O que são enzimas?

Catalizadores biológicos
- Aceleram reações químicas específicas sem
a formação de produtos colaterais

Reagentes = substratos
Local onde a reação ocorre = sítio ou centro
ativo

S + E  ES  EP  P + E
 Características das enzimas

1 - Grande maioria das enzimas são proteínas

(algumas moléculas de RNA tem atividade catalítica – ribozimas)

2 - Funcionam em soluções aquosas diluídas,

em condições muito suaves de temperatura e
pH (mM, pH neutro, 25 a 37oC)
Pepsina estômago – pH 2
Enzimas de organismos hipertermófilos (crescem em
ambientes quentes) atuam a 95oC
3 - Apresentam alto grau de especificidade por
seus reagentes (substratos)
4 - Peso molecular: varia de 12.000 à 1 milhão
daltons (Da), são portanto muito grandes
quando comparadas ao substrato.

Molécula que se
liga ao sítio Região da enzima
ativo e que vai onde ocorre a
sofrer a ação da reação = sítio ativo
enzima =
substrato
5 - A atividade catalítica das Enzimas depende
da integridade de sua conformação protéica
nativa – local de atividade catalítica (sítio
ativo)

glicose

catalase
Tetrâmero – 60KDa ~
500aa hexoquinase
98000 Da 920aa

Sítio ativo e toda a molécula proporciona um

ambiente adequado para ocorrer a reação
química desejada sobre o substrato
Nomes comuns de enzimas

Normalmente se adiciona o sufixo ase ao

nome do substrato ou à atividade
realizada:

Amilase – hidrolisa o amido

Amido sintetase – síntese do amido
DNA-polimerase – polimeriza DNA
Transaminase ou aminotransferase
Hidrolase
Classificação das enzimas
6 Classes de acordo
com o tipo de
reação/função

Comitê de Nomenclatura da União Internacional

de Bioquímica e Biologia Molecular
http://www.chem.qmul.ac.uk/iubmb/enzyme/
Como as enzimas agem?

 Enzimas fornecem um ambiente

específico para tornar uma reação
biológica termodinamicamente
mais favorável.

As enzimas aumentam a

velocidade das reações
químicas diminuindo a
energia de ativação da reação
Energia de ativação é dada pela diferença energética
entre o estado fundamental e o de transição

As enzimas aumentam a velocidade das reações

diminuindo a energia de ativação das reações
Como as enzimas diminuem a energia de ativação?

Várias ligações e interações entre os resíduos de

aminoácidos do centro ativo e o substrato proporcionam a
ocorrência da reação química necessária – aumentando a
velocidade da reação química
 Direcionam o
substrato para a
posição adequada
dos grupos reativos

Proporciona a
associação e a aquisição
de cargas elétricas
importantes para a
reação

Substrato posicionado no sítio ativo da enzima: grupos

catalíticos funcionais auxiliam a quebra e a formação de
ligações por meio de uma variedade e mecanismos
Substrato posicionado no sítio ativo da enzima:
grupos específicos (grupos catalíticos) auxiliam
a quebra e a formação de ligações por meio 3
tipos de mecanismos

Três tipos de mecanismos catalíticos:

 Catálise ácido-base geral

 Catálise covalente
 Catálise por íons metálicos
 Catálise ácido-base geral (transferência de prótons de
um substrato ou de um intermediário)

Esse tipo de catálise ocorre na maioria das enzimas

Aminoácidos que
recebem ou doam
prótons nos
centro ativos das
enzimas

Isso explica a
dependência do
pH na atividade
das enzimas
Catálise covalente (formação de ligação covalente
transitória entre o substrato e a enzima)

exemplo: reação de hidrólise ocorre em dois passos

 Catálise por íons metálicos (íons metálicos ligados às
enzimas auxiliam a reação)

Nesse tipo de catálise o íon (zinco, magnésio, cobre

ou cálcio) estão ligados a aminoácidos do centro
ativo e participam da catálise orientando o substrato
ou estabilizando o complexo ES eletricamente.

Reação do CO2 com

H2O – anidrase
carbônica
Vários fatores afetam a velocidade de uma reação enzimática:

pH

O pH pode influenciar
a atividade de uma
enzima através de
maneiras distintas.
Primeiramente, o pH
pode levar à
desnaturação proteica.

O pH também pode interferir na atividade de

uma enzima alterando o padrão de cargas de um
determinado sítio ativo ou catalítico, ou alterando
a conformação geral da proteína.
Temperatura
O aumento de
temperatura aumenta
a taxa de reação
enzimática devido ao
aumento de energia
cinética das
moléculas
participantes da
reação.

A temperatura pode interferir nas interações que mantém

as estruturas secundárias e terciárias (ligações de
hidrogênio e interações hidrofóbicas), podendo levar à
desnaturação protéica.
Concentração do Substrato

Curva que relaciona [S] e V0 é uma hipérbole, concentrações

mais baixas aumento linear da velocidade, concentrações mais
altas velocidade atinge um valor máximo
Concentrações
baixas de
substrato ocorre
aumento linear
entre
Velocidade(V0) e o
Substrato [S]

 [S]  V0
aumenta cada vez
menos até atingir
um patamar (Vmax)

Curva relacionando [S] e V0 pode ser expressa algebricamente

Equação de Michaelis-Menten

Constante de Michaelis
O que é Km ?

É a concentração
do substrato
onde se obtém
metade da
velocidade
máxima da reação

O Km é específico
para cada enzima e
substrato

O Km não varia com a concentração da enzima e sugere

a afinidade da E pelo S
Baixo Km alta afinidade Alto Km baixa afinidade
Equação de Michaelis-Menten

Transformações da equação de Michaelis-Menten

Equação de Lineweaver-Burk ou duplo-recíproco

Inversão dos dois lados da equação de Michaelis-Menten
Separação dos componentes do lado direito.
 Equação de Lineweaver-Burk ou duplo-recíproco

inverter

Separar
componentes e
resolver

y a x + b
1
=
Km
 Com essa transformação matemática
passa-se a trabalhar com uma reta e
não com uma hipérbole, mais fácil.

a = coeficiente angular

y=0 b = coeficiente linear

x=0
 A atividade de todas as enzimas pode ser
inibida por determinadas moléculas

Inibidores enzimáticos

São moléculas que interferem com a

catálise diminuindo ou interrompendo a
reação enzimática
Como são classificados os inibidores de
acordo com seu mecanismo de ação?

Reversíveis Irreversíveis

Inibição competitiva
Inibição incompetitiva
Inibição mista ou não competitiva

Como eles atuam?

 Reversíveis - Inibição competitiva
Inibidor compete com o substrato pelo sitio ativa da enzima

Inibidor tem estrutura molecular semelhante à do substrato

 [S] deslocar inibidor do sítio ativo e manter Vmax

Enzima que realiza o
primeiro passo da
síntese de colesterol

Substrato da enzima
(3-hidroxi-3-metilglutaril-CoA)

Estrutura similar

Droga para combater o

aumento de colesterol
endógeno (inibidor)
O glifosato mata as plantas por inibir competitivamente a enzima 5-
enolpiruvoil-shikimato-3-fosfato sintetase (EPSPS), que sintetiza os
aminoácidos aromáticos: fenilalanina, tirosina e triptofano.
A EPSPS catalisa a reação do shikimato-3-fosfato (S3P) e do
fosfoenolpurivato (PEP) para formar EPSP e fosfato.
Reversíveis - Inibição incompetitiva

Inibidor se liga em
um sítio diferente
do centro ativo,
impede a reação
do complexo ES e
formação do
produto.

Independente da concentração do substrato o Km e a

Vmax estão alterados, diminuem.
 Reversíveis - Inibição mista e não competitiva

Inibidor se liga tanto

ao complexo ES
como à enzima, em
um sítio diferente do
centro ativo

O Vmax é alterado e o Km pode (mista) ou não (não

competitiva) se alterar
Inibição irreversível

Inibidor se liga de maneira estável ou covalente

com um grupo funcional importante para a
atividade enzimática

Utilizados experimentalmente para definir os

aminoácidos essenciais do centro ativo das
enzimas

Inativar determinadas enzimas em situações

biológicas importantes
 Este é o mecanismos de ação dos inseticidas
organofosforados, como o malathion e o parathion.

Absorção via pele, inalação e ingestão alimentos contaminados.

Metabolismo hepático lento - intoxicação

Reagem com o resíduo de serina no sitio ativo das serino-

enzimas, formando um complexo irreversível.

Uma das enzimas altamente sensível a esses compostos é

a acetilcolinesterase, responsável pela metabolização do
neurotransmissor acetilcolina em neurônios centrais e
periféricos (envenenamento por organofosforados)
Sintomas – depressão respiratória, letargia, convulsões, coma
•Regulam a velocidade das reações metabólicas
•São reguladas por determinados sinais moleculares

•Tipos:
Enzimas alostéricas
Enzimas reguladas por modificações
covalentes reversíveis
Enzimas reguladas por proteólise
 Enzimas alostéricas

•Possui sítios reguladores

para a ligação do
modulador especifico

•Maiores e mais
complexas que as não
alostéricas (mais que uma
cadeia polipeptídica)

Sofrem modificações
conformacionais em
resposta à ligação do
modulador (positivo ou
negativo)
 Enzimas reguladas por modificações
covalentes reversíveis
•Diferentes grupos
podem se ligar á
molécula
enzimática e
regular sua
atividade
Menos ativa Mais ativa
•Grupos ligados
covalentemente e
removidos pela
ação de outras
enzimas
 Enzimas reguladas por proteólise

Enzimas proteolíticas – mecanismo de

proteção/regulação

Parte da cadeia é
Fatores externos retirada e a enzima
Enzima inativa (autólise ou ação muda sua
de outra protease) conformação
expondo o sítio ativo