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EN Z I MA S
PROPRIEDADES, CINTICA ENZIMTICA E REGULAO DA ACTIVIDADE ENZIMTICA
se atinge o estado de equilibrio Existem outros catalizadores biolgicos, no proteicos, como as ribozimas que so molculas de RNA A estrutura da protena determinante para a eficincia e para a especificidade do enzima. No so necessrios em grande quantidade do enzima em relao ao H2O2 2 H2O + O2 reagente, chamado SUBSTRATO Os enzimas permanecem inalterados Catalizador E activao (J.mol-1) no final do ciclo cataltico, quando ocorre a libertao de produto -75600 Os enzimas so especficos para os Pt coloidal 49140 substratos, mesmo para ismeros 8400 catalase apresentam esteroespecificidade
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EC 1 . 2 . 3 . 4
1. 2. 3. 4. Corresponde classe de enzima (existem 6) Correponde Sub-classe (no caso da classe 1, define o dador de electres) Corresponde Sub-sub-classe (na classe 1, define o aceitador de electres) Esta posio corresponde ao nmero de srie na Subsub-classe
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EC 1 . 1 . 1 . 1
lcool + NAD+ Aldedo ou cetona + NADH + H+ + H- (io hidreto) 1. 2. 3. 4. Corresponde classe de enzima (classe 1, das oxidoreductases) Correponde Sub-classe (no caso da classe 1, define o dador de electres) Corresponde Sub-sub-classe (na classe 1, define o aceitador de electres) Esta posio corresponde ao nmero de srie na Subsub-classe
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Outro exemplo so as cinases, que transferem grupos fosfato do ATP para uma biomolcula
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EC 3.4.21.4
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Actividade especfica a actividade enzimtica (U) por mg de protena. Outro tipo de unidade o katal, que corresponde a 1 mol de substrato por segundo 1 katal = 6 x 107 U aplica-se a actividades muito elevadas A actividade enzimtica deve ser apresentada, definindo tambm a Temperatura, o pH, o tipo de tampo, a concentrao de substrato e a concentrao de cofactores
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Tampo a) concentrao do tampo (fora inica, capacidade de taponar a reaco) b) composio do tampo (fosfatos e cinases!!!!) Temperatura
Deve ser a ptima. Pode ocorrer desnaturao do enzima
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37 C 72 C Temperatura
Coenzyme Q can exist in three oxidation states: the fully reduced ubiquinol form (CoQH2), the radical semiquinone intermediate (CoQH), and the fully oxidized ubiquinone form (CoQ).
Acetil Coenzima A
Coenzyme Q can exist in three oxidation states: the fully reduced ubiquinol form (CoQH2), the radical semiquinone intermediate (CoQH), and the fully oxidized ubiquinone form (CoQ).
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Aconitase (TCA)
Zinc Finger Hemo (metal Fe) Porfirinas outros metais Clorofila (Mg)
3 Zn-finger a promover a ligao ao DNA
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Catlise cido-base envolve a permuta de ies H+ Catlise Covalente formam-se transitoriamente ligaes covalentes entre as molculas de enzima e de substrato, ou do cofactor. Participam as cadeias laterais de Asp, Glu, Ser, Cys e Lis, que fornecem um par de electres a um centro parcialmente positivo no substrato. Podem formar-se ligaes do tipo: ster serina Tioster Cysteina Acilimidazolo-Histidina Base de Schiff lisina anidrido Aspartato e glutamato Hidrolases, oxidoreductase, isomerases, transferases, liases e sintetases
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Aco da Quimotripsina
1 -Catlise cido-base 2 -Catlise covalente
Enzimas
CINTICA ENZIMTICA
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Caso das transaminases, em que o grupo amina fica ligado ao cofactor, fosfato de piridoxal, e sai o oxocido. O cofactor liberta o NH2 e regenerado com a entrada do oxocido, que fica aminado
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P EA EA E
k2
Conceito bsico: A velocidade inicial (v0) deve ser proporcional concentrao de Enzima v0 = k[E0] A velocidade tambm dependente da [substrato] Assim, [E0] = [E] +[EA] e tb [A0] = [A] +[EA]
E+P
Como [E] <<[A] , a cada instante [A0] [A] Se houver um equilibrio na ligao do substrato (k2 << k -1) ento
[ E ].[ A] [ EA]
v0
V .[ A] K m [ A]
donde
A velocidade da reaco dada por v0 = k2[EA] Em que V k2[E0] e corresponde velocidade limite E Km a constande de Michaelis, uma constante de dissociao de EA, na assumpo do equilibrio.
P =V EA EA E
k2
E+P
v0
V .[ A] K m [ A]
V corresponde velocidade limite Km a constande de Michaelis, reflecte a afinidade para o substrato Corresponde concentrao de substrato com a qual se tem metade da V mx
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v0
EA EA E
k2
V .[ A] K m [ A]
=V
E+P
Km a constande de Michaelis, reflecte a afinidade para o substrato Um Km elevado significa uma baixa afinidade, um Km baixo uma alta afinidade
Lembrem-se que a concentrao de substrato em que se consegue metade da velocidade mxima (ou seja, da potencialidade cataltica) do enzima.
O V a velocidade mxima, quando o enzima est saturado de substrato. O V indica o turn over deste enzima (kcat) ou o n de moleculas transformadas por s, por molcula de enzima.
v0
EA EA E
k2
V .[ A] K m [ A]
=V
E+P
Caso prtico: tm dois enzimas NOD1 e NOD2, que usam o mesmo substrato. O NOD1 tem Km = 30 M e V = 10 mol.s-1 O NOD2 tem Km = 2 mM, e V = 300 mol.s-1. Quando a concentrao de substrato de 200 M, qual dos enzimas vai ser o mais eficiente a catalizar este substrato? E se a concentrao de substrato for de 10 mM?
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B EAB EA
k2
P =V E E+P
v0
V .[ A] K m [ A]
A equao de Michealis Menten pode ser aplicada quando h mais do que um reagente, para cada um dos substratos independentemente DESDE QUE o segundo substrato esteja numa concentrao saturante. Ou seja, quando [B] est em excesso, pode-se medir a dependencia da v0 em funo da concentrao de [A] e vice versa. Note-se que os Km para A e para B podem ser muito diferentes.
v0
V .[ A] K m [ A]
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Mtodo de Lineaver-Burk
v0
V .[ A] K m [ A]
Mtodo de Eadie-Hofstee
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[A] v0 1 2 3 4 5 1 5 10 12 13
V -[A] E v0 v2 v3
-a1
-a2
-a3
Km
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semelhana do Km, o Ki baixo indica forte afinidade para o inibidor, logo um inibidor mais forte
1/(1-Ki/Kii)V -Ki
[I]
[I]
[I]
[A]/v0
No-competitiva
-Kii [I]
Km/V
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Os inibidores no so necessriamente susbstncias txicas. Os inibidores podem ser molculas (metabolitos) finais de uma via metablica, que actuam negativamente sobre enzimas do incio da via. A este tipo de regulao chama-se Feedback negativo
Enzimas
REGULAO DA ACTIVIDADE ENZIMTICA
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1.Regulao por modificao covalente irreversvel 2.Regulao por controlo da concentrao de enzima
1. Protelise de zimogneos
Zimogneos so pro-enzimas que esto inactivas. Quando so hidrolisadas por uma protease ou peptidase (reaco de protelise) ficam activos. Exemplo o tripsinognio do suco gstrico.
Tripsinognio Enteropeptidase Tripsina Activao do quimotripsinognio Activao da proelastase Activao da procarboxilase autoactivao
Alostrea
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bibliografia
Capitulo 18, 19 e 20
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Questes
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