UNIVERSIDADE FEDERAL DE SO JOO DEL-REI

CAMPUS ALTO PARAOPEBA CAP

ANLISE INSTRUMENTAL EXPERIMENTAL APLICADA ENGENHARIA DE

BIOPROCESSOS

Roteiro de aula prtica

Determinao de cafena por mtodo espectrofotomtrico por absoro

molecular na regio do ultravioleta

Professor: Vagner Fernandes Knupp

OURO BRANCO - MG
Verso 2016

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 Determinao de cafena por mtodo espectrofotomtrico por absoro
molecular na regio do ultravioleta

Introduo

A espectroscopia e fotoespectrometria de absoro molecular podem ser aplica

tambm na regio do ultra-violeta. Mas devemos tomar cuidados redobrados,
pois alem nesta regio diversos grupos cromforos apresentam absoro
sendo uma regio muito suscetvel a interferncias espectrais.

A determinao da concentrao de substncias componentes de alimentos

de fundamental importncia na industria de alimentos, pois muitos aditivos
alimentares se consumidos em excesso podem causar problemas de sade.

A cafena figura 1 - um alcalide muito consumido e OMS inclusive

recomenda seu consumo dirio, mas ela tambm recomenda limites de
consumo porque pode gerar malefcios se consumida em excesso. O seu
consumo esta relacionado a produtos como o caf e alguns chs, mas a
presena em concentraes altas em alguns refrigerantes pode implicar em
desequilbrio da dieta levando a problemas de sade.

Figura 1 Formula estrutural da cafena

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Objetivo

Determinar em refrigerante a concentrao de cafena presente usando

absoro fotoespectromtrica na regio do ultra violeta. Este mtodo
aplicvel a refrigerantes e refrescos que contenham cafena (trimetilxantina),
natural ou adicionada, e baseia-se na extrao com clorofrmio em meio
alcalino e determinao por espectrofotometria na regio do ultravioleta.

Material

Espectrofotmetro UV/VIS,
cubeta de quartzo de 10 m,
balana analtica,
funil de filtrao,
algodo hidrfilo,
funil de separao de 250 mL,
bquer de 100 mL,
pipeta graduada de 10 mL ou volumtricas de 1, 2, 3, 4, 5, 10 e 20 mL,
proveta de 50 mL e
bales volumtricos de 50 e 100 mL.

Reagentes

Cafena com pureza mnima de 9%

Clorofrmio, grau espectrofotomtrico
Soluo redutora Pese 5 g de sulfito de sdio e 5 g de tiocianato de
potssio, dissolva em gua e dilua a 10 mL em balo volumtrico.
Soluo de hidrxido de sdio a 25% m/v Soluo de permanganato de
potssio a 1,5% m/v
Soluo de cido fosfrico -- Dilua 15 mL de cido fosfrico
(d=1,69g/cm3) em 85 mL de gua
Sulfato de sdio anidro

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 Soluo-padro de cafena Pese 100 mg de cafena, dissolva e dilua
em clorofrmio num balo volumtrico de 100 mL. Pipete 10 mL da
soluo-estoque de cafena e dilua a 100 mL com clorofrmio. Esta
soluo contm 0,1 mg de cafena por mL de clorofrmio.

1. Parte Extrao
Procedimento

Eliminao do gs do refrigerante.
1. Adicione aproximadamente 100,00 mL da amostra em um bquer de
250 mL.
2. Aquea at que a amostra entre em ebulio e perca todo gs carbnico
dissolvido nela (5 a 10 min de fervura).
3. Pipete de 50,00 mL da amostra desgaseificada para um funil de
separao.
4. Junte 10 mL da soluo de permanganato de potssio a 1,5 % e agite.
5. Aps 5 minutos, junte 20 mL da soluo redutora com agitao contnua.
6. Adicione 2 mL da soluo de cido fosfrico e agite.
7. Adicione 2 mL da soluo de hidrxido de sdio a 25 % e agite.
Repita extrao trs vezes.
8. Extraia a cafena com de 20 mL de clorofrmio e agite vigorosamente
por 30 segundos, inverta o funil e abra a torneira para aliviar a presso.
Repita mais duas vezes a agitao.
9. Aps a separao a frao orgnica estar na parte superior, retire a
camada inferior em um bequer e reserve. Transfira a frao orgnica
para um funil com sulfato de sdio anidro e algodo e recolha os
filtrados em um mesmo balo volumtrico de 100 mL. Lave a haste do
funil de separao e o filtro com pores de 2 mL de clorofrmio, aps
cada extrao.
10. Volte a frao aquosa para o funil e repita o item 8.
11. Complete o volume com clorofrmio. Reserve para a anlise.

Reserve o extrato para ser analisado

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 2. Parte Construo da curva analtica

Curva-padro

Pipete 1, 2, 3, 4, 5 e 6 mL da soluo-padro de cafena para bales

volumtricos de 50 mL e complete o volume com clorofrmio.
Usando a soluo feita com 6 mL de cafena faa a varredura de 200 a
350 nm e verifique se o mximo de absoro ocorre em 276 nm.
Determine a absorbncia a 276 nm, usando clorofrmio como branco e
faa os registros na tabela 1.
Trace a curva padro, registrando os valores de absorbncia nas
ordenadas e as concentraes de cafena em mg/100 mL de clorofrmio
nas abcissas.

Tabela 1 Curva analtica

Volume soluo padro Concentrao em Abs (276nm)
(mL) mg/100mL
0,00 (branco)
1,00
2,00
3,00
4,00
5,00
6,00
Amostra
Amostra

Faa o tratamento analtico adequado para curva de padronizao

externa.

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Tratamento do extrato das amostras

Faa a leitura da absoro diretamente se a amostra tiver baixo teor de

cafena (at 25 mg/100mL de amostra)
Para amostras com alto teor de cafena, faa uma diluio pipetando
uma alquota de 10 mL para balo volumtrico de 50 mL, complete o
volume com clorofrmio e faa a leitura da absorbncia a 276 nm.
Calcule o erro devido a componente da curva analtica.
Calcule a concentrao de cafena na amostra usando a curva-padro e
leve em conta o fator de diluio.

Referncia Bibliogrfica

Mtodo 470 - Captulo X - Bebidas No Alcolicas. Mtodos Fsico-

Qumicos para Anlise de Alimentos - 4 Edio 1 Edio Digital
http://www.ebah.com.br/content/ABAAABNsgAI/adolf-lutz-cap10
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official
methods of analysis of the Association of Official Analytical Chemists
(method 962.13) Arlington: A.O.A.C., 1995. chapter 29. p. 3.
SKOOG, D.A.; WEST, D.M.; HOLLER, F.J.; CROUCH, S.R. Fundamentos de
Qumica Analtica. 8a Edio, So Paulo: Thomson, 2007. 999 p.
HARRIS, D.C. Anlise Qumica Quantitativa. 6 edio, Rio de Janeiro: LTC,
2005. 876 p.