Normas para procedimentos laboratoriais

Exames especficos pesquisa de anticorpos IgM por testes sorolgicos (ELISA); pesquisa de
vrus (tentativa de isolamento viral); pesquisa de genoma do vrus dengue (RT-PCR); pesquisa
de antgeno NS1; ou ainda estudo anatomopatolgico seguido de pesquisa de antgenos virais
por imunohistoqumica.
Sorologia o mtodo de escolha para a confirmao laboratorial na rotina. Existem
vrias tcnicas, sendo a captura de IgM por ELISA (MAC ELISA) o mtodo de escolha, pois
detecta infeces atuais ou recentes. Baseia-se na deteco de anticorpos IgM para o VDEN.
Na maioria dos casos, somente uma amostra de soro necessria para a confirmao
diagnstica, contudo um resultado negativo em amostra de soro coletada em fase recente (6 a
10 dias aps o incio dos sintomas) no exclui o diagnstico de dengue, uma vez que, em
alguns casos, os nveis de IgM tornam-se detectveis pelo teste somente aps esse perodo.
Isolamento viral o mtodo mais especfico (padro ouro) para o isolamento e a identificao
do sorotipo do VDEN responsvel pela infeco. Pode ser realizado em amostras de sangue,
lquido cfalo-raquidiano (LCR) e fragmentos de vsceras (fgado, bao, corao, pulmo, rim e
crebro). A colheita da amostra de sangue dever ser feita na primeira semana da doena,
durante o perodo de viremia, preferencialmente at o quinto dia do incio dos sintomas.
Deteco do cido nuclico viral pelo mtodo da transcrio reversa seguida da reao em
cadeia da polimerase (RT-PCR) no utilizada na rotina diagnstica, contudo tem
importncia para o diagnstico dos casos em que as tcnicas de rotina foram insuficientes para
a definio diagnstica, especialmente nos casos que evoluram a bito, ou ainda nas
urgncias. O mtodo pode ser realizado em amostras de sangue, soro, lquido cfaloraquidiano (LCR), fragmentos de vsceras (fgado, bao, linfonodos, corao, pulmo, rim e
crebro) e ainda em lotes de mosquitos vetores.
Deteco de antgenos NS1 mtodo imunoenzimtico (ELISA) que permite a deteco de
antgenos virais especficos de dengue do tipo NS1. um mtodo que, a princpio, bastante
sensvel e especfico e deve ser utilizado em pesquisas e nos casos graves. O Ministrio da
Sade disponibiliza kits de teste NS1 Elisa para triagem das amostras para isolamento viral em
unidades sentinelas. O sangue deve ser colhido nos primeiros 3 dias do incio dos
sintomas e a responsabilidade do transporte da amostra fica a cargo do municpio que
deve entregar a amostra dentro das primeiras 24 horas da coleta ou mant-la
armazenada a menos 70 negativos (nitrognio lquido ou gelo seco).
Diagnstico histopatolgico realizado em material obtido aps a morte do paciente. As
leses anatomopatolgicas podem ser encontradas no fgado, bao, corao, linfonodos, rins e
crebro. O diagnstico presuntivo.
Imunohistoqumica esse mtodo permite a deteco de antgenos virais em cortes de tecidos
fixados em formalina e emblocados em parafina, corados pela fosfatase alcalina ou peroxidase
marcada com anticorpo especfico. Essa tcnica bastante sensvel e especfica, sendo
considerada exame confirmatrio e deve ser utilizada aps o diagnstico histopatolgico
presuntivo.