Estudo da velocidade da reao

enzimtica e como ela se altera em

funo de diferentes parmetros

Importante abordagem para o

entendimento do mecanismo de ao
de uma enzima.
Vrios fatores afetam a atividade de uma
enzima pH, temperatura e substrato
Parmetro mais importante para
comparar a atividade e o tipo de reao
das enzimas a concentrao do
substrato

Atividade enzimtica afetada pelo pH

O pH pode influenciar a atividade de uma enzima atravs de maneiras

distintas. Primeiramente, o pH pode levar desnaturao proteica.

O pH tambm pode interferir na atividade de uma enzima alterando o

padro de cargas de um determinado stio ativo ou cataltico, ou alterando
a conformao geral da protena.

Atividade enzimtica afetada pela temperatura

O aumento de temperatura aumenta a taxa de reao enzimtica devido

ao aumento de energia cintica das molculas participantes da reao.

A temperatura pode interferir nas interaes que mantm as estruturas

secundrias e tercirias (pontes de hidrognio e interaes hidrofbicas),
podendo levar desnaturao protica.

A concentrao do substrato afeta a velocidade das

reaes catalisadas por enzimas
enzima

Curva que relaciona [S] e V0 uma hiprbole

Concentraes
baixas de
substrato ocorre
aumento linear
entre
Velocidade(V0) e o
Substrato [S]

[S] V0
aumenta cada vez
menos at atingir
um patamar (Vmax)

Curva relacionando [S] e V0 pode ser expressa algebricamente

Equao de Michaelis-Menten

Constante de Michaelis

TAREFA Fazer para entregar a deduo da equao de Michaelis-Menten

O que Km ?

a concentrao do substrato
onde se obtm metade da
velocidade mxima da reao

TAREFA Demonstrar algebricamente o que Km usando a equao de

Michaelis-Mentem e a definio de Km.

Km e a Vmax varia de enzima para enzima caracterizandoas e pode variar tambm com o substrato
Rubisco
Km CO2 - 9M
Km O2 - 350 M
Hexoquinase Glicose Km - 0,05 M
Frutose Km -1,5 M

Km no uma medida de afinidade da enzima

pelo substrato mas sim a concentrao do
substrato onde se obtm a metade da
velocidade mxima da reao

Equao de Michaelis-Menten

Transformaes da equao de Michaelis-Menten

Equao de Lineweaver-Burk ou duplo-recproco
Inverso dos dois lados da equao de Michaelis-Menten
Separao dos componentes do lado direito.

Equao de Lineweaver-Burk ou duplo-recproco

inverter

Separar
componentes e
resolver

Km

Com essa
transformao
matemtica passa-se
a trabalhar com uma
reta e no com uma
hiprbole, mais fcil.

Vrias informaes
podem ser obtidas
com esse grfico

a = coeficiente angular

y=0

b = coeficiente linear

x=0

x=0

y=0

Atravs da anlise da cintica da reao pode-se descobrir qual

o mecanismo de ao da reao com relao ao substrato

A atividade de todas as enzimas pode ser

inibida por determinadas molculas

Inibidores enzimticos

So molculas que interferem com a

catlise diminuindo ou interrompendo a
reao enzimtica

Como so classificados os inibidores de

acordo com seu mecanismo de ao?

Reversveis

Irreversveis

Inibio competitiva
Inibio incompetitiva
Inibio mista ou no competitiva

Como eles atuam?

Reversveis - Inibio competitiva

Inibidor compete com o substrato pelo sitio ativa da enzima

Inibidor tem estrutura molecular semelhante do substrato

[S] deslocar inibidor do

stio ativo e manter Vmax
V max constante na presena do inibidor devido
grande quantidade de substrato

Reversveis - Inibio incompetitiva

Inibidor se liga em um
stio diferente do centro
ativo, impede a reao do
complexo ES.

Independente da concentrao do substrato o Km e a

Vmax esto alterados

Reversveis - Inibio mista ou no competitiva

Inibidor se liga tanto ao

complexo ES como
enzima, em um stio
diferente do centro ativo

Independente da concentrao do substrato o

Km e a Vmax esto alterados

Inibio irreversvel
Inibidor se liga de maneira estvel ou covalente
com um grupo funcional importante para a
atividade enzimtica
Utilizados experimentalmente para definir os
aminocidos essenciais do centro ativo das
enzimas
Inativar determinadas enzimas em situaes
biolgicas importantes

Este o mecanismos de ao dos inseticidas organofosforados, como o

malathion e o parathion.
Reagem com o resduo S1 de serino-enzimas, formando um complexo irreversvel.
Uma das enzimas altamente sensvel a esses compostos a
acetilcolinesterase, responsvel pela metabolizao do neurotransmissor
acetilcolina em neurnios centrais e perifricos (envenenamento por
organifosforados)

Salicina, extrada da casca do Salgueiro Branco ou Choro (Salix alba) - hoje sintetizada

No metabolismo celular
grupos de enzimas
trabalham em conjunto
onde o produto de uma
o substrato da outra
Via metablica
Nessas vias existe
sempre uma enzima que
determina a velocidade
com que o grupo vai
trabalhar enzimas
reguladoras

Regulam a velocidade das reaes metablicas

So reguladas por determinados sinais

Tipos:

Enzimas alostricas
Enzimas reguladas por modificaes
covalentes reversveis
Enzimas reguladas por protelise

Enzimas alostricas
Possui stios reguladores
para a ligao do
modulador especifico
Maiores e mais
complexas que as no
alostricas (mais que uma
cadeia polipeptdica)

Sofrem modificaes
conformacionais em
resposta ligao do
modulador (positivo ou
negativo)

Enzimas reguladas por modificaes

covalentes reversveis

Diferentes grupos podem se ligar

molcula enzimtica e regular sua atividade
Grupos ligados covalentemente e
removidos pela ao de outras enzimas

Enzimas reguladas por protelise

Enzimas proteolticas mecanismo de proteo

Bothrops (Jararacas)
87% acidentes no
Estado de SP janeiro
a abril sexo
masculino

TAREFA
1 - Procurar o mecanismo de ao do
glifosato e descrever como esse
herbicida exerce sua funo sobre a
atividade da 5-enolpiruvilshiquimato-3fosfato sintase (EPSPS), que tipo de inibio
essa.

TAREFA Fazer para entregar a deduo da equao de Michaelis-Menten

TAREFA Demonstrar algebricamente o que Km usando a equao de
Michaelis-Mentem e a definio de Km.