Pontifcia Universidade Catlica de Gois

Bioqumica e Biofsica I Prtica

CBB1081 - Turma A01.4
Prof. Msc. Roberpaulo Anacleto Neves

PIPETAS

As pipetas so instrumentos ou equipamentos largamente utilizados no

laboratrio com a finalidade de medir e transferir lquidos.
Uma pipeta deve apresentar preciso (reprodutividade) e exatido (relacionada
com o valor absoluto). A maioria das pipetas apresenta preciso, mas a exatido
tambm fundamental.
Problemas de pipetagem so fontes comuns de erros em diagnsticos
laboratoriais. Esses problemas podem ser causados por falha na tcnica de pipetagem,
erro na escolha da pipeta, problemas de ajuste do equipamento ou falta de cuidados de
conservao.

TIPOS DE PIPETAS

As pipetas mais utilizadas so as sorolgicas ou graduadas, as pipetas de volume

fixo ou ajustvel e tambm as pipetas multicanal. So usadas ainda as pipetas de
Pasteur, somente para transferir lquidos. Para lquidos densos, viscosos ou volteis so
indicadas as pipetas de deslocamento positivo, sendo muito utilizadas em tcnicas de
biologia molecular, uma vez que so desenvolvidas para que no haja contato da
substncia pipetada com o corpo da pipeta, prevenindo a contaminao de uma amostra
para outra.

I. PIPETAS SOROLGICAS (GRADUADAS) E PIPETAS VOLUMTRICAS

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 So instrumentos de vidro ou plstico utilizadas para medir volumes entre 1 e 10
ml. Devem ser usadas com muito critrio e preciso, devem apresentar um limiar de
tolerncia que devem ser expressos em percentagem sendo menor para as pipetas de
menor volume e maior para as pipetas de maior volume.
1) As pipetas graduadas (mais finas) permitem medir volumes variveis de
lquidos.
2) As pipetas volumtricas( com bulbos), no so graduadas e s permitem medir
um volume nico de lquido.

1. Cuidados e precaues nas pipetagens:

a) Usar uma pipeta para cada reagente, a fim de evitar contaminao entre um lquido e
outro;
b) Antes de introduzir as pipetas nas solues, verificar se esto realmente limpas a se
as extremidades superior e inferior no esto quebradas;
c) Utilize equipamento auxiliar de pipetagem. Nunca pipete com a boca.
d) Evitar a troca de rolhas entre os reagentes;
e) Nunca devolver a soluo pipetada para o frasco estoque, pois esta pode estar
contaminada;
f) As pipetas vem calibradas com H2O destiladas em dadas temperaturas, conforme
vem registrado (15, 20, 25C);
g) Para pipetar volumes entre 0 e 1 ml, usar pipetas de 1 ml graduadas ao centsimo;
entre 1 e 2 ml, usar pipetas de 2 ml graduadas ao centsimo; entre 2 e 5, usar de 5 ml
graduadas ao dcimo; entre 5 e 10 ml, usar pipetas de 10 ml graduadas ao dcimo;
h) O lquido no interior da pipeta forma um menisco. A leitura feita utilizando a parte
inferior do menisco se a substncia for incolor e a parte superior do menisco se for
colorida, sempre colocando a pipeta na altura da linha dos olhos;
i) Para pipetar substncias corrosivas ou txicas, obturar a extremidade superior da
pipeta com algodo ou utilizar pipetas semi-automticas;
j) Quando pipetar sangue, cido concentrado ou lcalis concentrados, lavar
imediatamente as pipetas em H2O corrente;
k) Aps o uso deixe as pipetas totalmente submersas, por 24h, em soluo de
hipoclorito de sdio a 2% para garantir sua desinfeco e tambm para evitar que os
resduos sequem no seu interior;
l) As pipetas que precisam ser sopradas apresentam dois anis ou um halo fosco na
extremidade superior;

2. Procedimento para pipetagem:

a) Aspirar a soluo at acima da marca de calibrao e manter a coluna lquida neste

ponto;
b) Encostar o bico da pipeta numa superfcie (vidro de soluo), colocar a pipeta em
posio vertical e levar o menisco at a marca zero;
c) Limpar a parte externa do bico da pipeta;

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d) Levar o bico da pipeta no recipiente adequado e deixar o lquido escoar livremente,
encostando o bico na parede do recipiente, at o volume desejado. Se a pipeta apresentar
dois anis na extremidade ela dever ser soprada
e) Ao usarmos apenas uma frao da pipeta sorolgica devemos cont-la entre duas
marcas e no utilizar a parte inferior da pipeta, pois ocorrem muitos erros de calibrao
junto a ponta.

II. PIPETAS SEMI-AUTOMTICAS

Destina-se a pipetagem de lquidos em geral podendo apresentar em modelo de volume

fixo ou ajustvel e pode ou no apresentar ejetor/dispersor de ponteiras, evitando
contaminaes.
As pipetas automticas tem como vantagem a rapidez de uso. Cuidados especiais,
porm, devem ser considerados. Toda pipeta automtica tem dois estgios no seu
mbolo. No momento de sugar o lquido, o mbolo deve ser colocado no primeiro
estgio. Para expulsar o lquido das ponteiras, o mbolo tem que ser levado ao segundo
estgio. Existem pipetas de volume fixo, volume ajustvel e as pipetas multicanal. So
necessrios ponteiras e o suporte para manter a pipeta na posio vertical.

1. Vrios pontos devem ser cuidadosamente verificados:

a) Nunca sugar um lquido ou soluo colocando o mbolo no segundo estgio. Se for

assim, o volume pipetado seria maior do que o valor nominal
b) Quando selecionar o volume, verificar que o volume escolhido esteja dentro da faixa
de volumes da pipeta automtica a ser utilizada. Ou seja, se por exemplo uma pipeta
tem uma faixa de volumes que vai de 200 a 1000 l, sob nenhuma circunstncia deve
ser pipetado um volume de por exemplo 1100 l. Na verdade, a eleio da pipeta
adequada depende do volume que se deseja pipetar e da faixa de volumes na qual cada
pipeta trabalha. Ex: num laboratrio tem 2 pipetas automticas. A pipeta A, tem uma
faixa de volumes de 10 a 40 l e a pipeta B tem uma faixa de volumes de 20 a 100 l
(figura 1a). Se fosse necessrio pipetar 40 l, a escolha certa seria a pipeta B, devido a
que o volume desejado no fica num dos extremos da faixa de trabalho da pipeta.
c) Especiais cuidados devem ser levados em considerao quando a soluo que de
quer pipetar custica (um cido ou uma base forte, por exemplo). Neste caso qualquer
gota do lquido (ou ainda o vapor do composto) que fique dentro da pipeta pode
danificar seriamente o instrumental. Uma soluo muito simples colocar um pedao
de algodo dentro da ponteira, verificando que no seja atingida pelo lquido no
momento de sugar. O algodo absorver qualquer respingo que houver, impedindo que
o lquido fique no interior da pipeta (figura 1b).

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d) Escolha as ponteiras adequadas s pipetas, que no seja de material reciclado para
evitar contaminaes e devem ter as pontas polidas. No reutilize ponteiras. Estes
materiais so de baixo custo e alm disso, os procedimentos adotados para lavagem no
garantem a completa remoo de resduos, constituindo-se em fonte de contaminao
das reaes e no esquea que estas devem ser autoclavadas antes de serem descartadas.
e) Mantenha sempre as pipetas em suporte apropriado na posio vertical, para evitar
agregao de partculas em seu interior.

Suporte para pipetas

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Cuidados a serem observados na pipetagem

a) Selecionar o volume desejado;

b) Verificar se a ponteira est corretamente acoplada pipeta;
c) Faa a pipetagem com a pipeta na posio vertical;
d) Aspire e dispense o lquido mantendo velocidade lenta e constante;
e) Mergulhe a ponteira aproximadamente 5 mm abaixo da superfcie do lquido;
f) Retire o excesso de lquido que se acumula no exterior da pipeta evitando erros de
volume. Passe a ponteira na borda do frasco para que o excesso de lquido seja retirado;
g) Algumas sees exigem que a ponteira seja limpa pelo lado de fora com papel
absorvente. Neste caso no passe o papel no orifcio da ponteira;
h) Ao manusear pipetas multicanal utilizar sempre ponteiras iguais, acoplar bem as
ponteiras e aps aspirar o lquido verificar se este se encontra no mesmo nvel em todos
os canais.