Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
Original
Abstract
The AOAC standard methodology for determination of vitamin C in juices and preparations employs a titration with the indicator
2,6-di-chlorophenol-indophenol. This technique presents difficulties when samples with intense coloration are analyzed. Considering the
need for a more adequate methodology to deal with these samples, adaptations of the traditional method were performed and their efficacy
was verified. Comparative tests were performed on the standard methodology, the modified methodology and the chromatography method.
Six different jelly fruits were analyzed and the proposed modifications were considered satisfactory, because these results were closest to the
chromatographic results. The system proved to be linear, repeatable (standard deviation of 2.50%), with high recovery (102.10%) and an
economy of 92.88% of reagents was achieved. Concentrations were between 0 to 6.08 mg of ascorbic acid per 100 g of sample.
Keywords: ascorbic acids; 2,6-diclorophenol-indophenol; methodology.
1 Introduo
Em 1937, Albert Von Szent Gyrgyi ganhou o prmio Nobel
pela descoberta de um composto capaz de curar o escorbuto,
uma enfermidade comum na poca; este composto conhecido
como cido ascrbico (AA). Apesar de apresentar caractersticas
nutricionais, atualmente o interesse por esse cido est voltado
sua capacidade antioxidante (BARATA-SOARES etal., 2004;
NEVES etal., 2008). No organismo humano, essa caracterstica
est relacionada captura de radicais livres txicos e outras
espcies reativas de oxignio, substncias que esto associadas
com diversos danos e doenas, como doenas cardiovasculares,
certas complicaes pr-natais, tumores malignos, inflamaes,
catarata, mal de Parkinson e Alzheimer, bem como acelerao
do processo de envelhecimento celular (SIKORA; CIESLIK;
LESZCZYNSKA, 2008). O AA atua ainda junto formao de
tecido conjuntivo e transporte de ons (BARATA-SOARESetal.,
2004). Casos de toxicidade envolvendo a ingesto de vitamina C
so poucos, uma vez que se trata de uma vitamina hidrossolvel
e regularmente excretada pelo corpo, no entanto, doses
excessivas podem estar relacionadas a clculos renais e, em casos
244
2 Materiais e mtodos
Foram utilizadas amostras de 10 geleias diferentes, cedidas
pelo fornecedor Klaus J. G. Bouillon ME: acerola com morango
(A), laranja (B), rosela (C), acerola com goiaba (D), acerola com
rosela (E), acerola com man (F), acerola com maracuj (G),
acerola (H), acerola com banana (I) e goiaba com rosela (J).
Foram utilizados cido l-ascrbico da marca Synth,
brometo de hexadecil-trimetil amnio (citrimida) da Sigma,
2,6-diclorofenol-indofenol (DCFI) da Fluka, fosfato de sdio
anidro, acetato de sdio cristalino e cido ortofosfrico da
Merck e EDTA da Reagen.
Logo aps o recebimento, as amostras foram armazenadas
sob refrigerao em frascos de colorao mbar. As extraes
foram realizadas individualmente e imediatamente antes
das titulaes, de modo a minimizar a exposio a agentes
degradantes.
A metodologia original (mtodo I) foi realizada segundo
o indicado pela AOAC (967.21): 0,5 g de amostras foram
homogeneizadas em 50 mL de cido metafosfrico 1% por
3minutos. A soluo resultante foi titulada com DCFI (50 mg
de DCFI e 20 mg de bicarbonato de sdio em 100 mL de gua
destilada). O indicador DCFI foi padronizado com 10 mL de
uma soluo padro de 10 mg.100 mL1 de cido l-ascrbico.
O ponto final da titulao foi definido no momento em que
a soluo titulada apresentou colorao rosa, reservando-se
um perodo de 15 segundos para a confirmao do ponto de
viragem.
Para o clculo da quantidade de AA presente na amostra,
foi aplicada a Equao 1:
C=
V f 100
m
(1)
10 c
p
(2)
(3)
3 Resultados e discusso
O estudo, inicialmente, buscava apenas verificar a
quantidade de AA presente nas amostras de geleias de frutas
atravs da metodologia indicada pela AOAC, 1997, porm,
durante o decorrer das anlises, houve dificuldade em se utilizar
esta metodologia para amostras de intensa colorao. Outro
problema foi quanto necessidade de extrao das amostras,
uma vez que se trata de amostras slidas e a metodologia inicial
foi desenvolvida para alquotas lquidas (sucos e preparado).
Como a vitamina C um composto de grande instabilidade
frente temperatura, luz e tambm ao oxignio, para resultados
precisos, necessrio que os agentes degradantes tenham
sua ao minimizada. As amostras foram armazenadas sob
refrigerao (aproximadamente 4 C), em frascos mbar
bem vedados e com ausncia de luz. A extrao foi realizada
imediatamente antes da titulao e as anlises procederam em
ambiente com pouca luz.
A metodologia indicada pela AOAC, 1997 prev o uso de
cido oxlico como soluo extratora, porm Aldrigue (1998),
em seu estudo, verificou que a extrao do AA mais eficiente
quando se utiliza o cido metafosfrico em substituio ao
cido oxlico ou apenas gua. O cido metafosfrico apresenta
ainda a capacidade de precipitar protenas e inativar enzimas do
grupo oxidase. Deste modo, no presente estudo foi empregada
a extrao do composto utilizando uma soluo de cido
metafosfrico 1%. Aldrigue (1998) verificou tambm que quanto
maior o tempo no qual a soluo extratora entra em contato
com a amostra, menor a quantidade de AA detectada; fato
que pode ser explicado pela alta instabilidade que a vitamina
apresenta. Alto tempo de agitao pode favorecer a extrao
da vitamina da matriz, porm favorece tambm a degradao
dessa vitamina.
Em um primeiro ensaio foi adicionando o cido
metafosfrico 1% a 0,5 g de amostra e essa soluo foi agitada
manualmente, porm a amostra no se solubilizou totalmente,
o que impede a eficincia do processo. A extrao utilizando
um ultrassom se mostrou mais adequada. Para evitar maiores
degradaes, um curto perodo de extrao foi proposto
(3minutos). Logo aps este processo a soluo foi titulada.
246
12
3,0
AA (mg)
2,0
AA (mg.mL1)
y = 0,244x + 0,007
R2 = 1,000
2,5
1,5
1,0
8
6
4
2
0,5
0
y = 49,03 x1
R2 = 0,99
10
0
0
5 6 7
DCFI (mL)
10 11
10
20
30
40
50
60
Padro
1,88
0,03
2,88
2,03
1,59
1,86
2,91
1,92
0,77
0,32
0,00
0,01
0,09
0,00
0,01
0,01
0,05
0,07
0,02
0,01
Adaptado
2,10
0,01
0,01
2,00
1,93
1,72
3,15
4,49
1,01
0,33
0,00
0,00
0,00
0,03
0,09
0,00
0,05
0,05
0,01
0,00
CLAE
3,29
0,00
0,00
2,97
3,20
2,74
3,81
6,08
1,23
1,61
0,06
0,00
0,00
0,02
0,00
0,09
0,04
0,09
0,01
0,03
4 Concluses
O mtodo desenvolvido no presente estudo demonstrou
ser confivel e apresentou vantagens quando comparado com
o mtodo original indicado pela AOAC, 1997, quando ambos
so comparados ao mtodo cromatogrfico. A quantidade
de reagentes utilizados no mtodo desenvolvido diminuiu
consideravelmente em relao ao anterior, diminuindo tambm
a quantidade de resduo gerado. A avaliao da eficincia da
metodologia foi realizada de modo que sua repetibilidade foi
satisfatria para a amostra e solues de padres individuais.
A quantidade de vitamina C encontrada nas geleias variou de
0 a 6,08 mg de cido ascrbico por grama de amostra. Pode-se
afirmar que o objetivo do presente trabalho foi concludo, de
modo que a determinao empregando o indicador DCFI foi
facilitada, permitindo que amostras de intensa colorao fossem
analisadas com maior preciso, porm ainda h problemas
quando se analisam amostras de colorao rosa intenso.
Cinc. Tecnol. Aliment., Campinas, 30(1): 244-249, jan.-mar. 2010
Agradecimentos
Os autores agradecem ao fornecedor Klaus J. G. Bouillon ME
por conceder gentilmente as amostras de geleia de frutas para o
presente estudo e Capes o financiamento dos estudos.
Referncias bibliogrficas
Aldrigue, M. L. Desenvolvimento e validao de metodologia
analtica, utilizando a CLAE, para determinao de vitamina
C em frutas e seus principais produtos. Campinas, 1998. Tese
(Doutorado em Cincia de Alimentos) - Universidade Estadual de
Campinas - UNICAMP.
AL-ZUBAIDY, M. M. I.; KHALIL, R. A. Kinetic and prediction
studies of ascorbic acid degradation in normal and concentrate
local lemon juice during storage. Food Chemistry, v. 101, n. 1,
p.254-259, 2007.
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS - AOAC.
Official methods of analysis of the AOAC. Washington, 1997.
p.16-17. (v. 2)
Arrigoni, O.; Tullio, M. Ascorbic acid: much more than an
antioxidant. Biochemical et Biophysical Acta, v.1569, n.1, p.1-9,
2002.
Aydogmus, Z.; Cetin, S. M. Determination of Ascorbic Acid in
Vegetables by Derivative Spectrophotometry. Turkish Journal of
Chemistry, v.26, n.5, p.697-704, 2002.
Barata-Soares, A. D.etal. Ascorbic acid biosynthesis: a precursor
study on plants. Journal of Brazilian Chemical Society, v.16, n.3,
p.147-154, 2004.
Cordenunsi, B. R.etal. Influence of cultivar on quality parameters
and chemical: composition of strawberry fruits grown in Brazil.
249