Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
Cell 201
Genética molecular. O DNA
1869: Friedrich Miescher descobre o ácido desoxirribonucléico (DNA)
Friedrich Miescher
Genética molecular. O DNA é o material hereditária
Knippers 17
Genética molecular. A DNA é o material hereditária
Oswald Avery
1877-1955
Fundamentos 187
Genética molecular. A DNA é o material hereditária
Fundamentos 187
“The dark Lady of the DNA”
Fundamentos 167
Genética molecular. A corrida pela estrutura do DNA.
Os nucleotídeos são
compostos de um açúcar de
cinco carbonos ao qual estão
ligados um ou mais grupos
fosfatos e uma base contendo
nitrogênio
Fundamentos 188
Genética molecular. A estrutura do DNA
Os nucleotídeos são ligados ........
1. covalentemente em uma cadeia por meio dos açúcares e fosfatos
formando um esqueleto de fosfato-açúcar-fosfato-açúcar alternados.
2. por pontes de hidrogênio entre as bases pareadas
Fundamentos 189
Genética molecular. A estrutura do DNA
Cada fita tem uma polaridade química: Os nucleotídeos são ligados por
ligações pelo grupo 3`-hidroxilo (-OH) de um açúcar e o 5`-fosfato (P) do
próximo.
Purinas: As
bases com dois
anéis, Adenina
e Guanina
Pirimidinas: As
bases com um
anel, Citosina e
Timina
Fundamentos 189
Genética molecular. O DNA é o carregador de uma informação linear
Fundamentos 190
Genética molecular. O DNA é o carregador de uma informação linear
Cell 202
Genética molecular. O DNA é o carregador de uma informação linear
Fundamentos
191, 192
Genética molecular. Replicação do DNA
Células são capazes de duplicar seus
cromossomos e distribuir igualmente para as
células filhas.
Em cerca de 8 horas uma célula animal em
divisão irá copiar o equivalente de 1000 livros
com apenas, na media, uma única ou duas
letras erradas !
Fundamentos 192
Genética molecular. Replicação do DNA
Proteínas iniciadores que se ligam ao DNA e quebram os pontes de
hidrogênio entre as bases.
Os locais onde a DNA é aberto primeiro são chamados origens de
replicação. Os origens de replicação são marcados por uma seqüência
particular de nucleotídeos ricos em A-T
Fundamentos 193
Bactérias tem um único origem
de replicação enquanto
humanos tem
aproximadamente 10.000 de
tais origens no genoma inteiro.
Uma proteína
iniciadora liga-
se ao DNA
abrindo a dupla
hélice e atraia
outras proteínas
formando a
maquina de
replicação.
Genética molecular. Replicação do DNA
Na microscopia eletrônica é possível de visualizar as forquilhas de
replicação. A máquina de replicação se move ao longo do DNA.
Duas forquilhas de
replicação são
formadas a partir
de cada origem de
replicação
movendo-se
bidirecional cerca
de 100 pares de
bases por segundo
no homem.
Fundamentos 193
Genética molecular. Replicação do DNA
A DNA-polimerase catalisa a
adição de nucleotídeos à
extremidade 3´ de uma fita de
DNA. A enzima catalisa a
ligação fosfodiéster entre a
extremidade 3´e o grupo 5´-
fosfato do nucleotídeo que está
sendo incorporado.
A DNA-polimerase não se
dissocia da DNA mas move-se
ao longo dele.
Fundamentos 194
Genética molecular. Replicação do DNA
Uma nova fita de DNA é feita na direção 5 → 3`. A DNA-polimerase
trabalha apenas nessa direção
A fita retardada é feito descontinuamente, em pequenos pedaços
separados e sucessivos. A fita-líder é sintetizada continuamente.
Fundamentos
195
Genética molecular. Replicação do DNA
A DNA-polimerase é tão fiel que ela comete
apenas cerca de um erro a cada 107 pares de
nucleotídeo replicados.
Fundamentos 196
Genética molecular. Replicação do DNA
Uma DNA-polimerase
hipotética que sintetizasse
na direção 3´ → 5´ seria
incapaz de verificação: Se
ela removesse um
nucleotídeo mal pareado
ela criaria uma extremidade
que é quimicamente morta.
Fundamentos 197
Genética molecular. Replicação do DNA
A DNA-polimerase no pode iniciar a formação de
uma fita completamente nova.
Uma RNA, a RNA iniciador, (ácido ribonucléico)
consistindo de 10 nucleotídeos se liga á fita molde
e serve como primer (iniciador). A RNA fornece
uma extremidade 3´ para a DNA-polimerase.
Fundamentos
199
Como a replicação proceda de forma sincrônica em ambos as fitas?
Genética molecular. Replicação do DNA
Fundamentos 200
Genética molecular. Replicação do DNA
Estrutura da DNA-helicase
Cell 246
Genética molecular. Replicação do DNA
Cell 247
Genética molecular. Replicação do DNA
Cell 247
Genética molecular. Polymerase chain reaction (PCR)
Gilbert 96
Genética molecular. Polymerase chain reaction (PCR)
PRIMER
5` TTAAGCAGCGGG...................................................TACGTCCTGCATGTTACC
3` AATTCGTCGCCCCTAGC........... 1000 bases......................GACGTACAATGG
3` 5`
5` 3`
Programa de temperatura, 25-35 ciclos
94° C Separação das fitas
52° C Ligação dos primers com as fitas
72° C Temperatura ótima da enzima Taq polimerase
Genética molecular. Polymerase chain reaction (PCR)
1x x50
H2O: 6,96 !l 348 !l
10 x Buffer: 1,00 !l 50 !l
(20mM) dNTP`s: 1,00 !l 50 !l
(20!M) Primer 1: 0,50 !l 25 !l
(20!M)Primer2: 0,50 !l 25 !l
Taq-Polymerase: 0,04 !l 2!l
Kary B. Mullis, premio Nobel de química 1992, inventou o PCR 1983
Kary B. Mullis