UNIVERSIDADE FEDERAL DO PAMPA

PROGRAMA DE PÓS GRADUAÇÃO EM ENGENHARIAS

ESPECTROFOTÔMETRO
EXPERIMENTO 1

DÉBORA BRETAS SILVA

JACSON WEBER DE MENEZES

Alegrete, 07 de setembro de 2017

SUMÁRIO
1. OBJETIVOS .................................................................................................. 3
1.1 Objetivo Geral .......................................................................................... 3
1.2 Objetivos específicos ............................................................................... 3
2. RESUMO ...................................................................................................... 4
3. INTRODUÇÃO TEÓRICA ............................................................................. 5
4. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL ............................................................ 6
4.1 Materiais Necessários ............................................................................. 6
4.2 Procedimento .......................................................................................... 6
5. RESULTADOS E DISCUSSÃO..................................................................... 7
6. CONCLUSÃO.............................................................................................. 11
7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ............................................................ 11
1. OBJETIVOS

1.1 Objetivo Geral

Este experimento visa determinar a concentração em percentual de massa de

azul de metileno diluído em água utilizando o espectrofotômetro modelo V-M5.

1.2 Objetivos específicos

 Determinar o espectro de transmitância e absorbância do azul de metileno em

água (maior concentração) tendo água como referência (500 – 800 nm);

 Fazer a curva de calibração utilizando o comprimento de onda em que a

absorção é máxima considerando concentrações conhecidas;

 Fazer o ajuste da reta através do gráfico Absorbância (A) x Concentração (C);

 Determinar a concentração do azul de metileno de uma amostra

desconhecida utilizando a curva de calibração determinada.
 2. RESUMO

O presente experimento, correspondente à primeira aula prática da disciplina de

Técnicas de Caracterização dos Materiais II, consistiu na determinação da concentração
em percentual de massa de azul de metileno diluído em água. Para isto, foi empregue
um espectrofotômetro modelo V-M5, que utiliza um detector de silício, presente no
laboratório da Unipampa campus Alegrete e seis cubetas amostrais. Dentre essas, cinco
cubetas contendo diferentes concentrações de azul de metileno, sendo apenas quatro
concentrações conhecidas, e uma cubeta contendo somente água a qual foi tomada
como referência. Uma vez que o intuito do experimento era determinar a concentração
desconhecida, foram aferidos os espectros de transmitância e absorbância para uma das
amostras de concentração conhecida a partir do qual pode-se definir o pico de absorção,
utilizado para gerar a curva de calibração que relaciona concentração e absorbância. Por
fim, determinou-se a absorbância da amostra desconhecida e inseriu-se esse valor na
equação originária da curva de calibração. A concentração encontrada foi de 0,000465%
mg/l com uma confiabilidade de 99,49%.
 3. INTRODUÇÃO TEÓRICA

O espectrofotômetro é um equipamento capaz de medir e relacionar a quantia de luz

absorvida, transmitida ou refletida por uma determinada amostra (sólido transparente ou
sólido opaco) de acordo com o comprimento de onda.
𝐼 𝐼
A transmitância T é definida como sendo 𝑇 = 𝐼 ou em percentagem 𝑇 = 𝐼 𝑥100%
0 0

onde I é a intensidade da luz transmitida pela amostra a ser medida e Io é a intensidade

da luz transmitida pela referência. Por outro lado, a absorbância A pode ser relacionada
𝐼
com a transmitância através da seguinte expressão 𝐴 = −𝑙𝑜𝑔 𝐼 . Além disso, de acordo
0

com a lei de Lambert-Beer, a absorbância pode ser relacionada com a concentração do

analito de acordo com a seguinte expressão: 𝐴 = 𝑎𝑙𝐶 onde "a" é o coeficiente de
absorção, "l" é a espessura óptica (cubeta = 1 cm) e "C" é a concentração do analito. O
instrumento permite achar o fator de proporção entre a concentração e a absorbância,
denominado fator F, ou seja: C = FxA.
 4. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

4.1 Materiais Necessários

 Espectrofotômetro;
 Seis cubetas, sendo cinco cubetas com diferentes concentrações de azul de
metileno diluído em água, em que quatro delas conhecidas e uma
desconhecida, e uma cubeta tomada como referência contendo apenas
água.

4.2 Procedimento

Inicialmente, determinou-se o intervalo espectral (λ) no qual seriam realizadas

as aferições do ensaio, que foi entre 500 e 800 nm, espaçados de 10 em 10 nm. Em
seguida, utilizando como referência a amostra que continha apenas água para
calibração do equipamento no modo transmissão e absorção (100% da luz chega ao
detector logo 100% transmissão 0% absorção) determinou-se a transmitância e
absorbância da amostra com concentração de 0,0010% de azul de metileno para cada
um dos comprimentos de onda selecionados. Após essa etapa, traçou-se os gráficos
transmitância x comprimento de onda e absorbância x comprimento de onda a partir
dos quais detectou-se qual comprimento de onda correspondia à maior absorbância e
à maior transmitância.
A próxima etapa foi gerar a curva de calibração absorbância x concentração com
base no comprimento de onda (λ) em que a absorção é máxima e nas concentrações
conhecidas. A partir desse traçou-se uma linha de tendência entre os pontos e definiu-
se a equação da mesma. De acordo com essa equação, é possível determinar para
cada valor de absorbância a concentração correspondente.
 5. RESULTADOS E DISCUSSÃO

Os valores de absorbância e transmitância aferidos para a amostra com 0,0010% de

azul de metileno através do espectrofotômetro V M5 encontram-se na Tabela 1.

Tabela 1- Resultados do ensaio no espectrofotômetro para a amostra com

concentração de 0,0010% de azul de metileno
A calc
λ(nm) Io I1 T(%) A(%)
(%)
500 100 86,9 0,869 0,061 0,061
510 100 86,9 0,869 0,061 0,061
520 100 86,1 0,861 0,065 0,065
530 100 84,8 0,848 0,071 0,072
540 100 82,1 0,821 0,085 0,086
550 100 77,8 0,778 0,109 0,109
560 100 72,5 0,725 0,140 0,140
570 100 66,1 0,661 0,18 0,180
580 100 57,8 0,578 0,238 0,238
590 100 48,7 0,487 0,313 0,312
600 100 38,4 0,384 0,416 0,416
610 100 29,5 0,295 0,531 0,530
620 100 26,5 0,265 0,577 0,577
630 100 25,8 0,258 0,589 0,588
640 100 22,2 0,222 0,654 0,654
650 100 16,3 0,163 0,789 0,788
660 100 11,6 0,116 0,936 0,936
670 100 10,3 0,103 0,987 0,987
680 100 18,9 0,189 0,724 0,724
690 100 46,8 0,468 0,33 0,330
700 100 72,7 0,727 0,139 0,138
710 100 86,4 0,864 0,063 0,063
720 100 92,5 0,925 0,034 0,034
730 100 94,8 0,948 0,023 0,023
740 100 95,7 0,957 0,019 0,019
750 100 96,4 0,964 0,016 0,016
760 100 96,8 0,968 0,014 0,014
770 100 97,3 0,973 0,012 0,012
780 100 97,3 0,973 0,012 0,012
790 100 97,4 0,974 0,011 0,011
800 100 97,7 0,977 0,010 0,010
Fonte: Elaboração Própria

A Figura 1 apresenta a relação comprimento de onda x absorbância encontrada

para o espectro ensaiado. Observando-a é notável que os pontos em laranja, que
representam a absorbância calculada, são muito semelhantes a curva em azul que
representa os valores aferidos pelo equipamento. Além disso, em conformidade com
os dados apresentados pela Tabela 1, o comprimento de onda no qual obteve-se a
máxima absorção foi λ igual a 670 nm.

Figura 1- Comprimento de onda X Absorbância

λ x Absorbância
1
0.9
0.8
0.7
Absorbância

0.6
0.5
Absorbância aferida
0.4
0.3 Absorbância calculada
0.2
0.1
0
480 530 580 630 680 730 780 830
Comprimento de onda λ (nm)

Fonte: Elaboração Própria

Figura 2- Comprimento de onda X Transmitância

λ x Transmitância
1.2

0.8
Transmitância

0.6

0.4

0.2

0
480 530 580 630 680 730 780 830
Comprimento de onda λ (nm)

Fonte: Elaboração Própria

 A Figura 2 confirma que quando a absorção foi máxima, isto é, quando o comprimento
de onda foi de 670 nm a transmitância foi nula (0%).
Na sequência, fixou-se este valor de comprimento de onda para a determinação da
absorbância para as demais amostras com concentração conhecida e por fim montou-
se a Tabela 2 a seguir com o intuito de traçar a curva de calibração com o auxílio do
software Excel.

Tabela 2- Dados da curva de calibração

Concentração Abs. Abs
λ (nm) (mg/l) Ref am.
670 0,00001 0 0,987
670 0,000005 0 0,440
670 0,000004 0 0,401
670 0,000001 0 0,038
Fonte: Elaboração Própria

A Figura 3 apresenta a dispersão desses valores, a linha de tendência linear criada,

bem como a equação que a define. Além disso, optou-se por indicar o coeficiente de
determinação R² afim de determinar a confiabilidade dos resultados encontrados. Desta
maneira, evidencia-se que a confiança dos resultados alcançou 99,49%.

Figura 3- Curva de Calibração

Concentração x Absorbância
1.200

0.987
1.000
y = 104333x - 0.0552
R² = 0.9949
0.800
Absorbância

0.600
0.440
0.401
0.400

0.200
0.038

0.000
0 0.000002 0.000004 0.000006 0.000008 0.00001 0.000012
Concentração de azul de metileno (mg/l)

Fonte: Elaboração Própria

 Uma vez que “y” equivale ao valor da absorbância e “x” da concentração, de maneira
bem simples podemos encontrar a concentração da amostra que não conhecemos.
Depois de todas essas etapas, determinou-se a absorbância da amostra que não
sabemos a concentração e inseriu-se esse valor na equação abaixo. O valor
correspondente a concentração da amostra “X” encontrado foi de 0,000465% mg/l de
azul de metileno.

Y = 104333x – 0,0552 (1)

Afim de fazer uma pequena confirmação do resultado, podemos constatar que como
a absorbância da amostra foi de 0,43 e este valor encontra-se entre duas absorbâncias
de amostras conhecidas (0,44 e 0,401), a concentração da mesma também deve
encontrar-se nesse intervalo (0,0005% e 0,0004%). Fato esse que se confirmou.
6. CONCLUSÃO

O equipamento espectrofotômetro utiliza uma técnica muito eficaz, capaz de

auxiliar tanto na medição do espectro de transmitância e absorbância quanto na
determinação de alguma concentração desconhecida de um analito. Este fato se
comprovou pela aproximação do valor encontrado e também pela confiabilidade que
foi assegurada. Portanto, possui uma gama de aplicações práticas, além de possuir
fácil manuseio e usabilidade. Nesse experimento, nos detivemos a determinar a
concentração de apenas uma substância e optamos por utilizar a calibração do próprio
equipamento, mas caso tivéssemos optado por não o utilizar, a absorbância total da
amostra deveria ser determinada pela subtração dos valores transmitidos pela
amostra e pela amostra referência, conforme mostrado matematicamente a seguir:

𝐴 = − log 𝑇

𝐼𝑟
𝐴 = log
𝐼𝑠

𝐴 = log 𝐼𝑟 − log 𝐼𝑠

7. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Material fornecido pelo professor.