
50
Figura 7 - Espectro UV-Vis do fenantreno, antraceno, fluorenteno e pireno.
52
Figura 8 - Espectro de fluorescncia do fenantreno, antraceno, fluorenteno e

pireno.
52
Figura 9 - Espectro
b[e]acefenantrileno.
52
Figura 10 - Espectro de fluorescncia do b[a]antraceno, criseno, b[e]pireno e

b[e]acefenantrileno.
53
Figura 11 - Espectro UV-Vis do b[k]fluoranteno, b[a]pireno, dibenzo[a,h]antraceno,

b(g,h,i)perileno.
53
Figura 12 - Espectro de fluorescncia

dibenzo[a,h]antraceno, b(g,h,i)perileno.
53
UV-Vis
do
b[a]antraceno,
do
criseno,
b[e]pireno
b[k]fluoranteno,
b[a]pireno,
Figura 13 - Espectro UV-Vis do Indeno(1,2,3,cd)pireno.
54
Figura 14 - Espectro fluorescncia do Indeno(1,2,3,cd)pireno.
54
Figura 15 - Cromatograma obtido pelo detector de UV-Vis para a soluo padro

(para identificao dos HPAs ver Tabela 2).
56
Figura 16 Cromatograma obtido pelo detector fluorescncia para a soluo

padro (para identificao dos HPAs ver Tabela 2).
56
Figura 17 - Curvas analticas dos HPAs
59
Figura 18 Seleo do solvente para extrao dos 17 HPAs. O eixo vertical a

razo dos sinais para os HPAs extrados do solo pelos outros solventes
comparativamente ao obtido com a acetona.
63
Figura 19 Atividades das reas contaminadas em So Paulo (1.336 casos), 2004

(FURTADO, 2005).
71
Figura 20 Principais agentes contaminantes em So Paulo (FURTADO, 2005).
71
Figura 21 Estgios do processo de remediao em So Paulo, 2004 (FURTADO,

2005).
71
Figura 22 Ciclo de reproduo da Eisenia foetida
77
Figura 23 - Minhoca Eisenia foetida
81
Figura 24 - Montagem das caixas de compostagem.
83
Figura 25 - Caixas de compensado utilizadas no tratamento.
83
-1
Figura 26 Concentraes (mg kg ) dos HPAs nas amostras durante o processo

da vermicompostagem.
87
Figura 27 Cromatograma (CLAE-fluorescncia) da amostra do experimento E no

1 dia. O extrato foi diludo 1:9 v/v antes da corrida cromatogrfica.
94

1 dia. O extrato foi diludo 1:9 v/v antes da corrida cromatogrfica.
95

90 dia.
95
Figura 30 - Fotografias tiradas na montagem dos experimentos utilizando esterco

bovino sem pr-compostar.
96
Figura 31 - Fotografias tiradas aps 3 meses dos experimentos utilizando esterco

98
Figura 32 Experimento aps 3 meses do processo de vermicompostagem

utilizando esterco bovino sem pr-compostar
99
Figura 33 Biomassa das minhocas no incio do processo e ao final de 3 meses,

utilizando esterco bovino (a) sem pr-compostar e (b) pr-compostado.
101
Figura 34 Tamanho apresentado pelas minhocas aps 3 meses do processo.
101
Figura 35 Maior tamanho apresentado pelas minhocas aps o processo de

vermicompostagem.
102
Figura 36 Minhocas em cada experimento (B, C, D, E e F) aps 3 meses

utilizando esterco bovino sem pr-compostar.
102
Figura 37 Cromatograma (CLAE-fluorescncia) do extrato das minhocas do

experimento B.
103

experimento C.
104

experimento D.
104
Figura 40 Cromatograma (CLAE-fluorescncia) do extrato extrado das minhocas

do experimento E.
104

experimento F.
104
Figura 42 - Modelo de cido hmico proposto por STEVENSON, em 1982

(adaptado de STEVENSON, 1985).
121
Figura 43 Modelo de cido hmico proposto por SCHULTEN e SCHNITZER

(1993).
121
Figura 44 Estrutura tridimensional proposta por SEIN Jr. et al.
122
Figura 45 - Curva de distribuio granulomtrica do solo.
140
Figura 46 Teor de matria orgnica das amostras durante a vermicompostagem

nos experimentos utilizando esterco bovino (A) sem pr-compostar e (B) pr-
141
compostado.
Figura 47 CTC das amostras durante a vermicompostagem nos experimentos
utilizando esterco bovino (A) sem pr-compostar e (B) pr-compostado.
142
Figura 48 pH das amostras durante a vermicompostagem nos experimentos

142
Figura 49 Teor de umidade das amostras durante a vermicompostagem nos

experimentos utilizando esterco bovino (A) sem pr-compostar e (B) prcompostado.
144
Figura 50 Curvas analticas utilizadas para a determinao de carbono orgnico

total - (A) em MG L-1 e (B) em mg.
145
Figura 51 Carbono orgnico das amostras durante a vermicompostagem nos

experimentos utilizando esterco bovino sem pr-compostar. *Coletas dos
experimentos realizadas em triplicata.
145
Figura 52 - Teor de cidos hmicos nas amostras dos experimentos B, C, D, E e F

do 1 e 90 dia de vermicompostagem utilizando esterco bovino sem pr-compostar
(A) e pr-compostado (B).
146
Figura 53 Razo C/N do cido hmico extrado dos experimentos utilizando

esterco bovino (A) sem pr-compostar e (B) pr-compostado.
150
Figura 54 - Curvas titulomtricas de cidos hmicos (dissolvidos em soluo de

Ba(OH)2) com HCl 0,05 mol L-1 (acidez total) referentes aos experimentos de 25%
de esterco bovino bovino e 25% solo a 2% diesel (v/v) utilizando esterco bovino (A)
sem pr-compostar e (B) pr-compostado.
151

151

152

152

Ba(OH)2) com HCl 0,05 mol L-1 (acidez total) referente aos experimentos de 100%
de esterco bovino bovino utilizando esterco bovino (A) sem pr-compostar e (B)
pr-compostado.
152

Ca(CH3COO)2) com NaOH 0,05 mol L-1 (acidez carboxlica) referentes aos
experimentos de 25% de esterco bovino bovino e 25% solo a 2% diesel (v/v)
153

153

154

154

Ca(CH3COO)2) com NaOH 0,05 mol L-1 (acidez carboxlica) referente aos
experimentos de 100% de esterco bovino bovino utilizando esterco bovino (A) sem
pr-compostar e (B) pr-compostado.
154
Figura 64 - Espectros de absorbncia no UV/Visvel das amostras de cidos

hmicos extrados dos experimentos de 25% de esterco bovino e 75% solo a 2%
diesel (v/v) utilizando esterco bovino (A) sem pr-compostar e (B) pr-compostado.
156

156
Figura 66 - Espectros de absorbncia no UV/visvel das amostras de cidos

157

157

hmicos extrados dos experimentos de 100% de esterco bovino utilizando esterco
bovino (A) sem pr-compostar e (B) pr-compostado.
157
Figura 69 - Espectros no infravermelho das amostras de cidos hmicos extrados

dos experimentos de 25% de esterco bovino e 75% solo a 2% diesel (v/v)
158

159

159

159

dos experimentos de 100% de esterco bovino utilizando esterco bovino (A) sem
160
Figura 74 Isotermas de soro (VIEIRA, 1996)
173
Figura 75 Classificao das isotermas de soro
176
Figura 76 Isoterma de Freundlich da soro do antraceno (A) e naftaleno (B) em

vermicomposto (concentrao de naftaleno sorvido por g de vermicomposto versus
181
concentrao em equilbrio).
Figura 77 Forma linearizada da isoterma de Freundlich da soro do naftaleno
em vermicomposto (log da concentrao de naftaleno sorvido por g de
vermicomposto versus log da concentrao em equilbrio).
181

em solo (log da concentrao de naftaleno sorvido por g de solo versus log da
182

em solo calcinado (log da concentrao de naftaleno orvido por g de solo calcinado
versus log da concentrao em equilbrio).
182
Figura 80 Forma linearizada da isoterma de Freundlich da soro do antraceno

em vermicomposto (log da concentrao de antraceno sorvido por g de
vermicomposto versus log da concentrao em equilbrio).
182

em solo (log da concentrao de antraceno sorvido por g de solo versus log da
183

em solo calcinado (log da concentrao de antraceno sorvido por g de solo
calcinado versus log da concentrao em equilbrio).
183
Figura 83 Forma linearizada da isoterma de Freundlich da soro do

benzo[a]pireno em vermicomposto (log da concentrao de benzo[a]pireno sorvido
por g de solo versus log da concentrao em equilbrio).
183

benzo[a]pireno em solo (log da concentrao de benzo[a]pireno sorvido por g de
solo versus log da concentrao em equilbrio).
184

benzo[a]pireno em solo calcinado (log da concentrao de benzo[a]pireno sorvido
por g de solo calcinado versus log da concentrao em equilbrio).
184
Figura 86 Comportamento do contaminante no solo (DÀGOSTINHO e FLUES,

2006).
186
Figura 87 Percentual de remoo do HPA durante o biorremediao versus

massa molar do HPA. Onde: (B) 25% de esterco bovino e 75% solo; (C) 50% de
esterco bovino e 50% solo; (D) 60% de esterco bovino e 40% solo; (E) 75% de
esterco bovino e 25% solo.
197
Figura 88 Percentual de remoo do HPA durante o biorremediao versus Kow.

Onde: (B) 25% de esterco bovino e 75% solo; (C) 50% de esterco bovino e 50%
solo; (D) 60% de esterco bovino e 40% solo; (E) 75% de esterco bovino e 25%
solo.
197
Figura 89 Percentual de remoo do HPA durante o biorremediao versus

solubilidade em gua. Onde: (B) 25% de esterco bovino e 75% solo; (C) 50% de
esterco bovino e 25% solo.
198
LISTA DE TABELAS
Tabela 1 - Caractersticas fsicas dos HPAs e seus sinnimos (LUNSTEDT,
2003).
26
Tabela 2 Alguns dos parmetros otimizados na tentativa de separao dos

HPAs.
47
Tabela 3 - Comprimentos de onda de excitao e emisso (nm) utilizadas por

algumas literaturas e aqueles obtidos neste trabalho.
48
Tabela 4 Tempo de reteno (tr) e validao do mtodo em termos de

linearidade, limite de deteco (LOD) e quantificao (LOQ).
58
Tabela 5 - Recuperao (R) e desvio padro relativo (DPR) para extrao por
ultra-som de solo com metanol, acetonitrila e acetona como solventes.
62
Tabela 6 Percentual de remoo dos HPAs (%) durante o processo de

biorremediao em cada experimento.
91
Tabela 7 - Conformao de substncias hmicas em funo do pH e da

concentrao inica.
119
Tabela 8 - Caracterizao fsica e qumica do solo utilizado.
139
Tabela 9 - Teor de cinzas (%) das amostras de cidos hmicos.
147
Tabela 10 - Teor (em massa) de C, H, N, S e O, e razes atmicas H/C, O/C, C/N

e (O + N)/C das amostras de cidos hmicos, utilizando esterco bovino sem prcompostar.
148
Tabela 11 - Teor (em massa) de C, H, N, S e O, e razes atmicas H/C, O/C, C/N

e (O + N)/C das amostras de cidos hmicos, utilizando esterco bovino prcompostado.
149
Tabela 12 - Acidez total, carboxlica e fenlica das amostras de cidos hmicos

extrados dos experimentos utilizando esterco bovino sem pr-compostar (valores
em mmolc g-1).
155
Tabela 13 - Acidez total, carboxlica e fenlica das amostras de cidos hmicos

extrados dos experimentos utilizando esterco bovino pr-compostado (valores
em mmolc g-1).
155
Tabela 14 - Valores de E4/E6 das amostras de cidos hmicos.
158
Tabela 15 - Caractersticas que identificam o tipo de soro (qumica ou fsica)

(OLIVEIRA, 2003).
172
Tabela 16 - Dados de soro dos HPAs estudados segundo o modelo de

Feundlich.
186
Tabela 17 Coeficiente de distribuio (Kd) em L kg-1 numa dada concentrao e

coeficiente de distribuio em relao ao teor de carbono orgnico (Koc) L kg-1 do
vermicomposto.
188
Tabela 18 Coeficiente de distribuio (Kd) em L kg-1 numa dada concentrao e

coeficiente de distribuio em relao ao teor de carbono orgnico (Koc) L kg-1 do
solo.
188
Tabela 19 - Comparao dos valores de coeficiente de distribuio (Kd) do

naftaleno, do antraceno e do benzo[a]pireno com base nos dados de Koc segundo
a EPA (2008) com os dados obtidos experimentalmente das amostras de solo e
vermicomposto.
189
LISTA DE ABREVIATURAS
HPAs: Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos
CLAE: Cromatografia Lquida de Alta Eficincia
CETESB: Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental
CTC: Capacidade de Troca Catinica
EPA: Environmental Protection Agency
LOC: Limite de deteco
LOQ: Limite de quantificao
TOC: Carbono Orgnico Total, do ingls Total Organic Carbon
C18 : n-octadecil
UV: Ultavioleta
UV-Vis: Ultravioleta visvel
UV-Vis-NIR: Ultavioleta visvel no infravermelho prximo
IV: Infravermelho
CG: Cromatografia Gasosa
CL: Cromatografia Lquida
DPR: Desvio Padro Relativo
CONAMA: Conselho Nacional do Meio Ambiente
CG-EM: Cromatografia gasosa acoplado ao espectrmetro de massas
Kd: Coeficiente de distribuio
Koc: Coeficiente de distribuio do contaminante entre solo-gua corrigido pela
matria orgnica do solo
SUMRIO
CAPITULO I - Os hidrocarbonetos policclicos aromticos e a otimizao
do mtodo para suas determinaes nas amostras
21
1.1. FUNDAMENTOS TERICOS
22
1.1.1. Hidrocarbonetos policclicos aromticos
22
1.1.1.1. Aspectos Histricos
22
1.1.1.2. Fontes de emisso de HPAs
23
1.1.1.3. Formao de HPAs
24
1.1.1.4. Propriedades fsicas e qumicas
25
1.1.1.5. Atividades biolgicas
26
1.1.1.6. HPAs e o ambiente
29
1.1.2. A Cromatografia
12
1.1.2.1. Cromatografia Lquida de Alta Eficincia
33
1.1.2.2. Detectores
35
1.1.2.2.1. Detector de fluorescncia
36
1.1.3. Metodologia analtica
37
1.1.3.1. O otimizao do mtodo para a determinao dos HPAs nas

amostras
37
1.2. OBJETIVO
41
1.3. METODOLOGIA
41
1.3.1. Limpeza do material a ser utilizado
41
1.3.2. Reagentes e solues-padro de referncia
41
1.3.3. O solo
42
1.3.4. Determinao do intervalo de linearidade dos compostos
42
1.3.5. Avaliao da sensibilidade: limite de deteco e quantificao
43
1.3.6. Tratamento estatstico dos dados ou avaliao do mtodo
43
1.3.7. Branco do mtodo
44
1.3.8. Extrao da amostra
45
1.3.9. Instrumentao e separao cromatogrfica
45
1.3.10. Quantificao das amostras
46
1.4. RESULTADOS E DISCUSSO
46
1.4.1. Otimizao das condies cromatogrficas
46
1.4.2. Separao cromatogrfica
55
1.4.3. Linearidade, sensibilidade e preciso
57
1.4.4. Seleo do solvente de extrao
61
1.5. CONCLUSES
64
1.6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
65
CAPITULO II - A biorremediao utilizando a vermicompostagem
69
2.1. FUNDAMENTOS TEORICOS
70
2.1.1. Ocorrncia dos HPAs no ambiente
70
2.1.2. Processo de remediao
72
2.1.3. A biorremediao
72
2.1.4. A vermicompostagem e sua utilizao como forma de remediao
73
2.1.4.1. As minhocas: Em especial Eisenia foetida
74
2.2. JUSTIFICATIVA DO TRABALHO
78
2.3. OBJETIVO
80
2.4. METODOLOGIA
80
2.4.1. As minhocas utilizadas
80
2.4.2. O solo
81
2.4.2.1. Adio de diesel ao solo
81
2.4.3. A vermicompostagem
82
2.4.4. A coleta
84
2.4.5. A extrao e a determinao dos HPAs
85
2.4.6. A extrao e a determinao qualitativa dos HPAs nas minhocas aps o

90 dia do processo.
85
2.4.7. A biomassa das minhocas
86
86
2.5.1. A remoo dos HPAs durante o processo de vermicompostagem
86
2.5.2. O aspecto do solo e das minhocas aps o processo
95
2.5.3. Compostos derivados de petrleo nas minhocas
103
2.6. CONCLUSES
105
106
CAPITULO III - Caracterizao fsico-qumica e estudo da humificao

durante a biorremediao
110
111
3.1.1. As substncias hmicas
116
3.1.1.1. Fracionamento das substncias hmicas
118
3.1.1.2. Estruturas qumicas propostas para os cidos hmicos
120
3.2. OBJETIVOS
123
3.3. METODOLOGIA
123
3.3.1. Anlises granulomtricas do solo
123
3.3.2. Caractersticas fsico-qumicas
124
3.3.2.1. Determinao do pH
124
3.3.2.2. Teor de matria orgnica
125
3.3.2.3. Determinao da umidade do solo a 100-1100C
125
3.3.2.4. Determinao da capacidade de troca catinica (CTC)
126
3.3.2.4.1. Determinao dos ctions metlicos totais trocveis
126
3.3.2.4.2. Acidez trocvel
127
3.3.2.5. Determinao do carbono orgnico total
128
3.3.3. Os cidos hmicos
129
3.3.3.1. A extrao
129
3.3.3.2. Teor de Cinzas
131
3.3.3.3. Anlise Elementar (CHNS)
131
3.3.3.4. Acidez Total, Carboxlica e Fenlica
133
3.3.3.4.2. Acidez total
134
3.3.3.4.3. Acidez carboxlica
134
3.3.3.5. Espectroscopia de Absoro no Ultravioleta/Visvel
135
3.3.3.6. Espectroscopia de Absoro no Infravermelho (FTIR)
136
139
3.4.1. Caractersticas do solo estudado
139
3.4.2. Caractersticas fsicas e qumicas das amostras durante o processo
141
3.4.3. cidos hmicos
146
3.4.3.1. Extrao dos cidos hmicos
146
3.4.3.2. Teor de cinzas
147
3.4.3.3. Razo C/N dos cidos hmicos
148
151
3.4.3.5. Espectros de absorbncia na regio do UV/visvel
155
3.4.3.6. Espectros no infravermelho
158
3.5. CONCLUSES
161
162
CAPITULO IV- O estudo da soro dos compostos naftaleno, antraceno

e b[a]pireno no solo e vermicomposto
167
168
4.1.1. Conceito Terico de soro
169
4.1.2. Isoterma de soro
174
4.1.2.1. As classes das isotermas de soro
175
4.1.2.1.1. Isotermas do tipo S
176
4.1.2.1.2. Isotermas do tipo L
176
4.1.2.1.3. Isotermas do tipo H
176
4.1.2.1.4. Isotermas do tipo C
177
4.2. OBJETIVOS
177
4.3. METODOLOGIA
177
4.3.1. Reagentes e solventes utilizados no experimento de soro
177
4.3.2. Coleta e preparo das amostras
177
4.3.3. Soro dos HPAs em vermicomposto, solo e solo calcinado
178
4.3.4. Coeficiente de distribuio (Kd) e coeficiente de distribuio do

contaminante na frao orgnica do solo (Koc)
179
4.4. RESULTADO E DISCUSSO
180
4.4.1. Determinao de coeficiente de distribuio (Kd)
187
4.5. CONCLUSES
191
193
5. CONCLUSES FINAIS
195
5. Trabalhos Futuros
199
CAPITULO I
Os hidrocarbonetos policclicos
aromticos e a otimizao
do mtodo para suas
determinaes nas amostras
Os HPAs e a otimizao do mtodo para suas determinaes nas amostras 22

1.1.1. Hidrocarbonetos policclicos aromticos
1.1.1.1. Aspectos Histricos
Pode-se considerar como o incio da qumica dos hidrocarbonetos policclicos
aromticos (HPAs) o isolamento do benzo[a]pireno a partir do carvo em 1931 e,
subseqentente, a sua sntese no mesmo ano. A sua identificao como uma nova
substncia qumica, em 1933, permitiu demonstrar que o benzo[a]pireno um forte
agente cancergeno em animais (LOPES e ANDRADE, 1996).
As primeiras provas dos riscos ocupacionais e ambientais dos HPAs foram
obtidas em 1922 pela demonstrao de que extratos orgnicos de fuligem so
cancergenos em animais e, em 1942, tambm pela atividade cancergena do extrato
de material particulado ambiental. Posteriormente, a atividade biolgica foi
observada em extratos de material particulado ambiental coletado do smog
fotoqumico de Los Angeles. Em 1949, o benzo[a]pireno foi identificado em fuligem
domstica e, em 1952, em material particulado ambiental. Em 1970 o benzo[a]pireno
e outros HPAs foram caracterizados como agente cancergenos de distribuio
mundial, em ambientes respirveis, como constituintes de aerossis urbanos
(LOPES e ANDRADE, 1996).
Nos anos 70 reconhecido da carcinogenicidade atribudo ao benzo[a]pireno
e demonstrado que a atividade cancergena dos extratos de partculas atmosfricas
no somente devida aos HPAs mas, tambm, presena de outras substncias
orgnicas ainda desconhecidas (LOPES e ANDRADE, 1996).
1.1.1.2. Fontes de emisso de HPAs

Os HPAs so produzidos pela combusto incompleta de combustveis fsseis,
bem como por processos diagenticos durante a formao dos combustveis fsseis,
em pequenas quantidades por incndios de florestas, possivelmente pela sntese
microbiolgica, pelos motores de combusto gasolina e especialmente pelos de
combusto a diesel, o alcatro da fumaa do cigarro, a superfcie dos alimentos
chamuscados ou queimados, fumaa da queima de madeira ou carvo, e outros
processos de combusto parcial, nos quais o carbono ou combustvel no so
convertidos em CO ou CO2 (CODINA et al., 1994; BERSET et al., 1999; BAIRD,
2002).
Os HPAs so emitidos por fontes naturais e antropognicas. A contribuio de
fontes naturais de HPAs muito limitada restringindo-se, praticamente, queimada
espontnea de florestas e s emisses vulcnicas. No entanto, as fontes
antropognicas so as maiores responsveis pela liberao dos HPAs ao meio
ambiente (LOPES e ANDRADE, 1996).
Os HPAs so tambm oriundos de fontes tecnolgicas que podem ser mveis
ou estacionrias. Entre as fontes mveis, destaca-se o motor de combusto interna
como o principal emissor de HPA para o ambiente, estando presente em diversos
veculos de transporte de carga e passageiros. As fontes estacionrias so divididas
entre as utilizadas na gerao de energia eltrica e calor e aquelas ligadas
atividade industrial e incinerao (principalmente os rejeitos qumicos) e podem
emitir uma grande variedade de produtos de combusto incompleta (LOPES e
ANDRADE, 1996).
As fontes veiculares de emisso tm uma grande importncia devido
complexidade e quantidade, cada vez maior, de material que lanado na
atmosfera. O material particulado emitido por veculos a diesel, por exemplo,

constitudo principalmente de carbono elementar que atua como superfcie de
condensao de HPAs e outros compostos orgnicos (LOPES e ANDRADE, 1996).
As maiores fontes de emisso dos HPAs so em geral os geradores de calor
e energia, incineradores, produo de coque, produo de carvo vegetal e motores
de veculos.
1.1.1.3. Formao de HPAs

Os HPAs formam-se pela combusto incompleta de substncias orgnicas a
altas temperaturas, atravs de processos como a pirlise e pirossntese e, deste
modo, so essencialmente emitidos por todo tipo de combusto. Na pirlise d-se a
quebra parcial de substncias orgnicas em molculas menores, as quais, por sua
vez,
recombinam-se
originando
os
hidrocarbonetos
policclicos
que
so
relativamente estveis (JUHASZ e NAIDU, 2000). A formao piroltica de HPAs

bastante complexa e varivel, dependendo de fatores como presso e temperatura.
O esquema mecanstico aceito para esta reao envolve a polimerizao via radicais
livres, em vrias etapas, at a formao de ncleos aromticos condensados (Figura
1).
CH2 700oC
CH2
CH
CH2
2
...Etc
Figura 1 Esquema mecanstico para a formao de HPAs por meio de pirlise (LOPES e
ANDRADE, 1996).
1.1.1.4. Propriedades fsicas e qumicas

Os principais processos e propriedades fsicas que afetam o destino dos
HPAs durante o processo atmosfrico de sua fonte para o receptor so a presso de
vapor, temperatura, deposio mida e seca e aglomerao de partculas. A Tabela
1 apresenta as principais caractersticas dos HPAs estudados.
Os HPAs so compostos que possuem dois ou mais anis benznicos
condensados em suas estruturas, e contm somente tomos de carbono e
hidrognio. Geralmente, os HPAs so compostos lipoflicos que mostram alta
afinidade pela matria orgnica. Contudo, HPAs, individualmente, diferem
substancialmente em suas propriedades fisico-qumicas. Como mostra a Tabela 1,
propriedades como a solubilidade em gua e presso de vapor variam de cinco a
doze ordens de magnitude quando se tm de dois a seis anis de benzeno na
molcula de HPAs, respectivamente. Eles existem nos estados lquido e slido e
apresentam ponto de ebulio maior do que 218C, sob presso atmosfrica normal.
Os HPAs de baixa massa molar so muito mais solveis em gua e volteis que os
HPAs de alta massa molar, os quais apresentam maior hidrofobicidade do que os
compostos com baixa massa molar. A diferena na hidrofobicidade tambm
refletida pelo coeficiente de partio octanol:gua (log Kow) mostrado na Tabela 1.
O coeficiente de partio gua:octanol varia entre 3,37 para o naftaleno (composto
com 2 anis) e 6,75 para o dibenzo[a,h]antraceno (LUNSTEDT, 2003).
As transformaes qumicas implicam em modificaes das propriedades
fsicas dos HPAs. Geralmente as reaes que envolvem os HPAs podem ser
classificadas como de substituio (um tomo de hidrognio trocado por outro
elemento ou grupo) ou adio (uma ligao dupla desfeita). O processo de adio
seguido de eliminao resulta em reao de substituio. Os produtos destas
reaes podem, subseqentemente, sofrer novas transformaes, inclusive a

abertura de anis, e dar origem a substncias mais complexas (LOPES e
ANDRADE, 1996).
O tipo de reao que um HPA pode experimentar depende de sua prpria
estrutura e das espcies com quem interagem. As posies em que ocorrem as
reaes so determinadas pela estabilidade das espcies intermedirias. So mais
reativas aquelas adjacentes fuso dos anis por serem energeticamente
favorecidas (LOPES e ANDRADE, 1996).
Tabela 1 - Caractersticas fsicas dos HPAs e seus sinnimos (LUNSTEDT, 2003)
No de
anis
2
3
3
3
3
3
4
4
4
Criseno
C10H8
C12H8
C12H10
C13H10
C14H10
C14H10
C16H10
C16H10
C18H12
MM
(gmol-1)
128,17
152,20
154,21
166,22
178,23
178,23
202,26
202,26
228,29
PF
(0C)
80,2
92,5
93,4
115
99,2
215
151
108
167
PE
(0C)
218
280
279
295
340
340
404
384
435
SA*
(mgL-1)
31
16
3,8
1,9
1,1
0,045
0,13
0,26
0,011
C18H12
228,29
258
448
0,006
Benzo[e]acefenantrileno
C20H12
252,32
168
0,0015
Benzo[k]fluoranteno
Benzo[a]pireno
5
5
C20H12
C20H12
252,32
252,32
217
177
480
495
0,0008
0,0038
C20H12
252,32
178
311
HPA
Naftaleno
Acenaftileno
Acenafteno
Fluoreno
Fenantreno
Antraceno
Pireno
Fluoranteno
Benzo[a]antraceno
Benzo[e]pireno
FM
Dibenzo[a,h]antraceno
6
C22H14
278,35
270
524
0,0006
Indeno[1,2,3-cd]pireno
6
C22H12
276,34
164
0,00019
Benzo[g,h,i]perileno
6
C22H12
276,34
278
0,00026
*SA - solubilidade em gua, PV - presso de vapor, FM - formula molecular, PF
coeficiente de partio octanol:gua, MM - massa molar.
PV*
(Pa)
1,0x102
9,0x10-1
3,0x10-1
9,0x10-2
2,0x10-2
1,0x10-3
6,0x10-4
1,2x10-3
2,8x10-5
Log
Kow
3,37
4,00
3,92
4,18
4,57
4,54
5,18
5,22
5,91
Sinnimos
Nafteno
Acenaftaleno
Benzo[d,e,f]fenantreno
Benzo[j,k]fluoreno
1,2-benzantraceno;
benzo[b]fenantreno;
2,3-benzofenantreno;
tetrafeno
5,7x10-7
5,91
1,2-benzofenantreno;
benzo[a]fenantreno
5,80
Benzo[b]fluoranteno;
3,4-benzofluoranteno;
2,3-benzofluoranteno
5,2x10-8
6,00
11,12-benzofluoranteno
-7
7,0x10
5,91
3,4-benzopireno;
6,7-benzopireno
1,2-benzopireno;
4,5-benzopireno
3,7x10-10
6,75
1,2,5,6-dibenzantraceno
6,50
2,3-fenilenopireno
1,4x10-8
6,50
1,12-benzoperileno
- ponto de fuso, PE - ponto de ebulio, Kow -
1.1.1.5. Atividades biolgicas

Uma grande variedade de substncias qumicas presentes no ambiente so
benignas ou ativamente benficas. Contudo, tem aumentado muito o relato de
poluentes ambientais que apresentam atividade mutagnica e cancergena. A
caracterizao da atividade biolgica e a quantificao destes compostos no
ambiente no o suficiente para determinar o risco individual. Geralmente, aps
absoro pelo organismo, estas substncias so convertidas em metablitos ativos.

Uma rigorosa avaliao de riscos requer a determinao dos efeitos resultantes da
exposio, conhecimento da relao dose-resposta e compreenso do mecanismo
de mutagnese para cada substncia qumica considerada. Isto finalmente depende
de metodologias analticas adequadas para a quantificao de metablitos ativos
oriundos de poluentes ambientais (LOPES e ANDRADE, 1996).
O
processo
de
mutagnese
est
intimamente
relacionado
com
carcinognese. Quando uma substncia qumica interage com o material gentico

podem aparecer as mutaes, ou seja, alteraes no material gentico. A
carcinognese mais complexa e envolve duas etapas principais: a iniciao e a
promoo. A iniciao caracteriza-se pela ocorrncia de uma mutao e a promoo
pelo crescimento celular intenso e desordenado das clulas iniciadas ou mutantes
originando focos de proliferao dos quais alguns se desenvolvem em tumores
(ANDRADE, 2000).
A atividade carcinognica de um composto particular dependente de vrios
fatores estruturais da molcula como forma, tamanho, fatores estricos e potencial
de ionizao.
Os HPAs esto entre aqueles poluentes ambientais que apresentam atividade
cancergena e mutagnicas, tendo sido comprovado que provocam tumorao em
animais e mutaes em bactria.
Investigaes sobre a atividade cancergena relativa de HPAs indicam que os
epxidos formados em regio de baia, em molculas angulares, so mais reativos
que os epxidos possveis na mesma molcula ou epxidos formados em molculas
lineares (Figura 2). Esta regio conhecida por propiciar vrios tipos de reaes e a
reatividade pode ser resultante da estabilidade do carboction formado como
intermedirio; o mesmo no ocorre com os HPAs lineares (LOPES e ANDRADE,

1996).
A ao carcinognica dos HPAs tem sido principalmente observada em
compostos tri-, tetra-, penta- e hexa-cclicos e parece estar relacionada com a
existncia da regio ativa K e da regio inativa L. A regio K possui alta densidade
eletrnica e a reatividade carcinognica pode ser formada via epoxidao na regio
K, enquanto que a reao na regio L conduz a um produto que facilmente
detoxificado (SUNDBERG et al., 1998; QIANHUAN, 1998.)
Similaridades estruturais entre metablitos ativos (diis e epxidos) de
diferentes HPAs conduziram proposta da teoria da regio de baa, na qual a
posio do anel epxido reativo dentro da molcula altamente relacionada sua
atividade biolgica. A atividade alta se o anel epxido faz parte da regio da baa.
As regies K e L, juntamente com a regio de baa, esto representadas na
estrutura do benzo[a]antraceno na Figura 2 (BRAGA et al., 1999; BARONE et al.,
1996).
Regio baia
Regio L
Regio K
Figura 2 - Regio K, L e baa do benzo[a]antraceno (BRAGA et al., 1999).
Dados sobre o potencial carcinognico e mutagnico dos HPAs so vastos na

literatura (BJRSETH e BECHER, 1986; LEE et al., 1981; COOKE e DENNIS,
1986). Sabe-se que de 70 a 90% dos cnceres humanos so causados por fatores
ambientais (LEE et al., 1981).
Uma ampla faixa de efeitos ecotoxicolgicos agudos e crnicos dos HPAs em
diversos componentes da biota, incluindo microorganismos, plantas terrestres, biota
aqutica, anfbios, reptis e animais terrestres tm sido relatados (LUNSTEDT,
2003), incluindo sobrevivncia, reproduo, crescimento e metabolismo, alm dos
efeitos citotxicos, genotxicos e carcinognicos. Porm, os focos principais da
pesquisa toxicolgica dos HPAs so a genotoxicidade e carcinogenicidade,
comprovando que alguns HPAs alteram o DNA e causam mutao, o que, em
alguns casos, pode resultar em cncer (LUNSTEDT, 2003).
1.1.1.6. HPAs e o ambiente

Os HPAs representam um importante grupo de micropoluentes orgnicos
(xenobiticos) devido alta capacidade de distribuio no ambiente (atmosfera,
gua e solo) (PEREIRA NETTO et al., 2000), sendo encontrados em matrizes
ambientais como uma mistura extremamente complexa contendo numerosos
ismeros em uma faixa extensa de concentrao (GORSHKOV et al., 2003;
VERWEIJ et al., 2004). HPAs so considerados indicadores de contaminao por
combustveis, por no se degradarem no ambiente. Comparando-se os HPAs com
menos de 4 anis com os que contm 4 ou mais, estes ltimos so menos volteis e
menos solveis em gua. Os HPAs permanecem no ambiente por um longo tempo.
Por essa razo, importante monitorar os HPAs tendo 4 ou mais anis em amostras
ambientais contaminadas por combustveis (UTSUMI et al., 1998). Nestes estudos
fica claro que a persistncia de HPAs no ambiente solo est possivelmente
relacionada com o nmero de anis benznicos na molcula do HPA. Este fato fica
aparente porque os compostos com alta massa molar so menos susceptveis

degradao, lixiviao e volatilizao (WIIDFL et al., 1992).
Devido s suas propriedades fsico-qumicas, especialmente os HPAs de alta
massa molar so dificilmente degradveis e tendem a se acumular em diferentes
compartimentos ambientais (PEREIRA NETTO et al., 2000; VERWEIJ et al., 2004;
BERSET et al., 1999; TOMANIOV et al., 1998; KOH et al., 2004; RHODES et al,
2005; QUANTIN et al., 2005).
Embora existam centenas de HPAs no ambiente, somente 17 HPAs so
selecionados pela US Environmental Protection Agency (US EPA) e o
National
Institute for Occupational Safety and Health (NIOSH) como poluentes prioritrios, a
saber:
naftaleno,
acenaftileno,
acenafteno,
fluoreno,
fenantreno,
antraceno,
fluoranteno, pireno, benzo[a]antraceno, criseno, benzo[e]pireno, benzo[b]fluoranteno

ou b(e) acefenantrileno, benzo[k]fluoranteno, benzo[a]pireno, dibenzo[a,h]antraceno,
benzo[g,h,i]perileno e indeno[1,2,3-cd]pireno, sendo monitorados rotineiramente
para fins reguladores. A EPA (EPA, 600/4-89/017,1988) considera como poluente
prioritrio para investigao ambiental os compostos da Figura 3, com exceo ao
benzo[e]pireno, enquanto que o NIOSH (Method 5506,1998) considera como
prioritrio todos os compostos apresentados. Ambas as agncias citadas so do
governo norte-americano, pois no Brasil no h legislao ambiental e/ou
ocupacional a respeito dos HPAs em solo.
Acenafteno
Benzo(b)fluoranteno
Benzo(a)pireno
Dibenzo(a,h)antraceno
Fluoreno
Antraceno
Acenaftileno
Benzo(a)antraceno
Benzo(k)fluoranteno
Benzo(g,h,i)perileno
Criseno
Benzo(e) pireno
Fenantreno
Fluoranteno
Naftaleno
Indeno(1,2,3,cd)pireno
Pireno
Figura 3 Estrutura dos HPAs estudados (NIOSH, 1989).
Devido sua alta carcinogenicidade, mutagenicidade e persistncia no

ambiente (OBUCHI et al., 1984; ANYAKORA et al., 2005), a EPA tem includo os 16
HPAs em sua lista de poluentes prioritrios e tem desenvolvido mtodos para seu
monitoramento no ambiente. Em 1986, a EPA props uma regulamentao para
diminuir os riscos de poluio, incluindo limites de concentrao para poluentes
orgnicos como o benzo[a]pireno, por exemplo. Na Europa apresenta-se uma lista
de
seis
HPAs
benzo[k]fluoranteno,
fluoranteno,
benzo[g,h,i]perileno
benzo[a]pireno,
e
Benzo[b]fluoranteno,
indeno[1,2,3-cd]pireno
para
monitoramento em guas superficiais usadas para fins de potabilidade.

Os HPAs so adsorvidos nas partculas slidas do solo, pois a maioria deles
apresentam baixa solubilidade em gua e alta hidrofobicidade (MIGE et al., 1998).
No solo, muitos HPAs so fortemente adsorvidos na matria orgnica, o que os
torna relativamente indisponveis para o processo de degradao. Os HPAs podem,
ento, permanecer no solo por muito tempo, possuindo um longo tempo de

residncia, apesar dos HPAs de baixa massa molar serem praticamente perdidos
por processos de degradao, volatilizao e lixiviao.
A natureza semi-voltil dos HPAs de baixa massa molar indica que eles
existem na atmosfera particularmente como vapor e so, por essa razo, altamente
suscetveis ao processo de degradao atmosfrica. Similarmente, em ambiente
aquoso, os HPAs de baixa massa molar so mais facilmente dissolvidos, tornandose disponveis para vrios processos de degradao. Os HPAs de alta massa molar,
por outro lado, so primeiramente associados s partculas na atmosfera e gua,
sendo por essa razo mais recalcitrantes degradao. Alm disso, os HPAs
adsorvidos sobre as partculas podem ser transportados a longas distncias na
atmosfera (LUNSTEDT, 2003).
1.1.2. A Cromatografia
A cromatografia compreende um grupo diversificado e importante de mtodos
que permitem ao cientista separar componentes muito semelhantes de misturas
complexas. Em todas as separaes cromatogrficas, a amostra transportada por
uma fase mvel, que pode ser um gs, um lquido ou um fluido supercrtico. Essa
fase mvel ento forada atravs de uma fase estacionria imiscvel fixa, colocada
na coluna ou em uma superfcie slida. As duas fases so escolhidas de modo que
os componentes da amostra se distribuam entre as fases mvel e estacionria em
vrios graus. Os componentes que so mais fortemente retirados na fase
estacionria movem-se muito lentamente no fluxo da fase mvel. Ao contrrio, os
componentes que se ligam mais fracamente fase estacionria, movem-se mais
rapidamente.
Como
conseqncia
dessas
diferenas
na
mobilidade,
os
componentes da amostra se separam em bandas ou zonas discretas que podem ser

analisadas qualitativa e/ou quantitativamente (SKOOG et. al, 2002).
Uma classificao mais bsica dos mtodos cromatogrficos apia-se nos
tipos de fase mvel e estacionria e nos tipos de equilbrio envolvidos na
transferncia de solutos entre as fases. Levando em conta a fase mvel pode-se,
como exemplo, classific-la em cromatografia lquida quando a fase mvel um
lquido, e gasosa quando a fase mvel um gs.
1.1.2.1. Cromatografia Lquida de Alta Eficincia

No incio do desenvolvimento da cromatografia lquida, os cientistas
perceberam que a eficincia da coluna podia ser aumentada atravs da diminuio
do tamanho da partcula da fase estacionria. Entretanto, somente no final dos anos
60 foi desenvolvida a tecnologia para a produo e uso de fases estacionrias com
partculas de dimetro de 3 a 10 m. Esta tecnologia exigiu equipamentos
sofisticados operando a altas presses, que contrastavam acentuadamente com as
colunas simples de vidro da clssica cromatografia lquida de fluxo por gravidade. O
nome Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE) empregada para distinguir
esses procedimentos mais novos dos mtodos bsicos, ainda usados para
finalidades preparativas. A CLAE a mais usada de todas as tcnicas de separao.
As razes para a popularidade do mtodo a sua sensibilidade, a fcil adaptao
para determinaes quantitativas acuradas, sua adequao separao de
espcies no-volatis ou termicamente frgeis e, acima de tudo, sua ampla
aplicabilidade a substncias de grande interesse para a indstria, para muitos
campos das cincias e para o pblico (SKOOG et. al, 2002).
Para se obter vazes do eluente com fases estacionrias com tamanho de

partculas de 2 a 10 m, comuns na cromatografia lquida moderna, so requeridas
presses de bombeamento de at milhares de libras por polegadas quadradas (psi).
Como conseqncia dessas altas presses, o equipamento necessrio para CLAE
tende a ser mais sofisticado e caro do que os encontrados para outros tipos de
cromatografia (SKOOG et. al, 2002). A Figura 4 mostra o cromatografo Lquido de
Alta Eficincia utilizado no trabalho.
Figura 4 Cromatografo lquido utilizado
Os trabalhos iniciais em cromatografia lquida estavam baseados em fases

estacionrias altamente polares, como gua ou trietilenoglicol, suportados em
partculas de slica ou alumina. Um solvente relativamente apolar, como o hexano,
serve ento como fase mvel. Por razes histricas, atualmente denomina-se esse
tipo de cromatografia como cromatografia de fase normal. Na cromatografia de fase
reversa, a fase estacionria apolar, geralmente um hidrocarboneto, e a fase mvel
relativamente polar (como gua, metanol e acetonitrila). Em cromatografia de fase
normal, o componente menos polar eludo primeiro por ser o mais solvel na fase
mvel. O aumento de polaridade da fase mvel tem efeito de diminuir o tempo de
eluio. Ao contrrio, no mtodo de fase reversa, o componente mais polar aparece

primeiro e o aumento da polaridade da fase mvel aumenta o tempo de eluio
(SKOOG et. al, 2002).
Os empacotamentos para fase ligada so classificadas sendo de fase reversa
quando a cobertura ligada tem carter apolar, e como de fase normal quando o
recobrimento contm grupos funcionais polares.Talvez trs quartos de toda a CLAE
esteja atualmente sendo feita em colunas com empacotamento de fase reversa.
Mais comumente, o grupo R do siloxano nesses recobrimentos a cadeia C8 (noctil) ou a cadeia C18 (n-octadecil).
Com essas preparaes, os grupos de hidrocarbonetos de cadeia longa so
alinhados paralelamente um ao outro e perpendicularmente superfcie da partcula,
gerando uma estrutura reticular. Atualmente, no est inteiramente claro o
mecanismo pelo quais essas superfcies retm molculas do soluto. Os suportes
para a maioria dos empacotamentos de fase ligada para cromatografia so
preparados com slica rgida ou com composies base de slica (SKOOG et. al,
2002).
1.1.2.2. Detectores
Os detectores de Cromatografia lquida so de dois tipos bsicos. Os
detectores de propriedades universais ou globais respondem s propriedades da
fase mvel como um todo, como ndice de refrao. Ao contrrio, detectores de
propriedade do soluto respondem a algumas propriedades do soluto, como
absorbncia no UV e fluorescncia, que no pertencem fase mvel (SKOOG et. al,
2002).
1.1.2.2.1. Detector de fluorescncia

Em condies normais a maior parte das molculas se encontra no nvel
energtico mais baixo do estado eletrnico (estado fundamental). A absoro de um
quantum de luz promove a passagem dos eltrons a nveis superiores de energia
(estado excitado). Durante o retorno ao estado fundamental, uma parte da energia
absorvida reemitida, sendo este fenmeno conhecido como luminescncia. Se a
energia reemitida partir do primeiro estado singlete excitado, o fenmeno
corresponde fluorescncia. A fluorescncia corresponde em princpio, ao processo
inverso do fenmeno da absoro, uma vez que se produz sempre pela emisso de
energia a partir do nvel mais baixo do primeiro estado singlete excitado.
A fluorescncia de um composto depende de sua estrutura molecular e est
quase sempre associada ao sistema eletrnico . Os eltrons envolvidos numa
ligao esto, geralmente, fortemente ligados molcula sendo necessrio
fornecer mais energia para levar estes eltrons a ocupar um orbital molecular vazio.
Assim os espectros eletrnicos produzidos por transies * se situam nas
zonas de comprimento de ondas mais curtos do espectro eletromagntico. Os
eltrons , ao contrrio, esto mais livres que os eltrons . O espectro de emisso
correspondente se situa na regio de comprimentos de onda mais longos.
Os detectores de fluorescncia para CLAE tm projetos similares aos
fluormetros e espectrofluormetros. Na maioria deles, a fluorescncia observada
por um detector fotoeltrico posicionado perpendicularmente ao feixe de excitao.
Os detectores mais simples empregam uma fonte de excitao de mercrio e um ou
mais filtros para isolar uma banda de emisso de radiao. Os equipamentos mais
sofisticados possuem uma fonte de xennio e empregam um monocromador de rede
para isolar a radiao fluorescente (SKOOG et. al, 2002).
1.1.3. Metodologia analtica

1.1.3.1. O otimizao do mtodo para a determinao dos HPAs nas
amostras
Os melhores mtodos disponveis para monitorar HPAs so a cromatografia
lquida (CL) com deteco por fluorescncia e ultravioleta e a cromatografia gasosa
(CG) acoplada ao espectrmetro de massas. As etapas de separao e deteco
para amostras slidas so descritas no mtodo 8310 da EPA, usando CL com
deteco no ultravioleta (UV) e fluorescncia e mtodo 8100, usando CG acoplada a
espectrmetro de massas. Os vrios mtodos j validados no deixam dvidas
quanto vantagem da CL no fracionamento de misturas complexas de HPAs e no
clean-up de amostras. Por exemplo, os procedimentos analticos recomendados
pela EPA-US so documentados nos mtodos 550.1 (gua potvel), 610 (gua
residual), 8310 (resduo slido) e TO-13 (ar). Todos esses mtodos so baseados na
CL com detector UV e fluorescncia. A CLAE prefervel cromatografia gasosa de
alta resoluo (CGAR), pois mesmo que apresente uma eficincia mais baixa na
resoluo de HPAs com baixa massa molar, as colunas de fase reversa podem
realmente separar um nmero de ismeros HPAs que so difceis de separar por
CGAR (MORET e CONTE, 2000).
No mtodo 8310 da EPA, 1986 (EPA, 2007) recomenda-se a determinao
dos HPAs em resduos slidos utilizando CLAE e, neste caso, os detectores
indicados so UV (254 nm) e fluorescncia (excitao: 280 nm e emisso: 389 nm) e
coluna de fase reversa HC-ODS Sil-X, de 250 x 2.6 mm com dimetro de partcula
de 5 m (Perkin Elmer no. 089-0716). Eluio isocrtica por 5 min usando
acetonitrila/gua (4:6 v/v) e, ento, um gradiente de eluio linear a 100%
acetonitrila at 25 min, com vazo de 0,5 mL min-1. Nestas condies, o limite de
deteco do mtodo quando utilizado CLAE/fluorescncia se mostrou melhor que o

sistema CLAE/UV. No sistema CLAE/UV o limite de deteco variou de 0,21 a 2,3
g/L enquanto que no CLAE/fluorescncia situou-se entre 0,013 a 0,66 g/L.
O mtodo 5506 NIOSH (1998) tambm trata da determinao dos HPAs por
CLAE/UV e fluorescncia em srie. Neste mtodo recomenda-se o comprimento de
onda de 254 nm no UV e os comprimentos de onda de 340 e 425 nm,
respectivamente, para excitao e emisso no detector de fluorescncia. A coluna
de fase reversa recomendada uma C-18 de 250 x 4,6 mm com dimetro de
partcula de 5 m. Um gradiente de eluio linear de 60% acetonitrila/40% gua para
100% acetonitrila acima de 20 min, seguido a 100% por 20 min e um gradiente linear
com as condies iniciais por 5 min, mantendo a temperatura ambiente com uma
vazo de 1 mL min-1. Os compostos naftaleno, acenaftileno, acenafteno, fluoreno,
antraceno, fenantreno e criseno so detectados por UV e os demais por
fluorescncia. Neste mtodo, os limites de deteco e quantificao se mostraram
bastante baixos, variando significativamente de um composto para outro (o intervalo
de valores para o limite de deteco mostra-se entre 0,0010-0,090 g para
antraceno e benzo[a]antraceno e 0,20-5,0 g para acenafteno). A extrao
realizada com 5 mL de acetonitrila de 30 a 60 minutos em um banho de ultra-som.
Mige et al. (1998) estudaram a determinao de poliaromticos em lodo de
esgoto por CLAE/fluorescncia. Uma coluna Bakerbond PAH-16 Plus (J.T. BakerMallinckrodt) de 250x3 mm foi usada. A acetonitrila e gua foram usadas como
solvente de eluio com uma vazo de 0,5 mL min-1. O programa de gradiente de
eluio foi de 0-5 min: acetonitrila-(40:60)gua; ento um gradiente eluio linear de
40% acetonitrila at 5 min a 100% acetonitrila at 30 min, abaixando por eluio
isocromtica com 100% acetonitrla por 5 min. A temperatura da coluna foi mantida a
45oC. Os comprimentos de onda de excitao e emisso foram mudados durante a

separao cromatogrfica na ordem para obter melhor sensibilidade. Os
comprimentos de onda de excitao e emisso foram de: 280/340 nm a 0 min,
295/380 nm a 18,2 min, 280/430 nm a 19,3 min, 285/460 nm a 26 min at 35 min. O
limite de deteco obtido por injeo direta da mistura padro dos 16 HPAs esto
entre 2 a 100 vezes mais altos usando detector de fluorescncia comparado com o
detectado por UV, exceto para antraceno e criseno, que possuem limites de
deteco similares por UV e por fluorescncia.
Para cada mtodo, uma etapa de extrao e concentrao requerida e o
principal problema para anlise de traos de poluentes orgnicos vem da
complexidade das vrias matrizes, que depende de sua origem (MIGE et al., 1998).
Os HPAs individualmente esto presentes no solo em nveis de ng/g ou
abaixo, e poucas matrizes podem ser analisadas diretamente. A eliminao dos
interferentes, extrao, pr-concentao e clean-up das amostras so etapas
indispensveis para a determinao dos HPAs. A extrao do analito em amostras
slidas continua sendo um passo crtico na anlise de contaminantes. Deve-se
avaliar o mtodo de extrao sempre levando em conta os seguintes aspectos:
seletividade para os componentes de interesse, recuperao do analito, volume do
solvente orgnico necessrio, toxicidade do solvente, tempo de extrao e nmero
de passos de clean-up requeridos aps a extrao (FEDOTOV et al., 2004;
HAWTHORNE et al., 2000). Cada tcnica tem seu prprio mrito e a escolha da
extrao depende, ainda, de outros fatores como o custo de capital, o custo e a
simplicidade de operao e a disponibilidade de um mtodo-padro ou validado.
Existe uma srie de tcnicas de extrao por solventes comumente usadas para a
extrao de hidrocarbonetos em solo e sedimento (HAWTHORNE et al., 2000;
SONG et al., 2004; SAIM et al., 1997; REIMER e SUAREZ, 1995). H procedimentos
de extrao que incluem Soxhlet, ultra-som, agitao mecnica, refluxo com KOH e
destilao a vapor, e tcnicas que incluem extrao por fludo supercrtico, extrao
lquida pressurizada, entre outras (FERNNDEZ-PREZ et al., 2000). A extrao em
Soxhlet o mtodo recomendado pela US Environmental Protection Agency (EPA)
para a extrao de compostos orgnicos semi-volatis e no-volteis de matrizes
slidas. Esta extrao, cuja eficincia alta, tem sido por muitos anos o mtodopadro para preparar um extrato de solvente das matrizes slidas contendo HPAs.
Contudo, o procedimento tedioso, pois o tempo de extrao longo, com
aproximadamente 16 horas ou mais, requer uma grande quantidade de solvente e
pode, ainda, degradar compostos termicamente lbeis (BANJOO e NELSON, 2005).
Mais recentemente, outras tcnicas de extrao em amostras ambientais slidas tm
sido desenvolvidas para tentar reduzir o tempo de extrao e a quantidade de
solvente, como, por exemplo, por ultra-som. Em comparao extrao por Soxhlet,
a extrao por ultra-som ocorre em curto espao de tempo (cerca de 15 minutos) e
oferece boa recuperao dos analitos, por meio de um equipamento simples e de
fcil operao (SUN et al., 1998). A otimizao dos parmetros de extrao por ultrasom, incluindo tipo de solvente ou composio do solvente, tempo de extrao,
carga da amostra e teor de gua, necessria para a obteno de uma maior
eficincia e reprodutibilidade de extrao (BERSET et al., 1999). Alm disso, para
melhorar a recuperao obtida, usa-se um solvente polar, como a acetona ou
metanol, minimizando-se, assim, a necessidade da secagem das amostras antes da
extrao. A secagem de amostras contendo analitos volteis ou semi-volteis um
fator de erro, devido perda desses analitos. At cerca de 16% de perdas de
hidrocarbonetos tm sido observadas, em conseqncia da secagem das amostras
em forno a 45oC. O uso de alta temperatura na extrao em Soxhlet tambm resulta

em perdas de hidrocarbonetos atribudas volatilizao e/ou oxidao de espcies
altamente volteis e termodinamicamente lbeis. Vrios estudos tm sido relatados
(BANJOO e NELSON, 2005; SUN et al. 1998) mostrando a eficincia de extrao
por ultra-som de analitos orgnicos em sedimento e solo utilizando diferentes
solventes.
1.2. OBJETIVO
O objetivo desta parte do trabalho foi adaptar um mtodo para anlise de
HPAs em solo, em nvel de mg kg-1 (matria seca), com limites de deteco de
HPAs em nveis de g L-1 a ng L-1 para cada composto. Foram avaliados a
recuperao, o limite de deteco e a aplicao do mtodo.
1.3. METODOLOGIA
1.3.1. Limpeza do material a ser utilizado
Toda vidraria utilizada foi imersa em soluo de detergente Extran alcalino
(Merck) por 24 horas e enxaguada sucessivamente, 6 vezes em gua corrente, 3
vezes em gua destilada, 1 vez com gua isenta de orgnicos e 1 vez com acetona.
A secagem foi feita em estufa (exceto material volumtrico). No momento da
utilizao foram feitas 2 lavagens com acetona.
1.3.2. Reagentes e solues-padro de referncia

Todos os reagentes e solventes utilizados foram de grau analtico. O sal de
sulfato de sdio foi obtido da Mallinckrodt Chemicals. Os solventes acetona,
acetonitrila e metanol foram obtidos da Mallinckrodt Chemicals; os padres slidos
dos correspondentes HPAs da Supelco. As solues-padro dos HPAs foram

preparadas separadamente em uma concentrao de 100 mg L-1 em acetonitrila. A
soluo-estoque padro ou padro mista foi preparada pela dissoluo de
quantidades apropriadas dos HPAs em acetonitrila, dependendo da resposta de
cada HPA pelo detector de fluorescncia e o acenaftileno pelo UV, com as seguintes
concentraes: naftaleno (0,492 mg L-1), acenaftileno (0,984 mg L-1), acenafteno
(0,032 mg L-1), fluoreno (0,162 mg L-1), fenantreno (0,540 mg L-1), antraceno (0,032
mg L-1), fluoranteno (3,142 mg L-1), pireno (0,212 mg L-1), benzo[a]antraceno (0,236
mg
L-1),
criseno
(0,540
mg
L-1),
benzo[e]pireno
(0,687
mg
L-1),
benzo[e]acefenantrileno ou benzo[k]fluoranteno (0,491 mg L-1), benzo[k]fluoranteno

(0,039 mg L-1), benzo[a]pireno (0,130 mg L-1), dibenzo[a,h]antraceno (1,944 mg L-1),
benzo[g,h,i]perileno (1,296 mg L-1), indeno[1,2,3-cd]pireno (1,296 mg L-1), e
estocadas sob refrigerao a 4oC. As solues-padro de trabalho foram preparadas
por diluio da soluo-estoque a um volume final de 5,0 mL com acetonitrila. A
identificao dos HPAs estudados foi feita em relao aos tempos de reteno dos
picos e a quantificao pelas reas dos mesmos.
1.3.3. O solo
O solo utilizado durante o trabalho foi coletado na fazenda Santa Isabel, na
Rodovia SP215, km 140, municpio de So Carlos, estado de So Paulo,
caracterizando um solo no cultivado e sem histrico de contaminao. Para efeito
didtico as caracterstcas do solo esto apresentadas no captulo III, pgina 139.
1.3.4. Determinao do intervalo de linearidade dos compostos

A linearidade refere-se faixa de concentrao na qual o composto de
interesse mantm a relao concentrao/rea do pico constante. A partir da
determinao da linearidade foram construdas as curvas analticas para os HPAs
estudados no intervalo de concentrao determinado, utilizando soluo-padro com
concentrao conhecida.
1.3.5. Avaliao da sensibilidade: limite de deteco e quantificao

A definio para limite de deteco adotada em 1975 estabelece que: limite
de deteco expressa a concentrao derivada da menor medida que pode ser
detectada com razovel certeza para dado mtodo analtico, ou seja, o limite de
deteco a mais baixa concentrao de um determinado analito que se pode
detectar por determinado procedimento analtico (LONG, 1983). Os limites de
deteco (LOD) e quantificao (LOQ) foram determinados com base na definio
IUPAC (KRULL e SWARTZ, 1998; LONG, 1983) segundo as Equaes 1 e 2, pelas
curvas analticas de cada composto, sendo:
LOD = 3.(/A)
(1)
LOQ = 10.(/A)
(2)
Onde:
= desvio-padro dos valores de y no ponto de intercepto com a regresso
linear;
A = coeficiente angular da curva analtica.
1.3.6. Tratamento estatstico dos dados ou avaliao do mtodo

Para a avaliao do mtodo foram utilizadas amostras do solo como matriz,
adicionando-se solues-padro de concentrao conhecida dos HPAs. Essas
matrizes foram, ento, submetidas ao mesmo procedimento analtico para as
amostras reais, sendo avaliados deste modo a porcentagem de recuperao do
mtodo. Foram determinados ainda o desvio padro (S) e desvio-padro relativo
(DPR), atravs das Equaes 3 e 4:
S=
(X X )
DPR =
Onde:
n 1
S
100
X
(3)
(4)
DPR = desvio-padro relativo

S = desvio-padro;
X = valor de recuperao;
X = mdia dos valores de recuperao;
n = nmero de determinao feitas.

A recuperao do mtodo de extrao foi determinada comparando-se a
concentrao no solo dopado com soluo-padro, submetida aos procedimentos de
extrao e comparada com o cromatograma do padro na respectiva concentrao.
Foram utilizados diferentes solventes de extrao, como acetona, metanol e
acetonitrila, com vistas avaliao do melhor extrator para os compostos de
interesse e recuperao do mtodo.
1.3.7. Branco do mtodo

Para a avaliao do branco foi seguido o mesmo procedimento aplicado s
amostras, ou seja, uma anlise completa utilizando-se apenas o solo calcinado como
matriz na extrao, com o objetivo de identificar possveis interferentes dos
solventes ou do solo que podem co-eluir com os compostos de interesses,
prejudicando a identificao e quantificao das mesmas.
1.3.8. Extrao da amostra

Para o mtodo de extrao de HPAs foi utilizada a tcnica de ultra-som. As
extraes foram realizadas em triplicata e de cada extrato foram feitas cinco injees
cromatogrficas. Amostras de 5 g de solo in natura e 5 g de sulfato de sdio foram
colocadas em recipiente fechado de 200 mL com 25 mL do solvente. A amostra foi
sonicada em banho de ultra-som (modelo 2510, marca Branson) por 15 min. A
soluo extrada foi centrifugada, separada e esse extrato foi filtrado em um vial (em
filtro de 13 mm de dimetro e 0,45 m de porosidade, da Hewlett Packard) e
armazenada em refrigerador a 4oC para posterior injeo (em triplicata) de 10 L no
CLAE.
1.3.9. Instrumentao e separao cromatogrfica

A determinao dos HPAs foi feita por CLAE, utilizando-se um cromatgrafo
da marca Shimadzu, com detector UV-Vis, modelo SPD-10A VP, e fluorescncia,
modelo RF-10A, utilizando uma coluna C-18 (250 x 4,6 mm SS, Wakosil II 5C18AR 5
m, SGE). A acetonitrila e a gua deionizada foram usadas como eluentes na vazo
de 1,8 mL min-1. O gradiente de eluio foi de 0-9,6 min: acetonitrila-(25-75%) gua,

9,6-20 min: 100 % acetonitrila. A temperatura da coluna foi mantida a 25oC. O
comprimento de onda de excitao/emisso no fluorescncia foi fixado em: 280/320

nm a 0,01 min; 240/398 nm a 9,6 min, 300/466 nm a 18,10 min , 240/398 nm a 19,8
min at 20 min. Quando a determinao foi feita por UV-Vis, o comprimento de onda
foi fixado em 254 nm.
Todos os parmetros para a extrao e as condies cromatogrficas foram
otimizadas para obteno da melhor e mais eficiente separao dos compostos
estudados.
1.3.10. Quantificao das amostras

A quantificao das amostras foi realizada por padronizao externa, por
meio de um grfico de calibrao compatvel com o das amostras e no qual o
composto apresentou linearidade. Para a determinao da quantidade dos HPAs
existentes na amostra utilizou-se a Equao 5:
R=
(5)
C V f 100
Onde:
m R%
R = Resduo dos compostos (mg kg-1);

C = Concentrao encontrada por interpolao na curva analtica (mg L-1);
V f = Volume final da diluio (L);
m = Massa da amostra (kg);

R % = Recuperao do mtodo.

1.4.1. Otimizao das condies cromatogrficas
Um dos parmetros otimizados foi a concentrao de cada analito na soluo
padro mista, j que o detector de fluorescncia tem sensibilidade diferenciada para
cada HPA.
otimizao
da
resoluo
dos
picos
cromatogrficos
no
sistema
CLAE/fluorescncia foi estudada. Para esta etapa utilizou-se a soluo-padro mista

contendo os 17 HPAs, no qual concentraes foram escolhidas por representarem
picos com boa deteco no detector fluorescncia. Nesta etapa trabalhou-se com os
comprimentos de onda para excitao e emisso, respectivamente.
Seguindo indicaes de mtodos oficiais da literatura (NIOSH, 1998), que
preconizavam a utilizao de coluna C-18, utilizou-se a coluna C-18 (250 x 4,6 mm
SS, Wakosil II 5C18AR 5 m, SGE) especfica para a separao dos HPAs. Com
essa coluna foram testados vrios parmetros, como vazo, gradientes de eluio
(acetonitrila/gua) e temperatura (Tabela 2).
Tabela 2 Alguns dos parmetros otimizados na tentativa de separao dos HPAs.

Testes
vazo
Gradiente
Temperatura
o
( C)
(mL/min)
1
0 - 11 min acetonitrila:gua (40:60%) / 11 - 30 min acetonitrila (100%)
24,7
0 - 13 min acetonitrila:gua (40:60%) /13 - 30 min acetonitrila (100%)
24,2
2,2
24,2
23,9
1,6
24,5
1,6
25
1,4
26
1,8
26,5
10
1,8
23,6
11
1,8
0 5 min acetonitrila:gua (40:60%) / 5 - 30 min acetonitrila (100%)
26
12
1,8
0 7,5 min acetonitrila:gua (40:60%) / 7,5 - 30 min acetonitrila (100%)
26
13
1,8
25
14
1,8
24
15
1,8
25
16
1,8
24
17
1,8
23
18
1,8
23
19
1,8
23
20
1,8
23
21
1,5
23
22
1,2
23
23
1,8
23
24
1,8
23
25
1,8
25
Uma vez otimizadas as condies para obteno da melhor resoluo

cromatogrfica, iniciou-se o estudo em relao sensibilidade aos detectores UV e
fluorescncia em relao aos 17 HPAs de interesse.
Como sabido que os comprimentos de onda de excitao e emisso so
diferentes para cada HPA, utilizaram-se diversas programaes de comprimento de
onda baseados na literatura (EPA, 1988; NIOSH, 1998; BERSET et al., 1999;
ANDRADE, 2000). Na Tabela 3 podem ser vistos os comprimentos de onda
estudados e o maior comprimento de onda obtidos aps uma varredura entre 200 e
600 nm, em um espectrofotmetro UV-Vis-NIR (Cary 5G, Varian), seguida de uma
varredura entre 250 e 550 nm em um espectrofotmetro de fluorescncia (F-4500,
Hitachi) para os HPAs durante este trabalho.
Tabela 3 - Comprimentos de onda de excitao e emisso (nm) utilizadas por algumas literaturas e
aqueles obtidos neste trabalho.
HPA#
Literaturaa
Literaturab
Literaturac
Estudado*
ex
ex
ex
ex
ex
em
ex
em
Naftaleno
220
330
224
Acenaftileno
330
320
220
325 a 340
No detectado por fluorescncia
Acenafteno
225
315
234
320
224
320
225
322 e 340
Fluoreno
225
315
224
320
224
320
204
305
Fenantreno
244
370
252
370
240
398
250
347 e 365
Antraceno
244
370
252
402
240
398
252
378 e 402
Fluoranteno
237
460
252
402
240
398
235
460
Pireno
237
385
238
398
240
398
239
370
Benzo[a]antraceno
277
376
238
398
240
398
287
388
Criseno
277
376
238
398
240
398
266
365 e 384
240
398
288
390 e 402
Benzo[e]pireno
224
255
420
268
398
240
398
255
430 a 455
Benzo[k]fluoranteno
255
420
268
398
240
398
306
410
Benzo[a]pireno
255
420
268
398
240
398
265 e 296
410
300
415
234
420
240
398
297
398
300
415
234
420
240
398
300
410
250
495
300
466
300
466
249
500
BERSET et al., 1999; Varian Chromatography Systems, 2008; ANDRADE, 2000; *Maior comprimentos de onda obtidos aps uma
varredura entre 200 e 600 nm, em um espectrofotmetro UV-Vis-NIR (Cary 5G, Varian), seguida de uma varredura entre 250 e 550 nm em
um espectrofotmetro de fluorescncia (F-4500, Hitachi) para os HPAs durante este trabalho.
O mtodo 8310 da Environmental Protection Agency (EPA, 2007) prope

determinar os compostos naftaleno, acenaftileno, acenafteno e fluoreno pelo
detector UV-Vis e os demais por fluorescncia. Mas pde-se observar, aps uma
varredura entre 200 e 600 nm, em um espectrofotmetro UV-Vis-NIR (Cary 5G,
Varian), seguida de uma varredura entre 250 e 550 nm em um comprimento de onda
de excitao estabelecido em um espectrofotmetro de fluorescncia (F-4500,
Hitachi) para todos os compostos, que o naftaleno, o acenafteno e o fluoreno tm
uma boa deteco por fluorescncia. Nas Figuras 5 e 6 apresentam-se os espectros
no UV-Vis e de fluorescncia do naftaleno, acenafteno, fluoreno e acenaftileno.
4,0
224nm 280 nm
Naftaleno
Acenaftileno
Acenafteno
Fluoreno
3,5
3,0
Absoro
2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0
200
250
300
350
400
450
500
550
600
Comprimento de onda (nm)
Figura 5 - Espectro UV-Vis do naftaleno, acenaftileno, acenafteno e fluoreno.
Figura 6 - Espectro de fluorescncia do naftaleno, acenaftileno, acenafteno e fluoreno (ex = 280 nm).
Segundo as Figuras 5 e 6, o melhor comprimento de onda de excitao para

os HPAs naftaleno, acenafteno e fluoreno seria prximo a 224 nm. O estudo desses
compostos seria prejudicado em uma faixa de comprimento de onda de
excitao/emisso em que respondem (ex = 224 nm e em = 330 nm), pois h um
aumento significativo na linha de base do cromatograma, o que impede a correta
integrao dos picos. Devido a isso, utilizou-se ex = 280 nm e em = 330 nm para o
naftaleno, acenafteno e fluoreno.
J com o acenaftileno, aps vrias tentativas com comprimentos de onda de
emisso entre 320 a 350 nm de excitao/emisso no detector de fluorescncia, no
se obteve resposta. Apesar de se registrar um sinal do acenaftileno da mesma
ordem de grandeza dos demais compostos, deve-se ressaltar que as demais
solues encontram-se 20 vezes mais diludas que a soluo de acenaftileno
utilizadas na leitura.
Sabe-se que cada HPA apresenta uma melhor deteco em um comprimento
de onda especifico, mas no foi possvel utilizar o comprimento de onda timo para
cada composto devido ao grande nmero de compostos e a proximidade de alguns
deles na ordem de eluio, ou seja, tempo de reteno muito prximo. Mas neste
caso, estipulou-se um comprimento de onda de emisso e excitao prximo ao
ideal para todos.
Foi ento verificado o melhor comprimento de onda que se deveria utilizar
para cada HPA no detector de fluorescncia a fim de se obter a melhor sensibilidade
para todos os analitos. As melhores condies observadas, nas quais foram obtidas
as curvas analticas e toda metodologia analtica, foram baseadas nos dados de
VARIAN CHROMATOGRAPHY SYSTEMS (2008) e Andrade (2000).
Para
Indeno(1,2,3,cd)pireno
alcanou-se
uma
boa
deteco
no
comprimento de onda de excitao em 300 nm e emisso em 466 nm e os demais

HPAs no comprimento de onda de excitao em 240 nm e emisso em 398 nm.
Espectros UV-Vis e de fluorescncia do fenantreno, antraceno, fluorenteno, pireno,
b[a]antraceno, criseno, b[e]pireno, b[e]acefenantrileno, b[k]fluoranteno, b[a]pireno,
dibenzo[a,h]antraceno, b(g,h,i)perileno e Indeno(1,2,3,cd)pireno so mostrados nas
Figuras de 7 a 14.
Por esta razo, o comprimento de onda de excitao/emisso no
fluorescncia foi fixado em: 280/330 nm a 0,01 min; 240/398 nm a 9,6 min, 300/466
nm a 18,10 min e 240/398 nm a 19,8 min at 20 min.
2,2
2,0
1,8
Fenantreno
Antraceno
Fluorenteno
Pireno
1,6
Abs
1,4
1,2
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
200
300
400
500
600
Figura 7 - Espectro UV-Vis do fenantreno, antraceno, fluorenteno e pireno.
Figura 8 - Espectro de fluorescncia do fenantreno, antraceno, fluorenteno e pireno (ex = 240 nm).
2,0
B(a)antraceno
Criseno
B(e)pireno
B(e)acefenantrileno
Abs
1,5
1,0
0,5
0,0
200
300
400
500
600
Figura 9 - Espectro UV-Vis do b[a]antraceno, criseno, b[e]pireno e b[e]acefenantrileno.
Figura 10 - Espectro de fluorescncia do b[a]antraceno, criseno, b[e]pireno e b[e]acefenantrileno (ex

= 240 nm).
1,2
1,0
B(k)fluoranteno
B(a)pireno
Dibenzo(a,h)antraceno
B(g,h,i)pirileno
Abs
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
200
300
400
500
600
Figura 11 - Espectro UV-Vis do b[k]fluoranteno, b[a]pireno, dibenzo[a,h]antraceno, b[g,h,i]perileno.
Figura 12 - Espectro de fluorescncia do b[k]fluoranteno, b[a]pireno, dibenzo[a,h]antraceno,

b[g,h,i]perileno (ex = 240 nm).
0,7
0,6
Abs
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0,0
200
300
400
500
600
Figura 13 - Espectro UV-Vis do Indeno[1,2,3,cd]pireno.
Figura 14 - Espectro fluorescncia do Indeno(1,2,3,cd)pireno (ex = 300 nm).
Trabalhou-se com os detectores de UV-Vis e de fluorescncia em linha

(online), criando-se o mtodo com inteno de quantificar o composto acenaftileno
utilizando o detector UV-Vis e para os compostos naftaleno, acenafteno, fluoreno,
fenantreno,
antraceno,
benzo[e]pireno,
fluoranteno,
pireno,
benzo[k]fluoranteno
ou
benzo[a]antraceno,
criseno,
benzo[e]acefenantrileno,
benzo[k]fluoranteno, benzo[a]pireno, dibenzo[a,h]antraceno, benzo[g,h,i]perileno,

indeno[1,2,3-cd]pireno utilizando-se o detector de fluorescncia, pois estes
apresentam maior sensibilidade nesse detector.
Pelos valores obtidos, verificou-se que o limite de deteco do naftaleno e
acenafteno + fluoreno 56 e 5 vezes menor no detector de fluorescncia em relao
ao UV-Vis, respectivamente. Nota-se, assim, que h uma maior sensibilidade destes

compostos no detector de fluorescncia. Por isso, resolveu-se determinar o
naftaleno e acenafteno + fluoreno pelo detector de fluorescncia, modificando
ligeiramente o mtodo 8310 proposto pela EPA.
1.4.2. Separao cromatogrfica

Cromatogramas com deteco por UV-Vis (Figura 15) e por fluorescncia
(Figura 16) nas melhores condies cromatogrficas foram obtidos pela injeo
direta da mistura-padro dos 17 HPAs. A separao dos 17 HPAs foi alcanada em
20 min. Somente o acenaftileno, por no fluorescer, no foi detectado no detector de
fluorescncia. Em nenhuma das condies de eluio foi possvel separar os pares
acenafteno/fluoreno.
Figura 15 - Cromatograma obtido pelo detector de UV-Vis para a soluo-padro (para identificao dos HPAs ver Tabela 2).
Figura 16 Cromatograma obtido pelo detector fluorescncia para a soluo-padro (para identificao dos HPAs ver Tabela 2).
1.4.3. Linearidade, sensibilidade e preciso

A CLAE com detectores de fluorescncia e UV fornece uma resposta linear
para quantidades injetadas na faixa pr-estabelecida para cada composto estudado.
Na Figura 17 apresentam-se as curvas de linearidade dos HPAs. A rea do pico foi
usada para avaliar a linearidade, sensibilidade e preciso do mtodo. As curvas
analticas obtidas, atravs de suas respectivas equaes das retas, permitiram o
clculo dos coeficientes de determinao, desvio-padro, limite de deteco e limite
de quantificao do equipamento. A Tabela 4 apresenta o intervalo no qual se
estudou a linearidade do sistema para os 17 HPAs, alm dos respectivos resultados
que mostram a sensibilidade e preciso do mtodo. Os HPAs apresentaram boa
linearidade, com valores de coeficiente de determinao na faixa de 0,999650,99999. Os limites de deteco (Tabela 4) obtidos por injeo direta da misturapadro dos 17 HPAs foram calculados com base na definio da IUPAC, pelas
curvas analticas de cada composto, e ficaram entre 3 e 74 vezes menores usandose deteco por fluorescncia com relao aos valores comparados com deteco
UV. Com as condies experimentais aqui relatadas, o limite de deteco no
detector de fluorescncia est na faixa de 7,1x10-6 mg L-1, injetado para o antraceno,
a 1,9x10-3 mg L-1 para o fluoranteno e os limites de deteco com UV (254 nm) na
faixa de 4,5x10-4 mg L-1 para o benzo[e]pireno a 9,9x10-3 mg L-1 para o acenaftileno.
Tabela 4 Tempo de reteno (tr) e validao do mtodo em termos de linearidade, limite de deteco (LOD) e quantificao (LOQ).
Compostos
1) Naftaleno
2) Acenaftileno
tr
(UV-Vis)
7,580
tr
(fluoresc.)
7,685
8,205
3) Acenafteno
4) Fluoreno
5) Fenantreno
0,0031-0,4921
Coeficiente de
determinao
Curva de calibrao
7
Y = 1,11x10 X + 1,10 x10
UV-Vis
-5
4,0x10
-3
9,9x10
-3
7,1 x10
0,0062-0,9843
Y = 9,33x10 X + 19,99
0,99999
0,0002-0,0325
0,0010-0,1624
Y = 4,27 x107X + 2,49x103
0,9998
1,4 x10-4
9,956
10,062
0,0034-0,5400
Y = 8,34 x106X + 5,96x103

8
10,738
7) Fluoranteno
11,127
11,233
8) Pireno
11,637
11,744
9) Benzo[a]antraceno
12,894
13,001
13,304
13,410
2,4 x10
-4
UV-Vis
1,3 x10-2
3,3 x10-2
4,6 x10-4
2,4 x10-3
0,99965
1,3 x10-4
3,3 x10-3
4,2 x10-4
1,1x10-2
0,0002-0,0324
Y = 1,65 x10 X + 2,65x10
0,99987
7,0x10
-6
-4
-5
1,7 x10-3
0,0196-3,1419
Y = 1,44 x106X + 3,13x103

7
5,2 x10
2,3x10
0,99993
1,9 x10-3
8,5 x10-3
6,2 x10-3
2,9 x10-2
0,0013-0,2121
Y = 1,99 x10 X + 1,94x10
0,99988
1,4 x10
-4
-3
-4
3,9 x10-3
0,0015-0,2356
Y = 2,03 x107X + 4,13x103
0,99995
8,3 x10-5
1,3 x10-3
2,8 x10-4
4,2 x10-3
0,0034-0,5400
Y = 9,08 x10 X + 6,01x10
0,99998
-5
2,9 x10
-3
-4
9,8 x10-3
0,99996
1,3x10
4,5 x10
-4
-4
1,5 x10-3
14,053
14,160
0,0043-0,6873
Y = 8,26 x10 X + 4,96x10
12) Benzo[e]acefenantrileno
14,264
14,370
0,0031-0,4909
Y = 1,11 x107X + 5,53x103

8
7,4 x10
-4
1,2 x10
4,6 x10
2,5 x10
4,5x10
0,99997
5,1x10-5
6,5 x10-4
1,7x10-4
2,2 x10-3
0,99996
3,9x10
-5
-4
-4
2,5 x10-3
13) Benzo[k]fluoranteno
15,086
15,191
0,0002-0,0393
Y = 1,44 x10 X + 1,22x10
14) Benzo[a]pireno
15,857
15,961
0,0008-0,1296
Y = 4,54 x107X + 5,14x103

6
7,5 x10
1,3x10
0,99996
1,1x10-4
5,6 x10-4
3,6 x10-4
1,9 x10-3
0,99992
9,5 x10
-4
-3
-3
1,1 x10-2
0,99996
3,5x10-4
4,3 x10-3
1,2 x10-3
1,4x10-2
0,99998
-4
-3
-4
1,2 x10-2
15) Dibenzo[a,h]antraceno
16,822
16,928
0,0122-1,9440
Y = 3,38 x10 X + 3,72x10
16) Benzo[g,h,i]perileno
17,871
17,975
0,0081-1,2960
Y = 6,19 x106X + 2,99 x103
0,0081-1,2960
18,907
7,3x10-4
Fluoresc.
11) Benzo[e]pireno
18,802
LOQ(mgkg-1)
fluoresc.
9,398
10,633
17) Indeno[1,2,3-cd]pireno
0,99996
LOD(mg L-1)
9,287
6) Antraceno
10) Criseno
Faixa de
concentrao
(mgL-1)
Y = 6,20 x10 X + 2,09 x10
1,8 x10
3,4 x10
3,6 x10
3,2 x10
5,9x10
6000000
10000
Naftaleno
Linearidade
5000000
Acenaftileno
Linearidade
8000
4000000
Y
A
B
R
2000000
=A+B *X
= 11028,95036
=1,10673E7
= 0,99996
rea
rea
6000
3000000
Y
A
B
R
4000
=A+B*X
= 19,9933
=9326,00721
= 0,99999
2000
1000000
0
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,0
0,5
0,2
10000000
0,4
0,6
0,8
1,0
Concentrao (m g/L)
Concentrao (m g/L)
Acenafteno-Fluoreno
Linearidade
5000000
Fenantreno
Linearidade
8000000
4000000
4000000
Y
A
B
R
2000000
=A+B *X
= 2490,95685
=4,2727E7
= 0,9998
rea
rea
6000000
3000000
Y
A
B
R
2000000
=A+B*X
= 5954,31514
=8,34032E 6
= 0,99965
1000000
0
0,00
0,05
0,10
0,15
0,0
0,20
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
Concentrao (mg/L)
Concentrao (mg/L)
6000000
5000000
5000000
Antraceno
Linearidade
Fluorenteno
Linearidade
4000000
4000000
Y
A
B
R
2000000
=A+B*X
= 2649,7602
=1,65464E8
= 0,99987
1000000
0
0,000
rea
rea
3000000
3000000
Y
A
B
R
2000000
=
=
=
=
A+B*X
3127,66938
1,44378E6
0,99993
1000000
0
0,005
0,010
0,015
0,020
0,025
0,030
0,035
0,0
0,5
Concentrao (mg/L)
1,0
1,5
2,0
2,5
3,0
3,5
Concentrao (mg/L)
Figura 17 - Curvas analticas dos HPAs.
5000000
Pireno
Linearidade
5000000
B(a)antaceno
Linearidade
4000000
4000000
Y
A
B
R
2000000
1000000
0
0,00
0,05
0,10
=
=
=
=
0,15
A+B*X
19442,85999
1,99262E7
0,99988
0,20
rea
rea
3000000
3000000
Y
A
B
R
2000000
1000000
0
0,00
0,25
0,05
0,10
Concentraao (mg/L)
0,20
0,25
6000000
B (e)pireno
Linearidade
5000000
4000000
4000000
Y
A
B
R
2000000
1000000
=
=
=
=
A+B*X
6009,78684
9,08089E6
0,99998
rea
3000000
rea
A+B*X
4128,56543
2,03435E7
0,99995
Concentrao (mg/L)
Criseno
Linearidade
5000000
0,15
=
=
=
=
3000000
Y
A
B
R
2000000
=
=
=
=
A+B*X
4961,4082
8,26411E6
0,99996
1000000
0
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,0
Concentrao (m g/L)
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
Concentrao (m g/L)
6000000
6000000
B(e)acefenantrileno
Linearidade
5000000
5000000
4000000
4000000
3000000
Y
A
B
R
2000000
=
=
=
=
A+B*X
5525,02965
1,11078E7
0,99997
1000000
rea
rea
B(k)fluorenteno
Linearidade
3000000
Y
A
B
R
2000000
=
=
=
=
A+B*X
12204,59702
1,43794E8
0,99996
1000000
0
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0
0,00
0,01
0,02
0,03
0,04
Concentrao (mg/L)
Concentrao (mg/L)
Figura 17 Continua.
7000000
7000000
B(a)pireno
Linearidade
6000000
5000000
5000000
Y
A
B
R
3000000
2000000
rea
4000000
rea
dibenzo(a,h)antraceno
Linearidade
6000000
=A+B*X
= 5142,16091
=4,54431E7
= 0,99996
4000000
Y
A
B
R
3000000
2000000
=A+B*X
=3715,10312
=3,38491E6
= 0,99992
1000000
1000000
0
0,00
0,0
0,02
0,04
0,06
0,08
0,10
0,12
0,5
1,0
0,14
1,5
2,0
Concentrao (mg/L)
Concentrao (mg/L)
10000000
Indeno(1,2,3 cd)pireno
Linearidade
8000000
B(g,h,i)perileno
Linearidade
8000000
6000000
Y
A
B
R
4000000
2000000
rea
rea
6000000
=A+B*X
= 2989,12683
=6,18623E6
= 0,99996
Y
A
B
R
4000000
=
=
=
=
A+B*X
2085,08891
6,20411E6
0,99998
2000000
0
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
0,0
Concentrao (mg/L)
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
Concentrao (m g/L)
Figura 17 Concluso.
1.4.4. Seleo do solvente de extrao

Como individualmente os HPAs podem estar presentes no solo em nveis de
ng g-1 ou menores, poucas matrizes podem ser determinadas diretamente sem
interferentes srios. Ento, uma extrao eficiente, pr-concentrao e clean-up
das amostras so operaes imprescindveis para a determinao de HPAs.
Sun et al. (1998) utilizaram acetona, cicloexano, hexano, diclorometano,
tolueno ou mistura destes solventes para a extrao de HPAs e observaram grandes
diferenas no percentual de recuperao. Song et al. (2002) relataram valores de
recuperaes adequados na extrao de HPAs em solo com 98% de areia usando
um mtodo ultra-som. Na maioria dos trabalhos publicados, os HPAs mais volteis,
com 2 ou 3 anis aromticos, tais como naftaleno e acenaftileno, alcanaram valores
de recuperao no-reprodutveis, porque o solvente usado para a extrao e a

eluio, na extrao por Soxhlet, por exemplo, foi evaporado quase secura usando
um rota evaporador e fluxo de nitrognio. A fim de evitar perdas dos HPAs mais
volteis e aumentar a eficincia de extrao, uma seleo apropriada dos solventes
foi empregada para otimizar o procedimento de extrao dos 17 HPAs, sem que
houvesse a
etapa de evaporao do solvente. Neste trabalho, trs diferentes
solventes (acetona, metanol e acetonitrila) foram testados. Os resultados para as

recuperaes, usando o procedimento de extrao em ultra-som, so mostrados na
Tabela 5. A preciso do mtodo, representada como desvio-padro relativo (DPR)
para determinao de replicatas, foram menores que 10,0%, exceto para
acenaftileno, que foi de 11,1% e benzo[a]pireno de 13,9%, ambos utilizando
acetonitrila como solvente de extrao. Foram observadas grandes diferenas no
percentual de recuperao quando esses diferentes solventes foram utilizados para
a extrao de HPAs no solo.
Tabela 5 - Recuperao (R) e desvio padro relativo (DPR) para extrao por ultra-som de solo com
metanol, acetonitrila e acetona como solventes (valores obtidos por triplicata).
HPAs
metanol
acetonitrila
acetona
R(%)
DPR (%)
R(%)
DPR (%)
R(%)
DPR (%)
1) Naftaleno
62,2
4,5
50,1
4,4
82,2
2,5
2) Acenaftileno
65,2
2,9
97,8
11,1
59,1
3,6
3) Acenafteno + 4) Fluoreno
57,7
9,8
58,8
9,3
75,1
1,0
5) Fenantreno
70,0
3,5
64,0
6,4
91,2
4,6
6) Antraceno
58,5
2,3
67,1
7,9
74,0
2,7
7) Fluoranteno
72,4
1,5
71,4
6,5
80,0
2,2
8) Pireno
73,4
4,5
65,9
5,8
88,9
3,3
9) Benzo[a]antraceno
74,8
2,3
73,1
9,6
83,4
4,2
10) Criseno
78,2
2,3
73,4
9,8
88,7
4,6
11) Benzo[e]pireno
74,8
2,0
69,6
9,2
82,8
2,5
12) Benzo[e]acefenantrileno
63,5
1,3
73,3
9,9
78,9
1,9
13) Benzo[k]fluoranteno
76,6
1,4
72,3
8,4
78,9
0,8
14) Benzo[a]pireno
20,5
9,1
46,3
13,9
46,0
6,2
15) Dibenzo[a,h]antraceno
70,0
3,0
70,3
6,9
76,2
1,4
16) Benzo[g,h,i]perileno
67,1
4,7
69,1
6,0
73,4
4,6
17) Indeno[1,2,3-cd]pireno
66,6
5,4
49,4
10,3
73,0
7,8
Como mostrado na Figura 18, a eficincia da extrao para os 17 HPAs no

solo com acetona, foi definida como 1, sendo as demais representadas por uma
razo dos sinais obtidos pelos outros solventes, em comparao com os sinais
obtidos pela acetona. Na Figura 18 observa-se que as mais elevadas eficincias de
extrao para a maioria dos 17 HPAs, em relao aos trs solventes utilizados,
foram obtidas usando acetona, exceto para o acenaftileno.
2,0
Razo da eficincia da extrao
1,8
acetonitrila
metanol
1,6
1,4
1,2
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2
na
ac fta
en len
a o
ac ftile
en no
af
te
flu no
fe ore
na no
n
an tren
tra o
flu ce
or no
an
te
no
b[
a] pir
an en
tra o
ce
cr no
b[
is
e]
ac b[e en
ef ]p o
en ire
b[ an no
k]
flu trile
di
or no
be
an
nz
o[ b[a ten
o
a,
h] ]pir
an en
in
b
d e [g tr
o
no ,h ac
[1 ,i]p en
,2
o
,3 eril
-c en
d]
pi o
re
no
0,0
Figura 18 Seleo do solvente para extrao dos 17 HPAs. O eixo vertical a razo dos sinais
para os HPAs extrados do solo pelos outros solventes comparativamente ao obtido com a acetona.
A ordem de eficincia de extrao para a maioria dos 17 HPAs do solo pelos

solventes foi acetona>metanol>acetonitrila. Como a mistura acetonitrila-gua foi o
solvente usado como fase mvel e levando-se em conta que o solvente que
miscvel com a fase mvel o melhor para a soluo de injeo final, selecionou-se
a acetona como o solvente de extrao. A etapa de evaporao do solvente quase
secura pde ser omitida, pois a sensibilidade foi bastante alta para a determinao
dos HPAs pelo mtodo proposto. Alm disso, com acetona alcanou-se a mais
elevada eficincia de extrao para a maioria dos 17 HPAs do solo em relao a

todos os solventes testados.
Na avaliao do branco, ou seja, uma anlise completa utilizando-se apenas
o solo calcinado como matriz na extrao, no foi identificado nenhum interferente
do solvente ou do solo que poderiam co-eluir com os compostos de interesse.
1.5. CONCLUSES
Os 17 HPAs podem ser bem separados e determinados por CLAE com
detector UV-Vis e fluorescncia usando uma coluna C-18 e misturas acetonitrilinagua como fase mvel. O tempo da corrida cromatogrfica de 20 minutos. A
extrao por ultra-som foi escolhida em relao extrao por Soxhlet, porque
apresentou alta eficincia de extrao, baixo custo operacional e fcil operao,
alm de minimizar o uso de solvente e no levar a perda por evaporao. A acetona
foi o melhor solvente entre os trs avaliados para a extrao dos 17 HPAs em solo,
seguida do metanol e da acetonitrila.
Finalmente, pode ser mencionado que a metodologia proposta pode ser
aplicada para o controle dos 17 HPAs em amostras de solo com caractersticas
prximas ao solo estudado.

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CAPITULO II
A biorremediao utilizando
a vermicompostagem
A biorremediao utilizando a vermicompostagem 70
2.1. FUNDAMENTOS TEORICOS

2.1.1. Ocorrncia dos HPAs no ambiente
Os combustveis armazenados consistem de vrios hidrocarbonetos de
petrleo com potencial efeito txico para o homem (NAMKOONG et al., 2002). A
preocupao relacionada ao potencial de contaminao por derramamentos de
combustvel vem crescendo, seja em So Paulo ou em diversas outras cidades do
pas, como Curitiba, que j possui legislao sobre o tema, e Joinville (SC). No
Brasil, este problema tende a se acentuar porque a vida til de grande parte dos
tanques de armazenamento dos postos de combustveis est prxima do seu fim,
podendo aumentar a ocorrncia de vazamentos. J as indstrias de petrleo lidam
diariamente com problemas decorrentes de vazamentos, derrames e acidentes
durante a explorao, refino, transporte e operaes de armazenamento do petrleo
e seus derivados (FURTADO, 2005; CETESB, 2003). As Figuras 19 a 21 levantam
alguns dados relacionados s atividades das reas contaminadas, principais
agentes contaminantes e estgios do processo de remediao no estado de So
Paulo, segundo a CETESB (FURTADO, 2005).
Resduos (61)
Acidentes (14)
Industria (237)
Comercial (92)
Posto de Combustvel (931)
Fonte: Cetesb
69%
5%
1%
7%
18%
Figura 19 Atividades das reas contaminadas em So Paulo (1.336 casos), 2004 (FURTADO,
2005).
Microbiolgicos
Radionucldeos
Anilinas
Dioxinas e furanos
Ftalatos
Solventes arom. halogenados
PCBs
Biocidas
Fenis halogenados
Outros inorgnicos
Outros contaminantes
Solventes halogenados
Metais
HPAs
Solventes aromticos
Combustveis lquidos
0
200
400
600
800
Fonte: Cetesb
Figura 20 Principais agentes contaminantes em So Paulo x ocorrncia (FURTADO, 2005).

Remediao concluda (19)
Remediao em andamento (484)
Contaminada sem proposta de remediao (710)
Contaminada com proposta de remediao (123)
Fonte: Cetesb
54%
9%
1%
36%
Figura 21 Estgios dos processos de remediao de reas contaminadas no estado de So Paulo,

2004 (FURTADO, 2005).
2.1.2. Processo de remediao

Uma grande variedade de processos fsico-qumicos e biolgicos tem sido
utilizada na remoo de hidrocarbonetos de petrleo no ambiente. Processos como
extrao de vapores do solo (SVE), recuperao de produto livre, bioventilao,
extrao com solventes, incinerao, torres de aerao, adsoro em carvo
ativado, biorreatores, biorremediao no local, entre outros, tm sido usados para
remover contaminantes orgnicos de sistemas de solo subsuperficial e guas
subterrneas. Esses processos podem ser implementados para controlar o
movimento de plumas (contaminantes), tratarem guas subterrneas e/ou
descontaminar solos. No entanto, longos perodos de tempo e altos custos esto
normalmente associados com a grande maioria dos processos utilizados para
remediao de reas contaminadas. Por outro lado, a biorremediao no local,
processo economicamente mais vivel, muitas vezes limitada por dificuldades no
transporte de nutrientes ou receptores de eltrons e no controle das condies para
aclimatao e degradao dos contaminantes nos sistemas sub-superficiais. Mas ela
continua sendo a forma mais usada e pesquisada para a descontaminao de
aqferos contendo compostos txicos (SAINT-DENIS et al., 1999; SATERBAK et
al., 1999; SATERBAK et al., 2000).
2.1.3. A biorremediao
A biorremediao pode ser um processo efetivo e barato para remediar solos
contaminados com compostos orgnicos txicos e promovida por uma populao
de microorganismos capaz de degrad-los. O solo, neste caso, deve ser mantido em
condies apropriadas para promover a biodegradao.
A degradao de contaminantes qumicos no solo afetada por fatores

ambientais, tais como, grau de mistura, pH, temperatura, nvel de O2 e a
biodisponibilidade dos contaminantes ou metablitos tais como os nutrientes
requeridos pelos organismos e a aclimatao da populao. Alguns destes fatores
podem ser manipulados durante um processo de biorremediao para aumentar a
taxa de biodegradao (PHILLIPS et al., 2000). A remoo dos contaminantes
durante a biorremediao pode ser monitorada por aproximao da concentrao
dos contaminantes. Uma combinao de anlises qumicas, para apontar o nvel de
contaminao, e teste de toxicidade tambm recomendada para monitorar o
processo de biorremediao (PHILLIPS et al., 2000).
A compostagem e a vermicompostagem so tcnicas ideais para se obter
mais rapidamente, e em melhores condies, a desejada estabilizao da matria
orgnica. Na natureza, essa estabilizao ou humificao se d em prazo
indeterminado, ocorrendo de acordo com as condies em que a matria orgnica
se encontra (KIEHL, 1985).
2.1.4. A vermicompostagem e sua utilizao como forma de remediao

A bio-oxidao e estabilizao da matria orgnica, resultante da ao
combinada de minhocas e da microflora que vive em seu trato digestivo, definida
como vermicompostagem ou vermiestabilizao (EDWARDS e FLETCHER, 1988;
AQUINO et al., 1992). Enquanto a compostagem de resduos orgnicos uma
prtica antiga, a vermicompostagem foi desenvolvida nas dcadas 40 e 50 a partir
de pesquisas realizadas por programas de manejo de minhocas na estao
experimental em Rothamstead (Inglaterra). S a partir de 1970 que se
intensificaram os estudos sobre o potencial das minhocas para converso de
resduos orgnicos em uma forma mais estabilizada da matria orgnica (AQUINO

et al., 1992; EDWARDS, 1995). Embora os microorganismos sejam responsveis
pela degradao bioqumica da matria orgnica, minhocas influenciam fisicamente
e bioquimicamente o processo (NADDAFI et al., 2004). O vermicomposto o
produto final (estabilizado) da vermicompostagem (KIEHL, 1985).
A vermicompostagem tem a vantagem de ter um baixo custo de capital e de
operao, simplicidade de operao e eficincia relativamente alta. No Brasil a
vermicompostagem uma atividade recente e relativamente desconhecida pela
agroindstria. Teve incio no final de 1983 com matrizes (minhocas) trazidas da Itlia
pelo Comendador Lino Morganti para a sua propriedade em ltu (SP). Em 1987 a
CETESB de So Paulo, agncia responsvel pelo monitoramento ambiental,
publicou o artigo: The use of worms in the production of organic compost. Esse
trabalho
discute
a biologia
da minhoca,
sua
importncia
agronmica,
vermicompostagem e predadores da minhoca (CETESB, 1987).

A estabilizao da matria orgnica alcanada pelo metabolismo de
algumas espcies de minhocas ao se alimentarem desse material. As minhocas
ingerem rapidamente a matria orgnica, transformando-a em composto de melhor
qualidade do que os produzidos pelo mtodo tradicional de compostagem, sendo
rico em elementos essenciais para as plantas, como nitrognio, fsforo, magnsio,
enxofre e potssio, contendo tambm bactrias fixadoras de nitrognio (KIEHL,
1985).
2.1.4.1. As minhocas: Em especial Eisenia foetida

As minhocas so animais invertebrados, hermafroditas (possuem os dois
sexos, embora no se auto-fecundem e necessitam de outra minhoca para se
reproduzirem) e tm respirao cutnea. As minhocas se reproduzem durante a

noite (2 a 3 h), originando cada minhoca adulta 1500 indvduos em 6 meses. A boca
fica na extremidade prxima do clitelo. So capazes de regenerar a cauda, mas no
a cabea, ou seja, se uma minhoca for dividida, apenas a parte que contm a
cabea regenera uma nova cauda. Elas no tm olhos, mas os seus fotorreceptores
so sensveis luminosidade (luz do Sol). Vivem em mdia um ano, mas em
condies favorveis chegam a at 5 anos. Quando adultas pesam em mdia 1 g,
podendo chegar a um tamanho mximo (12 a 20 cm) aos 7 meses, dependendo da
espcie.
As minhocas so saprfitas, isto , alimentam-se de matria orgnica morta,
especialmente vegetal, que normalmente transportam para dentro das suas galerias.
Durante a digesto das minhocas, a matria orgnica ao passar pela faringe,
umedecida pelas secrees salivares e neutralizada pelas secrees das glndulas
calcferas do esfago. Na moela os alimentos so esmagados para posterior
digesto no intestino; a areia e os minerais atuam como um moinho de pedra na
moela, transformando o alimento em uma massa homognea. O processo de
digesto no tubo digestivo ocorre devido reao das enzimas com os carboidratos,
protenas, gorduras e at mesmo com a celulose. no intestino que ocorre a
adsoro dos principais nutrientes necessrios alimentao das minhocas. No final
do processo digestivo, os restos orgnicos que no foram digeridos e assimilados
so expelidos, junto com as partculas de terra, na forma de vermicomposto
(OLIVEIRA, 2001; EDWARDS, 1995).
As minhocas so classificadas como oligoquetos terrestres e as que
apresentam interesse para a decomposio da matria orgnica podem ser
agrupadas de acordo com sua colorao: vermelha e cinzenta. Do grupo
pigmentado de vermelho destaca-se a minhoca vermelha Lumbricus rubellus e do

grupo cinzento a minhoca de esterco ou ftida Eisenia foetida.
A escolha da minhoca um aspecto importante na evoluo da tecnologia de
vermicompostagem. Dentre mais de 3.000 espcies conhecidas no mundo todo
(SHARMA et al., 2005), a Eisenia foetida a mais utilizada pelo fato de sua ampla
distribuio, pela larga faixa de tolerncia variao de temperatura e por viver em
resduos orgnicos com diferentes graus de umidade, alm de ser bastante
resistente ao manuseio. So amplamente utilizadas na vermicompostagem, porque
alm de se alimentarem de resduos orgnicos, tm elevada capacidade reprodutiva
e apresentam crescimento rpido (AQUINO e NOGUEIRA, 2001; PEREIRA et al.,
2005).
A espcie foetida - Savigny, 1826 - pertence ao reino Animalia, filo Annelida,
Classe Clitellata, Ordem Haplotaxida, Famlia Lumbricidae e ao gnero Eisenia, e
se adapta muito bem s condies ambientais dos climas temperados. Esta espcie
apresenta duas sub-espcies: a Eisenia foetida andrei ou a minhoca do terrio, de
cor vermelha e comprimento no estado adulto entre 50 e 90 mm, e a Eisenia foetida
foetida ou minhoca zebrada do estrume, de comprimento superior anterior,
caracterizada por apresentar em cada anel uma banda vermelha alternada com uma
zona pigmentada e ainda a caracterstica que lhe d o nome; liberta, quando
ameaada, um lquido de cheiro ftido. A Eisenia foetida foetida, conhecida
comumente como vermelha-da-califrnia ou minhoca-europia-de-esterco, ou
manure worm, compost worm ou red worms em ingls, apresenta um corpo
cilndrico medindo de 35 a 130 mm de comprimento e de 3 a 5 mm de dimetro.
Pode apresentar as seguintes coloraes: roxo, vermelho, vermelho escuro e
marrom-avermelhado. H indivduos cujo corpo de uma nica cor, e indivduos
cujas cores so intercaladas entre o marrom-avermelhado na regio dorsal e um tom

de amarelo nas reas apigmentadas entre os segmentos. A colorao vermelha
restrita apenas regio dorsal. Alimenta-se de frutas e vegetais em decomposio,
consumindo pouco solo. principalmente utilizada para compostagem de restos de
vegetais e frutas e esterco animal. Vive no mximo de 4 - 5 anos, sendo que
normalmente atinge no mximo 2 anos de vida. Quando ameaada, a minhoca
secreta pelos poros na superfcie superior do corpo uma substncia ftida amarela
que age em defesa do animal, afastando possveis predadores (AQUINO e
NOGUEIRA, 2001; DOMINGUEZ, 2005). A Figura 22 mostra o ciclo de reproduo
da Eisenia foetida.
Figura 22 Ciclo de reproduo da Eisenia ftida.
As
minhocas
so
consideradas
uma
importante
fonte
de
estudos
ecotoxicolgicos devido sua habilidade em acumular e excretar metais e compostos

orgnicos txicos (SAINT-DENIS et al., 1999). So utilizadas como bioindicadores
de solos contaminados com pesticidas organoclorados (MORRISON et al., 2000),
hidrocarbonetos policclicos aromticos (TANG et al., 2002; BUNDY et al., 2002) e
metais txicos (PEREIRA at al., 2003). A Eisenia foetida apontada como a espcie
indicadora para testes de toxicidade de poluentes industriais pela Environmental
Protection Agency (EPA, 1996). A sua habilidade em promover a concentrao de

metais como Cd, Cu, Pb, Zn e Ca nos seus tecidos tambm foi avaliada por Morgan
e Morgan (1999) e Shahmansouri et al. (2005). Os autores relatam que diferentes
espcies de minhocas apresentam sensibilidades diferentes com relao ao efeito
txico dos metais. Baseado em sua importncia ecolgica e resistncia toxicidade,
as minhocas podem ser consideradas como uma importante fonte de informao
para a avaliao de risco de contaminao ambiental (LUKKARI et al., 2004; GUPTA
et al., 2005).
2.2. JUSTIFICATIVA DO TRABALHO

Um dos principais problemas atuais a contaminao do solo por
vazamentos de tanque de armazenagem no subsolo e seus efeitos adversos. No
Brasil, segundo o Anurio Estatstico da Agncia Nacional do Petrleo (ANP) em
2004 havia mais de 31000 postos revendedores em funcionamento no Brasil. H,
portanto, um crescente interesse sobre o impacto que esses postos podem causar
ao meio ambiente. A Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental, ligada
Secretaria do Meio Ambiente do governo de So Paulo CETESB imps a
determinao de HPAs junto aos postos de gasolina do estado de So Paulo, onde
existem cerca de 5.000 postos. Esse nmero, aliado importncia que tais
contaminantes tm em termos ambientais e de sade ocupacional, justifica a busca
de metodologias analticas reprodutveis para sua determinao, com adequados
limites de deteco e de quantificao e que ofeream respostas rpidas. Ressaltese que a obrigatoriedade de tais determinaes comea a ser estendida a diversas
regies do pas. A obrigatoriedade do licenciamento, determinada pela Resoluo
CONAMA (Conselho Nacional do Meio Ambiente) n0 273, deve-se ao fato de grande
parte dos estabelecimentos estarem localizados em reas densamente povoadas,

cujas populaes correm risco em casos de vazamentos de tanques, que podem
provocar a contaminao do solo e das guas subterrneas, alm da possibilidade
de incndios e exploses (CETESB, 2003).
A biorremediao vem recentemente ganhando aceitao, principalmente em
locais contaminados por derramamentos de derivados de petrleo, como o que
acontece em postos de gasolina. um mtodo de tratamento de baixo custo para a
descontaminao de solos contaminados por HPAs e outros hidrocarbonetos. A
biorremediao, isto , a utilizao de microrganismos ou minhocas para degradar
poluentes ambientais, apresenta-se como uma alternativa para remover xenobiticos
do ambiente, especialmente os compostos orgnicos txicos.
Ela s pode ser
utilizada em locais onde os contaminantes estejam biodisponveis. Compostos que

sejam insolveis ou ligados matria orgnica ou argila so, freqentemente,
menos acessveis ao ataque dos microrganismos (MELO et. al., 1997).
Embora a compostagem tenha sido realizada por dcadas para degradao
de resduos em lixes municipais, entre outros, ela ainda uma tecnologia mais
utilizada ex-situ, por exemplo, em laboratrio, em estudo para descontaminao de
solos com poluentes orgnicos. Estudos (KSTNER et al., 1996; WISCHIMANN e
STEINHART, 1997; JRGENSEN et al., 2000; SEMPLE et al., 2001; NAMKOONG
et al., 2002; VAN GESTEL, 2003; ROMANTSCHUK et al., 2000) mostram que a
compostagem pode ser utilizada com eficcia na remoo de HPAs em solos e
relatam seu uso como estratgia de biorremediao de solos contaminados .
A recuperao de reas contaminadas deve ser prioridade tanto para as
empresas potencialmente poluidoras como para os rgos de controle ambiental
(MOLSON et al., 2002). As estratgias de compostagem para a descontaminao de
solos com poluentes orgnicos em geral foram recentemente revisadas por SEMPLE
et al. (2001), entre outros. Entretanto, estudos que envolvam a utilizao da
vermicompostagem esto em um estgio inicial, sendo a tcnica demonstrada por
poucas pesquisas, como a de Tharakan et al. (2004), que estudaram a
biorremediao de congneres de bifenilas policloradas e a de Hickman et al. (2005)
que avaliaram a aplicao da vermicompostagem para a biorremediao de solos
contaminados. Neste trabalho so propostos meios de recuperao de solos
contaminados utilizando a vermicompostagem.
2.3. OBJETIVO
Verificar a eficincia da biorremediao de solo contaminado por HPAs
usando a vermicompostagem com resduos de esterco bovino como fonte de matria
orgnica e investigar o papel da matria orgnica slida durante o processo da
vermicompostagem, e o das minhocas, para melhorar a atividade de remoo
desses compostos no sistema solo.
2.4. METODOLOGIA
2.4.1. As minhocas utilizadas
As minhocas utilizadas foram cultivadas na mesma fazenda onde foi feito o
trabalho experimental. As minhocas usadas no experimento apresentavam um
massa mdia de 0,2 g e foram adquiridas da empresa Minhobox situada em Juiz de
Fora MG e identificadas pelo fornecedor.
Nos experimentos foi utilizada a minhoca Eisenia foetida (Figura 23), tambm
conhecida como minhoca vermelha da Califrnia ou minhoca de esterco. A escolha
da espcie foi feita em funo de sua habilidade em converter resduos orgnicos
pouco decompostos em material estabilizado, bem como pela preferncia por

ambientes com elevado contedo de matria orgnica, extraordinria capacidade
reprodutiva e rpido crescimento.
Figura 23 - Minhoca Eisenia foetida
2.4.2. O solo
O solo utilizado no estudo foi coletado na fazenda Santa Isabel, municpio de
So Carlos, estado de So Paulo, na Rodovia SP215, km 140. Para efeito didtico
as caractersticas fsicas e qumicas do solo estudado sero apresentadas no
captulo III.
2.4.2.1. Adio de diesel ao solo

Como este estudo requer um conhecimento prvio do teor de diesel no
experimento, fez-se necessrio dopar o solo com uma quantidade estabelecida de
diesel. No entanto, dependendo da concentrao, o diesel pode ser txico para as
minhocas. Foram levantados dados tericos a respeito da toxicidade aguda, ou seja,
a concentrao letal (CL50) de diesel e HPAs em solo usando minhocas da espcie
Eisenia foetida (DORN et. al, 1998), chegou-se a concentrao de 2% (v/v) de

diesel, a qual no seria letal para as minhocas.
Ao solo foi adicionada apropriada quantidade de diesel, ou seja, 0,12L de
diesel a 6L de solo. O solo foi colocado em um recipiente de polietileno,
adicionando-se o diesel em diferentes sees do solo com o requerido volume
calculado de diesel. O solo foi ento misturado de forma a alcanar a
homogeneidade da mistura.
2.4.3. A vermicompostagem
Foram utilizados no tratamento caixas de compensado naval, denominadas
leiras de vermicompostagem, de dimenso de 0,70 x 0,70 x 0,70 m. Em diferentes
caixas foram adicionadas determinadas quantidades de solo dopado com 2% v/v, ou
seja, 1,74% volume de diesel por massa de solo, e quantidades estabelecidas de
esterco bovino sem pr-compostar, como matria orgnica, conforme mostrado nas
Figuras 24 e 25. Este material foi misturado de forma a alcanar a homogenidade da
mistura solo/esterco. Dois outros experimentos foram realizados como controle: um
experimento somente com esterco bovino sem a presena do solo contaminado para
avaliar a taxa de decomposio da matria orgnica pelas minhocas e outro
envolvendo somente o solo contaminado (sem mistura de correo orgnica e sem
minhocas) para investigar a remoo dos HPAs por outros fatores, como a luz
ultravioleta (fotodegradao), durante o processo. Foram feitos no total 6
experimentos, onde (A) corresponde ao experimento contendo 0% de esterco bovino
e 100% solo (sem minhoca); (B) 25% de esterco bovino e 75% solo; (C) 50% de
esterco bovino e 25% solo e (F) 100% de esterco bovino e 0% solo,

respectivamente.
Figura 24 - Montagem das caixas de compostagem.
Figura 25 - Caixas de compensado utilizadas no tratamento.
Segundo Landgraf (1999) necessita-se de 1000 minhocas para 1m2. Foram

adicionadas 400 minhocas em cada caixa, exceto quela que continha 100% de solo
dopado (A), que serviu como controle. As caixas foram cobertas com palha para
favorecer as condies propcias ao meio, como por exemplo, dificultar a entrada de
luz, pois as minhocas so fotossensveis e os compostos poderiam degradar-se

atravs da luz ultravioleta.
Na utilizao da compostagem, assim como da vermicompostagem para a
descontaminao de solo contaminado, os resduos orgnicos incluindo esterco,
resduo de processamento de alimento, lodo de esgoto, resduos orgnicos
industriais, entre outros, so freqentemente adicionados para suplementarem a
quantidade de nutrientes e realizar a degradao orgnica no solo. A adio de
resduo orgnico pode facilitar a remoo de contaminantes orgnicos, porque eles
tm um importante papel na suplementao de nutrientes e de fonte de carbono no
solo contaminado. Os resduos orgnicos podem conter uma abundante quantidade
de matria orgnica e nitrognio, elevando assim o potencial de biorremediao
(NAMKOONG et al., 2002). A razo entre solo contaminado e resduo orgnico deve
ser determinada porque uma razo inapropriada pode retardar ou inibir a atividade
microbiana. Diante desse fato, utilizaram-se diferentes porcentagens de esterco
bovino, segundo a Figura 24.
2.4.4. A coleta
Foram realizadas 7 coletas (1o, 10o, 25o, 43o, 58o, 73o e 90o dia, em que o 1o
dia corresponde ao tempo 0 h) em cada experimento durante os 3 meses decorridos
do processo de vermicompostagem. Em cada experimento foram realizadas trs
amostragens, coletando-se as amostras a aproximadamente 15 cm de profundidade.
As amostras foram armazenadas em refrigerador a 4oC para posteriormente serem
extradas.
2.4.5. A extrao e a determinao dos HPAs

Cinco gramas das amostras e 5 g de sulfato de sdio anidro foram colocados
em recipiente fechado de 200 mL com 25 mL de acetona. A amostra foi sonicada em
banho de ultra-som (modelo 2510, marca Bransom) por 15 min. A soluo extrada
foi centrifugada e filtrada em um vial (em filtro Minisart RC15 de 15 mm de dimetro
e 0,45 m de porosidade da marca Sartorius) e armazenada em refrigerador a 4oC
para posterior determinao.
As determinaes dos 17 HPAs foram feitas por cromatografia lquida de alta
eficincia, utilizando-se um cromatgrafo da marca Shimadzu, com detector UV-Vis,
modelo SPD-10A VP, e fluorescncia, modelo RF-10A, utilizando uma coluna C-18
(250 x 4,6 mm SS, Wakosil II 5C18AR 5 m, SGE), segundo as condies
cromatogrficas descritas no capitulo I. A cada determinao foi feita uma corrida
com padro contendo os 17 HPAs a fim de corrigir o tempo de reteno referente a
cada composto e o comprimento de onda de excitao e emisso durante a corrida
cromatogrfica.
Buscou-se certificar, atravs das determinaes das concentraes dos 17
HPAs durante o decorrer do experimento, se a tcnica de vermicompostagem pode
ser aplicada para limpar solos contaminados por compostos derivados de petrleo
ao adicionar-se matriz orgnica a esse solo.
2.4.6. A extrao e a determinao qualitativa dos HPAs nas minhocas

aps o 90 dia do processo.
Cinco gramas da minhoca e 5 g de sulfato de sdio anidro foram colocados
em recipiente fechado de 200 mL com 25 mL de acetona. A amostra foi sonicada em
banho de ultra-som (modelo 2510, marca Bransom) por 15 min. A soluo extrada
foi centrifugada e filtrada em um vial (em filtro Minisart RC15 de 15 mm de dimetro

e 0,45 m de porosidade da marca Sartorius) e armazenada em refrigerador a 4 oC
para posterior determinao.
Seguiu-se a mesma metodologia (itens 1.3.8. e 1.3.9., pgina 45) adotada
anteriormente para a extrao e determinao dos HPAs nas minhocas em cada
experimento.
2.4.7. A biomassa das minhocas

As minhocas foram pesadas no incio dos experimentos e aps o 90 dia. Elas
foram lavadas, secas em papel de filtro e pesadas em balana analtica. Foram
pesados 20 indivduos em cada experimento, que correspondem em mdia a 5%
dos indivduos inicialmente adicionados a cada experimento.

2.5.1. A remoo dos HPAs durante o processo de vermicompostagem
A Figura 26 mostra a cintica de remoo dos HPAs no 1o, 10o, 25o, 43o, 58o,
73o e 90o dia, onde o 1o dia corresponde ao tempo 0 h dos experimentos de solo
dopado a 2% (v/v) de diesel com porcentagens de 0, 25, 50, 60 e 75% de esterco
No foram detectados os compostos benzo[g,h,i]perileno e indeno[1,2,3cd]pireno em nenhum dos experimentos.

naftaleno
acenaftileno*
85
8
6
4
2
0
10
20
30
40
50
60
70
80
100
95
90
85
80
75
70
65
60
55
50
45
40
35
30
25
20
15
10
5
0
100
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
4
3
2
30
40
50
60
70
80
90
10
20
antraceno
100
-1
90
85
20
15
10
5
60
70
80
90
100
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
95
Concentrao (mg kg )
95
50
90
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
80
-1
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
40
fluoranteno
Concentrao (mg kg )
100
30
Dias de vermicompostagem
fenantreno
-1
85
0
20
Concentrao (mg kg )
90
1
10
90
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
95
-1
90
-1
-1
Concentrao (mg kg )
95
Concentrao (mg kg )
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
Concentrao (mg kg )
100
acenafteno+fluoreno
85
0,8
0,6
60
40
20
0,4
0,2
0,0
10
20
30
40
50
60
-1
70
80
90
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
10
20
30
40
50
60
70
80
90
Figura 26 Concentraes (mg kg ) dos HPAs nas amostras durante o processo da vermicompostagem. Coleta realizada em triplicata. Determinao por
CLAE com detector de fluorescncia ou com detector UV-Vis.* detector UV-Vis.
(A) 0% de esterco bovino e 100% solo a 2% diesel; (B) 25% de esterco bovino e 75% solo a 2% diesel; (C) 50% de esterco bovino e 50% solo a 2% diesel;
(D) 60% de esterco bovino e 40% solo a 2% diesel; (E) 75% de esterco bovino e 25% solo a 2% diesel.

pireno
b[a]antraceno
100
-1
Concentrao (mg kg )
-1
Concentrao (mg kg )
90
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
95
85
4
90
85
8
6
4
20
30
40
50
60
70
80
90
20
50
60
70
80
90
10
85
5
4
3
2
1
0
40
50
60
70
80
90
30
40
50
60
70
80
90
b[k]fluoranteno
100
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
90
85
4,5
4,0
3,5
3,0
2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0
10
20
30
40
50
60
70
80
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
95
-1
95
-1
90
20
Concentrao (mg kg )
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
Concentrao (mg kg )
-1
40
100
95
Concentrao (mg kg )
30
b[e]acefenantrileno ou b[b]fluoranteno
100
30
1,5
B[e]pireno
20
2,0
0,0
10
10
85
2,5
0,5
0
10
90
1,0
2
0
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
95
-1
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
95
100
Concentrao (mg kg )
100
criseno
90
90
85
0,14
0,12
0,10
0,08
0,06
0,04
0,02
0,00
10
20
30
40
50
60
70
80
90
Figura 26 Continuao.
B[a]pireno
100
100
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
-1
90
(A)
(B)
(C)
(D)
(E)
95
Concentrao (mg kg )
-1
Concentrao (mg kg )
95
85
0,15
0,10
90
85
1,5
1,0
0,5
0,05
0,0
0,00
10
20
30
40
50
60
70
80
90
10
20
30
40
50
60
70
80
90
Figura 26 Concluso.
Observa-se, pelos resultados obtidos, que os compostos foram removidos

durante a vermicompostagem, enquanto a concentrao dos compostos na caixa
contendo o solo dopado (utilizado como controle - A) permaneceu quase sempre
inalterada.
Pelo grfico de cintica do naftaleno (Figura 26) observa-se que houve uma
diminuio na concentrao deste HPA no experimento A (controle) at o 25 dia.
Este composto de baixa massa molar e de baixo ponto de ebulio e com maior
polaridade que os demais HPAs tende a facilmente evaporar para o ambiente e a
dissolver-se melhor em gua. Por essa razo, altamente suscetvel ao processo de
degradao,
seja
ele
fotoqumico
ou
biolgico.
Observou-se,
menos
acentuadamente, esse mesmo comportamento para o acenaftileno e acenafteno +

fluoreno.
Pela Figura 26, utilizando-se a CLAE para a determinao da concentrao
de benzo[a]pireno, constatou-se um aumento da concentrao desse composto.
Porm, uma confirmao mais precisa dever ser realizada futuramente por
espectrmetro de massas (CG-EM).
Ainda pela Figura 26, pode-se notar que os HPAs que so mais polares e que
apresentam menor massa molar degradaram com maior facilidade em relao
queles compostos com maior massa molar. Neste estudo fica claro que a
persistncia de HPAs no ambiente solo est relacionada com o nmero de anis
benznicos na molcula do HPA. Pela Tabela 6, nota-se que os compostos que
contm at 4 anis benznicos (naftaleno, acenaftileno, acenafteno+fluoreno,
fenantreno, antraceno, fluoranteno, pireno, b[a]antraceno, criseno) apresentaram
maior tendncia degradao, ou seja, maior remoo desses compostos durante o
processo de biorremediao. J os compostos que contm mais de 4 anis
benznicos,
b[e]pireno,
b[e]acefenantrileno,
b[k]fluoranteno,
b[a]pireno,
dibenzo[a,h]antraceno, apresentaram menor remoo. Esses compostos so mais

apolares e menos volteis, portanto so menos susceptveis degradao, lixiviao
e volatilizao, tendendo a adsorverem nas partculas do solo com maior facilidade e
a permanecem no ambiente por um longo tempo. Por essa razo so utilizados para
efeito de monitoramento ambiental em reas contaminadas por combustveis.
(WIIDFL et al., 1992; UTSUMI et al., 1998).
Tabela 6 Percentual de remoo dos HPAs (%) durante o processo de biorremediao em cada
experimento (valores obtidos em triplicata).
HPA
A
B
C
D
E
Naftaleno
53,3
95,4
91,8
90,6
86,8
Acenaftileno
36,8
88,6
72,1
79,0
91,5
Acenafteno + Fluoreno
0,0
97,9
94,2
93,0
86,4
Fenantreno
0,0
94,0
89,8
71,3
47,3
Antraceno
14,3
99,1
97,8
98,8
98,0
Fluoranteno
18,6
97,8
98,3
97,0
93,8
Pireno
0,0
100,0
100,0
100,0
100,0
Benzo[a]antraceno
0,0
71,6
83,5
86,1
86,3
Criseno
0,0
83,1
82,2
84,3
83,3
Benzo[e]pireno
8,1
61,2
27,2
66,9
60,9
0
33,4
18,6
ND
ND
Benzo[k]fluoranteno
55,2
49,4
55,9
64,7
64,6
Benzo[a]pireno
0
0
0
0
0
0
51,9
73,6
70,2
50,6
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
ND
Monitorou-se a biorremediao atravs da determinao da concentrao dos

contaminantes, mas deve-se ressaltar que nem sempre a reduo dos mesmos
um indicativo do decrscimo da toxicidade do solo. A degradao incompleta e a
formao de metablitos intermedirios txicos podem resultar no aumento da
toxicidade do solo durante a biorremediao. A degradao pode ocorrer por
processos qumicos, fsicos e biolgicos, levando formao de compostos de
diferente toxicidade. Deve-se pensar em se estudar futuramente os possveis
produtos da degradao dos HPAs e sua toxicidade no ambiente, alm de fazer um
controle de sua concentrao atravs de um espectrmetro de massas durante o

processo da vermicompostagem.
Recentemente, a remoo de hidrocarbonetos do solo tem sido investigada
utilizando glicose, serradura, esterco, biosslido e composto com bioestimulantes
(NAMKOONG et al., 2002). Os bioestimulantes so fontes de nutrientes para
minhocas na vermicompostagem e contm microorganismos que podem acelerar a
remoo de hidrocarbonetos (NAMKOONG et al., 2002). A liberao de nutrientes
lenta, reduzindo, assim, possveis prejuzos e a contaminao do meio ambiente
(CONTRERAS-RAMOS et al., 2008).
Alguns estudos, no entanto, tm relatado o uso de biosslido ou
vermicomposto e/ou de minhocas para remediar os hidrocarbonetos aromticos
policclicos (HPAs) em solos contaminados. Contreras-Ramos et al. (2008)
estudaram a remoo de trs HPAs, fenantreno, antraceno e benzo[a]pireno em solo
esterilizado e no esterilizado com ou sem biosslido ou vermicomposto, e com ou
sem minhocas, da espcie Ensenia foetida, durante uma incubao aerbia a 22,2oC
durante 70 dias. A remoo de fenantreno foi mais rpida no solo adicionando-se
minhocas, que em solos sem minhocas aps 7 dias. Os experimentos demonstraram
que o desaparecimento de fenantreno, antraceno e b[a]pireno nos solos acelerado
pela presena de minhocas. A remoo dos HPAs aumentou no solo noesterilizado com adio de minhocas. Houve uma degradao de 91% de antraceno,
16% de b[a]pireno e 99% fenantreno dissipado comparado a 42%, 3% e 95% em
solo no-esterilizado sem minhocas, mostrando, assim, que o efeito da adio de
minhocas foi altamente significativo em matria de perda de HPAs no solo, e que a
atividade das minhocas aumenta a remoo de HPAs, estimulando a quantidade e a
atividade da biomassa microbiana do solo e melhora a sua aclimatao e adaptao
microbiana. As minhocas excretam em seus dejetos nutrientes como N e P, e

microorganismos, que passam a acelerar a remoo de HPAs. Alm disso, as
minhocas melhoraram a remoo de contaminantes dos solos e pela aerao
fornecem nutrientes para os microorganismos do solo.
No estudo de Contreras-Ramos et al. (2008) tambm foi relatado o efeito da
flora intestinal microbiana das minhocas e de sua atividade na remoo de HPAs no
solo esterilizado com minhocas. A remoo de fenantreno foi em mdia 89%, em
solo esterilizado com minhocas nos primeiros 7 dias e maior que 75% em solo noesterilizado sem minhocas. A remoo de antraceno foi 63% em solo esterilizado
com minhocas comparado a 42% em solo no-esterilizado sem minhocas, enquanto
que a remoo de b[a]pireno foi de 58% comparado a 3% aps 70 dias. Houve uma
maior remoo desses HPAs no solo esterilizado com minhocas do que no solo noestilizado sem minhocas, mostrando que as minhocas tm maior capacidade de
remoo que os microorganismos que vivem neste solo. Estes resultados sugerem
que as minhocas e/ou os microrganismos que vivem em seu trato intestinal podem
desempenhar um papel importante na remoo de HPAs. Os microrganismos
presentes na flora intestinal das minhocas contriburam para a remoo dos HPAs, e
100% de fenatreno, 63% de antraceno e 58% de b[a]pireno foram removidos do solo
esterilizado na presena de Ensenia foetida. Verificaram tambm que a adio de
biosslido e vermicomposto em menor grau acelera a remoo de HPAs do solo.
A Figura 27 apresenta o cromatograma referente amostra do experimento A
(0% de esterco bovino) no 1 dia de processo.
Figura 27 Cromatograma (CLAE-fluorescncia) da amostra do experimento A no 1 dia. O extrato

foi diludo 1:9 v/v antes da corrida cromatogrfica. Identificao: naftaleno (tr:10,871), acenafteno e
fluoreno (tr:11,981), fenantreno (tr: 12,366), antraceno (tr: 12,806), fluoranteno (tr: 13,092), pireno
(tr:13,711), b[a]antraceno (tr: 14,406), criseno (tr: 14,829), benzo[e]pireno (tr: 15,469),
b[e]acefenantrileno (tr: 15,717), b[k]fluoranteno (tr: 16,629), benzo[a]pireno (tr: 17,536)
As Figuras 28 e 29 apresentam os cromatogramas referentes s amostras do

experimento E (75% de esterco bovino e 25% solo a 2% diesel) no 1 e 90 dia de
processo. O extrato referente amostra E do 1 dia foi diludo 1:9 v/v antes da
injeo. Percebe-se uma significante reduo na intensidade e resoluo dos picos
aps os 90 dias de vermicompostagem. Esta caracterstica indica que houve uma
remoo
de
compostos
derivados
de
petrleo
durante
processo
de
biorremediao.
Percebe-se nos cromatogramas um aumento na linha de base aps 10
minutos de corrida, indicando ser um cromatograma tpico de amostras derivadas de
petrleo (hidrocarbonetos de petrleo).
Figura 28 Cromatograma (CLAE-fluorescncia) da amostra do experimento E no 1 dia. O extrato

foi diludo 1:9 v/v antes da corrida cromatogrfica. Identificao: naftaleno (tr:9,831), acenafteno e
fluoreno (tr:10,993), fenantreno (tr: 11,371), antraceno (tr: 11,801), fluoranteno (tr: 12,269), pireno
(tr:12,456), benzo[a]antraceno (tr: 13,383), criseno (tr: 13,792), benzo[e]pireno (tr: 14,518),
benzo[e]acefenantrileno (tr: 14,874), benzo[k]fluoranteno (tr: 15,247), benzo[a]pireno (tr: 16,173),
dibenzo[a,h]antraceno (tr: 17,166).
Figura 29 Cromatograma (CLAE-fluorescncia) da amostra do experimento E no 90 dia.

Identificao: naftaleno (tr:9,825), acenafteno e fluoreno (tr:11,007), fenantreno (tr: 11,371), antraceno
(tr: 11,818), fluoranteno (tr: 12,122), pireno (tr:12,446), benzo[a]antraceno (tr: 13,415), criseno (tr:
13,823), benzo[e]pireno (tr: 14,455), benzo[e]acefenantrileno (tr: 14,619), benzo[k]fluoranteno (tr:
15,311), benzo[a]pireno (tr: 16,250), dibenzo[a,h]antraceno (tr: 17,215).
2.5.2. O aspecto do solo e das minhocas aps o processo.

A Figura 30 mostra fotografias tiradas na montagem dos experimentos.
Caixas
Minhocas utilizadas
Experimento E (1 dia)
Experimento D (1 dia)
Experimento C (1 dia)
Experimento B (1 dia)
Figura 30 - Fotografias tiradas na montagem dos experimentos utilizando esterco bovino sem prcompostar. (B) 25% de esterco bovino e 75% solo a 2% diesel; (C) 50% de esterco bovino e 50% solo
a 2% diesel; (D) 60% de esterco bovino e 40% solo a 2% diesel; (E) 75% de esterco bovino e 25%
solo a 2% diesel.
A Figura 31 mostra fotografias tiradas aps 3 meses do nicio dos

experimentos. Observa-se uma estrutura diferente do solo, com a cor tpica de um
solo mais humificado.
As minhocas deixam o solo com aspecto homogneo, mantendo a sua
fertilidade e estrutura e melhorando a capacidade de infiltrao da gua e aerao
(CONTRERAS-RAMOS et al., 2008). Funcionam como engenheiras do solo,
alterando o substrato atravs do qual elas se movimentam, melhorando o
ecossistema dos solos. As minhocas fazem galerias atravs do solo, assim,
acumulam muitos poluentes orgnicos lipoflicos do meio circundante, ento elas
podem ser usadas para remover os hidrocarbonetos aromticos policclicos (HPAs)
a partir do solo (CONTRERAS-RAMOS et al., 2008).
A atividade das minhocas contribui para a biodegradao de contaminantes
orgnicos. Alguns trabalhos indicam que outros aneldeos podem metabolizar o
benzo[a]pireno, porque eles possuem enzimas citocromo-P450 capazes de degradar
este composto (CONTRERAS-RAMOS et al., 2008). A mesma atividade enzimtica
foi encontrada em minhocas terrestres, como a Eisenia foetida. Microrganismos
autctones degradam hidrocarbonetos (JOHNSEN et al., 2005), mas as minhocas ao
serem adicionadas ao solo melhoram a aerao, estimulam a atividade microbiana e
aumentam a biodegradao. Enquanto h uma grande diversidade de organismos
capazes de degradar HPAs de baixa massa molar, so relativamente poucos os
gneros que tm sido capazes de degradarem HPAs de alta massa molar, tal como
o b[a]pireno (JUHASZ e NAIDU, 2000).
Aspecto do solo
Aspecto do solo
Experimento D
Aspecto das minhocas
Figura 31 - Fotografias tiradas aps 3 meses dos experimentos utilizando esterco bovino sem prcompostar. (D) 60% de esterco bovino e 40% solo a 2% diesel.
Observa-se
(Figura
32-A)
aps
os
meses
do
processo
de
vermicompostagem, ao retirar-se o material das caixas, que havia espaos onde o

material encontrava-se em um maior estado de decomposio (circulado em
vermelho), e outros com menor estado de decomposio (circulado em branco).
Alm disso, verificou-se a formao de clitelo nas minhocas e produo de casulos
nas caixas dos experimentos C, D, E, F, indicando a reproduo das minhocas
(Figura 32-B).
casulos
(A)
(B)
Figura 32 Experimento aps 3 meses do processo de vermicompostagem utilizando esterco bovino
sem pr-compostar
Outros fatores que devem ser levados em considerao para os processos de

vermicompostagem so a qualidade e a quantidade de material em relao ao
nmero de minhocas (EDWARDS e FLETCHER, 1988; REINECKE e VILJOEN,
1990). Diante disso, para efeito de enriquecimento deste trabalho realizou-se uma
nova batelada de experimentos utilizando esterco bovino pr-compostado por 15
dias como matria orgnica.
A Figura 33 mostra a biomassa das minhocas (g) no incio e aps 3 meses do
processo da vermicompostagem, utilizando-se esterco bovino sem pr-compostar e
pr-compostado. De acordo com Gunadi et al. (2002) muitos estudos tm usado
matria-prima fresca, mas o grau de estabilizao ou a pr-compostagem da

matria-prima determina a velocidade e a qualidade do vermicomposto. A prcompostagem um passo importante para reduzir a mortalidade das minhocas
devido presena de elementos txicos, como amnia e cidos em estercos verdes
e ao aumento de temperatura durante os estgios iniciais de vermicompostagem.
GUNADI et al. (2003) encontraram uma mortalidade de 13% dos indivduos para
resduos pr-compostados e 20% para o resduo sem nenhuma estabilizao prvia.
Com relao ao crescimento da biomassa, em ambos os experimentos o valor mdio
observado foi de 7,9 mg dia-1. Os autores tambm observaram valores da C/N
varveis entre 29,0-51,5 e 14,8-17,9 durante os seis meses de experimento. O
mesmo comportamento foi observado neste trabalho. Os experimentos utilizando
resduo sem nenhuma estabilizao prvia promoveram maior mortalidade dos
indivduos, no entanto, Gunadi et al. (2003) afirma que a biomassa dos organismos
manteve-se inalterada. No presente estudo os indivduos dos experimentos com
esterco bovino pr-compostado apresentaram menor biomassa em relao quelas
com esterco bovino sem pr-compostar.
A Figura 34 mostra os tamanhos apresentados pelas minhocas nas caixas de
25, 50, 60, 75 e 100% de esterco bovino pr-compostado aps o processo. As
minhocas da caixa de 25% e 100% apresentaram os menores e os maiores
tamanhos, respectivamente.
(a)
(b)
Figura 33 Biomassa das minhocas no incio do processo e ao final de 3 meses, utilizando esterco
bovino (a) sem pr-compostar e (b) pr-compostado. Mdia de 20 indivduos.
25%
60%
50%
75%
100%
Figura 34 Tamanho apresentado pelas minhocas aps 3 meses do processo, utilizando esterco
bovino pr-compostado.
comprimento
das
minhocas
(Figura
35)
aps
processo
de
vermicompostagem variou de 5 a 11 cm. No incio do processo elas apresentavam

um tamanho de 3 a 4 cm.
Figura 35 Maior tamanho apresentado pelas minhocas aps o processo de vermicompostagem.
A Figura 36 mostra o aspecto das minhocas em cada experimento utilizando

esterco bovino pr-compostado ao fim do 90 dia do processo. Pode-se afirmar que
a quantidade da matria orgnica influenciaram no tamanho da minhoca.
(B)
(C)
(E)
(F)
(D)
Figura 36 Minhocas em cada experimento (B, C, D, E e F) aps 3 meses utilizando esterco

2.5.3. Compostos derivados de petrleo nas minhocas

Os cromatogramas (Figuras de 37 a 41) fornecem informaes qualitativas
sobre a existncia de hidrocarbonetos nas minhocas. Percebe-se que os
cromatogramas dos experimentos B, C, D e E apresentaram um aumento na linha
de base aps 10 minutos de corrida, tpico de amostras derivadas de petrleo
(hidrocarbonetos de petrleo). J o cromatograma do experimento F, mantido como
branco, no apresenta esta caracterstica. Isto indica que as minhocas, alm de
degradarem os compostos orgnicos, tendem a incorpor-los em seu organismo.
As minhocas acumulam muitos poluentes orgnicos lipoflicos do solo a partir
do ambiente circundante, no s atravs da absoro pela superfcie do corpo na
forma de frao dissolvida na gua intersticial, mas tambm pela absoro intestinal
durante a passagem do solo atravs do tubo digestivo (CONTRERAS-RAMOS et al.,
2006 e CONTRERAS-RAMOS et al., 2008).
Figura 37 Cromatograma (CLAE-fluorescncia) do extrato das minhocas do experimento B.
Figura 38 Cromatograma (CLAE-fluorescncia) do extrato das minhocas do experimento C.
Figura 39 Cromatograma (CLAE-fluorescncia) do extrato das minhocas do experimento D.
Figura 40 Cromatograma (CLAE-fluorescncia) do extrato extrado das minhocas do experimento E.
Figura 41 Cromatograma (CLAE-fluorescncia) do extrato das minhocas do experimento F.
2.6. CONCLUSES
Verificou-se atravs da determinao da concentrao dos contaminantes,
que houve uma remoo dos HPAs durante o processo de biorremediao. A
biorremediao utilizando-se a ao conjunta de minhocas e de microorganismos
apresenta vantagens, como a de realizar o processo no prprio local contaminado,
por ser natural e por deixar o solo mais rico em nutrientes, entre outros, alm de ser
economicamente mais vivel. Esse tipo de remediao pode ser utilizado em locais
impactados por derramamento de compostos derivados de petrleo, como, por
exemplo, postos de gasolina com vazamento de combustveis, alm de ser utilizado
para degradar esses compostos em resduos slidos de laboratrios de anlises
ambientais, onde se recebe um vasto nmero de amostras de solo para serem
analisadas.
A utilizao de minhocas em um stio contaminado uma forma
ambientalmente amigvel para eliminar hidrocarbonetos do solo. No entanto, pode
ter uma limitao quanto grande quantidade de minhocas necessria para eliminar
os HPAs de solo e para a necessidade de fornecer-lhe substrato suficiente,
mantendo simultaneamente o teor de gua do solo suficientemente alto para o seu
normal funcionamento. Assim, sugere-se que o solo seja caracterizado e que se
acrescente matria orgnica (esterco bovino, por exemplo) para suprir os nutrientes
necessrios manuteno das minhocas.

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CAPITULO III
Caracterizao fsico-qumica e
estudo da humificao durante
a biorremediao
Caracterizao fsico-qumica e estudo da humificao durante a biorremediao 111

Na matria orgnica encontram-se dois tipos de substncias: a denominada
matria orgnica ativa, que ainda no se decomps e a matria orgnica inativa ou
humificada ou estabilizada, tambm denominada de hmus, no mais sujeita a
decomposies intensas. Portanto, o hmus pode ser dividido em duas fraes:
hmica e no-hmica.
Durante o processo de decomposio, ou seja, de mineralizao da matria
orgnica pelo processo da compostagem ou vermicompostagem, haver liberao
de elementos qumicos, como nitrognio, fsforo, potssio, clcio e magnsio, os
quais deixam a forma orgnica, dita imobilizada, para passarem forma assimilvel
de nutrientes para as plantas. Alguns componentes da matria orgnica so
utilizados pelos microorganismos e minhocas para formao de seus tecidos, outros
so volatilizados e outros so transformados biologicamente em substncia escura,
uniforme, com consistncia amanteigada e aspecto de massa amorfa, rica de
partculas coloidais, proporcionando a esse novo material formado propriedades
fsicas, qumicas e fsico-qumicas inteiramente diferentes da matria-prima original.
A essa substncia d-se a denominao de hmus. O hmus apresenta colorao
variando de cinza escuro preta intensa. praticamente insolvel em gua, embora
boa parte possa entrar em suspenso coloidal, e solvel em lcalis (KIEHL, 1985).
A produo de vermicomposto acelerada devido digesto da celulose e
semi-decomposio provocada pelas minhocas que trabalham simbioticamente com
os microorganismos. Isto fortalece sua habilidade na reduo da matria orgnica

crua em material humificado (KIEHL, 1985, LONGO,1987).
Diferentes espcies de minhocas secretam diferentes enzimas baseadas em
suas fontes de alimentao preferidas. A Eisenia foetida secreta duas proteases e
uma amilase para ajudar na sua digesto. Essas enzimas ajudam a acelerar a
humificao da matria orgnica ingerida, auxiliando no aumento da flora
microbiana, que em atividade aumenta a degradao da matria orgnica (SHARMA
et al., 2005). Tambm seus sucos gstricos atacam grnulos de rochas e minerais
engolidos, alterando-lhes a estrutura. Os carbonatos por elas expelidos servem
como corretivo dos solos cidos e os demais elementos do hmus constituem
excelentes nutrientes vegetais (CANTI e PIEARCE, 2003).
A qualidade e a quantidade dos alimentos disponibilizados nos resduos
influenciam no tamanho e na velocidade de crescimento da minhoca e na produo
de coprlitos (SHARMA et al., 2005). Os coprlitos neutralizam os solos originais,
quer eles sejam cidos ou alcalinos. So pobres em argilas, ricos em matria
orgnica, nitratos, fsforo, potssio, clcio e magnsio e apresentam elevada
capacidade de troca catinica, saturao em base e umidade (KIEHL, 1985,
SHIPITALO e PROTZ, 1989).
O tempo necessrio para compostar resduos orgnicos depende da natureza
fsica e qumica da matria-prima como a relao C/N, teor de nitrognio da matriaprima, dimenso das partculas, entre outros, e das condies do meio, tais como
umidade, temperatura e pH. Outros fatores de menor importncia completam a
relao dos agentes que influenciam na decomposio. Para que o processo de
decomposio seja bem sucedido, a matria-prima deve ter um balano da relao
C/N favorvel ao metabolismo dos organismos que vo efetuar sua biodigesto,
deve-se facilitar a digesto dessa matria-prima dispondo-a em local adequado,

controlando a umidade, a temperatura e os demais fatores, conforme o caso
requerer.
Antes
de
se
discorrer
sobe
tempo
de
compostagem
vermicompostagem necessrio esclarecer qual o produto final que se pretende

obter e qual o conceito que se tem sobre as qualidades desse material.
O teor de nitrognio dos resduos a serem decompostos deve ser
teoricamente 1,7% (KIEHL, 1985). Quando o contedo de nitrognio for inferior a
esse valor, o tempo de decomposio ser maior. Os materiais pobres em nitrognio
decompem-se mais lentamente, liberando a princpio pouco nitrognio e ao final
geram maior poro de hmus que o material rico em nitrognio. Por outro lado,
experimentos tm demonstrado que a decomposio de resduos vegetais ricos em
nitrognio rpida, liberando-se uma grande quantidade de amnia, enquanto que,
comparativamente, pequena poro de hmus formada (KIEHL, 1985).
Portanto, segundo Imbar et al. (1999), a decomposio de resduos com
concentrao de nitrognio inferior a 2% ou com uma relao C/N maior que 25
possibilita
imobilizao
de
nitrognio
mineral,
enquanto
materiais
com
concentrao superiores a esses valores liberam o nitrognio mineral. A

concentrao de nitrognio e relao atmica C/N so os principais fatores que
determinam a habilidade na liberao do nitrognio dos resduos. Relaes muito
baixas causam perdas praticamente inevitveis de nitrognio na forma de amnia,
enquanto que os valores mais altos tornam o processo mais prolongado.
A
razo
C/N
de
fundamental
importncia
no
processo
de
vermicompostagem para produo de energia e metabolizao do protoplasma,

protenas e aminocidos das clulas (KIEHL, 1985 e WALLACE, 1994). A utilizao
da matria orgnica fresca no aconselhvel, devido aos valores mais altos da
relao C/N e excesso de componentes orgnicos txicos. As minhocas

desenvolvem-se bem com uma alimentao relativamente rica em nitrognio
protico; devido a este fato elas preferem os resduos de origem animal aos de
vegetal. Porm, resduos com teores elevados de protena devem ser evitados por
serem altamente fermentveis no intestino da minhoca, provocando sua morte. A
matria orgnica fibrosa, rica em carbono, apresenta uma relao C/N de 70/1 a
90/1, o que dificulta sua decomposio pelas bactrias. Desta forma necessria a
incluso do esterco, que rico em nitrognio e tem a funo de baixar a relao C/N
em nveis ideais para o desenvolvimento das bactrias (THOMSEN, 2000).
O favorecimento da respirao microbiana e do desenvolvimento da
populao de bactrias devido ao excremento das minhocas est diretamente
associado transformao microbiana do nitrognio, indicando uma elevada
atividade de nitrificao e desnitrificao (PARKIN e BERRY, 1999). A atividade
microbiana em processos aerbios utiliza de 15 a 30 partes de carbono para cada
parte de nitrognio, mantendo uma razo C/N aproximadamente entre 15/1 e 30/1.
Semelhantemente, a relao C/N ideal para facilitar a decomposio do resduo
pelas minhocas e microorganismos de 30 partes de carbono para 1 de nitrognio.
De acordo com estudos realizados por Aquino et al. (1994), Elvira et al. (1996) (a) e
Elvira et al. (1996 b), esses valores devem ser controlados atravs da prcompostagem ou pelas misturas de material a ser utilizado na vermicompostagem.
Os
resduos
contm
diferentes
quantidades
de
nutrientes
em
sua
composio, a qual influencia na velocidade e no grau de decomposio desses

resduos. Os resduos no so igualmente atacados nem se decompem
inteiramente de uma s vez. Seus vrios constituintes so decompostos em
diferentes estgios, com diferentes intensidades. A velocidade e o grau de
decomposio dos resduos vegetais e animais podem ser medidos de vrias

maneiras: pela quantidade de gs carbnico desprendido, pelo consumo de certos
componentes como os acares, os amidos e as celuloses, e pela transformao de
nitrognio orgnico em amnio, nitrito e nitrato. As anlises qumicas em laboratrio
ou os testes rpidos de campo permitem que se acompanhe o grau de
transformao que esses materiais vo sofrendo durante o processo de
decomposio. A diminuio do contedo de matria orgnica e, conseqentemente,
o aumento do teor de cinzas que ocorre no processo, devido simultnea
humificao e mineralizao dos restos orgnicos, outra maneira de se
acompanhar a decomposio. A fertilidade geralmente avaliada atravs da anlise
dos macros e micros nutrientes, C/N e sua capacidade de troca catnica (CTC)
(KIEHL, 1985). As cargas negativas, responsveis pelo aumento da CTC, esto
presentes nos grupos funcionais carboxlicos (-COOH), fenlicos (-OH), alcolicos (OH) e metoxlicos (-OCH3) dos cidos orgnicos presentes no hmus e dependem
do pH do meio (ABREU Jr. et al., 2001).
O emprego de estercos animais como de bovinos, equinos, caprinos, sunos e
ovinos para a vermicompostagem uma prtica comum mundialmente, pois um
mtodo economicamente interessante de aproveitamento de resduos gerado no
prprio campo (HARRIS et al., 1990; LOH et al., 2005). A produo de minhocas
semelhante, independentemente da origem do esterco empregado (RODRIGUES et
al., 2003). No entanto, o esterco bovino, devido facilidade de ser obtido, vem se
constituindo na principal fonte de matria-prima para essa atividade (TEIXEIRA,
1996).
A composio e as propriedades fsico-qumicas dos dejetos aceleram em at
60% o desenvolvimento de bactrias, protozorios e outros microrganismos,
inclusive a bactria que fixa o nitrognio. Esses mesmos microrganismos

multiplicados no processo tornam mais rpida a fermentao de restos vegetais e
animais, que podem ser aproveitados pelas plantas. O esterco bovino que passou
pelo processo de vermicompostagem tem seu contedo de matria orgnica
humificada (cidos flvicos, hmicos e humina) acrescido em at 30% (AQUINO et
al., 1994).
3.1.1. As substncias hmicas

Os solos so constitudos de uma poro inorgnica e outra orgnica. A
matria orgnica existente nos solos, turfas, sedimentos e gua consiste de uma
mistura de produtos em vrios estgios de decomposio, que resultam de
degradao qumica e biolgica de resduos de plantas e animais e de atividades
sintticas dos microorganismos (SILVA, 2000).
De todos os componentes do solo, a matria orgnica , sem dvida, um dos
principais constituintes. Em geral, a frao orgnica do solo tem um papel
fundamental na regulagem dos processos qumicos que ali ocorrem, influi sobre as
caractersticas fsicas e o centro de quase todas as atividades biolgicas, incluindo
fauna, flora e sistemas de razes de plantas superiores (ALLISON, 1982).
A matria orgnica pode ser dividida em substncias hmicas e substncias
no hmicas.
As substncias no-hmicas apresentam caractersticas qumicas bem
definidas: incluindo-se nesse grupo os carboidratos, as protenas, os peptdeos, os
aminocidos, os cidos graxos, as ceras e os cidos orgnicos de massa molar
baixa. Esses compostos so mais facilmente degradados por microorganismos
possuindo, portanto, curto tempo de vida no ambiente.
As substncias hmicas no apresentam caractersticas qumicas e fsicas

bem definidas (tais como: ponto de fuso, ndice de refrao, composio elementar,
espectro na regio do UV etc.). As substncias hmicas, que se constituem de cido
hmico, cido flvico e humina, pertence a um grupo heterogneo de compostos
originrios da degradao qumica e biolgica de resduos de plantas e da atividade
metablica de microrganismos (KONONOVA, 1966 e STEVENSON, 1994). Os
produtos formados tendem a associar-se em estruturas complexas que so mais
estveis que os materiais de origem (SCHNITZER e KHAN, 1978).
As substncias hmicas so constitudas de estruturas polimricas amorfas
em vrios graus de polidisperso, de cor escura, carter cido, predominantemente
aromtico, hidroflicas, natureza polieletroltica e massa molar entre algumas
centenas at milhares (JAVARONI, 1993). As substncias hmicas presentes no
vermicomposto so macromolculas amorfas que podem existir como partculas
tridimensionais ou como envoltrio de partculas minerais (ATIYEH et al, 2002). So
encontrados na literatura dados de substncias hmicas contendo fraes de massa
molar variando desde 340 a valores superiores a 8500 (MESSIAS, 2004). Entretanto,
nenhum conceito com aceitao geral encontrado, dada a sua natureza complexa
e heterognea. Algumas colocam em evidncia sua natureza polimrica, outras a
solubilidade ou ainda a sua colorao escura. Atualmente, a definio mais aceita
de que substncias hmicas so biopolmeros, possuindo alto poder de interagir com
ons metlicos e molculas orgnicas de baixo massa molar (MESSIAS, 2004).
Suas propriedades fsico-qumicas esto relacionadas conservao do solo,
complexao, transporte e biodisponibilidade de metais, interao com pesticidas
etc. (MITCHELL, 1997; KONONOVA, 1966).
Em termos de composio qumica, as substncias hmicas apresentam

anis aromticos substitudos, os quais so geralmente grupos carboxlicos,
hidroxlicos e carbonlicos. Em termos de propriedades fsicas, as substncias
hmicas so materiais de cargas variveis, nos quais os grupos carboxlicos e
fenlicos dissociam-se gradualmente quando do aumento de pH. Isto leva
formao de cargas negativas que criam stios trocadores de ctions.
3.1.1.1. Fracionamento das substncias hmicas

As substncias hmicas so usualmente fracionadas com base nas suas
solubilidades em meio aquoso. As fraes obtidas por esse meio incluem:
cidos flvicos: frao solvel em meios alcalino e cido;
cidos hmicos: frao solvel em meio alcalino e insolvel em meio
cido (pH < 2);
humina: frao insolvel em qualquer condio de pH.
Dos cidos hmicos pode ser extrado o cido himatomelnico, que a parte
dos cidos hmicos solveis em lcool (REZENDE, 1999).
Cada uma dessas fraes apresentada como uma mistura heterognea e
complexa, geralmente com estruturas irregulares e com uma grande variedade de
massas molares.
A solubilizao dos cidos hmicos em meio alcalino se deve converso
dos grupos cidos (principalmente carboxlicos e fenlicos) em ons. A repulso
eletrosttica
entre
os
ons
formados
as
argilas
(tambm
carregadas
negativamente) e a repulso intramolecular, que leva a uma conformao menos

enovelada dos cidos hmicos, facilita sua hidratao. Ressalta-se, porm, que
sais (humatos) de ctions polivalentes no so solveis (MESSIAS, 2004).
A conformao estrutural das substncias hmicas depende principalmente

de aspectos como pH, concentrao inica do meio e grau de complexao dos
grupamentos. Baseado em estudos de presso de superfcie e estudos
viscosimtricos, Ghosh e Schnitzer (1982) sugerem um modelo para a conformao
de cido hmico em funo do pH e da concentrao inica, como mostra a Tabela
7. O pH influencia na ionizao dos grupamentos cidos, tendo como conseqncia
uma variao da quantidade de cargas formais na cadeia. A repulso dessas
cargas, visando-se a uma energia mnima, faz com que o esqueleto da molcula
seja mais ou menos aberto. Portanto, o pH e a concentrao inica apresentam-se
como variveis de grande importncia, pois alteram a estrutura macromolecular e a
solubilidade das substncias hmicas (SILVA, 2000).
Tabela 7 - Conformao de substncias hmicas em funo do pH e da concentrao inica.
O percentual de material hmico extrado varia consideravelmente de um tipo

de matriz para outro e, em geral, maior quando se aumenta o pH do extrator e a
temperatura de extrao (STEVENSON, 1994).
De acordo com Stevenson (1994), o mtodo de extrao ideal seria aquele
que permitisse o isolamento dos cidos hmicos inalterados, livres de contaminantes
e representativos de toda a amplitude de massas molares, e que fosse aplicvel a
qualquer tipo de matriz. Entretanto, tal mtodo ainda no foi desenvolvido e,

provavelmente, nunca o ser, dada a complexidade da matriz.
Pode-se dizer que a polimerizao muda sistematicamente com o aumento da
massa molar. Os cidos flvicos tm baixa massa molar, possuem alto teor de
oxignio, mais baixo teor de carbono e nitrognio quando comparados aos cidos
hmicos, composto de alta massa molar. A acidez do cido flvico
consideravelmente maior do que a do cido hmico.
As substncias hmicas, humina e cido flvico, parecem ser semelhantes
estruturalmente, diferindo na massa molar, quantidade de grupos funcionais e
interao com os constituintes inorgnicos do solo.
As principais caractersticas dos cidos hmicos so a sua habilidade em
interagir com argilas minerais e compostos orgnicos, e de formar complexos
solveis e insolveis em gua, com ons e xidos hidratados de metais.
3.1.1.2. Estruturas qumicas propostas para os cidos hmicos

Os cidos hmicos so, geralmente, os principais constituintes do hmus
natural, devido a apresentar-se em maior quantidade. Vrias tm sido as estruturas
propostas para este material. A estrutura proposta por Stevenson (1985) (Figura 42)
mostra grupos OH fenlicos livres e ligados, estruturas quinnicas, nitrognio ligando
unidades estruturais e grupos COOH em diferentes pontos dos anis aromticos.
Esses grupos seriam, ento, os responsveis pela atividade qumica e biolgica
dessas substncias, nos ecossistemas aquticos e terrestres (STEVENSON, 1994).

HC
COOH
COOH
HO
R
OH
OH
CH
HO
HC
COOH
O
O
HC
O
O
OH
COOH
H2
C
CH
COOH
O
N
NH
R
OH
CH
C
NH
Figura 42 - Modelo de cido hmico proposto por STEVENSON em 1982 (adaptado de

STEVENSON, 1985).
A Figura 43 apresenta a estrutura proposta por Schulten e Schnitzer (1993).

Essa estrutura apresenta uma maior predominncia de grupos alifticos. Entretanto,
no esto apresentados os grupamentos quinnicos, que so responsveis por
grande parte das caractersticas redox das molculas (SCHULTEN e SCHNITZER,
1993).
Figura 43 Modelo de cido hmico proposto por Schulten e Schnitzer (1993).
Sein Jr.et al. (1999) construram uma proposta de estrutura parcial de cido
hmico, como mostra a Figura 44, levando em considerao o aspecto
tridimensional da molcula, utilizando simulaes computacionais. Os espaos
intersticiais
da
molcula
proporcionam
geometria
necessria
para
aprisionamento e/ou quelao de outras substncias .
Figura 44 Estrutura tridimensional proposta por Sein Jr. et. al
A presena de cargas eltricas na estrutura macromolecular dos cidos

hmicos desenvolve caractersticas polieletrliticas que permitem formar ligaes de
hidrognio com as guas de hidratao dos ctions metlicos, bem como interaes
eletrostticas mais fracas como foras de van der Waals (SPOSITO, 1989). As
propriedades polieletrolticas das substncias hmicas tm um importante papel no
ambiente pela sua influncia na especiao de ons metlicos e devido ao fato de se
ligarem com poluentes orgnicos muitas vezes contribuindo para degrad-los.
Devido natureza heterognea e complexa das substncias hmicas, apesar
dos muitos estudos na rea, pouco se sabe sobre a formao, sntese e estrutura
qumica das substncias hmicas (SCHULTEN e SCHNITZER, 1995). Assim,
importante o desenvolvimento de pesquisas que permitam um maior entendimento
das
principais
caractersticas
das
substncias
hmicas,
proveniente
da
vermicompostagem.
Estudos de espectroscopia no IV sobre o cido hmico de vermicomposto

proveniente de esterco bovino mostraram acentuadas diferenas na composio
desse material quando comparado com o cido hmico de turfa ou solo e, ainda,
que a concentrao de nitrognio em cido hmico de vermicomposto foi
aproximadamente 2 vezes maior que no cido hmico de turfa (LANDGRAF e
REZENDE, 1997 e LANDGRAF et al.,1999). Messias (2004) utilizou-se de vrias
tcnicas analticas para verificar as diferenas na composio de cidos hmicos
extrados de turfa e vermicomposto.
3.2. OBJETIVOS
Este captulo tem como objetivo estudar as propriedades qumicas e fsicas
das amostras dos experimentos A, B, C, D, E e F durante a biorremediao, com o
intuito de monitorar a dinmica de mineralizao, ou seja, de degradao. Alm
disso, procura-se extrair e caracterizar os cidos hmicos das amostras de cada
experimento, atravs de anlise elementar, espectroscopia de absoro no
ultravioleta/visvel e no infravermelho.
3.3. METODOLOGIA
Para efeito de enriquecimento deste trabalho realizou-se uma nova batelada
de experimentos utilizando esterco bovino pr-compostado por 15 dias como matria
orgnica, como mencionado no captulo II (pgina 99). Verificaram-se as diferenas
nas condies qumicas e fsicas referentes humificao entre o processo de
biorremediao utilizando esterco bovino sem pr-compostar e pr-compostado.
3.3.1. Anlises granulomtricas do solo

Foi realizada anlise granulomtrica do solo utilizado no estudo para fins de
caracterizao da composio do mesmo. A anlise granulomtrica foi realizada
seguindo a norma tcnica NBR 7181/1984 (ABNT, 1984). Para a anlise do solo
utilizou-se um jogo de peneiras de nmero: 16, 40, 60, 100 e 230 em mesa agitadora
por dez minutos. As determinaes das fraes silte e argila so feitas pelo mtodo
do densmetro, segundo a mesma norma tcnica (NBR 7181/1984). A anlise foi
realizada no Laboratrio de Estradas do Departamento de Transportes da
Universidade de So Paulo, Campus So Carlos.
3.3.2. Caractersticas fsico-qumicas

Determinaram-se as caractersticas qumicas (pH, matria orgnica, CTC,
carbono orgnicos total) e fsica (umidade). Estas anlises so essenciais para
verificar o grau de nutrientes e fonte de carbono para as minhocas durante o
tratamento, alm de mudanas nas condies fsicas e qumicas durante a
vermicompostagem.
3.3.2.1. Determinao do pH
Quando se determina o pH, est-se determinando a acidez ativa, ou seja, a
parcela do hidrognio que est ionizado e, portanto, na forma de H+. A parte noionizada do hidrognio chamada acidez potencial. Em solos, a maior parte do
hidrognio no est ionizada. Isso quer dizer que o comportamento do solo
assemelha-se ao de cidos fracos.
As amostras secas em estufa a aproximadamente 50oC por 24 h foram
trituradas e peneiradas em malha de 250 m de dimetro para remover as
impurezas. Para a determinao do pH, 10 g das amostras foram suspensas em

uma soluo de CaCl2 0,01 mol L-1, com agitao ocasional por 30 minutos, tendo,
ento, o pH determinado (CLAESSEN, 1997).
3.3.2.2. Teor de matria orgnica

Das amostras foram retiradas alquotas in natura, que foram trituradas em
almofariz e pistilo, e peneiradas em malha de 250 m para homogeneizao das
partculas, secas a 50oC at massa constante, e mantidas dentro de um dessecador
at a sua anlise. O teor de matria orgnica foi determinado por calcinao em
mufla a 550oC, por 4 horas (ALLISON,1965; KIEHL,1985). Pesaram-se 10 g da
amostra, que foi submetida 550oC por 4 horas em mufla e resfriada em ambiente
livre de umidade (dessecador). Queima-se o material orgnico, restando o
inorgnico e por diferena determina-se o teor de matria orgnica nas amostras. A
determinao obedece Equao 6:
%MO=(Ps-Pm/Ps)*100
(6)
onde:
%MO= matria orgnica em porcentagem
Pm= massa (em g) aps ser submetida combusto
Ps= massa (em g) total ou inicial
3.3.2.3. Determinao da umidade do solo a 100-1100C

Para determinar a umidade (CLAESSEN, 1997; KIEHL,1985), 10 g da
amostra in natura foram levados estufa por 24 horas a 100 110oC. Aps esse
tempo, deixou-se esfriar at massa constante, em dessecador, determinando-se a
umidade pela Equao 7:
%U(100 1100C)= 100(p- p1)/p
(7)
onde:
p= massa (em g) de amostra ao natural
p1= massa (em g) da amostra seca a 100-1100C
Durante os experimentos, os teores de umidade foram controlados de forma a
serem mantidos em torno de 35 a 45%. Lelis et al. (1999) observaram que a
manuteno do teor de umidade proporciona a maximizao da velocidade de
degradao, a reduo dos impactos ambientais associados ao processo e a
eliminao dos organismos patognicos.
3.3.2.4. Determinao da capacidade de troca catinica (CTC)

Entende-se por CTC efetiva ou potencial a capacidade de troca de ctions ou
a capacidade em reter ctions prximos ao valor de seu pH natural (RAIJ et al.,
1996). A acidez (H + Al) liberada pela reao com soluo no tamponada de KCl
pode ser designada como acidez real e utilizada para determinar o que se
denomina de CTC efetiva, que definida como a soma dos ctions metlicos totais
trocveis (bases) + (H + Al).
As amostras secas em estufa a aproximadamente 50oC por 24 h foram
trituradas e passadas em peneira de malha de 250 m de dimetro para remover as
impurezas.
3.3.2.4.1. Determinao dos ctions metlicos totais trocveis

Foram pesados 2,50 g de amostras, s quais adicionaram-se 25 mL de
CH3COOH 1,00 mol L-1. A suspenso foi agitada por uma hora e, ento, foi
determinado o pH, assim como o pH da soluo de CH3COOH.
Para os clculos dos ctions metlicos totais trocveis das amostras foi usada
a Equao 8 (JACKSON, 1967):
Ctions metlicos trocveis (cmolc kg-1) = [pH1 pH2] x 22
(8)
em que:
pH1 = pH da suspenso
pH2 = pH da soluo de cido actico
22 = constante logartmica
A determinao dos ctions metlicos totais trocveis baseia-se no
deslocamento dos ctions metlicos trocveis dos componentes da amostra pelo
prton do CH3COOH. Mede-se cuidadosamente a variao de pH ocorrida,
determinando-se a quantidade de ons H+ deslocados. Os ctions trocveis
correspondem soma dos ons Ca2+, Mg2+, K+ e Na+.
3.3.2.4.2. Acidez trocvel

A acidez (H + Al) liberada determinada pela reao com soluo no
tamponada de KCl (CLAESSEN, 1997).
Foram colocados 5 g das amostras em erlenmeyer de 125 mL e adicionados
50 mL de KCl 1 mol L-1. Agitou-se manualmente algumas vezes e deixou-se em
repouso durante 30 minutos. Filtrou-se em papel de filtro, adicionando-se duas
pores de 10 mL de KCl 1 mol L-1. Adicionou-se ao filtrado 6 gotas de fenolftalena
a 0,1% m/v e titulou-se com NaOH 0,01 mol L-1. Pela Equao 9, determinou-se a
acidez trocvel.
Acidez trocvel (cmolc kg-1) = (V x C x 100) /m
(9)
onde:
V= volume (em mL) de NaOH gastos na titulao
C= concentrao (em mol L-1) do NaOH

m= massa (em g) da amostra
3.3.2.5. Determinao do carbono orgnico total

O carbono total determinado pela oxidao do carbono orgnico e
inorgnico da amostra a CO2, devido ao aumento de temperatura 900 oC. A
determinao do carbono inorgnico realizada quando se acidifica, com cido
fosfrico, e aquece-se a amostra a 200oC, o que leva liberao de CO2
proveniente do carbono inorgnico. Por diferena do carbono total e inorgnico
calcula-se o valor do carbono orgnico total das amostras.
O dixido de carbono pode, tambm, ser determinado via condutividade da
soluo, reduo a metano e anlise deste gs por deteco por ionizao em
chamas, ou medido diretamente por espectrometria de infravermelho. A anlise
atravs de TOC possui as seguintes vantagens: uma tcnica rpida; altamente
reprodutvel; pode ser facilmente automatizada; entre outras (REEVE, 1994).
Foi usado um aparelho carbono total, modelo TOC-VCPH, acoplado ao mdulo
de amostras slidas, modelo SSM-5000A, marca SHIMADZU. As curvas analticas
foram construdas com padro de biftalato de potssio para anlise de carbono total
e carbonato de sdio anidro para anlise de carbono inorgnico das amostras. Nas
anlises de carbono total, as amostras foram oxidadas a 900C, utilizando-se uma
vazo de O2 de 0,5 L min-1. Nas anlises de carbono inorgnico, as amostras foram
acidificadas com cido fosfrico e aquecidas a 200C (vazo de O2 de 0,5 L min-1).
Determina-se o carbono total e inorgnico e por diferena calcula-se o valor do
carbono orgnico total das amostras (SHIMADZU, 2001).
Foram pesados aproximadamente 100 mg de amostra, seca em estufa a 50oC

por 24 h e triturada, a qual foi colocada no equipamento TOC para determinao de
carbono total e inorgnico. Por diferena calculou-se o valor do carbono orgnico
total das amostras.
3.3.3. Os cidos hmicos

3.3.3.1. A extrao
Foram extrados os cidos hmicos somente das amostras do 1o,
correspondendo ao tempo 0 h, e 90 dia. Os cidos hmicos foram extrados e
purificados de acordo com a metodologia convencional estabelecida pela Sociedade
Internacional para Substncias Hmicas, baseada em solubilidade em soluo
alcalina de NaOH 0,1 mol L-1 e precipitao em cido clordrico 0,1 mol L-1.
150 g da amostra foi transferida a um bquer no qual foi adicionado 1,0 L de
soluo de HCl 0,1 mol L-1. A suspenso foi agitada por 1 hora.
Depois de removido o sobrenadante por sifonao, foi adicionado ao resduo
1,0 L de soluo de NaOH 0,1 mol L-1. A mistura foi agitada por 4 horas e, em
seguida, deixada em repouso por 12 horas temperatura ambiente.
A mistura foi centrifugada a 7.500 rpm (5,53 x 103 g) por 20 minutos. O
sobrenadante foi novamente centrifugado e, depois, acidificado com uma soluo de

HCl 6 mol L-1 at pH 1,0 (aproximadamente 500 mL) e deixado em repouso por 12
horas.
O precipitado, cido hmico, foi separado da frao solvel, cido flvico, por
nova centrifugao a 7.500 rpm por 20 minutos.
Em um bquer de plstico, foram adicionados ao cido hmico cerca de 250
mL de soluo composta de HCl 0,1 mol L-1 e HF 0,3 mol L-1. Deixou-se em agitao
por 4 horas e em repouso por, no mnimo, 24 horas.
A suspenso foi centrifugada (7500 rpm por 20 minutos) e, aps se eliminar o
sobrenadante, o resduo foi transferido, com auxlio de gua destilada, para uma
membrana de dilise da marca Spectrapor (Thomas Scientific), com 65 cm de
comprimento por 50 mm de largura, capacidade de 8,0 mL cm-1 e porosidade para
molculas com massa molar de 6000 a 8000 daltons. Essa membrana ficou em um
recipiente plstico com gua destilada e desionizada (trocada duas vezes por dia)
sob agitao constante por aproximadamente 5 dias.
O cido hmico foi ento liofilizado em um liofilizador modelo FD1-060E da
marca Heto Laber Equipament e mantido em dessecador.

Antes de serem utilizadas na purificao do cido hmico, as membranas de
dilise foram devidamente tratadas para remoo de glicerina, traos de compostos
sulfurosos e metais, seguindo o procedimento estabelecido por McPhie:
As membranas foram fervidas por 1 hora em 1 litro de etanol a 50%.
As membranas foram, ento, agitadas por 1 hora temperatura ambiente em
soluo de NaHCO3 0,01 mol L-1 e EDTA dissdico 0,001 mol L-1.
Repetiu-se o procedimento com gua destilada, depois com nova soluo de
NaHCO3 0,01 mol L-1 e EDTA 0,001 mol L-1 e, por fim, com gua destilada.
A quantidade extrada de cido hmico (%) foi calculada segundo a
Expresso 10:
%AH = 100*p1/p
(10)
onde:
%AH = quantidade extrada de cido hmico
p = massa (em g) de amostra ao natural

p1 = massa (em g) da amostra extrada
Os valores da quantidade extrada de cido hmico foram corrigido para base
seca e sem cinzas (valor corrigido = valor original x 100 (100 teor de umidade
teor de cinzas)
3.3.3.2. Teor de Cinzas

O teor de cinzas corresponde quantidade de matria inorgnica,
especialmente slica e metais, presentes no cido hmico. Esse valor reflete na
eficincia da extrao e purificao. Valores altos de cinzas podem comprometer a
interpretao da anlise elementar.
Aproximadamente 50,0 mg da amostra de cido hmico foram colocados em
uma mufla, a 550C, por 4 horas, em um cadinho de platina previamente tarado. O
teor de cinzas foi calculado seguindo a Equao 11:
C = 100
m
m0
(11)
em que: C = teor de cinzas (em %);

m = massa (em miligramas) da amostra aps calcinao;
m0 = massa (em miligramas) da amostra total.
3.3.3.3. Anlise Elementar (CHNS)

Os primeiros experimentos para determinao da composio elementar das
substncias hmicas foram feitos por Sprengel e Berzelius entre os anos de 1826 e
1845 (STEVENSON, 1994). Segundo eles, as substncias hmicas eram
constitudas essencialmente de carbono, hidrognio, nitrognio e oxignio, sendo C

e O os elementos mais abundantes.
Os mtodos para determinao desses elementos so muito variados, dentre
eles os mtodos qumicos. Assim, carbono e hidrognio podem ser determinados
por combusto completa a seco, nitrognio pelos mtodos de Dumas ou de Kjeldahl,
oxignio por pirlise redutiva e enxofre por combusto (MESSIAS, 2004).
Entretanto, a utilizao de analisadores elementares automticos trouxe
avanos considerveis nesse sentido, permitindo anlises rpidas e confiveis. Os
analisadores elementares atuais so baseados na oxidao da amostra alta
temperatura, sendo os gases resultantes separados por uma coluna cromatogrfica
e detectados, geralmente, por condutividade trmica (SKOOG et al., 2002).
Informaes isoladas sobre a composio elementar dessas substncias no
so muito conclusivas, e as razes atmicas (H/C, O/C, C/N) tm sido
preferencialmente utilizadas para estabelecer o grau de condensao, as
transformaes diagenticas, bem como as condies ambientais sob as quais elas
foram formadas (MESSIAS, 2004).
A razo H/C freqentemente associada ao grau de condensao ou de
aromaticidade, e este, por sua vez, ao grau de humificao, sendo que maiores
valores de H/C (ou menores valores de C/H) indicam maior quantidade de grupos
alifticos, tpicos de materiais menos humificados (STEVENSON, 1994). A razo
O/C indica o teor de grupos oxigenados presentes na molcula (MESSIAS, 2004).
As anlises foram realizadas em um analisador elementar Carlo Erba
Instruments EA 1110 CHNS-O, em que foram utilizados os seguintes padres: Lcistina, sulfanilamida, DL-metionina e BBOT (2,5-bis-(5-tert-butil-benzoxazol-2-il)triofeno). Foram pesados, em cada anlise, cerca de 2 mg de amostra seca em
estufa de 50 a 55oC por 24 h . Os valores de C, H, N e S (porcentagem em massa)

foram corrigidos para base sem cinzas (valor corrigido = valor original x 100 (100 teor de cinzas)). O teor de oxignio foi determinado por diferena a 100% a partir
dos valores de C, H, N e S corrigidos.
Os parmetros H/C, O/C, C/N e (O + N)/C foram determinados pelas razes
atmicas, ou seja, dividindo-se previamente as porcentagens em massa dos
elementos por suas respectivas massas atmicas.

A determinao de acidez em cidos hmicos um importante passo na sua
caracterizao, pois indica o nmero de grupos cidos (essencialmente carboxlicos
e fenlicos) presentes na estrutura. O mtodo mais utilizado baseia-se em titulao
potenciomtrica indireta, com hidrxido de brio (para acidez total) e acetato de
clcio (para acidez carboxlica) (SCHNITZER e GUPTA, 1965; SCHNITZER e
KHAN, 1972; LANDGRAF et al., 1998; POPPI e TALAMONI, 1992).
3.3.3.4.1. Acidez total

Uma amostra de 100 mg de cido hmico foi colocada em um erlenmeyer de
25 mL, juntamente com 10 mL de soluo 0,1 mol L-1 de hidrxido de brio
(Ba(OH)2). A gua utilizada para preparar a soluo alcalina foi previamente fervida
para retirada de CO2. Foi tambm preparada uma soluo referncia (branco),
constituda apenas de 10 mL da soluo de Ba(OH)2. Passou-se um fluxo de
nitrognio nos erlenmeyers, que foram ento submetidos agitao por 24 horas a
temperatura ambiente. Em seguida, a suspenso foi filtrada em papel de filtro
comum, sendo coletados 5 mL do filtrado, que foi titulado potenciometricamente com
uma soluo padro de HCl 0,05 mol L-1. O ponto de equivalncia foi determinado
em pH 8,4. A acidez total foi calculada pela Equao 12.
AT =
em que:
(Vbranco V ).C a
m AH
Vbase
(12)
Valquota
AT = acidez total (em mmolc g-1);

Vbranco = volume de HCl usado na titulao do branco;
V = volume de HCl usado na titulao da amostra;
Ca = concentrao da soluo de HCl;
mAH = massa de cido hmico;
Vbase = volume total de Ba(OH)2 utilizado (10 mL);
Valquota = volume da alquota utilizado na titulao (5 mL).
3.3.3.4.2. Acidez carboxlica

Uma amostra de 50 mg de cido foi colocada em um erlenmeyer de 25 mL,
juntamente com 20 mL de soluo 0,1 mol L-1 de acetato de clcio (Ca(CH3COO)2).
A gua utilizada para preparar a soluo foi previamente fervida para retirada de
CO2. Foi tambm preparado um branco, constitudo apenas de 20 mL da soluo de
Ca(CH3COO)2. Passou-se um fluxo de nitrognio nos erlenmeyers, que foram ento
submetidos agitao por 24 horas temperatura ambiente. Em seguida, a
suspenso foi filtrada em papel de filtro comum, sendo coletados 10 mL do filtrado,
que foi titulado potenciometricamente com uma soluo padro de NaOH 0,05 mol L1
. O ponto de equivalncia foi determinado em pH 9,8. A acidez total foi calculada
pela Equao 13.
AC =
em que:
(V Vbranco ).C b
m AH
Vacetato
Valquota
(13)
AC = acidez carboxlica (em mmolc g-1);

V = volume de NaOH usado na titulao da amostra;

Vbranco = volume de NaOH usado na titulao do branco;
Cb = concentrao da soluo de NaOH;
mAH = massa de cido hmico;
Vacetato = volume total de acetato de clcio utilizado (20 mL);
Valquota = volume da alquota utilizado na titulao (10 mL).
A determinao da acidez fenlica foi feita por diferena entre a acidez total e
a acidez carboxlica.
3.3.3.5. Espectroscopia de Absoro no Ultravioleta/Visvel

Atravs da espectroscopia de absoro na regio do ultravioleta e visvel,
possvel calcular a razo E4/E6 (razo entre as absorbncias a 465 e a 665 nm).
Essa razo um primeiro indicativo da proporo de grupos aromticos. Quanto
maior a aromaticidade, menor a razo E4/E6. Entretanto, deve-se levar em conta que
essa relao deve ser interpretada com cuidado, pois a comparao entre amostras
bem distintas pode no ser conclusiva (MESSIAS, 2004).
Cerca de 5,0 mg de cido hmico purificado foram dissolvidos em 50,0 mL de
uma soluo de bicarbonato de sdio (NaHCO3) 0,025 mol L-1, com pH 8,4. As
medidas de absorbncia da soluo foram obtidas a partir do espectro na regio do
visvel, utilizando um espectrofotmetro de UV-Visvel modelo V-630 da marca Jasco
e uma cubeta de quartzo de 1 cm de caminho ptico.
Com os valores de absorbncia nos comprimentos de onda 465 e 665 nm,
calculou-se a razo E4/E6.
3.3.3.6. Espectroscopia de Absoro no Infravermelho (FTIR)

De acordo com Stevenson (1994), a espectroscopia no infravermelho permite
obter informaes sobre a natureza, a reatividade e o arranjo estrutural dos grupos
funcionais (principalmente funes oxigenadas) presentes nas substncias hmicas,
avaliar os efeitos provocados por modificao qumica, tais como metilao e
acetilao, estabelecer a presena ou a ausncia de impurezas inorgnicas (metais,
argilo-minerais) e analisar interaes entre as substncias e compostos orgnicos ou
metais.
A absoro da radiao na regio do infravermelho pela matria corresponde
energia de vibrao e rotao associada a uma ligao. Existem 2 tipos de
vibraes moleculares: os estiramentos ou deformaes axiais () (simtricas e
assimtricas), que correspondem ao movimento rtmico de expanso e contrao ao
longo do eixo da ligao, e as deformaes angulares ou simplesmente
deformaes (), nas quais ocorre uma variao no ngulo da ligao entre os
tomos (SILVERSTEIN et al., 1994). Em geral, o espectro obtido em transmitncia
ou em absorbncia em funo do nmero de ondas, que varia normalmente de
4.000 a 400 cm-1 (2,8 a 50 m). Atualmente, a maioria dos espectrmetros utiliza a
transformada de Fourier (FTIR).
Os espectros na regio do infravermelho dos cidos hmicos so
relativamente simples, possuindo poucas bandas de absoro e geralmente
alargadas. A complexidade do ambiente qumica que envolve os grupamentos
funcionais dos cidos hmicos resulta em uma srie de sobreposies de bandas de
absoro (MESSIAS, 2004).
As possveis atribuies das principais bandas de absoro usualmente

observadas nos espectros no infravermelho dos cidos hmicos esto mostradas a
seguir (MESSIAS, 2004):
3.400 3.300 cm-1: estiramento de OH;
3.077 3.030 cm-1: estiramento de CH de aromticos e olefinas (pode estar
encoberto pela banda de estiramento de OH);

2.940 2.840 cm-1: estiramento simtrico e assimtrico de CH aliftico;
2.750 2.400 cm-1: estiramento de OH de grupos carboxlicos;
1.725 1.720 cm-1: estiramento de C=O de cidos carboxlicos;
1.660 1.630 cm-1: estiramento de C=O de amidas e quinonas e de cetonas
conjugadas com ligao de hidrognio;

1.650 1.580 cm-1: estiramento simtrico de C=O de ons carboxilatos;
1.630 1.600 cm-1: estiramento de C=C aromtico;
1.590 1.520 cm-1: deformao de NH de amidas e estiramento C=N;
1.500 1.400 cm-1: estiramento de C=C aromtico;
1.400 1.380 cm-1: estiramento de CO fenlico, deformao de OH
carboxlico, deformao de CH aliftico e estiramento assimtrico de C=O de

carboxilatos;
1.280 1.200 cm-1: estiramento de CO de teres, steres e fenis e
deformao de OH carboxlico;
1.170 1.000 cm-1: estiramento de CO de estruturas polissacardicas;
1.050 950 cm-1: estiramento de CO de estruturas polissacardicas e
estiramento de SiO (impurezas do tipo silicato);

950 670 cm-1: deformao no plano e fora do plano de CH aromtico.
Bandas prximas de 1.610 cm-1 so geralmente atribudas a estiramentos

C=C de aromticos; entretanto, ligaes duplas no aromticas e quinonas podem
absorver nessa regio. A ligao C=O de cidos carboxlicos absorve em 1.720 cm1
. Por sua vez, o on carboxilato (COO), resultado da desprotonao de grupos
carboxlicos, absorve na regio entre 1.690 e 1.660 cm-1 (MESSIAS, 2004).

Stevenson (1994) classificou os espectros de substncias hmicas em 3
tipos. Os espectros de tipo I so caracterizados por bandas de absoro fortes e
evidentes em 3.400, 2.900, 1.720, 1.600 e 1200 cm-1. A absoro na regio de 1600
cm-1 possui intensidade semelhante absoro em 1.200 cm-1. Os espectros do tipo
III apresentam as mesmas absores caractersticas dos espectros do tipo I, com a
diferena de uma absoro em 2.900 cm-1 mais intensa e com o aparecimento de
uma absoro forte em 1.540 cm-1. Os espectros do tipo II so caractersticos de
molculas hmicas de menor massa molar (cidos flvicos) e apresentam, alm
dessas absores, uma absoro muito intensa em 1.720 cm-1.
A relao entre as absorbncias em 2.927 e em 1.050 cm-1 (relao entre
grupos apolares e polares) fornece o ndice de hidrofobicidade (quanto maior esse
ndice, maior resistncia degradao microbiana). A relao entre as absorbncias
em 1.660 e em 2.929 cm-1 corresponde ao ndice de aromaticidade.
As amostras de cido hmico foram analisadas em um espectrofotmetro com
transformada de Fourier da marca Bomem MB-102. Pesou-se, em uma balana com
preciso de 0,01 mg, aproximadamente 0,50 mg de amostra e, aps adicionar 150,0
mg de KBr, a mistura foi pulverizada e prensada, formando uma pastilha, que foi
ento analisada no espectrofotmetro. Efetuaram-se, para cada anlise, 32
varreduras de 4.000 a 300 cm-1, com resoluo de 4 cm-1.

3.4.1. Caractersticas do solo estudado
A caracterizao fsica e qumica do solo estudado encontra-se na Tabela 8.
Tabela 8 - Caracterizao fsica e qumica do solo utilizado
Caractersticas
pH
Valores
4,51 0,01*
-1 b
Carbono orgnico (g kg )
Umidade (%)
8,6 0,3*
7,01 0,09*
Teor de Matria orgnica (%)
1,62 0,05*
-1 e
CTC (cmolc kg )
Argila (%)
Silte (%)
1,32 0,00*
3,3
Areia (%)
6,7
f
90
a
determinao da atividade hidrogeninica atravs de uma suspenso com 25,00 mL de soluo de cloreto de clcio 0,01 mol L-1 e
10,00 g de cada amostra coletada; bmedidor de carbono total, modelo TOC-VCPH, acoplado ao mdulo de amostras slidas, modelo SSM5000A, marca SHIMADZU, com detector de combusto; cem estufa a 60-650C e a 100-1100C; dcalcinao em mufla a 5000C por 4 h;
e
suspenso em CH3COOH; fjogo de peneiras de nmeros: 16, 40, 60, 100 e 230, as quais foram agitadas em mesa agitadora por dez minutos.
As determinaes da frao silte e argila foram feitas pelo mtodo do densmetro, da norma tcnica (NBR).*Experimentos feitos em
triplicata.
A curva de distribuio granulomtrica para a determinao das fraes

granulomtrica do solo utilizado neste estudo encontra-se na Figura 45.
100
90
70
60
50
40
30
20
silte
0,1
areia
argila
0,01
pedregulho
10
10
1E-3
Porcentagem que passa
80
Dimetro dos gros (mm)
Figura 45 - Curva de distribuio granulomtrica do solo.

A frao mineral do solo bem estvel, e a determinao da participao em

peso dos diferentes tamanhos das partculas revela a composio textural do solo. O
tamanho das partculas a que se refere cada frao textural definido conforme o
aspecto funcional da partcula, sendo assim, uma partcula mais grosseira (maior
dimetro) apresenta um comportamento muito diferente de uma partcula mais fina.
A Sociedade Brasileira de Cincias do Solo adota as seguintes dimenses para
cada partcula: argila (< 0,002 mm), silte (0,002 a 0,06 mm), areia (0,06 a 2 mm) e
pedregulho (> 2 mm). Pelo grfico verifica-se que o solo apresenta 3,3% de argila,
6,7% de silte e 90% de areia. O solo apresenta uma quantidade maior de areia, isso
significa que esse solo tem baixa reteno de umidade, agregao, superfcie
especfica e capacidade de troca catinica, e alta porosidade e densidade.
3.4.2. Caractersticas fsicas e qumicas das amostras durante o

processo
Seguem nas Figuras 46, 47 e 48, os resultados referentes ao teor de matria
orgnica (%), capacidade de troca catinica (CTC) (cmolc Kg-1) e pH nos
experimentos utilizando esterco bovino sem pr-compostar e pr-compostado,
respectivamente, sendo que (A) corresponde ao experimento contendo 0% de
esterco bovino e 100% solo (sem minhocas); (B) 25% de esterco bovino e 75% solo;
(C) 50% de esterco bovino e 50% solo; (D) 60% de esterco bovino e 40% solo; (E)
75% de esterco bovino e 25% solo e (F) 100% de esterco bovino e 0% solo,
respectivamente.
70
60
55
50
45
40
25
Teor de matria orgnica (%)
Teor de matria orgnica (%)
50
1 dia
o
10 dia
o
25 dia
o
43 dia
o
58 dia
o
73 dia
o
90 dia
65
20
15
10
5
1 dia
o
10 dia
o
25 dia
o
43 dia
o
58 dia
o
73 dia
o
90 dia
45
40
20
15
10
5
0
0
A
Experimentos
Experimentos
(A)
(B)
Figura 46 Teor de matria orgnica das amostras durante a vermicompostagem nos experimentos
utilizando esterco bovino (A) sem pr-compostar e (B) pr-compostado. *Coletas dos experimentos
realizadas em triplicata.
1 dia
o
10 dia
o
25 dia
o
43 dia
o
58 dia
o
73 dia
o
90 dia
CTC ( cmolckg-1)
25
20
1 dia
o
10 dia
o
25 dia
o
43 dia
o
58 dia
o
73 dia
o
90 dia
30
25
CTC ( cmolckg-1)
30
15
10
5
20
15
10
5
0
0
A
Experimentos
Experimentos
(A)
(B)
Figura 47 CTC das amostras durante a vermicompostagem nos experimentos utilizando esterco
bovino (A) sem pr-compostar e (B) pr-compostado. *Coletas dos experimentos realizadas em
triplicata.
14
14
8
7
6
5
4
1 dia
o
10 dia
o
25 dia
o
43 dia
o
58 dia
o
73 dia
o
90 dia
9
8
7
6
pH
1 dia
o
10 dia
o
25 dia
o
43 dia
o
58 dia
o
73 dia
o
90 dia
pH
13
13
5
4
3
0
A
Experimentos
Experimentos
(A)
(B)
Figura 48 pH das amostras durante a vermicompostagem nos experimentos utilizando esterco
bovino (A) sem pr-compostar e (B) pr-compostado. *Coletas dos experimentos realizadas em
triplicata.
As anlises qumicas e fsicas permitiram acompanhar o grau de

transformao que o material foi sofrendo durante o processo de decomposio.
Percebe-se pela Figura 46, que h uma diminuio do teor de matria orgnica nos
experimentos C, D, E e F ao longo do processo da vermicompostagem. Isso se deve
ao
processo
de
mineralizao
que
ocorreu
durante
processo
de
vermicompostagem. A diminuio do teor de matria orgnica e, conseqentemente,

o aumento do teor de cinzas que ocorre no processo, devido simultnea
humificao e mineralizao, uma maneira de se acompanhar a marcha de
decomposio. Essa mineralizao est ligada no s ao trabalho realizado pelas
minhocas, como tambm a uma ao conjunta das minhocas e dos microorganismos
contidos no meio. Esse material apresenta como vantagem maior reteno de
umidade e mineralizao mais lenta.
A CTC tem sua origem nas cargas negativas oriundas dos grupos carboxlicos
e fenlicos. Tais grupos apresentam um tomo de hidrognio ionizvel ligado ao
oxignio. A dissociao do hidrognio deixa stios negativos nos cidos hmicos, os
quais podem atrair outros ctions como clcio, magnsio e potssio. O grau de
ionizveis depende do pH do meio (REZENDE, 1999). Assim, observando-se a
concentrao de grupos carboxlicos (pgina 155), pode-se notar que pouca
variao ocorreu entre o incio e o final do processo de vermicompostagem. Em
trabalhos anteriores (LANDGRAF et. al, 1999) j foi observado que os cidos
hmicos provenientes de vermicomposto, comparativamente aos do solo e de turfa,
so mais alifticos e menos aromticos, tm mais grupos oxigenados na forma de
steres e alcois e menos grupos cidos. Portanto, a CTC, estando relacionada
concentrao de grupos cidos, e sendo esses grupos menos presentes, lcito
esperar pouca variao no tocante CTC.
Percebe-se tambm uma diminuio do pH nos experimentos onde o pH era

maior que 7, e um aumento do pH nos experimentos onde o pH era menor do que 7
(Figura 48), tendendo-se ao pH prximo neutralidade (pH = 7). Segundo Bidone
(1995), do esfago das minhocas saem pequenas bolsas, as glndulas calcferas
que segregam carbonato de clcio, controlando o teor desse elemento no organismo
do animal. O CO2 produzido pela respirao eliminado com o excesso de clcio
absorvido do solo, formando o CaCO3, que lanado ao exterior junto com
partculas no-digeridas, na forma de excrementos. Assim, as constantes adies de
carbonato de clcio contribuem para o aumento do pH. Isso sugere uma participao
da minhoca na elevao do pH no ambiente onde ocorreu a vermicompostagem. Por
outro lado, Albanell et al. (1988) e Haimi et al. (1986) atribuem a diminuio do pH
produo de CO2 e de cido orgnico por atividade microbial presente durante o
processo de vermicompostagem.
A Figura 49 mostra o teor de umidade (%) nos experimentos utilizando
esterco bovino sem pr-compostar e pr-compostado, respectivamente, durante o
processo de biorremediao. A umidade nos experimentos B, C, D, E e F variou de
20 a 70 % durante o processo.
100
100
70
60
50
40
1 dia
o
10 dia
o
25 dia
o
43 dia
o
58 dia
o
73 dia
o
90 dia
90
80
Teor de umidade (%)
80
Teor de umidade (%)
1 dia
o
10 dia
o
25 dia
o
43 dia
o
58 dia
o
73 dia
o
90 dia
90
30
20
70
60
50
40
30
20
10
10
0
A
Experimentos
Experimentos
(A)
(B)
Figura 49 Teor de umidade das amostras durante a vermicompostagem nos experimentos

utilizando esterco bovino (A) sem pr-compostar e (B) pr-compostado. *Coletas dos experimentos
realizadas em triplicata.
A Figura 50 mostras as curvas analticas construdas com padro de biftalato

de potssio, seco em estufa por 24 h, para anlise de carbono total, utilizando-se um
aparelho carbono total.
7000
600
6000
500
5000
4000
300
Y=A+B*X
A = 4,78162
B = 0,06955
R = 0,99995
200
Area
Area
400
100
Y=A+B*X
A = -67,91463
B = 0,0645
R = 0,99952
3000
2000
1000
0
0
2000
4000
6000
8000
Abs C [ug]
(A)
0
0
20000
40000
60000
80000
100000
Abs C [ug]
(B)
Figura 50 Curvas analticas utilizadas para a determinao de carbono orgnico total - (A) em mg L
1
e (B) em mg.
Durante o processo h formao de um material mais estabilizado, isto , com

carbono na forma humificada, isso faz com que haja uma diminuio da
concentrao de carbono orgnico (Figura 51).
350
1 dia
o
10 dia
o
25 dia
o
43 dia
o
58 dia
o
73 dia
o
90 dia
-1
Concentrao (gkg )
300
250
200
150
100
50
0
A
Experimentos
Figura 51 Carbono orgnico das amostras durante a vermicompostagem nos experimentos

utilizando esterco bovino sem pr-compostar. *Coletas dos experimentos realizadas em triplicata.
3.4.3. cidos hmicos

3.4.3.1. Extrao dos cidos hmicos
A Figura 52 mostra o teor de cido hmico extrados das amostras dos
experimentos B, C, D, E e F do 1 e 90 dia de vermicompostagem utilizando esterco
4,71
0,93
2,50
2,07
1,72
3,13
1,08
% de cido hmico
1,84
2,08
1,69
1,83
1,61
0,62
0,59
0,95
2,45
4
3
1 dia
o
90 dia
1,28
1 dia
o
90 dia
6,79
6,62
% de cido hmico
6,94
bovino sem pr-compostar (A) e pr-compostado (B).
0
B
Experimentos
(A)
Experimentos
(B)
Figura 52 - Teor de cidos hmicos nas amostras dos experimentos B, C, D, E e F do 1 e 90 dia de

vermicompostagem utilizando esterco bovino sem pr-compostar (A) e pr-compostado (B).
O teor de cido hmico aumentou em todos os experimentos aps o processo

de vermicompostagem. Neste caso, pode-se dizer que houve uma estabilizao do
material, ou seja, com maior contedo de carbono na forma humificada. O processo
de compostagem e a ao das minhocas alteram qualitativa e quantitativamente a
composio das substncias hmicas e dos materiais orgnicos. Esse material
encontra-se em estado mais avanado de decomposio e humificao. A ao
conjunta dos microorganismos e das minhocas inicia uma rpida decomposio do
material orgnico, a qual aumenta com o tempo. Este resultado se deve intensa
digesto da matria orgnica por esses organismos.
Alm
da
remoo
dos
poluentes
(HPAs)
durante
processo
da
vermicompostagem, obtm-se, tambm, um solo mais rico em nutrientes. As

minhocas ingerem e digerem os resduos orgnicos, dejetando excrementos com
forma especial, constitudo de agregados de terra e matria orgnica digerida, os
quais recebem o nome de coprlitos (em ingls casting). Os coprlitos contm
nutrientes para as plantas em maior concentrao que o solo onde se encontram
devido ao metabolismo da minhoca. Isto ocorre devido ao solo contendo coprlito
estar agora misturado com matria orgnica e mais as secrees intestinais e
urinrias. O material dejetado encontra-se em estado mais avanado de
decomposio, sendo de assimilao mais fcil pelas razes das plantas. Os
coprlitos sempre so mais neutros do que os solos originais, mesmo quando estes
so cidos ou alcalinos. Os dejetos so pobres em argila e ricos em matria
orgnica, nitrato, fsforo, clcio e magnsio, e elevada porcentagem de umidade. H
tambm uma produo acelerada de cido hmicos graas digesto e semidecomposio provocada pelas minhocas.
3.4.3.2. Teor de cinzas

Os resultados de teor de cinzas esto apresentados na Tabela 9.
Tabela 9 - Teor de cinzas (%) das amostras de cidos hmicos.
Experimentos
Sem pr-compostar
Pr-compostado
1 dia
90 dia
1 dia
90 dia
1,86
0,62
5,17
1,00
2,44
6,78
33,57
2,54
3,09
1,29
5,18
4,68
2,34
0,00
0,00
3,89
0,86
0,00
0,00
1,61
Como pode ser observado na Tabela 9, os teores de cinzas dos cidos

hmicos ficaram abaixo de 5%, o que pode ser considerado satisfatrio para as
anlises subseqentes, com exceo das amostras dos experimentos C, utilizando
esterco bovino pr-compostado. Estes valores foram levados em considerao para
os resultados posteriores, pois representam erro experimental durante a metodologia
de extrao.
3.4.3.3. Razo C/N dos cidos hmicos

Os valores de porcentagem em massa de C, H, N, S e O, e as razes
atmicas H/C, O/C, C/N e (O + N)/C das amostras de cidos hmicos extrados do
experimentos B, C, D, E e F, utilizando esterco bovino sem pr-compostar e prcompostado esto mostrados nas Tabelas 10 e 11, respectivamente.

Tabela 10 - Teor (em massa) de C, H, N, S e O, e razes atmicas H/C, O/C, C/N e (O + N)/C das
amostras de cidos hmicos, utilizando esterco bovino sem pr-compostar.
o
1 dia
90 dia
Experimentos
C (%)
60,12
55,10
55,06
54,51
52,53
54,64
53,86
51,74 52,16
51,46
H (%)
8,05
7,02
6,69
6,25
6,42
7,34
6,51
6,65
6,15
6,28
N (%)
2,82
2,82
2,97
2,91
2,87
3,33
3,29
3,22
3,39
3,24
S (%)
2,58
3,33
2,41
2,79
3,18
3,31
2,52
3,34
2,39
3,15
O (%)
26,43
31,74
32,87
33,54
35,00
31,38
33,82
35,05 35,91
35,88
H/C
1,61
1,53
1,46
1,38
1,47
1,61
1,45
1,54
1,41
1,46
O/C
0,33
0,43
0,45
0,46
0,50
0,43
0,47
0,51
0,52
0,52
C/N
24,87
22,78
21,60
21,88
21,38
19,15
19,12
18,76 17,96
18,54
(O + N)/C
0,48
0,62
0,64
0,66
0,71
0,63
0,68
0,73
0,75
0,74
Tabela 11 - Teor (em massa) de C, H, N, S e O, e razes atmicas H/C, O/C, C/N e (O + N)/C das
amostras de cidos hmicos, utilizando esterco bovino pr-compostado.
o
1 dia
90 dia
Experimentos
C (%)
60,27
51,60
59,49
52,97
50,98
52,04
52,73 54,41
53,87 52,10
H (%)
7,37
5,23
7,65
6,44
5,93
6,41
7,91
6,71
6,93
6,34
N (%)
2,82
2,74
2,98
2,94
3,43
3,52
3,69
3,51
3,18
3,33
S (%)
2,40
2,15
3,08
3,17
2,74
2,65
3,77
3,00
4,43
3,10
O (%)
27,13
38,29
26,81
34,47
36,92
35,39
31,90 32,37 31,59
35,13
H/C
1,47
1,22
1,54
1,46
1,40
1,48
1,80
1,48
1,54
1,46
O/C
0,34
0,56
0,34
0,49
0,54
0,51
0,45
0,45
0,44
0,51
C/N
24,93
22,01
23,32
21,01
17,33
17,24
16,68 18,10 19,75
18,26
(O + N)/C
0,49
0,79
0,49
0,70
0,78
0,74
0,66
0,73
0,65
0,64
Os teores de nitrognio nas amostras de cido hmico aumentam com o

tempo, com exceo da amostras do experimento F utilizando esterco bovino prcompostado.
As razes H/C indicam a proporo de estruturas condensadas, sendo que
maiores valores de H/C indicam maior quantidade de grupos alifticos. As razes
O/C indicam o teor de grupos oxigenados.
As razes H/C e C/N tendem a diminuir e a razo O/C a aumentar com o

tempo de compostagem ou vermicompostagem.
A Figura 53 mostra a razo C/N dos cidos hmicos extrados dos
experimentos do 1 e 90 dia de vermicompostagem utilizando esterco bovino sem
pr-compostar e pr-compostado.
1 dia
o
90 dia
25
1 dia
o
90 dia
25
20
15
15
C/N
C/N
20
10
10
0
B
Experimentos
(A)
Experimentos
(B)
Figura 53 Razo C/N do cido hmico extrado dos experimentos utilizando esterco bovino (A) sem
A razo C/N indica o grau de incorporao de nitrognio na estrutura hmica.

A determinao da relao C/N considerada um dos mais simples mtodos para
se avaliar a capacidade de assimilao pelas plantas do nitrognio em um resduo
orgnico. Segundo as Tabelas 10 e 11, a razo C/N dos cidos hmicos variou de
17,96 a 19,15 para as amostras dos experimentos utilizando esterco bovino sem prcompostar aps o 90 dia do processo. J para os experimentos utilizando esterco
bovino pr-compostado as razes C/N variaram de 16,68 a 19,75 aps o 90 dia do
processo. Segundo Kayhanian e Tchobanoglous (1993), a relao C/N do hmus
estabilizado, pronto para ser utilizado nas culturas, deve estar entre 15 a 20. Assim
as razes C/N dos experimentos aps o processo esto dentro desses limites.
Observa-se pela Figura 53 um decrscimo nas razes C/N aps o 90 dia, exceto no
experimento F utilizando esterco bovino pr-compostado. De acordo com Atiyeh et
al. (2001), a acelerada humificao do vermicomposto reflete em um decrscimo da
C/N e o aumento de nutrientes minerais (P, K e Na), e est relacionada com a
mineralizao da matria orgnica pelas minhocas.

Os grficos titulomtricos para as determinaes da acidez total esto
mostradas nas Figuras de 54 a 58. Os resultados da anlise de acidez esto
mostrados na Tabela 12 e 13.
14
14
o
1 coleta
o
7 coleta
Branco
12
10
12
1 coleta
o
7 coleta
Branco
10
8
pH
pH
8
6
6
4
0
0
10
15
20
25
30
Volume de HCl (mL)
0
0
10
15
20
25
30
Volume de HCl (mL)
(A)
(B)
Figura 54 - Curvas titulomtricas de cidos hmicos (dissolvidos em soluo de Ba(OH)2) com HCl
-1
0,05 mol L (acidez total) referentes aos experimentos de 25% de esterco bovino bovino e 25% solo a
2% diesel (v/v) utilizando esterco bovino (A) sem pr-compostar e (B) pr-compostado.
14
14
12
12
1 coleta
o
7 coleta
Branco
10
pH
pH
1 coleta
o
7 coleta
Branco
10
6
4
0
0
10
15
20
25
30
10
15
20
25
30
Volume de HCl (mL)
Volume de HCl (mL)
(A)
(B)
-1
14
14
12
12
1 coleta
o
7 coleta
Branco
10
pH
pH
1 coleta
o
7 coleta
Branco
10
0
0
10
15
20
25
30
Volume de HCl (mL)
10
15
20
25
30
Volume de HCl (mL)
(A)
(B)
-1
14
14
o
1 coleta
o
7 coleta
Branco
12
10
12
o
pH
pH
1 coleta
o
7 coleta
Branco
10
0
0
10
15
20
Volume de HCl (mL)
25
30
0
0
10
15
20
25
30
Volume de HCl (mL)
(A)
(B)
-1
14
14
12
12
1 coleta
o
7 coleta
Branco
10
8
pH
pH
1 coleta
o
7 coleta
Branco
10
0
0
10
15
20
25
30
10
Volume de HCl (mL)
15
20
25
30
Volume de HCl (mL)
(A)
(B)
-1
0,05 mol L (acidez total) referente aos experimentos de 100% de esterco bovino bovino utilizando
esterco bovino (A) sem pr-compostar e (B) pr-compostado.
Os grficos titulomtricos para as determinaes da acidez carboxlica esto

mostradas nas Figuras de 59 a 63.
13
13
12
12
11
11
10
1 coleta
o
7 coleta
Branco
pH
pH
10
1 coleta
o
7 coleta
Branco
9
8
6
0
Volume de NaOH (mL)
10
10
Volume de NaOH (mL)
(A)
(B)
Figura 59 - Curvas titulomtricas de cidos hmicos (dissolvidos em soluo de Ca(CH3COO)2) com
-1
NaOH 0,05 mol L (acidez carboxlica) referentes aos experimentos de 25% de esterco bovino bovino
e 25% solo a 2% diesel (v/v) utilizando esterco bovino (A) sem pr-compostar e (B) pr-compostado.
13
13
12
12
11
11
o
pH
pH
10
1 coleta
o
7 coleta
Branco
10
1 coleta
o
7 coleta
Branco
9
8
6
0
10
10
Volume de NaOH (mL)
Volume de NaOH (mL)
(A)
(B)
-1
13
13
12
12
11
11
1 coleta
o
7 coleta
Branco
1 coleta
o
7 coleta
Branco
10
pH
pH
10
10
10
Volume de NaOH (mL)
Volume de NaOH (mL)
(A)
(B)
-1
13
13
12
12
11
11
o
pH
6
2
Volume de NaOH(mL)
10
1 coleta
o
7 coleta
Branco
10
pH
1 coleta
o
7 coleta
Branco
10
10
Volume de NaOH (mL)
(A)
(B)
-1
13
13
12
12
11
11
10
1 coleta
o
1 coleta
o
7 coleta
Branco
9
8
pH
pH
10
4
6
8
Volume de NaOH (mL)
1 coleta
o
7 coleta
Branco
10
10
Volume de NaOH (mL)
(A)
(B)

-1
NaOH 0,05 mol L (acidez carboxlica) referente aos experimentos de 100% de esterco bovino bovino
Tabela 12 - Acidez total, carboxlica e fenlica das amostras de cidos hmicos extrados dos
-1
experimentos utilizando esterco bovino sem pr-compostar (valores em mmolc g ).
Experimentos
Acidez total
Acidez carboxlica
Acidez fenlica
1 dia
90 dia
1 dia
90 dia
1 dia
90 dia
5,35
4,39
0,90
0,90
4,44
3,49
5,17
5,89
0,84
0,95
4,33
4,94
5,49
6,00
1,08
1,09
4,41
4,91
6,08
6,07
1,06
1,16
5,02
4,91
6,72
6,23
1,09
1,24
5,64
4,99
Tabela 13 - Acidez total, carboxlica e fenlica das amostras de cidos hmicos extrados dos
-1
experimentos utilizando esterco bovino pr-compostado(valores em mmolc g ).
Experimentos
Acidez total
Acidez carboxlica
Acidez fenlica
1 dia
90 dia
1 dia
90 dia
1 dia
90 dia
4,40
4,94
0,90
0,90
3,50
4,04
3,67
4,09
1,14
1,14
2,53
2,96
4,89
6,16
1,24
1,24
3,64
4,91
5,93
5,93
1,30
1,30
4,63
4,63
5,89
5,91
1,26
1,27
4,63
4,65
Observa-se que os cidos hmicos apresentaram um aumento na acidez

total, comparando-se o 1 dia ao 90 dia, j para experimentos B e F utilizando-se
esterco bovino sem pr-compostar no se obteve o mesmo resultado. Durante o
processo de estabilizao, tem-se uma diminuio dos grupos alifticos na estrutura
da matria orgnica e a formao de anis aromticos substitudos, os quais so

geralmente grupos carboxlicos, hidroxlicos e carbonlicos, assim h uma maior
tendncia ao aumento desses grupos durante o processo de vermicompostagem.
3.4.3.5. Espectros de absorbncia na regio do UV/visvel

Os espectros de absorbncia na regio do UV/visvel das amostras de cido
hmico esto mostrados nas Figuras de 64 a 68. Alguns espectros de cidos
hmicos extrados das amostras aps o 90o dia de vermicompostagem
apresentaram um ombro prximo a 280 nm, caracterstico de grupos cromforos,
como estruturas insaturadas e/ou aromticas (MESSIAS, 2004).
7
o
1 dia
o
90 dia
5
4
3
5
4
3
300
400
500
600
Nmero de onda (cm-1)
1 dia
o
90 dia
0
200
Absorbncia
Absorbncia
700
800
0
200
300
400
500
600
700
800
-1
Nmero de onda (cm )
(A)
(B)
Figura 64 - Espectros de absorbncia no UV/Visvel das amostras de cidos hmicos extrados dos
experimentos de 25% de esterco bovino e 75% solo a 2% diesel (v/v) utilizando esterco bovino (A)
1 dia
o
90 dia
1 dia
o
90 dia
Absorbncia
Absorbncia
6
5
4
3
4
3
2
1
0
200
300
400
500
600
700
0
200
800
300
400
500
600
700
800
-1
Nmero de onda (cm )
(A)
(B)
1 dia
o
90 dia
5
4
3
5
4
3
2
1
0
200
1 dia
o
90 dia
Absorbncia
Absorbncia
300
400
500
600
700
0
200
800
300
400
500
600
700
800
-1
Nmero de onda (cm )
(A)
(B)
Figura 66 - Espectros de absorbncia no UV/visvel das amostras de cidos hmicos extrados dos
7
o
1 dia
o
90 dia
1 dia
o
90 dia
Absorbncia
Absorbncia
6
5
4
3
5
4
3
2
2
1
1
0
200
0
200
300
400
500
600
-1
Nmero de onda (cm )
700
800
300
400
500
600
700
800
-1
Nmero de onda (cm )
(A)
(B)
7
o
5
4
3
5
4
3
0
200
300
400
500
600
700
1 dia
o
90 dia
1 dia
o
90 dia
Absorbncia
Absorbncia
0
200
800
300
400
-1
Nmero de onda (cm )
500
600
700
800
-1
Nmero de onda (cm )
(A)
(B)
experimentos de 100% de esterco bovino utilizando esterco bovino (A) sem pr-compostar e (B) prcompostado.
Os valores da razo E4/E6 obtidos pelos cidos hmicos de vermicomposto

(Tabela 14) esto de acordo com os valores citados na literatura (HERVAS et al.,
1989; LANDGRAF et al., 1999). No se chegou a nenhuma concluso, pois o tempo
de formao de um cido hmico, que neste caso de 3 meses, muito pequeno
para refletir em uma mudana na razo E4/E6.
Tabela 14 - Valores de E4/E6 das amostras de cidos hmicos.
Experimentos
sem pr-compostar
o
pr-compostado
o
1 dia
90 dia
1 dia
90 dia
2,35
3,65
3,04
4,03
4,88
3,86
3,30
3,20
5,32
4,18
3,33
3,81
5,30
5,41
5,43
5,20
5,05
2,82
3,66
5,09
3.4.3.6. Espectros no infravermelho

As Figuras 69 a 73 mostram os espectros no infravermelho (modo
transmitncia) das amostras de cido hmico do vermicomposto extrados dos
experimentos B, C, D, E e F.
70
100
o
1 dia
o
90 dia
80
70
60
50
50
40
30
40
4000
1 dia
o
90 dia
60
Transmitncia
Transmitncia
90
3500
3000
2500
2000
1500
1000
20
4000
500
3500
3000
2500
2000
1500
1000
500
-1
Nmero de onda (cm )
-1
nmero de onda (cm )
(A)
(B)
Figura 69 - Espectros no infravermelho das amostras de cidos hmicos extrados dos experimentos
de 25% de esterco bovino e 75% solo a 2% diesel (v/v) utilizando esterco bovino (A) sem prcompostar e (B) pr-compostado.
80
75
1 dia
o
90 dia
75
65
Transmitncia
Transmitncia
70
65
60
55
50
60
55
50
45
45
40
40
35
35
30
4000
1 dia
o
90 dia
70
3500
3000
2500
2000
1500
1000
4000
500
3500
3000
2500
2000
1500
1000
500
-1
Nmero de onda (cm )
-1
Nmero de onda (cm )
(A)
(B)
100
90
1 dia
o
90 dia
95
90
80
85
70
Transmitncia
Transmitncia
80
75
70
65
60
60
50
40
55
50
30
45
40
35
4000
1 dia
o
90 dia
20
4000
3500
3000
2500
2000
1500
-1
1000
500
3500
3000
2500
2000
1500
1000
500
-1
Nmero de onda (cm )
Nmero de onda (cm )
(A)
(B)
110
100
75
90
70
80
70
60
65
60
55
50
50
45
40
40
30
4000
1 dia
o
90 dia
80
Transmitncia
Transmitncia
85
1 dia
o
90 dia
35
3500
3000
2500
2000
1500
1000
500
4000
3500
3000
2500
2000
1500
1000
500
-1
-1
Nmero de onda (cm )
Nmero de onda (cm )
(A)
(B)
80
1 dia
o
90 dia
80
70
Transmitncia
70
Transmitncia
1 dia
o
90 dia
75
60
50
65
60
55
50
45
40
40
35
30
4000
3500
3000
2500
2000
1500
1000
500
4000
3500
-1
3000
2500
2000
1500
1000
500
-1
Nmero de onda (cm )
Nmero de onda (cm )
(A)
(B)
de 100% de esterco bovino utilizando esterco bovino (A) sem pr-compostar e (B) pr-compostado.
Podem ser observados nos espectros referentes a Figuras de 69 a 73:

larga banda centrada em 3.410 cm-1 associada ao estiramento OH de fenis e
lcoois, alm de gua, presente como impureza;
picos em 2.923 e 2.850 cm-1, devido a estiramentos simtrico e assimtrico,
respectivamente, de CH aliftico;
picos em 1.630 cm-1, atribudos ao estiramento C=O dos grupos carboxilatos
(COO) e picos menos visveis em 1.720 cm-1 referentes ao estiramento C=O
dos grupos carboxlicos (COOH); ao pico em 1.630 cm-1 sobreposto ao
estiramento C=C de aromtico;
picos em 1.510, 1.461 e 1.422 cm-1 associados ao estiramento C=C

aromtico;
pico em 1.238 cm-1, de estiramento CO e deformao OH de grupos
carboxlicos
Analisando os espectros, observa-se pouca diferena entre eles, relacionados
ao 1 e ao 90 dia do processo. No pr-compostado observa-se um ligeira
diminuio (muito discreta) no ndice da aromaticidade, colaborando com a razo
H/C (pgina 148 e 149). No incio do processo a degradao acelerada,
favorecendo a formao dos cidos hmicos. No final do processo (90 dia), com a
formao de cidos hmicos, cujo material encontra-se mais estabilizado, ocorre
uma desacelerao da degradao, tendendo a um aumento do ndice de
hidrofobicidade. No entanto, no se chegou a nenhuma concluso, pois o tempo de
formao de um cido hmico, que neste caso de 3 meses, muito pequeno para
refletir em qualquer mudana.
3.5. CONCLUSES
Durante o processo de biorremediao, percebem-se grandes diferenas nas
caractersticas qumicas e fsicas do solo, como, por exemplo, a diminuio no teor
de matria orgnica (%) e aumento do teor de cinzas (%). Percebe-se tambm uma
diminuio na concentrao de carbono orgnico (g kg-1). Os solos aps o processo
tendem neutralizao, mesmo quando os solos originais apresentam carter cido
ou alcalino.
Um aumento do teor de cido hmico em todos os experimentos foi
alcanado, o que se relaciona ao processo de humificao. Percebem-se diferenas
nas caractersticas dos cidos hmicos extrados dos experimentos do 1 e 90 dia

do processo, como por exemplo, a diminuio na razo C/N.

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CAPITULO IV
O estudo da soro dos
compostos naftaleno,
antraceno e b[a]pireno
no solo e vermicomposto
Estudo da soro dos compostos naftaleno, antraceno e b[a]pireno no solo e vermicomposto 168

Comumente a relao entre o soluto adsorvido e a concentrao de soluto na
soluo solo so quantificadas pelos isortermas de soro. Considerando-se que as
isotermas de soro no solo muitas vezes variam fortemente de lugar para lugar, so
necessrios estudos mais detalhados do comportamento de metais e compostos
orgnicos em solo brasileiro, para melhor adequao dos modelos s condies
climticas e ambientais brasileiras (DÀGOSTINHO e FLUES (2006).
importante conhecer a capacidade de soro e de complexao de
substncias hmicas com compostos orgnicos, tais como HPAs e metais e a
influncia das substncias hmicas quanto ao transporte e destino destes
compostos em solos para se avaliar o impacto ambiental por eles causados
(MORAES e REZENDE, 2000).
Como dito no captulo I, os HPAs so adsorvidos nas partculas slidas do
solo, pois apresentam baixa solubilidade em gua e alta hidrofobicidade (MIGE et
al., 1998). No solo, a maioria dos HPAs so fortemente adsorvidos na matria
orgnica, o que os torna relativamente indisponveis para o processo de
degradao. Os HPAs podem, ento, permanecer no solo por muito tempo,
possuindo um longo tempo de residncia, apesar dos HPAs de baixa massa molar
serem praticamente perdidos por processos de degradao, volatilizao e lixiviao
(WIIDFL et al., 1992).
O efeito de soro geralmente aumenta com o nmero de anis benznicos e
o aumento da massa molar dos HPAs, visto que isto implica em forte lipofilicidade.
Alm disso, tem sido mostrado que a degradabilidade e a capacidade de serem
extrados diminui conforme aumenta o tempo em que permanecem em contato com

o solo, fenmeno chamado de envelhecimento (aging). O envelhecimento
principalmente um resultado de lenta difuso para dentro da matria orgnica do
solo, mas h outros mecanismos envolvidos, incluindo a formao de ligao
residual e interao fsica com os microporos do solo. O processo de soro e
envelhecimento limita, por um lado, a degradabilidade dos contaminantes; por outro
lado, este processo reduz a toxicidade do solo contaminado, baixando a frao
disponvel aos organismos vivos (LUNSTEDT, 2003).
importante avaliar a soro desses compostos ao se fazer o estudo de
biorremediao, o qual ser levado a efeito quando da proposta de metodologias de
descontaminao
de
solo
utilizando-se
vermicompostagem.
transporte,
transformaes e efeitos biolgicos desses compostos no solo e sistemas aquticos

dependem fortemente de sua capacidade de reteno pela fase slida organomineral.
4.1.1. Conceito terico de soro

De acordo com a terminologia da IUPAC, a soro o enriquecimento de
uma ou mais espcies qumicas em uma interface (CALVET, 1989). Para solos e
seus constituintes em condies naturais, soro a passagem de um soluto da
fase aquosa para a superfcie de um adsorvente slido e a dessoro o processo
reverso. O soluto pode ser uma molcula neutra ou uma espcie inica e o processo
pode acontecer em meios macro ou microporos.
Para Ruthven (1984) a soro o processo de transferncia de um ou mais
constituintes (adsorbatos) de uma fase fluida (adsortivo) para a superfcie de uma
fase slida (adsorvente). No processo de soro as molculas presentes na fase
fluda so atradas para a zona interfacial devido existncia de foras atrativas no

compensadas na superfcie do adsorvente.
O fenmeno de soro decorre da partio dos compostos entre as fases
slidas e a soluo do solo, sendo dependente das propriedades fsico-qumicas dos
colides do solo e do composto. A soro pode ser classificada como soro
qumica, na qual esto envolvidas altas energias de ativao do processo com
transformao dos compostos, e/ou soro fsica, cujas energias so mais baixas e
a natureza qumica das espcies envolvidas preservada (RUTHVEN, 1984).
Quando o slido , por exemplo, inico e a molcula que se adsorve polarizvel, a
ligao formada forte e passa a ser conhecida como soro qumica ou
quimiossoro. Se a ligao fraca, a soro conhecida como soro fsica ou
fisiossoro.
As foras envolvidas na soro fsica incluem as foras de van der Waals
(repulso e disperso) e interaes eletrostticas compreendendo as interaes de
polarizao, dipolo e quadrupolo. As contribuies das foras de van der Waals
esto sempre presentes, enquanto as contribuies eletrostticas so significativas
apenas no caso de adsorventes que possuem uma estrutura inica (RUTHVEN,
1984). A soro fsica ocorre por uma diferena de energia e/ou foras de atrao
que tornam as molculas fisicamente presas ao slido. Estas interaes tm um
longo alcance, porm so fracas. A energia produzida quando uma partcula
fisicamente adsorvida da mesma ordem da entalpia de condensao. Este tipo de
soro sempre exotrmica e reversvel. O equilbrio estabelecido rapidamente, a
menos que ocorra a difuso atravs da estrutura porosa. A fisiossoro corresponde
a uma interao de natureza puramente eletrosttica entre a partcula e os tomos
superficiais do slido. Origina-se pela atrao entre dipolos permanentes ou
induzidos, sem alterao dos orbitais atmicos ou moleculares das espcies

comprometidas. Recebe tambm o nome de soro de van der Waals (DROGUETT,
1983).
Deste modo, nas vizinhanas da superfcie do adsorvente ocorre uma
mudana das propriedades da fase fluida, sendo esta regio tratada como uma fase
termodinamicamente diferente. conveniente considerar esta camada interfacial
como sendo composta pela camada da superfcie do adsorvente, chamada
simplesmente de superfcie do adsorvente, e o espao de soro no qual o
enriquecimento do adsortivo pode ocorrer. Sendo assim, podemos definir a soro
fsica como aquela que ocorre quando as foras intermoleculares de atrao das
molculas na fase fluida e da superfcie slida so maiores que as foras atrativas
entre as molculas do prprio fluido (RUTHVEN, 1984).
Entretanto, a quimiossoro corresponde a uma interao de tipo qumico, na
qual os eltrons de ligao entre as molculas e o slido experimentam
reordenamento e os orbitais respectivos mudam de forma, de modo similar a uma
reao qumica. Mas nem sempre a alterao eletrnica completa no sentido das
ligaes qumicas, covalentes ou inicas; pode ocorrer somente uma modificao ou
deformao parcial dos orbitais (DROGUETT, 1983).
A soro qumica envolve a interao qumica entre o fluido adsorvido e o
slido adsorvente, conduzindo formao de um composto qumico de superfcie ou
complexo de soro. Neste caso, o calor de soro da mesma ordem de grandeza
dos calores de reao. Por esta razo, somente a soro fsica apropriada a uma
operao contnua em estgios. Alm disso, na soro fsica podem formar-se
camadas moleculares sobrepostas, enquanto que na soro qumica se forma uma
nica camada molecular adsorvida (monocamada) (RUTHVEN, 1984). A entalpia de
soro qumica muito maior que a da soro fsica. Com exceo de alguns casos,
a soro qumica exotrmica e reversvel.
Oliveira (2003) sumariza, segundo a Tabela 15, as principais caractersticas
das reaes envolvendo a quimissoro e a fisiossoro.
Tabela 15 - Caractersticas que identificam o tipo de soro (qumica ou fsica) (OLIVEIRA, 2003)
Soro Qumica ou Quimiossoro
Soro Fsica ou Fisiossoro
1. Fenmeno que ocorre por foras qumicas que

conduzem a ligaes que so eletrostticas ou que
envolvam compartilhamento de eltrons.
2. Caso haja na superfcie de um material, tomos
que podem no estar ligados completamente com
os vizinhos, sobrando valncias livres, dependendo
das condies trmicas, poder haver formao de
ligaes qumicas entre as valncias livres.
3. H uma interao qumica entre o slido e a
substncia adsorvida.
4. So encontrados grandes valores para o calor
de soro, raramente menor que 20 kcal/mol.
5. As molculas no so atradas para todos os
pontos da superfcie, mas especialmente para
centros ativos; logo, as foras de quimiosoro so
bem mais especficas e a atrao qumica entre o
slido e as molculas de fludo saturam-se quando
todos os centros ativos estiverem ocupados.
6. No se prolonga alm da primeira camada, mas
possvel que depois se d adicionalmente soro
fsica.
7. Devido alta energia de ativao, a temperatura
auxilia o processo de soro.
1. Fenmeno reversvel que ocorre por foras

entre as molculas do slido e as espcies a
ser adsorvida.
2. As foras que envolvem este fenmeno so
de van der Waals; logo, so foras
relativamente fracas e geralmente mais fceis
de serem revertidas.
3. O calor liberado por um mol de soluto
adsorvido varia de 2 a 6 kcal/mol, mas as vezes
ocorre at na faixa de 20 kcal/mol. A magnitude
do calor de soro um dos melhores critrios
de diferenciao.
4. A quantidade de material fisicamente
adsorvido aumenta com o decrscimo da
temperatura de soro.
5. O equilbrio entre a superfcie slida e as
molculas do fluido rapidamente alcanado.
6. As molculas so atradas para todos os
pontos da superfcie.
7. limitado apenas ao nmero de molculas
que se pode encaixar na camada no se
limita a uma monocamada, at que a
concentrao da fase adsorvida seja igual a do
fluido.
8. Ao assegurar uma concentrao suficiente
no fluido, as foras de soro fsica podem
continuar a ter influncia at terem se
acumulado vrias camadas de molculas sobre
a superfcie do slido.
Freqentemente, a adsoro definida como o fenmeno de reteno. O

fenmeno inverso chamado de dessoro, responsvel por liberar o composto
orgnico dos colides do solo e permitir sua transformao ou transporte.
A soro pode ser avaliada quantitativamente atravs das isotermas. O
procedimento experimental bastante simples: basta colocar em contato a soluo
contendo o componente a ser adsorvido com diferentes massas de adsorvente at
atingir o equilbrio. Aps a filtrao pode-se obter a concentrao de equilbrio em

soluo (Ce em mg.L-1) e a quantidade de material adsorvido por massa de solo
(x/m em mg.g-1). Os grficos x/m em funo de Ce so as isotermas e podem
apresentar-se de vrias formas, fornecendo informaes importantes sobre o
mecanismo de soro. Elas mostram a relao de equilbrio entre a concentrao na
fase fluida e a concentrao nas partculas adsorventes em uma determinada
temperatura (RUTHVEN, 1984). Algumas formas mais comuns esto apresentadas
na Figura 74.
Figura 74 Isotermas de soro (VIEIRA, 1996)
4.1.2. Isoterma de soro

A isoterma de soro representa a relao entre a quantidade de um
composto adsorvido a partir de solues a vrias concentraes e a quantidade
remanescente nestas solues, aps determinado perodo de equilbrio com um
dado solo, temperatura constante (VIEIRA et al., 1999; ARANTES et al., 2006).
Quantifica-se a soro dos compostos pelo solo e pela matria orgnica
conforme a Expresso 14:
(14)
x / m = (Ci Ce) * v / m
Em que:
x/m = quantidade do HPA sorvida por massa de solo (mg kg-1);

Ci = concentrao do HPA inicial (mg L-1);
Ce = concentrao do HPA na soluo em equilbrio com o solo (mg L-1);
v = volume da soluo do HPA adicionado (mL); e
m = massa de solo utilizada (g).
Vrios modelos matemticos de isotermas que descrevem a relao de
soro para um composto no solo e seus constituintes so descritos na literatura
(RUTHVEN, 1984). O modelo de Freundlich tem sido largamente utilizado porque
garante boa linearidade para solos (VIEIRA et. al, 1999; ARANTES et. al, 2006).
A forma da isoterma de Freundlich representada como na Equao 15:
x / m = K f .Ce1 / n
(15)
Na Equao 15, Kf a constante de Freundlich (quando 1/n difere de 1, a

unidade de Kf mg1-1/nkg-1L1/n) e 1/n uma constante (ndice de intensidade da
soro) que depende da substncia adsorvida e do meio adsorvente. Os resultados
foram ajustados usando a regresso linear na forma logartmica da equao de
Freundlich (Equao 16) e os valores Kf e 1/n da soro dos HPAs foram

determinados (VIEIRA et al., 1999; ARANTES et al., 2006).
(16)
log( x / m) = log K f + 1 / n log Ce
Tanto Kf como 1/n so parmetros de regresso caractersticos para cada

sistema solo-composto. Sob as condies experimentais, a capacidade de soro
(Kf) a quantidade do composto adsorvido ou remanescente no solo, quando a
concentrao da soluo no equilbrio igual unidade (1,0 mg mL-1). O parmetro
1/n indica o grau em que a isoterma de soro do composto no solo funo da
concentrao da soluo em equilbrio. Isto significa que a isoterma ser
estritamente linear quando o valor obtido para 1/n for igual unidade.
A isoterma de dessoro representa a relao entre a quantidade de um
composto ainda remanescente no solo e em outros substratos, aps o processo de
dessoro, e a quantidade liberada para a soluo aquosa, originalmente sem o
composto, aps o equilbrio a uma dada temperatura.
4.1.2.1. As classes das isotermas de soro

As isotermas de soro so divididas em quatro principais classes, de acordo
com sua inclinao inicial e, cada classe, por sua vez, em vrios subgrupos,
baseados na forma das partes superiores da curva (FALONE e VIEIRA, 2004;
CALVET, 1989). As quatro classes foram nomeadas de isotermas do tipo S
("Spherical"), L ("Langmuir"), H ("High affinity") e C ("Constant partition"),
apresentadas na Figura 75.
Figura 75 Classificao das isotermas de soro.
4.1.2.1.1. Isotermas do tipo S

Este tipo de isoterma tem inclinao linear e convexa em relao abscissa.
A soro inicial baixa e aumenta medida que o nmero de molculas adsorvidas
aumenta. Isto significa que houve uma associao entre molculas adsortivas
chamadas de soro cooperativa.
4.1.2.1.2. Isotermas do tipo L

A forma L possui inclinao no-linear e cncava em relao abcissa.
Nesse caso, h uma diminuio da disponibilidade dos stios de soro quando a
concentrao da soluo aumenta.
4.1.2.1.3. Isotermas do tipo H

Trata-se de um caso especial de curva do tipo L e observada quando a
superfcie do adsorvente possui alta afinidade pelo soluto adsorvido.
4.1.2.1.4. Isotermas do tipo C

Corresponde a uma partio constante do soluto entre a soluo e o
adsorvente, dando curva um aspecto linear. As condies que favorecem as
curvas do tipo C so substratos porosos flexveis e regies de diferentes graus de
solubilidade para o soluto.
As isotermas do tipo C e L so freqentemente muito prximas, podendo ser,
em muitos casos, consideradas do mesmo tipo.
4.2. OBJETIVOS
Estudar
soro
de
naftaleno,
antraceno
benzo[a]pireno
em
vermicomposto, solo e solo calcinado para fins de enriquecimento no estudo da

biorremediao de solos impactados por estes compostos.
4.3. METODOLOGIA
4.3.1. Reagentes e solventes utilizados no experimento de soro
Todos os solventes utilizados nos experimentos foram de grau analtico:
acetonitrila (HPLC) e as solues preparadas com gua livre de orgnicos. O padro
de referncia de naftaleno, antraceno e benzo[a]pireno foram obtidos da Supelco
(USA). As solues de diferentes concentraes foram preparadas pela diluio do
padro do naftaleno, antraceno e benzo[a]pireno em soluo de CaCl2 0,01 mol.L-1,
para manter a concentrao inica prxima quela da soluo do solo.
4.3.2. Coleta e preparo das amostras

O solo utilizado nos estudo de soro foi o mesmo utilizado em todo
trabalho,ou seja, um solo no cultivado e coletado a uma profundidade de
aproximadamente 10 cm. O solo foi seco temperatura ambiente e posteriormente

macerado, sendo, em seguida, armazenado em vidraria apropriada, esterilizada e
devidamente etiquetada.
O hmus de minhoca foi coletado em um minhocrio montado no mesmo
local da coleta do solo. A vermicompostagem se processou da seguinte maneira: em
uma caixa de 0,70 m3 foi adicionado esterco bovino previamente lavado e a esta
caixa foram inoculadas 400 minhocas da espcie Eisenia foetida e o material foi
vermicompostado por 3 meses. Aps decorrido esse tempo foram retiradas as
amostras de vermicomposto que foram secas temperatura ambiente, maceradas e
armazenado em vidraria apropriada.
Para obteno das amostras calcinadas (livres de matria orgnica), colocouse em cadinho uma determinada quantidade de solo, a qual foi mantida 550C por
4 h, em mufla.
4.3.3. Soro dos HPAs em vermicomposto, solo e solo calcinado

Os ensaios de soro foram realizados colocando-se 1,00 g de cada matriz
em erlenmeyers de 150 mL e adicionando-se 10,0 mL de solues em diferentes
concentraes do naftaleno, antraceno e benzo[a]pireno (0,1; 0,25; 0,5; 0;75; 1,0;
2,0; 4,0; 6,0; 8,0; 10,0; 15,0; 20,0 mg.L-1), tendo soluo aquosa de CaCl2 0,01 mol
L-1 como eletrlito-suporte. As amostras foram submetidas agitao orbital em uma
mesa agitadora do sistema matriz/soluo por 12 horas, temperatura ambiente e
no pH natural da matriz. Em seguida, as amostras foram centrifugadas por 20 min a
15.000 rpm (AIROLDI, 2001). Os sobrenadantes foram retirados cuidadosamente,
filtrados em filtro de 0,45m e posteriormente analisados por HPLC. Utilizou-se o
detector de fluorescncia, segundo a metodologia analtica proposta no captulo I.
Foram feitas vrias diluies visando chegar s concentraes ideais para

obteno da melhor e mais eficiente deteco do composto estudado de acordo com
condies cromatogrficas.
Os compostos naftaleno, antraceno e benzo[a]pireno apresentam 2, 3 e 5
anis aromticos, respectivamente. Esses compostos foram escolhidos de acordo
com o nmero de anis aromticos apresentados em sua estrutura.
Os resultados foram utilizados nos grficos de soro baseados na equao
de Freundlich. Foram realizados os grficos de isotermas de soro para os HPAs
estudados (BENEDITO FILHO, 1999; VIEIRA, 1996; VIEIRA et al., 1999; AIROLDI,
2001; LANDGRAF, 1998).
4.3.4. Coeficiente de distribuio (Kd) e coeficiente de distribuio do

contaminante na frao orgnica do solo (Koc)
Foram calculados os valores de Kd (constante de distribuio em dada
concentrao), ou tambm chamado de coeficiente de distribuio, prprio para a
comparao da capacidade adsortiva entre o composto e o solo e o vermicomposto
(ARANTES et al., 2006), conforme a Equao 17.
(17)
K d = ( x / m) / Ce
Onde:
Kd = coeficiente de distribuio (L kg-1);
x/m = quantidade do HPA sorvida por massa de solo (mg kg-1);
Ce = concentrao do HPA na soluo em equilbrio com o solo (mg L-1);
Devido importncia do carbono orgnico presente no solo no processo de
soro e distribuio de compostos orgnicos, o coeficiente de distribuio (Kd)
geralmente expresso por coeficiente de distribuio do contaminante na frao

orgnica do solo (Koc) (ARANTES et al., 2006), apresentado na Equao 18.
K oc = ( K d / C ) * 1000
(18)
Em que:
Koc = coeficiente de distribuio normalizado pelo carbono orgnico (L kg-1
substncia orgnica);
C = teor de carbono orgnico (g kg-1).
4.4. RESULTADO E DISCUSSO

Uma avaliao das curvas de soro no-linearizadas mostra que as curvas
obtidas para o composto naftaleno nos ensaios de soro seguiram uma tendncia
para isotermas de soro do tipo L e para o antraceno (como exemplo, Figura 76)
seguiram uma tendncia para isotermas de soro do tipo C. J para benzo[a]pireno
seguiu-se uma tendncia para isotermas do tipo S para ensaios de soro em solo e
solo calcinado e do tipo C para o ensaio de soro em vermicomposto. A maioria
dos estudos de soro para compostos apolares tem observado isotermas do tipo L
(Langmuir) ou C (partio constante) segundo DÀgostinho e Flues (2006).
180
120
160
140
120
80
-1
X/M (g.g )
-1
X/M (g.g )
100
60
40
100
80
60
40
20
20
0
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0
0,0
-1
Ce (g.mL )
0,5
1,0
1,5
2,0
-1
Ce (g.mL )
(A)
(B)
Figura 76 Isoterma de Freundlich da soro do antraceno (A) e naftaleno (B) em vermicomposto
(concentrao de naftaleno sorvido por g de vermicomposto versus concentrao em equilbrio).
As Figuras 77, 78 e 79 mostram a forma linearizada de isoterma de

Freundlich de soro do naftaleno em vermicomposto, solo e solo calcinado (ALVES
et. al, 2001).
2,5
-1
log X/M (g.g )
2,0
1,5
1,0
Adsoro
log X/M = 2,24713 +1,37305 * log Ce
0,5
R = 0,90512
0,0
-1,4
-1,2
-1,0
-0,8
-0,6
-0,4 -1
log Ce (g.mL )
-0,2
0,0
0,2
0,4
Figura 77 Forma linearizada da isoterma de Freundlich da soro do naftaleno em vermicomposto

(log da concentrao de naftaleno sorvido por g de vermicomposto versus log da concentrao em
equilbrio).
2,5
2,0
-1
logX/M (g.g )
1,5
1,0
Adsoro
log X/M = 1,80218+0,8463* log Ce
0,5
R =0,91163
0,0
-0,5
-1,5
-1,0
-0,5
0,0
0,5
1,0
-1
logCe (g.mL )
Figura 78 Forma linearizada da isoterma de Freundlich da soro do naftaleno em solo (log da

concentrao de naftaleno sorvido por g de solo versus log da concentrao em equilbrio).
2,5
-1
log X/M (g.g )
2,0
1,5
1,0
Adsoro
log X/M = 2,11818 + 1,12879 * log Ce
0,5
R = 0,95275
0,0
-1,6
-1,4
-1,2
-1,0
-0,8
-0,6
-0,4
-0,2
0,0
0,2
0,4
-1
log Ce (g.mL )
Figura 79 Forma linearizada da isoterma de Freundlich da soro do naftaleno em solo calcinado

(log da concentrao de naftaleno sorvido por g de solo calcinado versus log da concentrao em
equilbrio).

Freundlich de soro do antraceno em vermicomposto, solo e solo calcinado.
2,5
-1
log X/M (g.g )
2,0
1,5
1,0
0,5
Adsoro
log X/M = 2,44535+ 1,29904 * log Ce
R =0,97748
0,0
-0,5
-2,0
-1,8
-1,6
-1,4
-1,2
-1,0
-0,8
-0,6
-0,4
-0,2
0,0
-1
log Ce (g.mL )
Figura 80 Forma linearizada da isoterma de Freundlich da soro do antraceno em vermicomposto

(log da concentrao de antraceno sorvido por g de vermicomposto versus log da concentrao em
equilbrio).
2,5
1,5
-1
logX/M (g.g )
2,0
1,0
Adsoro
log X/M = 2,66748+1,47198* log Ce
0,5
R =0,97241
0,0
-0,5
-2,0
-1,8
-1,6
-1,4
-1,2
-1,0
-0,8
-0,6
-0,4
-0,2
0,0
-1
logCe (g.mL )
Figura 81 Forma linearizada da isoterma de Freundlich da soro do antraceno em solo (log da

concentrao de antraceno sorvido por g de solo versus log da concentrao em equilbrio).
2,5
-1
log X/M (g.g )
2,0
1,5
1,0
Adsoro
log X/M = 2,62052 + 1,40201 * log Ce
0,5
R = 0,95193
0,0
-2,0
-1,8
-1,6
-1,4
-1,2
-1,0
-0,8
-0,6
-0,4
-0,2
-1
log Ce (g.mL )
Figura 82 Forma linearizada da isoterma de Freundlich da soro do antraceno em solo calcinado

(log da concentrao de antraceno sorvido por g de solo calcinado versus log da concentrao em
equilbrio).

Freundlich de soro do benzo[a]pireno em vermicomposto, solo e solo calcinado.
3,0
2,5
-1
log X/M (g.g )
2,0
1,5
1,0
Adsoro
log X/M = 3,85925 + 1,55353 * log Ce
0,5
R =0,95708
0,0
-0,5
-2,6
-2,4
-2,2
-2,0
-1,8
-1,6
-1,4
-1,2
-1,0
-0,8
-0,6
-1
log Ce (g.mL )
Figura 83 Forma linearizada da isoterma de Freundlich da soro do benzo[a]pireno em

vermicomposto (log da concentrao de benzo[a]pireno sorvido por g de vermicomposto versus log
da concentrao em equilbrio)
2,5
logX/M (g.g )
2,0
-1
1,5
Adsoro
log X/M = 4,01925+0,9907* log Ce
1,0
R =0,60214
0,5
0,0
-0,5
-3,5
-3,0
-2,5
-2,0
-1,5
-1,0
-1
logCe (g.mL )
Figura 84 Forma linearizada da isoterma de Freundlich da soro do benzo[a]pireno em solo (log

da concentrao de benzo[a]pireno sorvido por g de solo versus log da concentrao em equilbrio).
2,5
-1
log X/M (g.g )
2,0
1,5
1,0
Adsoro
log X/M = 3,79683 + 0,87239 * log Ce
0,5
R =0,77053
0,0
-4,0
-3,5
-3,0
-2,5
-2,0
-1,5
-1,0
-1
log Ce (g.mL )
Figura 85 Forma linearizada da isoterma de Freundlich da soro do benzo[a]pireno em solo

calcinado (log da concentrao de benzo[a]pireno sorvido por g de solo calcinado versus log da
As isotermas obtidas (Figura 84 e 85) para benzo[a]pireno indicam uma

tendncia isoterma de soro do tipo S (sigmoidal). Segundo DÀgostinho e Flues
(2006) um levantamento mais detalhado da literatura mostrou que vrios
pesquisadores tambm observaram isotermas de soro do tipo S para compostos
orgnicos apolares. Mas at hoje, ainda no foi estabelecido um conceito claro para
explicar o comportamento de interao de compostos orgnicos apolares com o
solo. DÀgostinho e Flues (2006) tambm afirmam que vrios autores sugerem
alguns mecanismos de interao e comportamentos das curvas de soro para
compostos orgnicos apolares. Porm, a maioria dos estudos realiza os
experimentos em meio aquoso e nem sempre utilizam como adsorvedor um solo
natural, mas sim argilominerais especficos ou cido hmico puro, que, na realidade
no representam fielmente o solo natural. , portanto, muito difcil comparar os
resultados deste trabalho, onde se estudou um solo natural, com trabalhos da
literatura.
A maioria dos pesquisadores concorda que o comportamento de reteno de
compostos orgnicos no solo fortemente dependente da matria orgnica do solo.
DÀgostinho e Flues (2006) observaram que sistemas de soro de solos com
baixos teores de matria orgnica tendem a gerar isotermas tipo S. De acordo com
Stevenson (1994), o cido hmico o constituinte da matria orgnica que mais
insolvel e tende a se fixar superfcie das partculas inorgnicas do solo
(principalmente argilominerais, devido a sua rea especfica), modificando os pontos
de soro para os poluentes orgnicos. Ele tambm afirma que isotermas tipo S
ocorrem normalmente quando o sistema adsorvedor (solo) tem elevada afinidade
com o solvente.
A matria orgnica do solo considerada heterognea e consiste de
componentes "hard" e "soft" (Figura 86), que exibem comportamentos de soro
diferentes para compostos orgnicos. Os componentes mais acessveis so
denominados matria orgnica tipo borracha ("soft" ou "rubbery") e os componentes
menos acessveis so denominados rgidos ou vtreos ("hard" ou "glassy") que
exibem comportamentos de soro diferentes. O poluente orgnico pode ser sorvido
superficialmente pela matria orgnica aderida frao mineral ou frao orgnica
solvel. Em uma segunda etapa, o poluente orgnico pode difundir para dentro dos
microporos e interagir com a matria orgnica "soft" (microporos mais acessveis) ou
"hard" (microporos menos acessveis). As maioria dos adsorvedores so corpos
altamente porosos, com rea superficial interna muito grande. A superfcie externa
constitui somente uma pequena frao da superfcie total do adsorvedor. Em geral,

uma soro no-linear resultado do processo de soro na frao "hard" da
matria orgnica do solo (DAGOSTINHO e FLUES, 2006).
Figura 86 Comportamento do contaminante no solo (DÀGOSTINHO e FLUES, 2006).
A Tabela 16 apresenta os dados de soro do naftaleno, antraceno e

benzo[a]pireno segundo o modelo de Freundlich para vermicomposto, solo e solo
calcinado.
Tabela 16 - Dados de soro dos HPAs estudados segundo o modelo de Freundlich
HPAs
matriz
soro
Log Kf
Kf
1/n
R
Naftaleno
vermicomposto
2,16
146,89
0,76
0,91
solo
1,80
63,41
0,85
0,91
Solo calcinado
2,12
131,27
1,13
0,95
Antraceno vermicomposto
2,45
278,84
1,30
0,98
solo
2,67
465,03
1,47
0,97
Solo calcinado
2,62
417,37
1,40
0,95
B[a]pireno vermicomposto
3,86
7231,86
1,55
0,96
solo
4,02
10453,22
0,99
0,60
Solo calcinado
3,80
6263,69
0,87
0,77
O ajuste equao linear produziu valores de R ligeiramentes superiores na

soro para naftaleno e antraceno. J para o benzo[a]pireno obteve-se valor de R
superior para vermicomposto.
Pode-se observar que o benzo[a]pireno apresenta valores de Kf relativamente

altos em todas as matrizes, o que indica que a soro de benzo[a]pireno foi
relativamente alta quando comparada aos demais compostos.
No se observou nenhum resultado que possa indicar se a matria orgnica
um fator importante na soro desses compostos.
Sabendo-se que capacidade de soro e dessoro (Kf) a quantidade do
composto adsorvido ou remanescente no solo, quando a concentrao da soluo
no equilbrio igual unidade, e analisando os valores de Kf de soro nesse
estudo, fica bem claro que o efeito de soro geralmente aumenta com o nmero de
anis benznicos e o aumento da massa molar dos HPAs, e que a persistncia de
HPAs no ambiente solo e vermicomposto esto possivelmente relacionadas com o
nmero de anis benznicos na molcula do HPA. Os HPAs de baixa massa molar
so mais facilmente dissolvidos e adsorvem menos no sistema solo e
vermicomposto, tornando-se disponveis para vrios processos de degradao. Os
HPAs de alta massa molar, por outro lado, so mais adsorvidos, sendo por essa
razo mais recalcitrantes degradao e tendem a se acumular em diferentes
compartimentos ambientais. Alm disso, a degradabilidade e a capacidade de serem
extrados diminui conforme aumenta o tempo que este permanece em contato com o
matriz, fenmeno chamado de envelhecimento.
Os valores de 1/n na Tabela 16 esto longe do valor unitrio, indicando uma
falta de ajuste segundo o modelo de Freundlich, evidenciando que este modelo no
seria o mais adequado para o tratamento destes dados, seria mais adequado buscar
um novo modelo que melhor se ajuste.
4.4.1. Determinao de coeficiente de distribuio (Kd)

Outro fator de grande importncia que a soro de compostos orgnicos no
solo varia fortemente de lugar para lugar no campo. Grande parte dos dados
apresentados pela EPA (2008) foram obtidos por experimentos realizados em
amostras de cidos hmicos puros, sedimentos e argilominerais especficos ao invs
de um solo natural. Portanto, estudar e determinar estes coeficientes (Kd e Koc) em
amostras de solo natural, que apresentam uma combinao de stios sorvedores
(como argilominerais e cidos hmicos) muito mais complexo.
As Tabelas 17 e 18 trazem os coeficiente de distribuio em dada
concentrao e coeficiente de distribuio em relao ao teor de carbono orgnico
do vermicomposto e solo utilizado neste trabalho.
-1
Tabela 17 Coeficiente de distribuio (Kd) em L kg em dada concentrao e coeficiente de

-1
distribuio em relao ao teor de carbono orgnico (Koc) L kg do vermicomposto.
naftaleno
antraceno
benzo[a]pireno
Concentrao
-1
(mg L )
Koc
Kd
Koc
Kd
Koc
Kd
0,1
15
61
56
231
149
617
0,25
74
307
63
260
317
1313
0,5
57
236
175
724
418
1733
0,75
64
264
579
2399
1
108
447
140
582
1216
5039
2
70
291
74
305
904
3745
4
189
782
224
926
6
265
1096
216
894
3175
13155
8
256
1059
202
837
3604
14932
10
173
715
211
875
852
3529
15
134
556
237
982
1793
7428
20
92
381
204
845
2012
8335
-1
Tabela 18 Coeficiente de distribuio (Kd) em L kg em dada concentrao e coeficiente de

-1
distribuioem relao ao teor de carbono orgnico (Koc) L kg do solo.
Concentrao
naftaleno
antraceno
benzo[a]pireno
-1
(mg L )
Kd
Koc
Kd
Koc
Kd
Koc
0,1
0,25
0,5
0,75
1
2
4
6
8
10
15
20
43
175
177
103
178
210
379
274
328
177
50
17
3949
15976
16145
9365
16241
19178
34574
24990
29919
16110
4550
1545
52
65
110
4763
5888
10018
120
108
158
169
412
380
396
216
10938
9838
14407
15354
37536
34601
36064
19707
575
1492
2724
6200
2778
41559
83084
46849
44918
50916
37328
6070
52371
135967
248239
564934
253106
3786658
7570275
4268688
4092728
4639224
3401187
553042
A idia deste estudo foi comparar os dados experimentais de Kd com dados

da literatura e discusso dos principais motivos da variao dos valores de Kd
experimentais quando comparados com a literatura. O parmetro Kd (L kg-1) uma
importante ferramenta na estimativa do potencial de soro do contaminante
dissolvido em contato com o solo e vermicomposto. Quanto maior o Kd, maior a
tendncia do contaminante ficar adsorvido ao solo ou ao vermicomposto.
Koc , portanto, o coeficiente de distribuio do contaminante entre solo-gua
corrigido pela matria orgnica do solo. A fora de soro entre naftaleno, antraceno
e b[a]pireno e o solo medida pelo coeficiente de distribuio Koc, que depende das
propriedades fsico-qumicas deste contaminante e da porcentagem de carbono
orgnico do solo.
Os valores de Koc so normalmente determinados com base nos valores de
Kd e corrigidos pela frao orgnica do solo. No manual de valores de Koc para solo
("Soil Screening Guindance", EPA, 2008) so apresentadas amplas faixas de valores
de Koc para um grande nmero de compostos orgnicos, que foram obtidas, em sua
maioria, por isotermas de soro.
O coeficiente de distribuio Kd foi obtido atravs da poro linear da isoterma

de soro. O Kd foi determinado pela relao K d = ( x / m) / Ce . Para efeito de
avaliao dos dados obtidos, os valores de Kd experimentais foram comparados com
os valores de Kd calculados a partir de valores de Koc da literatura EPA (2008),
Tabela 19.
Tabela 19 - Comparao dos valores de coeficiente de distribuio (Kd) de naftaleno, antraceno e
benzo[a]pireno com base nos dados de Koc segundo EPA (2008) com os dados obtidos
experimentalmente das amostras de solo e vermicomposto
naftaleno
antraceno
B[a]pireno
Koc
min.-mx
(x103L kg-1)
Nmero de
dados
publicados
0,83-1,95
14,5 - 33,9
479 - 2130
20
9
3
Kd calculado
min.-mx
vermicomposto
(x103L kg-1)
0,20 0,47
3,50 -8,18
115,6 514,1
Kd calculado
min.-mx
solo
(x103L kg-1)
0,009 -0,021
0,159 0,372
5,26 23,4
Kd experimental
vermicomposto
(x103L kg-1)
Kd experimental
solo
(x103L kg-1)
0,10
0,207
2,06
0,017
0,220
6,20
Avaliando-se a Tabela 19 observa-se que o valor calculado de Kd em alguns

casos maior que o valor de Kd obtido experimentalmente neste estudo.
A seguir sero discutidas as possveis razes que afetaram o valor de Kd
obtido experimentalmente a ser inferior ao valor encontrado na literatura.
Os valores de Koc publicados pela EPA e apresentados na Tabela 19 foram
obtidos com base em reviso da literatura e mostram que estes dados apresentam
grande variao entre si, muitas vezes em vrias ordens de grandeza. Essa variao
pode ser atribuda a vrios fatores, que segundo a EPA podem estar relacionados :
diferenas nas propriedades das amostras de solo; diferenas nos ensaios e mtodo
analtico utilizado, e erros experimentais ou de medidas.
Verificou-se tambm que na literatura poucos foram os estudos experimentais
realizados para obteno de Koc em benzo[a]pireno. surpreendente que os valores
de Koc para compostos orgnicos no ionizveis, grupo onde se inclui o
benzo[a]pireno, sejam muito pequenos, principalmente para este composto cujo grau
de toxicidade e fator carcinognico muito elevado. Essa escassez de dados na
literatura de Kd ou Koc mostra a dificuldade desse trabalho e a complexidade da

pesquisa desses coeficientes.
Como dito anteriormente, os dados aqui presentes foram obtidos por
experimentos realizados com amostras mais complexas, e da a provvel razo do
alto grau de incerteza obtida em alguns casos na comparao dos dados de Kd
deste trabalho com a literatura. Alm disso, existem poucas referncias na literatura
sobre experimento de Koc realizados em amostras de solo natural e praticamente
no existem referncias
de experimentos
em amostras de
solo tropical
(DÀGOSTINHO e FLUES, 2006).

Outra razo para a provvel incerteza nos valores experimentais de Kd dos
compostos estudados podem estar relacionada hidrofobicidade. A propriedade
hidrofbica favorece a soro dos compostos orgnicos matria orgnica do solo.
As caractersticas hmicas do solo e vermicomposto apresentam complexidade
estrutural e composio qumica pouco definida e, portanto, as interaes entre
esses compostos e a matria hmica do solo podem ocorrer por diferentes
processos, ainda no completamente conhecidos (DÀGOSTINHO e FLUES, 2006).
4.5. CONCLUSES
Neste estudo, fica bem claro que o efeito de soro geralmente aumenta com
o nmero de anis benznicos e o aumento da massa molar dos HPAs, e que a
persistncia de HPAs no ambiente esto possivelmente relacionadas com o nmero
de anis benznicos na molcula do HPA.
Estudar e determinar os coeficientes em amostras de solo natural, que
apresentam uma combinao de stios sorvedores muito mais complexo. E assim
torna-se claro a importncia de se obter resultados detalhados do comportamento
desses contaminantes em solo brasileiro, para melhor adequao dos modelos prexistentes s condies climticas e ambientais brasileiras, bem como para o estudo
de biorremediao em solo contaminado por esses compostos.
O valor calculado de Kd em alguns casos maior que o valor de Kd obtido
experimentalmente neste estudo. As possveis razes que afetaram o valor de Kd
obtido experimentalmente a ser inferior ao valor encontrado na literatura pode estar
relacionado com a dificuldade em realizar experimentos com amostras muito
complexas. Existem estudos com solos in natura e praticamente no existem
referncias de experimentos em amostras de solo tropical, alm da escassez de
dados literrios. Outra razo para a provvel incerteza pode estar relacionada
hidrofobicidade do meio.

AIROLDI, Flvia Pereira da Silva. Avaliao de processos de degradao de
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CAPITULO V
Concluses Finais
196
Os 17 HPAs podem ser bem separados e determinados por CLAE com

detector UV-Vis e fluorescncia usando uma coluna C-18. A extrao por ultra-som
foi escolhida para a extrao dos HPAs na matriz solo porque apresentou alta
eficincia de extrao, alm de minimizar o uso de solvente e no levar a perda por
evaporao. A acetona foi o melhor solvente avaliado para a extrao dos 17 HPAs
em solo.
Verificou-se atravs da determinao da concentrao dos contaminantes,
que houve uma remoo dos HPAs durante o processo de biorremediao.
Observa-se que o composto naftaleno muito suscetvel a degradao, por
apresentar baixa massa molar e de baixo ponto de ebulio e com maior polaridade
que os demais HPAs, tendendo a ser facilmente evaporado para o ambiente e a
dissolver-se melhor em gua.
Relacionando-se o percentual de remoo de cada HPA (Tabela 6, captulo II,
pgina 91) durante a biorremediao com alguma de suas propriedades fsicoqumicas mencionadas na Tabela 1 do captulo I, pgina 26, nota-se pela Figura 87
que o percentual de remoo durante a biorremediao diminui com o aumento da
massa molar. Neste estudo fica claro que a persistncia de HPAs no ambiente solo
est relacionada com o nmero de anis benznicos na molcula do HPA e sua
massa molar. Esse mesmo comportamento observado ao montar-se um grfico do
percentual de remoo versus Kow (Figura 88).
Fica evidente tambm atravs do estudo da soro dos compostos naftaleno
(um anel aromtico), antraceno (trs anis aromticos) e benzo[a]pireno (cinco anis
aromticos) que o efeito de soro e a persistncia de HPAs no ambiente solo e
197
vermicomposto esto relacionadas com o nmero de anis benznicos na molcula

do HPA e o aumento da massa molar. Na tabela 16, pgina 186, capitulo IV,
evidencia-se que a capacidade de soro (Kf) aumenta com o nmero de anis
benznicos e o aumento da massa molar dos HPAs.
B
C
D
E
100
Remoo (%)
80
60
40
20
0
120
140
160
180
200
220
240
260
280
300
-1
Massa molar (g mol )
Figura 87 Percentual de remoo do HPA durante o biorremediao versus massa molar do HPA.
Onde: (B) 25% de esterco bovino e 75% solo; (C) 50% de esterco bovino e 50% solo; (D) 60% de
esterco bovino e 40% solo; (E) 75% de esterco bovino e 25% solo.
B
C
D
E
100
Remoo (%)
80
60
40
20
0
3,0
3,5
4,0
4,5
5,0
5,5
6,0
6,5
7,0
Log Kow
Figura 88 Percentual de remoo do HPA durante o biorremediao versus Kow. Onde: (B) 25% de
esterco bovino e 75% solo; (C) 50% de esterco bovino e 50% solo; (D) 60% de esterco bovino e 40%
solo; (E) 75% de esterco bovino e 25% solo.
198
J a Figura 89 mostra o grfico da remoo do HPA versus sua solubilidade

em gua, percebe-se um aumento da remoo dos HPAs com o aumento da
solubilidade em gua. Os compostos com maior solubilidade em gua so mais
polares e mais volteis, portanto so mais susceptveis degradao. J os
compostos mais apolares tendem a adsorverem nas partculas do solo com maior
facilidade e so menos suscetveis degradao.
100
Remoo (%)
80
60
B
C
D
E
40
20
0
-3
-2
-1
-1
log solubilidade em gua (mg L )
Figura 89 Percentual de remoo do HPA durante o biorremediao versus solubilidade em gua.

Onde: (B) 25% de esterco bovino e 75% solo; (C) 50% de esterco bovino e 50% solo; (D) 60% de
esterco bovino e 40% solo; (E) 75% de esterco bovino e 25% solo.
Durante o processo de biorremediao, percebem-se diferenas nas

caractersticas qumicas e fsicas do solo, como, por exemplo, a diminuio no teor
de matria orgnica (%). H um aumento do teor de cido hmico em todos os
experimentos, o que se relaciona ao processo de humificao e mineralizao.
199
TRABALHOS FUTUROS
Monitorar a concentrao dos HPAs durante a biorremediao atravs de
um espectrmetro de massas.
Estudar os possveis produtos da degradao dos HPAs e sua toxicidade
no ambiente aps um processo de biorremediao utilizando-se minhocas, alm de

fazer um controle de sua concentrao atravs de um cromatgrafo a gs acoplado
ao espectrmetro de massas.
Fazer um estudo sobre as concentraes letais de HPAs e de diesel para
as minhocas atravs de ensaios ecotoxicolgicos, com o intuito de saber a

concentrao inicial que se deve ter para haver uma reprodutibilidade bem sucedida
da biorremediao utilizando-se minhocas.
Aplicar este processo de remediao em larga escala, como, por exemplo,
postos de gasolina, onde haja uma contaminao do solo por vazamento de

combustveis.

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UNIVERSIDADE DE SO PAULO

INSTITUTO DE QUMICA DE SO CARLOS

APLICAO DE VERMICOMPOSTAGEM PARA A

Jussara Aparecida de Oliveira Cotta

Tese apresentada ao Instituto de

ORIENTADORA: Profa Dra Maria Olmpia de Oliveira Rezende

Milton Nascimento e Fernando Brant

Quero a utopia, quero tudo e mais

Aqueles que so responsveis

A minha querida afilhada e sobrinha

Aquelas que dividiram o teto, as alegrias e tristezas, Marisa, Roberta e Lucimar,

No sou nada diante

Instituto de Qumica de So Carlos - USP

Instituto de Qumica de So Carlos - USP

Figura 2 - Regio K, L e baia do benzo[a]antraceno (BRAGA et al., 1999).

Figura 3 Estrutura dos HPAs estudados (NIOSH, 1989).

Figura 4 Cromatografo lquido utilizado.

Figura 5 - Espectro UV-Vis do naftaleno, acenaftileno, acenafteno e fluoreno.

Figura 6 - Espectro de fluorescncia do naftaleno, acenaftileno, acenafteno e

Figura 7 - Espectro UV-Vis do fenantreno, antraceno, fluorenteno e pireno.

Figura 8 - Espectro de fluorescncia do fenantreno, antraceno, fluorenteno e

Figura 10 - Espectro de fluorescncia do b[a]antraceno, criseno, b[e]pireno e

Figura 11 - Espectro UV-Vis do b[k]fluoranteno, b[a]pireno, dibenzo[a,h]antraceno,

Figura 12 - Espectro de fluorescncia

Figura 13 - Espectro UV-Vis do Indeno(1,2,3,cd)pireno.

Figura 14 - Espectro fluorescncia do Indeno(1,2,3,cd)pireno.

Figura 15 - Cromatograma obtido pelo detector de UV-Vis para a soluo padro

Figura 16 Cromatograma obtido pelo detector fluorescncia para a soluo

Figura 17 - Curvas analticas dos HPAs

Figura 18 Seleo do solvente para extrao dos 17 HPAs. O eixo vertical a

Figura 19 Atividades das reas contaminadas em So Paulo (1.336 casos), 2004

Figura 20 Principais agentes contaminantes em So Paulo (FURTADO, 2005).

Figura 21 Estgios do processo de remediao em So Paulo, 2004 (FURTADO,

Figura 22 Ciclo de reproduo da Eisenia foetida

Figura 23 - Minhoca Eisenia foetida

Figura 24 - Montagem das caixas de compostagem.

Figura 25 - Caixas de compensado utilizadas no tratamento.

Figura 26 Concentraes (mg kg ) dos HPAs nas amostras durante o processo

Figura 27 Cromatograma (CLAE-fluorescncia) da amostra do experimento E no

Figura 28 Cromatograma (CLAE-fluorescncia) da amostra do experimento E no

Figura 29 Cromatograma (CLAE-fluorescncia) da amostra do experimento E no

Figura 30 - Fotografias tiradas na montagem dos experimentos utilizando esterco

Figura 31 - Fotografias tiradas aps 3 meses dos experimentos utilizando esterco

Figura 32 Experimento aps 3 meses do processo de vermicompostagem

Figura 33 Biomassa das minhocas no incio do processo e ao final de 3 meses,

Figura 34 Tamanho apresentado pelas minhocas aps 3 meses do processo.

Figura 35 Maior tamanho apresentado pelas minhocas aps o processo de

Figura 36 Minhocas em cada experimento (B, C, D, E e F) aps 3 meses

Figura 37 Cromatograma (CLAE-fluorescncia) do extrato das minhocas do

Figura 38 Cromatograma (CLAE-fluorescncia) do extrato das minhocas do

Figura 39 Cromatograma (CLAE-fluorescncia) do extrato das minhocas do

Figura 40 Cromatograma (CLAE-fluorescncia) do extrato extrado das minhocas

Figura 41 Cromatograma (CLAE-fluorescncia) do extrato das minhocas do

Figura 42 - Modelo de cido hmico proposto por STEVENSON, em 1982

Figura 43 Modelo de cido hmico proposto por SCHULTEN e SCHNITZER

Figura 44 Estrutura tridimensional proposta por SEIN Jr. et al.

Figura 45 - Curva de distribuio granulomtrica do solo.

Figura 46 Teor de matria orgnica das amostras durante a vermicompostagem

Instituto de Qumica de So Carlos - USP

Figura 48 pH das amostras durante a vermicompostagem nos experimentos

Figura 49 Teor de umidade das amostras durante a vermicompostagem nos

Figura 50 Curvas analticas utilizadas para a determinao de carbono orgnico

Figura 51 Carbono orgnico das amostras durante a vermicompostagem nos

Figura 52 - Teor de cidos hmicos nas amostras dos experimentos B, C, D, E e F