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Resumo
Nos ltimos anos, as tcnicas clssicas de preparo de amostra para a determinao de compostos orgnicos em
amostras ambientais e alimentos esto sendo substitudas por tcnicas miniaturizadas que so caracterizadas
pelo baixo custo, alta eficincia, reduzida quantidade de solvente, alm da possibilidade de automao. Dentre
essas tcnicas, a Microextraao Lquido-Lquido Dispersiva (DLLME) apresenta-se como uma interessante
alternativa para o preparo de amostra e est baseada na partio dos analitos de interesse empregando-se
pequenos volumes de uma mistura de solventes (dispersor e extrator). A DLLME apresenta como principais
vantagens a miniaturizao, baixo custo, rapidez, alta eficincia de extrao e pr-concentrao, bem como
potencial para aplicao direta em campo. Esta reviso apresenta fundamentos e aplicaes da DLLME na
determinao de compostos orgnicos em diferentes tipos de amostras.
Palavras-chave
Preparo de amostra; extrao miniaturizada; compostos orgnicos; cromatografia.
Figura1 Diagrama simplificado demonstrando a injeo da mistura dos solventes na amostra, a disperso do
solvente extrator na amostra e a partio do analito entre a amostra e o solvente extrator.
maior concentrao de carga negativa numa polaridade relativa do sistema, tais como pre-
parte da nuvem e maior concentrao positiva sena ou adio de sais, alteraes no pH da fase
em outro extremo. Nas molculas apolares, a aquosa, modificadores qumicos ou misturas de
carga eletrnica est uniformemente distribuda. solventes solveis ou parcialmente solveis na
As diferenas de cargas eltricas entre as molcu- fase aquosa[2].
las dos analitos, da fase aquosa (polar) e da fase
A fase orgnica ou extrato poder conter a
orgnica (apolar), que determinam o equilbrio
maior proporo do analito. Se esta quantidade
resultante[7], que pode ser representado por:
for prxima a 100% pode ser considerada uma
Aaq Aorg (1) tcnica de extrao exaustiva e a exatido do
mtodo, expressa em termos de recuperao,
No caso ideal, a razo das atividades do ana- pode ser calculada atravs da seguinte Equao3:
lito A nas duas fases uma constante e independe
da quantidade de A, sendo que para uma dada C1 C2
=
R (%) 100 (3)
temperatura, a constante de equilbrio (KD) o C3
coeficiente de partio ou distribuio[7], sendo
representado como: onde: C1=concentrao do analito determinada
na amostra fortificada; C2 = concentrao do
[ Aorg ]
KD = (2) analito na amostra no fortificada; C3=concen-
[ Aaq ]
trao do analito adicionada na amostra fortifi-
onde: A: Analito; aq: fase aquosa; org: fase org- cada.
nica; KD: coeficiente de distribuio ou partio; Se a transferncia do analito entre a fase
[ ]: atividade ou concentrao relativa do analito. aquosa e a fase orgnica for parcial, a extrao
Depois do tempo necessrio para que seja por DLLME ser considerada uma tcnica de
atingido o equilbrio da partio do analito, equilbrio[6]. Neste caso, a recuperao (R) pode
as fases so separadas. Alguns fatores afetam a ser definida como a quantidade total de analito,
em porcentagem, que transferida para a fase mental, para obter um volume adequado de fase
aceptora (ou orgnica) ao final da extrao. A sedimentada, alguns testes devem ser efetuados
razo entre o volume da fase doadora (aquosa) e a antes do incio da otimizao[10,11].
fase aceptora (orgnica) tambm governa a recu-
perao do analito, de acordo com a Equao4[8]. 3.1 Seleo do solvente extrator
Tabela1 Algumas propriedades fsico-qumicas de alguns solventes passveis de serem utilizados como solventes
extratores e dispersores.
timo de solvente extrator deve garantir tanto pH do meio permite que os analitos permane-
um alto fator de pr-concentrao quanto per- am na forma neutra, facilitando a partio dos
mitir a obteno de um volume de fase sedimen- analitos nas microgotas do solvente extrator[21].
tada suficiente para as anlises necessrias[19]. No trabalho desenvolvido por Farhadietal.[22], o
Variaes no volume do solvente dispersor pH da amostra foi ajustado em 1,5 para extrao
causam variaes no volume da fase sedimen- de herbicidas da classe dos clorofenoxiacticos
tada, tornando necessrio modificar simultanea- em amostras de gua. A amostra com pH1,5 e
mente o volume do solvente extrator e o volume 10% NaCl foi extrada com 1 mL acetona (dis-
do solvente dispersor para manter constante o persor) e 25 L de clorobenzeno (extrator).
volume da fase sedimentada. O volume ade- Recuperaes entre 94 e 102,9% foram obtidas
quado de solvente dispersor para uma boa for- em guas de poo e de torneira, com limite de
mao das microgotas depende tanto do volume deteco (LOD) de 0,16g.L1.
da fase aquosa quanto do volume do solvente
extrator[18]. 4 Aplicaes
3.4 Efeito do tempo de extrao A DLLME tem sido aplicada com sucesso
nas etapas de extrao e pr-concentrao de
Na DLLME, apesar do equilbrio de partio
uma grande variedade de compostos orgnicos
dos analitos entre a fase orgnica e a fase aquosa
e ons metlicos. A Tabela2 apresenta as carac-
ser atingido muito rapidamente, na prtica, o
tersticas de algumas aplicaes da DLLME para
tempo de extrao definido como o intervalo
amostras ambientais. Entre os analitos avaliados
entre a injeo da mistura dos solventes extrator
nestas aplicaes pode-se destacar agrotxicos,
e dispersor na fase aquosa e o final da centrifu-
frmacos e outros poluentes orgnicos. Como
gao. Este tambm deve ser otimizado e um
pode ser observado, a DLLME uma tcnica de
dos parmetros mais importantes em tcnicas de
preparo de amostra bastante verstil, uma vez
microextrao[3,20,21].
que os extratos obtidos podem ser empregados
com sucesso em distintos mtodos de anlise.
3.5 Efeito da adio de sais e do ajuste
do pH A determinao de compostos orgnicos em
alimentos bastante complexa devido presena
A influncia da fora inica tambm deve de coextrativos que podem afetar o resultado final.
ser considerada, uma vez que influencia na sepa- Entre os problemas que podem ser observados
rao das fases. O aumento na concentrao de esto: baixa robustez do mtodo, diminuio da
NaCl aumenta o volume de fase sedimentada, detectabilidade e quantificao imprecisa, uma vez
devido diminuio da solubilidade do solvente que resultados falsos positivos ou falsos negativos
podem ser obtidos. Desta maneira, ateno especial
extrator na presena de um sal. Esta influncia
vem sendo dada a mtodos de preparo de amostra
ser de acordo com as caractersticas de cada
que minimizem o efeito destes coextrativos. Como
analito. Observa-se, nos trabalhos publicados, pode ser observado na Tabela3, a tcnica DLLME
uma grande variao da adio de NaCl, desde tem sido aplicada com sucesso na anlise de dife-
a no utilizao at a adio de 0,5 a 30%. Outro rentes compostos orgnicos em alimentos.
parmetro que deve ser levado em considerao Na grande maioria das aplicaes apresen-
o pH, que otimizado em funo da acidez tadas nas Tabelas2 e 3, os solventes de extrao
ou basicidade de alguns compostos. O ajuste do empregados so clorados. O emprego destes sol-
Analitos/matriz Solvente extrator Solvente dispersor Tcnica de Fator de pr- LOD % Recuperao Ref.
(volume) (volume) determinao concentrao (RSD%)
Hormnios Tetracloreto de Acetona UHPLC-UV 71,0-78,5 0,008-0,010 g.L1 85,2-94,2 19
em gua carbono (80 L) (1,25 mL) (2,4-3,2)
Herbicidas do grupo das Diclorometano Tetra-hidrofurano HPLC-UV 68-126 0,10-0,28 g.L1 91,2-104,1 23
fenilureias em gua (60 L) (1,0 mL) (0,4-2,3)
Disruptores endcrinos Cloreto de 1-butil-3- - UHPLC-UV 140-989 0,8-4,8 g.L1 90,2 (11) 24
em gua metilimidazolium
(38 L)
Martins ML, Primel EG, Caldas SS, Prestes OD, Adaime MB, Zanella R
Analito (matriz) Solvente dispersor Solvente extrator Tcnica de Fator de pr- LOD % Recuperao Ref
(volume) (volume) determinao concentrao 1
(g.L ou g.kg1) (RSD%)
Bifenilas policloradas
Acetona Clorobenzeno 74,0-131,8
e teres difenlicos GC-MS 274,0-554,0 0,01-0,4 38
(1 mL) (19 L) (1,12-17,4)
polibromados (leite)
Bifenilas policloradas Acetona Clorobenzeno 81,2-108,4 (1,0-
GC-ECD 87,0-123,0 0,12-0,35 39
(peixe) (1 mL) (30 L) 9,2)
Agrotxicos Acetonitrila Hexano 83,3-117,4 (3,0-
GC-FPD - 0,03-1,0 40
organofosforados (ch) (2 mL) (24 L) 7,8)
Martins ML, Primel EG, Caldas SS, Prestes OD, Adaime MB, Zanella R
1-octil-3-metil-
Parabenos Acetonitrila 60,1-79,5 (1,8-
imidazolium HPLC-UV 68,2-90,4 1,0-1,5 41
(panquecas) (0,1 mL) 7,0)
hexauorfosfato (100 L)
Micotoxinas Metanol Diclorometano 67,0-90,0 (1,0-
HPLC-FD 2,5 0,01-0,17 42
(cereais) (0,1 mL) (220 L) 18,0)
Colesterol (leite, ovos e Etanol Tetracloreto de carbono 95,0-105,0 (1,0-
HPLC-UV - 0,01 43
azeite de oliva) (0,8 mL) (35 L) 2,97)
Agrotxicos
Acetonitrila Clorobenzeno 67,0-111,0 (2,0-
organofosforados GC-FPD 41,0-50,0 0,01-0,19 44
(1,0 mL) (27 L) 9,0)
(melancia e pepino)
Agrotxicos multiclasse Acetona 1-undecanol 81,0-120,0 (1,0-
GC-MS 8,0-86,0 - 45
(vinho) (0,5 mL) (50 L) 13,0)
GC: Gas Chromatography; ECD: Electron Capture Detection; FPD: Flame Photometric Detection; FID: Flame Ionization Detection.
ventes criticado devido a sua toxicidade. No de extrao, uma vez que microgotas menores
entanto, a quantidade de solventes usados em so produzidas quando a vibrao ultrassnica
DLLME muito reduzida. Embora a DLLME empregada. A UA-DLLME (ultrasound-assisted-
tenha sido proposta para solventes mais densos -DLLME) foi utilizada no trabalho desenvolvido
do que a gua, Rodriguz-Caboetal.[45] desenvol-
por Chen et al.[54] que descrevem um mtodo
veram uma nova proposta para a determinao
simples e com baixo consumo de solventes para
de resduos de fungicidas em vinho, empregando
50L de 1-undecanol como solvente de extrao. a determinao de fulerenos em amostras de
Este solvente caracteriza-se por ser no clorado gua. Os compostos foram determinados por
e de menor densidade que a gua. Os 10 anali- LC-APPI-MS/MS. O mtodo consistiu na injeo
tos de interesse foram analisados por GC-MS de 1mL de 2-propanol (dispersor) e 10L de bro-
(do ingls Gas Chromatography coupled to Mass meto de benzila (extrator) em 10mL da amostra
Spectrometry). O mtodo apresentou RSD% infe- pH10, contendo 1% de NaCl. As amostras foram
riores a 13% e os valores de LOQ variaram entre submetidas ao ultrassom por 1 minuto, depois
0,2 e 3,2g.L1. Os valores de recuperao obti-
foram centrifugadas e 5 L da fase sedimentada
dos esto na faixa de 81 e 120%, com fatores de
foi injetado. O mtodo apresentou valores de LOQ
pr-concentrao entre 8 e 86 vezes.
entre 8 e 150ng.L1, com preciso menor que 12%
Os excelentes resultados obtidos com a utili-
e exatido entre 70 e 86%.
zao da tcnica de DLLME tambm podem ser
observados quando esta combinada a outras Apesar das importantes vantagens da tc-
tcnicas de preparo de amostras. Yan et al.[53] nica DLLME anteriormente citadas, a dificul-
empregaram DLLME combinada com a tcnica dade de automao, devido necessidade de
de Disperso da Matriz em Fase Slida (MSPD, etapas de separao de fases e centrifugao,
do ingls Matrix Solid Phase Dispersion) para considerada uma desvantagem. A fim de mini-
a determinao de corantes do tipo Sudo em mizar este problema, Andruchetal.[55] propuse-
amostras de gema de ovo por HPLC-UV (do
ram a combinao entre um sistema de injeo
ingls High Performance Liquid Chromatography
sequencial de anlise (SIA, do ingls Sequencial
with Ultraviolet Detection). Durante o proce-
dimento de MSPD a amostra foi diretamente Injection Analysis) e a tcnica de DLLME para a
misturada com um polmero de impresso determinao de tiocianato em amostra de saliva
molecular (MIP, do ingls Molecularly Imprinted empregando detector espectrofotomtrico. Os
Polymer) formado por anilina e naftol. Uma resultados obtidos demonstram a eficincia
mistura de acetona:cido actico (95:5, v/v) foi do sistema proposto, sendo que a combinao
empregada como solvente de eluio na MSPD SIA-DLLME apresentou LOD de 17,0 g.L1, e
e, aps, como solvente de disperso na DLLME. o mtodo convencional por DLLME apresentou
O mtodo apresentou boa linearidade, suas recu-
LOD de 100,0 g.L1. Alm disso, outra grande
peraes em trs nveis de fortificao variaram
vantagem desta combinao foi o tempo de
entre 87,2 e 103,5%, com RSD% 6,1. Os valo-
res de LODs do mtodo variaram entre 2,9 e 3segundos para a realizao da etapa de extra-
6,7 g.kg1, demonstrando o bom desempenho o por DLLME.
da combinao entre as tcnicas de MIPs-MSPD A completa automao da tcnica foi pro-
e DLLME. posta por Mayaetal.[56], empregando injeo em
O uso de ultrassom para facilitar a extrao fluxo com multisseringas (MSFIA, Multisyringe
tambm tem sido empregado. Os estudos rela- Flow Injection Analysis) e solventes extratores
tam que o uso do ultrassom aumenta a eficincia menos densos que a gua. Quando hifenado com
Recebido: 08/03/2012
Aceito: 14/03/2012