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Cromatografia

A cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao dos componentes de


uma mistura. Este mtodo est baseado na distribuio dos componentes da mistura em
duas fases que esto em contato. Uma das fases permanece fixa (fase estacionria) e a
outra move-se atravs dela (fase mvel). Durante a passagem da fase mvel sobre a
estacionria, as substncias da mistura so distribudas entre as duas fases. Atualmente a
utilizao desta tcnica muito ampla, pode-se, por exemplo, cromatografar a urina de
um jogador para saber se ele estava dopado ou no durante a competio, ou ainda isolar
de um vegetal uma certa substncia de interesse farmacolgico.
O nome cromatografia foi utilizado pela primeira vez pelo botnico russo
Tswett, em 1906, que para separar as substncias contidas nos extratos de folhas,
colocou o extrato em um tubo de vidro contendo carbonato de clcio (fase estacionria).
Com a passagem de ter de petrleo (fase mvel) por este tubo de vidro houve a
separao dos componentes em faixas coloridas.
Chrom = cor e graphie = escrita
Os experimentos que sero realizados envolvem a utilizao da cromatografia
em camada delgada para visualizao da clorofila e -caroteno presentes no espinafre e
a cromatografia em coluna para a sua separao, aps extrao destes com o auxlio de
solventes.

-caroteno

A clorofila nas plantas responsvel pela colorao verde. A clorofila a a mais


abundante no reino vegetal sendo encontrada junto com a clorofila b em uma proporo
de 3:1, respectivamente. O mais conhecido dos carotenos o -caroteno, que
encontrado normalmente nas plantas junto com a clorofila.
Materiais:
10 Lminas de vidro (7,5 x 2,5 cm), slica para cromatografia em camada
delgada e coluna, 1 coluna cromatogrfica, 1 cuba cromatogrfica, 1 bquer de 50 mL, 1
vidro de relgio, 5 capilares, hexano, acetona, clorofrmio, 1 funil de extrao de 125
mL, 1 aro de metal, 1 suporte, 4 erlenmeyers de 50 ml, algodo, papel filtro, funil de
transferncia, basto de vidro, 2 provetas de 25 mL.
Procedimentos:
Preparao das placas Lave as placas com detergente e gua, seque-as e limpe-as com acetona para
retirar vestgios de gordura.
Prepare uma suspenso de slica em clorofrmio (relao de 1:3) e prepare as
placas mergulhando-as, duas a duas e justapostas, nesta suspenso. Deixe-as secar ao ar.
Preparo do extrato de espinafre - Pese 10 g de folhas de espinafre e transfira para
um almofariz. Adicione 20 mL de uma mistura de hexano e acetona (8:2) e triture as
folhas com o auxlio de um pistilo. Separe a soluo verde obtida das folhas de
espinafre por filtrao ou filtrao.
a) Cromatografia em camada delgada - Utilize um capilar para aplicar a amostra
a 1 cm da parte inferior da placa. A mancha deve ser pequena e simtrica com cerca de 1
a 2 mm de dimetro. Deixe o solvente evaporar e repita a aplicao de extrato at que a
mancha verde esteja visvel (em mdia 3 a 4 vezes). Introduza esta placa na cuba
cromatogrfica com uma quantidade de solvente cuja altura no ultrapasse o ponto de
aplicao da amostra na placa. A cuba deve estar saturada com os vapores do solvente
utilizado como eluente, assim as paredes devem estar recobertas com papel de filtro.
Aps a introduo da placa neste sistema, deixe o eluente ascender at a frente do
solvente atingir cerca de 5 mm da extremidade superior da placa. Teste hexano, acetona
e solues destes solventes (propores variadas) como eluentes. Compare as manchas
obtidas e verifique em que sistema de eluentes foi obtida a melhor separao. Calcule o
Rf para o sistema em que foi obtido a melhor separao.
b) Separao por cromatografia em coluna - Pese 5 g de slica para coluna e
adicione a um bquer contendo 10 ml de hexano. Agite a mistura obtida e transfira para
o interior de uma coluna de vidro contendo um pedao de algodo na extremidade
inferior. Deixe o solvente escorrer por ao da gravidade. Bata levemente com os dedos
ou uma mangueira de borracha para auxiliar no empacotamento. Na parte superior da
coluna coloque um pedao de algodo. Adicione 3 mL do extrato de espinafre. Deixe o
extrato penetrar pela fase estacionria da coluna e adicione lentamente o hexano. Colete
toda a banda amarela. Mude de solvente para acetona e colete a banda verde.

Questionrio:
a) Por que voc utilizou uma mistura de acetona e hexano no preparo do extrato?
b) Aps a separao do extrato das folhas de espinafre observa-se a presena de duas
fases. Explique.
c) Qual dos dois componentes mais polar? Baseado em que voc chegou a esta
concluso?
d) Se os componentes no fossem coloridos como voc faria para identificar as
manchas na cromatografia em camada delgada?
e) O que Rf?

Bibliografia
1. Soares, B. G., Souza, N. A. de; Pires. D. X. Teoria e Tcnicas de Preparao,
Purificao e Identificao de compostos Orgnicos. Rio de Janeiro: Editora
Guanabara, 1988.
2. Mewaldt, W.; Rodolph, D.; Sady, M. An inexpensive and quick method for
demonstrating column chromatography of plants pigments of spinach extract. J.
Chem. Educ., v. 62, p. 530, 1985.
3. Mickey, C. D. Separation Technology- I. Chromatography. J. Chem. Educ., v. 58,
p. 997, 1981.