ESTUDO DIRIGIDO DE BIOQUÍMICA – Enzimas

1. O que são enzimas?

2. Conceitue isoenzimas, co-enzimas e holoenzimas
3. Quais as principais classes de enzimas?
4. Por que as enzimas são catalisadores tão eficazes?
5. Descreva os mecanismos da ação enzimática
6. Quais os mecanismos da regulação enzimática?
7. O que é sítio ativo? Quais as funções do sítio ativo no processo de
catálise?
8. O que são os cofatores enzimáticos?
O que você entende sobre as teorias : modelo chave-fechadura e o modelo encaixe induzido?

Resposta:

Atualmente, muitos pesquisadores consideram que a enzima ajusta-se à molécula do

substrato com a qual interage, uma teoria conhecida como “teoria do encaixe induzido”. No
caso da teoria chave fechadura um modelo extremamente conhecido, explica que os
centros ativos de uma enzima encaixam-se perfeitamente em seus substratos específicos.

. O que são enzimas? Qual seu efeito sobre a energia de ativação das reações? Explique.
Enzima é uma função específica das proteínas, que catalisam as reações químicas nos
sistemas biológicos. As enzimas agem de forma a diminuir essa energia, fazendo com que a
reação se inicie precisando de uma menor quantidade de energia (sendo assim com uma
velocidade maior da reação catalisada).
2. Por que, em uma reação, as enzimas podem estar presentes em quantidades pequenas em
relação à de substrato? Porque numa reação catalisada as enzimas não alteram o equilíbrio
da reação entre o substrato e produto. Elas saturam-se.
3. Caracterize as enzimas quanto à estrutura. Apenas uma pequena porção da enzima (cerca
de 3-4 aa) está envolvida na catálise. A região que contém os resíduos catalíticos, que se liga
ao substrato e desempenha a reação, é denominada de centro ativo. Algumas enzimas
podem ter centros onde se ligam cofatores, e centros alostéricos onde se ligam moduladores
(enzimas alostéricas regulatórias). As enzimas são específicas para o reconhecimento de
seus substratos (modelo chave-fechadura e modelo encaixe induzido).

4. Descreva as etapas da catálise enzimática. A enzima possui um centro ativo que se

combina com o composto que irá sofrer a ação enzimática. Esse composto é chamado de
substrato. A enzima reage com o substrato de maneira específica, originando os produtos.
Além disso, a enzima é regenerada, não sendo consumida na reação.

5. Em que se baseia a classificação das enzimas? Descreva cada uma das classes. As
enzimas podem ser classificadas de acordo com vários critérios, o mais importante foi
estabelecido pela IUB e estabalece 6 classes: - Oxidorredutases: Catalisam reações de óxido-
redução, removendo átomos de hidrogênio e adicionando átomos de oxigênio. Ex.:
desidrogenase, oxidase. - Transferases: Catalisam transferências de grupos funcionais
(amina, fosfato, acil, etc), transferindo grupos metil. Ex.: metiltransferase, transaminases. -
Hidrolases: Catalisam reações de hidrólise, quebrando lipídios e proteínas. Ex.: lipases,
proteases. - Liases: Catalisam quebra de ligações duplas, removendo CO2. Ex.:
descarboxilase, dehidratases. - Isomerases: Catalisam isomerizações, convertendo formas
cis e trans. Ex.: cis-trans isomerase, epimerases. - Ligases: Catalisão as reações de
formação de ligações, combinando dois grupos. Ex.: sintatese.

6. O que são cofatores enzimáticos? Classifique-os.

Cofatores são pequenas moléculas orgânicas ou inorgânicas que podem ser necessárias para
a função de uma enzima. Esses cofatores não estão ligados permanentemente à molécula da
enzima mas, na ausência deles, a enzima é inativa.

7. Faça o gráfico e explique o efeito da temperatura, pH, concentração de substrato e da

enzima sobre a atividade enzimática.
 Fatores que são capazes de alterar a atividade das enzimas (e consequentemente a
velocidade das reações por elas catalisadas): - temperatura: a velocidade das reações
enzimáticas aumenta com a temperatura até que seja atingida a velocidade máxima. A partir
desse momento, a velocidade da reação começa a decrescer, o que pode ser explicado pelo
início da inativação das enzimas pela temperatura. - pH: cada enzima possui um pH ótimo de
atividade (onde sua atividade é máxima), para a maioria das enzimas ele está entre 4,5 e 8,0.
- concentração de substrato e enzima: Levando-se em conta a concentração das moléculas de
enzimas, quanto maior o seu teor, maior será a velocidade da reação, seguindo
proporcionalmente a quantidade suficiente de substratos para reagir com as enzimas.
Conforme a demanda no consumo de reagentes vai ocorrendo, a velocidade da reação decai
gradativamente. Quando aumentamos a concentração do substrato, a velocidade tende a um
limite determinante de acordo com a quantidade de enzimas no sistema. A partir desse ponto
nenhuma influência terá o substrato sobre a velocidade, pois todas as enzimas já se
encontraram ocupadas.
8. O que é Km? O que ele indica? É um parâmetro cinético e indica a concentração de
substrato em que a enzima produz metade de sua velocidade. Expressa a afinidade da
enzima.
9. Caracterize os tipos de inibição enzimática. - Reversível competitiva: inibidor não se liga no
centro ativo. Varia o soluto. Velocidade máxima permanece.
- Reversível não-competitiva: inibidor não se liga no centro ativo. Diminui a velocidade
máxima. Km permanece inalterado.
- Inibição irreversível: inibidor se liga permanente a enzima.

10. Caracterize a regulação de uma enzima por modificação covalente e não covalente
(alostérica). - Modulação covalente: ocorre quando há modificação covalente da molécula da
enzima, com conversão entre formas ativa/inativa. O processo ocorre principalmente por
adição/remoção de grupamentos fosfato de resíduos específicos de serina. - Modulação
alostérica: ocorre nas enzimas que possuem um sítio de modulação, ou alostérico, onde se
liga de forma não-covalente um modulador alostérico que pode ser posiivo (ativa a enzima) ou
negativo (inibe a enzima). A ligação do modulador induz modificações conformacionais na
estrutura espacial da enzima, modificando a afinidade desta para com seus substratos; Um
modelo muito comum de regulação alostérica é a inibição por "feed-back", onde o próprio
produto da reação atua como modulador da enzima que a catalisa.
11. O que são isoenzimas? São diferentes formas das moléculas de uma mesma enzima,
catalisam a mesma reação química.
12. Caracterize a regulação de uma enzima por clivagem proteolítica. Muitas enzimas são
sintetizadas e armazenadas na forma de precursores inativos chamados zimogênios. A
ativação dos zimogênios se dá por clivagem irreversível de uma ou mais ligações peptídicas,
expondo o sítio ativo da enzima que se torna funcional. A clivagem irreversível das ligações
peptídicas é feita por enzimas proteolíticas (proteases).

. Definir constante de Michaelis-Mentem (KM) e mostrar a relação entre seu valor e a

afinidade da enzima pelo seu substrato.

A constante de Michaelis-Mentem, sigla KM, é definida como a concentração na qual

avelocidade de uma reação enzimática é metade da velocidade máxima, a Vmax. A
constante KM de uma enzima específica para um determinado substrato é característico, e
fornece uma relação de afinidade entre essa enzima e este substrato, da forma:

Menor KM, maior afinidade.

Maior KM, menor afinidade

2. Definir enzima, substrato e sítio ativo.

Enzimas são um grupo de substâncias orgânicas, com atividade intra ou extracelular, e

que têm funções catalisadoras, catalisando reações químicas que, em sua ausência,
provavelmente não ocorreriam. As enzimas transformam uma substância, o substrato, em
outra, o produto, e são extremamente específicas para a reação que catalisam. Ou seja,
em geral, uma enzima catalisa apenas um tipo de reação química.
Substrato é um composto químico que sofre uma reação catalisada por enzimas. Eles se
encaixam em enzimas seguindo um modelo chave-fechadura.
O sítio ativo trata-se de uma cavidade com forma bem definida, revestida por cadeias
laterais de aminoácidos para ajudar na ligação do substrato ou para participar da catalise
diretamente.

3. Definir inibidor competitivo e não-competitivo. Mostrar num gráfico (Vo x [S])

osresultados de uma inibição competitiva e noutro uma inibição não-competitiva,
em comparação a uma curva obtida na ausência de inibidores.

Os inibidores competitivos são aqueles parecidos com o substrato e, portanto, ocupam o

sítio ativo. A ligação do inibidor não permite que o substrato se ligue ao sítio ativo da
enzima.

Os inibidores não-competitivos são aqueles que não são semelhantes ao substrato e,

então, ocupam um sítio diferente do sítio ativo. A ligação do inibidor permite que o
substrato se ligue ao sítio ativo da enzima, mas não ocorre reação com formação de
produto.

4. Caracterizar enzima alostérica. Definir sítio alostérico e efetuador alostérico

(positivo e negativo).

Enzimas alostéricas são as enzimas que possuem uma região separada daquela em que é
ligado o substrato, onde pequenas moléculas regulatórias, os efetores, podem ser ligados
e modificarem a atividade catalítica destas enzimas.
O sítio alostérico, presente na região da molécula de algumas enzimas, não está nem no
sítio ativo nem no sítio de ligação do substrato, mas quando se liga à pequenas moléculas
causa mudança no sítio de ligação do substrato ou na atividade que ocorre no sítio ativo,
estimulando ou inibindo a atividade enzimática.

Os efetuadores alostéricos se ligam ao sítio alostérico da enzima, podendo o efetor

alostérico aumentar (efetor positivo) ou diminuir (efetor negativo) a atividade catalítica,
através de modificações no sítio catalítico.

5. Temperatura e pH podem interferir na atividade enzimática? Justifique a sua

resposta.

A elevação da temperatura, dentro de um certo limite, produz aumento na velocidade de

uma reação catalisada enzimaticamente. Mas, a partir de certa temperatura, a velocidade
da reação diminui devido a desnaturação da enzima (quando a enzima perde suas
propriedades). Cada enzima trabalha melhor em uma faixa de temperatura característica,
a temperatura ótima, na qual a velocidade da reação catalisada é a máxima possível e
sem a ocorrência de desnaturação.

Cada enzima tem seu pH ótimo específico de atuação, onde sua atividade será máxima.
Para a maioria das enzimas, o pH ótimo está próximo de 7, ou seja, do neutro. Alterações
extremas de pH podem modificar a estrutura da enzima devido a uma repulsão de cargas,
assim como alterações mais leves de pH podem causar a dissociação de enzimas
oligoméricas.

6. Examinando as estruturas do amido e da celulose, é possível fazer uma hipótese

explicativa para o fato de a celulose não ser um nutriente para o homem? Justifique.

Apesar de ser um polissacarídios da glicose, a celulose, principal elemento estrutural das

plantas, não pode ser digerida pelo homem por conter ligações químicas que resistem ao
ataque das enzimas do sistema gastrintestinal, por terem moléculas com ligação
glicosídica, que dá á molécula uma estrutura espacial linear, formando fibras insolúveis em
água e não digeríveis pelo ser humano.

É vantajoso o uso de enzimas em transformações bioquímicas? Justifique.

Sim. Enzimas, pois em transformações bioquímicas:

- Diminuiem a energia de ativação, causando altas velocidades de reação.

- São bastante específicas.
- São sintetizadas pelas próprias células.
- Tem concentração e atividade ajustáveis, permitindo ajuste fino do metabolismo ao
ambiente celular