05/06/2014

Universidade Federal de Pelotas

Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel

Departamento de Fitossanidade
Programa de Ps-Graduao de Fitossanidade
Fisiologia da Interao Planta-Patgeno

Resistncia sistmica
m
induzida
uz
(ISR) e adquirida (SAR)
Prof. Dr. Leandro Jos Dallagnol

Induo de resistncia em plantas...

Ativao de mecanismos de resistncia
latentes em resposta ao tratamento com
agentes biticos ou abiticos
A ao se d sobre a planta hospedeira modificando a
sua relao com o patgeno

29/05 e 04/06 de 2014

Induo de resistncia em plantas...

Resistncia no-hospedeiro, resistncia monognica e

polignica
No patgeno

Planta
Indutor

Patgeno
avirulento

Resistncia
Nohospedeiro

Mecanismos
ativos:
Mecanismos passivos:
tricomas,estmatos
Reconhecimento
compostos txicos.
incompatibilidade

h/dias

Desafiador (challenger)

FLG22

Produtos
genes AVRs

Reconhecimento
incompatibilidade

AS; JA; ET
Ativao de sistema de defesa

Local

Sistmica

(genes R)

Patgeno Virulento
(compatibilidade)

Resistncia
Sistmica

Resistncia induzida
em outros tecidos

ncleo

Fatores de
Mecanismos
transcrio
ativos
Hipersensibilidade, exploso oxidativa,
papilas, lignificao, PR-protenas, etc.

05/06/2014

Estgios de sinalizao longa distncia

durante a defesa
1. Induo da resposta no tecido local
(inclui a produo de sinal de longa
distncia)

SAR

g distncia
2. Movimento do sinal a longa
3. Percepo molecular do sinal no tecido
distante imediato em resposta ao
ferimento e plantas SIS se torna
preparada para responder ao
subseqente ataque em SAR e ISR
4. Manifestao da resposta sob ataque
subsequente em SAR e ISR

Champigny & Cameron, 2009

Patgeno .... resposta de hipersensibilidade (HR)

Patgeno .... resposta de hipersensibilidade (HR)

Tobacco mosaic virus x tabaco

Tobacco mosaic virus x tabaco

2 TMV
2 TMV
1 inoculao
(-7dias)

2 Inoculao

1 TMV
1 TMV

1 TMV

1 Inoculao

induzida
Ross, 1961

controle
Ross, 1961

05/06/2014

No patgeno

P/P

Resistncia
sistmica
adquirida

HR

Drechslera teres x cevada

Folhas de cevada
inoculadas com

Bipolaris maydis
no patgeno da
cevada

Interao planta-patgeno
gt = tubo germinativo
ap = apressrio
pa = papila
Jrgensen et al., 1998

No patgeno

Drechslera teres x cevada

Pr-tratamento
P/P

Pr-tratamento

HR/patgeno avirulento
no-patgeno

Resistncia
sistmica
adquirida

no patgeno
da cevada

Interao planta-patgeno
ou ainda RH tipo II

Jrgensen et al., 1998

05/06/2014

Patgeno virulento
1 dia aps 1 inoc.

Vicia faba x Uromyces viciae-fabae

3 dia aps 1 inoc.

P/P

6 dia aps 1 inoc.

9 dia aps 1 inoc.

2 inoc.
1 inoc.
induzida

Resistncia
sistmica
adquirida

patgeno virulento
HR/patgeno avirulento
no-patgeno

1 inoc.
gua.
g
no induzida

1 inoc. Uromyces viciae-fabae

2 inoc. Uromyces viciae-fabae

12 dia aps 1 inoc.

Interao planta patgeno

ou ainda RH tipo II

induzida
no induzida

Murray & Walters, 1992

SAR

Efeito de amplo espectro.

Pode durar dias ou at o final da vida da planta...

ausncia de sintomas
ou sintomas atenuados
inoculao com TMV
ou outro patgeno

SAR
inoculao com
patgeno (TMV)
ou no-patgeno
ou patgeno avirulento

1) Aps primeira inoculao,em

tecido no infectado, notam-se
discretas alteraes em nveis
de expresso gnica de vrios
genes. (PR genes, fitoalexinas).
2) Os eventos mais notveis
ocorrem aps a segunda inoculao.
A planta reage mais RAPIDAMENTE.
Concluso: a primeira inoculao
deixa a planta preparada, para um
segundo ataque. Pronta para reagir.
Este fenmeno chamado de...
PRIMING

leso necrtica (HR) !! Com reaes locais

leso necrtica pode advir de uma reao de hipersensibilidade
ou ainda ser resultado de um outro sintoma necrtico

Genes assinatura da SAR

Genes relacionados patognese (PR)

ausncia de sintomas
ou sintomas atenuados
inoculao com patgeno
(TMV) ou outro

SAR

Em tabaco, existem nove famlias:

PR 1
PR 2 beta 1, 3 glucanase
PR-3 quitinase
PR 4 - quitinase
PR-5 similar a taumatina
etc.

inoculao com
patgeno (TMV)
ou no-patgeno
ou patgeno avirulento

leso necrtica (HR) !!

05/06/2014

Shikimate pathway

SAR depende do acmulo de

cido saliclico?
tabaco selvagem

tabaco mutante NahG

(salicilato hidroxilase)

SAR depende do acmulo de cido saliclico?

tabaco selvagem

NahG

NahG compromete resistncia

tabaco mutante NahG

(salicilato hidroxilase)

Raa virulenta

No acumula AS;
tambm mais suscetvel
a diversos patgenos
Raa avirulenta

dias

INA

Peronospora parasitica x
Arabidopsis

Expresso do gene PR1

INA

Daleney et al., 1994

05/06/2014

Interao planta-patgeno traduo de sinal

NahG compromete resistncia

TMV

NahG
WT

Daleney et al., 1994

Vlot et al, 2009

NahG compromete SAR

AS [6334 ng/g)

Sem expresso
de NahG

AS [2824 ng/g)

Expresso intermediria
de NahG

AS [112 ng/g)

Elevada expresso
de NahG

P/P

HR

Salicylate

Resistncia
sistmica
adquirida

Interao planta patgeno

ou ainda RH tipo II

Gaffney et al, 1993

05/06/2014

SAR depende do acmulo de cido saliclico?

tabaco mutante NahG
(salicilato hidroxilase)

tabaco selvagem

P/P

HR

No acumula AS;
no apresenta SAR
tambm mais suscetvel
a patgenos biotrficos

Salicylate
nahG

Resistncia
sistmica
adquirida

catecol

Interao planta patgeno

ou ainda RH tipo II

Mutantes nahG indicam papel duplo do SA: resistncia basal e SAR

Induo de SAR por agentes exgenos

tabaco mutante nahG
(salicilato hidroxilase)

BTH
INA

P/P

HR

Salicylate
nahG

Resistncia
sistmica
adquirida

catecol

aplicaes de SA, INA ou

BTH restituem a SAR

INA = cido 2,6 dicloroisonicotnico

BTH = benzotiadiazole

No acumula AS, mas

apresenta SAR

Interao planta patgeno

ou ainda RH tipo II

05/06/2014

Qual o sinal translocado?

Qual o sinal translocado?

No AS....

X = wild type
N = NahG

wild type
NahG

NahG
wild type

wild type
wild type

NahG
NahG

SAR expressa na copa mesmo se o estmulo

induzido em tecido que no produz AS. Portanto,
o sinal translocado NO pode ser o SA

No AS....

Qual o sinal translocado?

SABP2 is a methyl esterase that converts
MeSA to SA, while SA inhibits the esterase
activity of SABP2

inoculao da folha primria e remoo aps 6 horas,

antes que haja acmulo de SA, no afeta SAR.

Rasmussen et al., 1991

Qual o sinal translocado?

W = wild type
S = SABP2-silenced

Park et al., 2007

Heil & Ton, 2008

05/06/2014

Qual o sinal translocado?

Heil & Ton, 2008

Qual o sinal translocado?

BTH
INA

P/P

HR/pat. Avir.
No-pat.
Salicylate
Pat. Vir.
nahG

catecol

Heil & Ton, 2008

MeSA

Resistncia
sistmica
adquirida

No induzida

Wild type

Ind id
Induzida
DIR1 encodes a putative apoplastic lipid transfer
protein and DIR1 interacts with a lipid-derived
molecule to promote long distance signalling.

No induzida

Interao planta patgeno

ou ainda RH tipo II

dir1-1 mutant

Induzida

the protein (DIR1) localizes to all living cell

types of the vasculature, including companion
cells and sieve elements, and therefore DIR1 is
well situated to participate in long-distance
signaling during SAR. (Champigny et al., 2011)

Maldonado et al., 2002

05/06/2014

BTH
INA

P/P

HR/pat. Avir.
No-pat.
Salicylate
Pat. Vir.
nahG

Qual o sinal translocado?

Sinal de natureza lipdica
LTP
MeSA

Resistncia
sistmica
adquirida

catecol

Interao planta patgeno

ou ainda RH tipo II

BSMT1 = benzoic acid/SA carboxyl methyltransferase 1

MSE = MeSA esterase
DIR1 = defective in induced resistance1
SFD1 = suppressor of fatty acid desaturase1
XY = complexo lipdico

Liu et al., 2011

O papel do gene NPR1/NIM1

(non-expresser of PR1/noninducible immunity1)
npr1

WT

AS

AS

INA

WT

INA

Qual o sinal translocado?

Pseudomonas syringae
pv. maculicola

Peronospora parasitica

npr1

0, no conidiophores on the plant; 1, no more than 5 conidiophores

per infected leaf; 2, 620 conidiophores on a leaf few infected
leaves; 3, 620 conidiophores on most of the infected leaves; 4, 5
or more conidiophores on all infected leaves; 5, 20 or more
conidiophores on all infected leaves.

OD600 = 0.001

Vlot et al., 2008

0.0001

OD600 = 0.001

Pseudomonas syringae
pv. maculicola

0.0001

Cao et al., 1997

10

05/06/2014

O papel do gene NPR1/NIM1

(non-expresser of PR1/noninducible immunity1)

BTH
INA

P/P

HR

Salicylate
nahG

interage com fatores de transcrio (do tipo bZIP basic

leucine zipper)

Sinal de natureza lipdica

LTP
NPR1/
NIM1
MeSA

catecol

Resistncia
sistmica
adquirida

Importante:
p
mutante NPR1/NIM1
alm de no apresentar SAR, tambm
mais suscetvel
Ou seja, gene tem papel duplo: SAR e
resistncia basal

Interao planta patgeno

ou ainda RH tipo II

Produto do gene NPR1/NIM1:

NPR1/NIM1 mutante de
Arabidopsis que no expressa PRs
nem SAR quando aplicado SA

alguns membros desta famlia se ligam a promotores de genes

de defesa, como o PR-1

a transcription factor
(sometimes called a sequencespecific DNA binding factor) is a
protein that binds to specific
DNA sequences and thereby
controls the transfer (or
transcription) of genetic
information from DNA to mRNA
Plant, Surgery 30(4): 165-168, 2012

Interao planta-patgeno traduo de sinal

reduzido
oxidado

Pieterse & Van Loon, 2004

Vlot et al, 2009

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05/06/2014

Features of Systemic Acquired Resistance (SAR)

Triggered by Viral, Fungal or Bacterial Agents
Results in Systemic Changes in Physiology and Gene Expression****
Requires Salicylic Acid Accumulation****
Resistance is Effective Against Diverse Pathogens

BTH
INA

HR/pat. Avir.
Salicylate
P/P No-pat.
Pat. Vir.
nahG

Sinal de natureza lipdica

LTP
NPR1/
NIM1
MeSA

Resistncia
sistmica
adquirida

catecol

Response Lasts Weeks to Months

Depends upon activity of the NIM1/NPR1 gene product
NIM1/NPR1 interacts with family transcription factors, which may play
a role in regulating SAR

**** = assinaturas moleculares da SAR

Interao planta patgeno

ou ainda RH tipo II

ISR

ISR

SAR

Rizobactrias (PGPR)
Insetos
Patgenos necrotrficos

Patgenos biotrficos virulentos

Patgenos biotrficos avirulentos
No-patgenos
notar semelhana fenotpica dos fenmenos:
Agentes abiticos

resistncia sistmica contra vrios patgenos

SAR e ISR: so fenmenos biolgicos distintos?

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05/06/2014

Trichoderma asperellum
(strain T34)

Efeito priming tambm ocorre na ISR?

Pseudomonas syringae pv tomato

e

Fusarium oxysporum f.sp. raphani

(parte area)

Alteraes no ocorrem aps o tratamento com a bactria

indutora . . . mas sim aps a inoculao do patgeno

nontreated
T ill & S
Trillas
Segarra, 2009

no induzida

induzida
produo mais rpida de fitoalexinas, do
fortalecimento da parede celular (calose,
material fenlico), etc.

...parece que a indutora prepara (priming) o sistema de defesa

para quando o patgeno chegar...

Pseudomonas fluorescens WCS417

(razes)

SAR e ISR: fenmenos biolgicos

distintos?

Shikimate pathway

ISR ocorre independente da rota cido saliclico

nahG

tabaco mutante nahG

(salicilato hidroxilase)

SA (-)

P/P;M

Salicylate
nahG
catecol

Pseudomonas fluorescens
-WCS 417 (SA+)
-WCS 358 (SA-)

ISR(+)

-WCS 374 (SA+)

ISR(-)

ISR (+)

SA no est envolvido na ISR

SA de origem bacteriana no induz ISR

ISR independe de SA
(e de PR genes) portanto, SAR e ISR so distintos

Patgeno
necrotrfico

PGPR

Van Wees et al., 1007

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05/06/2014

Indutores bacterianos da ISR

Vias de sinalizao da ISR

Number of Pseudomonas syringae pv tomato bacteria in challenged
leaves of control plants and Pseudomonas fluorescens WCS417r and
avirulent P. s. tomatotreated Arabidopsis plants

Flagelina (Bakker et al., 2007)

Lipopolissacarideos (Bakker et al., 2007)
Antibioticos (diacetilfloroglucinol - DAPG em P. fluorescens) (Iavicoli et al.,
2003)
Surfactantes (Tran et al., 2007)
Sideroforos (Meziane et al., 2005)

ETR1 = ethylene perception/response codifica um receptor

etr1 (insensvel a etileno)
jar1 (insensvel a cido jasmnico)

N-acyl-homoserine lactones (AHL)

para etileno

JAR1 = Jasmonic acid-amido synthetase catalisa a sntese

N-alkylated benzylamines

de conjugados
jasmonatos-amino
cidos

Exopolisacarideos (EPS)

Pieterse et al, 1998

Vias de sinalizao da ISR

Mutantes etr1 e jar1 no apresentam ISR

etr1 (insensvel a etileno)
jar1 (insensvel a cido jasmnico)

Conclui-se que ISR depende dos hormnios JA e ET

Interessante: nveis de JA e ET no aumentam
durante ISR, indicando que a percepo a estes
hormnios e no suas concentraes que
disparam a ISR
etr1 (insensvel a etileno)
jar1 (insensvel a cido jasmnico)

mutantes etr1 e jar1

Finalmente, mutantes etr1 e jar1 tambm so mais suscetveis a patgenos

necrotizantes (Alternaria, Botrytis), indicando papel duplo destes
hormnios: na ISR e na resistncia basal
Pieterse et al, 1998

14

05/06/2014

Mutantes para etileno e AJ no apresentam ISR

P/P;M

Salicylate
nahG

mutantes
etr e jar

Vias de sinalizao da ISR

Number of Pseudomonas syringae pv tomato bacteria in challenged

leaves of control plants and Pseudomonas fluorescens WCS417r and
avirulent P. s. tomatotreated Arabidopsis plants

catecol

ISR (-)

Patgeno
necrotrfico

PGPR
Pieterse et al, 1998

Vias de sinalizao da ISR

No entanto, mutantes NIM1/NPR1 no respondem a ACC e MeJA

cido jasmmico

P/P;M

Etileno

npr1/
nim1

Salicylate
nahG
catecol

X
ISR (-)

Patgeno
necrotrfico

PGPR

ET e JA atuam antes de
NPR1/NIM1 na cascata de eventos

Pieterse et al, 1998

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05/06/2014

Choudhary & Johri , 2009

Walters & Heil, 2007

Interessante......
Vias do JA e ET tambm atuam
contra insetos - IHR

IRH induced resistance against

herbivores

ISR

Inseto
mastigador

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05/06/2014

Acido jasmnico na sinalizao para ISR/IRH

(Proteinases inhibitors)

Etileno e JA: envolvimento em

resistncia a insetos...
Dano s clulas induz a liberao de cido
linoleico das membranas que enzimaticamente
convertido a JA

Heil & Ton, 2008

SAR

W/HIR

ISR

....mas qual o papel do etileno e JA

no contexto de ISR?
SPR2
SPR2

Alguns agentes microbianos (necrotizantes) produzem danos celulares

semelhantes queles produzidos por insetos mastigadores...
da a ativao da via ET/JA

TMV x Tabaco

spr2

Sem sinal
sistmico

spr2
suppressor of
prosysteminmediated
responses2
(spr2),

Arabidopsis x

Alternaria brassicicola.

SA mediated

Et/JA mediated

Pieterse & Van Loon, 2004

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05/06/2014

H uma clara troca de sinais (cross-talk) entre

via de defesa a insetos e a patgenos
De fato ataques de insetos esto associados a maior resistncia
a patgenos...
Mas por outro lado, aplicao de INA e BTH esto associados com
inibio de respostas dependentes de AJ e conseqente aumento de
suscetibilidade a insetos..

Pode haver a induo de resistncia

utilizando rota de AS e JA/Et ao
mesmo tempo????
possvel....mas apenas em certos graus...

Walters & Heil, 2007

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05/06/2014

The priming state...

Gene R

Spoel et al., 2007

Conrath, 2009

Conrath, 2011

19

05/06/2014

A induo da resistncia
p
um custo para
p
a
representa
planta!?

Conrath, 2011

A induo da resistncia representa um

custo para a planta!?
Custo X Benefcio

A induo da resistncia representa um

custo para a planta!?
Alocao de recursos
CAPACIDADE DE DEFESA
Trade-off
CRESCIMENTO / PRODUO

(Treutter 2005)

Plantas apresentam um pool limitado de recursos que podem ser investidos

em crescimento / produo ou em defesa

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05/06/2014

Fotossntese: metabolismo dos carboidratos

Primary metabolism pathways involved in plant

defense

Bolton., 2009

Biossntese de metablitos secundrios

Expresso gnica durante

interao incompatvel

Xanthomonas campestris pv. vesicatoria

x
tomato

Classification of Xanthomonas-regulated genes

into functional categories based on sequence
similarity to known genes

Differential expression of Xanthomonasregulated genes upon Xanthomonas

campestris pv. vesicatoria T3 infection as
compared with mock inoculation.

Alcalides, AJ

Schmidt et al., 2005

Gibly et al., 2004

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05/06/2014

A induo da resistncia representa

um custo para a planta!?

FIM
Bolton., 2009

Condio desejada

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