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MICROBIOLOGIA - Manual de Laboratório
MICROBIOLOGIA - Manual de Laboratório
Recife - Pernambuco
1998
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Apresentao
PRTICA N 1
OBJETIVOS:
Discriminar as funes e/ou aplicaes
Limpar
Acondicionar
1.2. Vidraria
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h. Fernbach - idem
1.4. Diversos
2. DESINFECO
a. Desinfeco do ar:
b. Desinfeco da bancada:
c. Desinfeco da vidraria:
3. ACONDICIONAMENTO
ESTERILIZAO EM AUTOCLAVE
PRTICA N 2
OBJETIVOS:
Trabalhar assepticamente
Cultivar microrganimos
Diferenciar macroscopicamente fungos, leveduras, bactrias
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INTRODUO
PROCEDIMENTO PRTICO
Limpar a bancada;
Marcar todo material (placa e tubos), especificando o tipo de meio e
a fonte da inoculao;
Fundir dois meios de cultura diferentes (por exemplo AN e CZ);
Distribuir os meios em placas de Petri e tubos (inclinar);
Esperar solidificar;
Fazer inoculaes nas superfcies dos meios distribudos em placas;-
Incubar na temperatura ambiente por 2 a 5 dias, no esquecendo de
guardar placas sem inocular, uma de cada meio utilizado para
controle da esterilizao e da eficcia da tcnica utilizada.
a. forma:
b. quanto dimenso
c. cromognese
-cor do pigmento
-pigmento solvel ou insolvel no meio
d. superfcie
Observao:.
. As colnias de fungos so geralmente grandes e filamentosas, algumas
vezes ocupam toda a placa onde esto cultivadas.
. As colnias de leveduras so pequenas e leitosas, enquanto as de
bactrias so menores e brilhantes sendo algumas to pequenas que se
denominam puntiformes.
PRTICA N 3
OBJETIVOS:
I - PARTE MECNICA:
II - PARTE TICA
1. Fonte luminosa:
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MANIPULAO DO MICROSCPIO
1. Instalao do aparelho
2. Iluminao de campo
3. Adaptao da preparao
4. Escolha da objetiva
5. Iluminao da preparao
6. Focalizao
c) centralizar a preparao;
d) Dificuldade subjetiva
e) Movimento Brauniano
Nunca deixe ficar leo na lente pois ali resinifica e depois para
limpar, exige excesso de dissolvente, podendo este penetrar no sistema,
dissolvendo o blsamo que liga as diversas partes.
PRTICA N 4
OBJETIVOS:
Realizar colorao simples
Observar microrganismos diferentes sob objetiva de imerso
Diferenciar leveduras de bactrias considerando o tamanho celular
OBSERVAES IN VITRO
SUBSTNCIAS CORANTES
TCNICA
COLORAO SIMPLES
TCNICA
PRTICA N 5
OBJETIVOS:
Realizar colorao Diferencial de Gram
Observar ao microscpio sob imerso as preparaes
in vitro
Diferenciar as formas de bactrias (cocos, bacilos) e arranjos
celulares ( em cadeia, ttrades, cbicos, em cachos).
COLORAES DIFERENCIAIS
As coloraes diferenciais distinguem grupos de microrganismos
entre si, devido diferenas qumicas existentes entre as clulas
microbianas.
Nesta tcnica de colorao utiliza-se inicialmente solues de
corantes e mordentes; numa segunda etapa um agente diferenciador;
para finalmente realizar outra colorao que contrasta com a primeira.
AMOSTRAS:
Bacillus subtilis
Escherichia coli
Aerobacter aerogenes
Staphylococcus aureus
Sarcina lutea
Micrococcus
PRTICA N 6
OBJETIVOS:
Realizar colorao Especial de esporos
Observar ao microscpio sob imerso as preparaes coradas
COLORAO DE ESPOROS
TCNICA
PRTICA N 7
OBJETIVOS:
Preparar meios de cultura de usos em prticas microbiolgicas
Distribuir convenientemente, esterilizar em autoclave
NORMAS DE PREPARAO
AGAR NUTRITIVO
pH = 6,8 - 7,0
CZAPECK (CZ)
CALDO GLICOSADO
CALDO LACTOSADO
Peptona.................................................. 5,0g
Extrato de carne...................................... 3,0g
Lactose.................................................. 5,0g
gua destilada........................................1000ml
pH = 6,8 - 7,0
GODOY
Peptona................................................. 1,0g
Caldo-de-cana........................................ 500g
Agar...................................................... 15g
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EMB
SORO DE LARANJA
Triptona................................................ 10,0g
Extrato de leveduras............................... 3,0g
Glicose................................................. 4,0g
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PRTICA N 8
OBJETIVOS:
Isolar bactrias, fungos filamentosos e leveduras de ambientes
diversos
Identificar morfologicamente as espcies isoladas
MATERIAL
TCNICA
MATERIAL
TCNICA
MATERIAL
TCNICA
MATERIAL
TCNICA
MATERIAL
TCNICA
MATERIAL
TCNICA
MATERIAL
MATERIAL
Acar cristal
Erlenmeyer com 99 ml de gua estril
Balo com batata- glicose-agar (BGA) acidificado a pH 3,5
Balo com meio de Czapeck (CZ)
Placas de Petri estreis
Tubos de ensaio com BGA e CZ
TCNICA
1 o DIA - Pesar 11g de acar e transferir para o Erlenmeyer com gua
estril, agitando bem para dissolver.
Transferir pores de 1 e 2 ml para placas de Petri.
Os meios de cultura CZ e BGA devem ser fundidos, refriados
a 45 o C e em seguida acidificados com cido ltico a pH 3,5.
MATERIAL
TCNICA
1 o DIA - Acidificar o caldo glicosado com cido ltico a pH 3,5.
Cortar a fruta com casca e macerar com ajuda de uma faca.
Tranferir para o Erlenmeyer com o meio acidificado, agitar e
incubar temperatura ambiente, durante 48 a 72 horas.
I
45
MATERIAL
TCNICA
PRTICA N 9
OBJETIVOS:
Material
- Microrganismos:
- Meios de cultura:
Caldo lactosado
Caldo glicosado
- Equipamentos:
Agitador magntico
Espectrofotmetro
- Diversos:
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Mtodos
Resultados
49
1/2
1/4
1/8
1/16
1/32
1/64
PRTICA N 10
OBJETIVOS:
Obter a concentrao de clulas de leveduras pelo uso de cmara
de contagem (cmara de Neubauer)
Material
- Microrganismo:
Cultura de Saccharomyces cervisiae
- Reagentes:
Soluo salina fisiolgica (0,85% NaCl)
-Equipamentos:
- Diversos:
Pipeta Pasteur
Mtodos
Resultados
Exemplo:
n = 232
diluio 1:100
PRTICA 11
INTRODUO:
TCNICA:
PRTICA 12
OBJETIVOS:
INTRODUO:
P= (X f - X o )/(t f - t o ) )
MATERIAL
- Microrganismo
Saccharomyces cerevisiae
- Meios de cultura
Caldo nutritivo suplementado com 1% de acar (glicose, frutose e
sacarose)
- Equipamentos:
Espectrofotmetro
Mesa agitadora (rumbeira)
Balana semi-analtica
- Diversos:
Cubetas do espectrofotmetro
Tubos de ensaio estreis
3 Erlenmeyers, 1000ml
Pipetas, 10ml
MTODOS