Ver artigo online

Lab on a Chip Papel

Publicado a 15 de agosto de 2017. Descarregado por University of Windsor em 15/08/2017 14:09:33.

Fig. 3 Propriedades biofísicas ajustáveis de membranas derivadas de ECM projetadas. A. Gráfico de absorbância de membrana de 350-700 nm. As membranas
derivadas de ECM exibem transparência óptica superior em comparação com inserções de cultura de células transparentes tradicionais, como as membranas de
poliéster Transwell. B. Fotografia digital do COL-Membrana MAT demonstrando sua clareza ótica. Esta membrana foi aparada para o tamanho aproximado usado para
a colagem do dispositivo e mantida sobre o texto impresso usando uma pinça. C. Gráfico de permeabilidade relativa da membrana, representando medições de
transporte de FITC-dextrano de 20 kDa através de COL, COL-MAT, COL-ALG e inserções de membrana PE ao longo de um período de 6 horas sob perfusão de fluxo
paralelo contínuo a uma taxa de fluxo de 100 µlh-1. ** e ns representam P < 0,01 e não significativo, respectivamente. D. Visualização SEM de colágeno tipo I-alginato
(COL-ALG) ultraestrutura da superfície da membrana demonstrando poros maiores e fenestrações (setas) criadas usando alginato como um material sacrificial solúvel
em água, escala bar = 2 µm. E. Medição de nanoindentação por microscopia de força atômica (AFM) do módulo de elasticidade para COL hidratado, 80: 20 COL-MAT,
50: 50 COL-MAT, 20: 80 COL-Membranas MAT e Transwell PE. * representaP < 0,05.

membranas de poliéster (Fig. S3†). A ligação e o sequestro de
moléculas biológicas são uma função crítica da ECM nativa que
muitas vezes é um desafio para replicar usando membranas de
cultura de células sintéticas. Portanto, esta propriedade única pode
ser explorada para aumentar ainda mais a atividade biológica de
nossas membranas ECM de uma forma controlável.
Módulo de Young. A rigidez da membrana basal varia
significativamente dependendo do microambiente mecânico dos
tecidos associados.24 Durante o desenvolvimento embrionário inicial,
por exemplo, a membrana basal é mais elástica para acomodar o
rápido crescimento e expansão dos órgãos em desenvolvimento, ao
passo que se torna mais rígida em estágios posteriores para fornecer
estabilidade mecânica.24,25 Estudos também mostraram que o
envelhecimento e vários tipos de doenças (por exemplo, diabetes) são
frequentemente acompanhados por um enrijecimento significativo
da membrana basal e de seu tecido adjacente.26 Replicando essas
alterações mecânicas fisiologicamente relevantes da membrana basal
nativa em vitro envolve a capacidade de ajustar a rigidez das
membranas de cultura de células de uma maneira predeterminada.
Para demonstrar essa capacidade, variamos a composição da matriz
de nossas membranas ECM e usamos nanoindentação AFM como
uma forma quantitativa de medir seus módulos de Young.
A partir do exame visual qualitativo, observou-se que as
membranas secas de ECM preparadas por nossa técnica eram
rígido e resistente a flexões e torções excessivas, independentemente
da composição. Quando hidratadas, no entanto, as membranas se
tornaram mais macias e mais flexíveis, exibindo transição para uma
aparência gelatinosa de retenção de água (Fig. S4†). Conforme
representado na Fig. 3E, as membranas COL molhadas tinham um
módulo de Young médio de aproximadamente 660 kPa. Quando o
colágeno foi misturado com Matrigel em uma proporção de volume
de 80: 20 (colágeno: Matrigel), a rigidez do COL resultante-As
membranas MAT diminuíram significativamente, produzindo um
módulo de Young de 549 kPa. O aumento da fração de volume de
Matrigel para 50% levou a uma redução adicional do módulo de
Young para 429 kPa. Considerando que Matrigel é composto em
grande parte por proteínas da membrana basal globular, as
alterações observadas na rigidez da membrana são provavelmente
devido à redução do colágeno fibroso tipo I, tornando as membranas
compostas mais flexíveis. Embora poucos dados tenham sido
relatados sobre as propriedades mecânicas das membranas basais
nativas sozinhas, nossos resultados são comparáveis às faixas
fisiológicas de rigidez da membrana basal medidas em vários tipos de
tecido humano,27 incluindo a cápsula da lente (0,3-2,4 MPa),28 retina (1
MPa),27 cóclea (37-135 kPa),29 e vasos sanguíneos (1-3 MPa).30 Em
contraste, as membranas Transwell PE hidratadas foram
consideradas mais de 2 ordens de magnitude mais rígidas, conforme
demonstrado por sua média de Young's

Este jornal é © The Royal Society of Chemistry 2017 Chip de laboratório

 Ver artigo online

Papel Lab on a Chip

módulo de 180 MPa (Fig. 3E). Esses dados ilustram a rigidez
ajustável de nossas membranas ECM e seu potencial como
alternativas promissoras para inserções de membrana
convencionais para modelar microambientes biofísicos
fisiologicamente relevantes.
Incorporação de membranas ECM em cultura microfluídica
Em seguida, investigamos a utilidade de nossas membranas como
substratos de cultura de células em sistemas microfluídicos. Para este
estudo, nós incorporamos membranas ECM entre dois microcanais
paralelos para construir dispositivos perfusáveis de cultura de
Publicado a 15 de agosto de 2017. Descarregado por University of Windsor em 15/08/2017 14:09:33.
A hidratação das membranas com meios de cultura antes da semeadura
das células levou a maior clareza óptica, mas nenhuma alteração
estrutural indesejável foi observada (dados não mostrados).
Para examinar a adesão celular e o crescimento em nossas
membranas de ECM, usamos células epiteliais brônquicas humanas
(BEAS-2b) como uma população de células representativa. Quando as
células foram semeadas em nossos dispositivos contendo
membranas COL, elas se fixaram na superfície da membrana e
começaram a aderir em 30 minutos na ausência de fluxo. A adesão
celular nestes dispositivos não exigiu pré-tratamento das superfícies
do canal com soluções de ECM- uma técnica comum para alcançar a
fixação de células a substratos sintéticos em sistemas microfluídicos

células em multicamadas (Fig. 4A). Nossa técnica de colagem com
base em camadas adesivas de PDMS não curado (Fig. 1F-H) permitiu a
integração perfeita de membranas ECM nas câmaras de cultura de
células sem comprometer a integridade estrutural. Apesar de sua
pequena espessura, as membranas permaneceram intactas e planas
em toda a largura do canal durante e após a montagem (Fig. 4B).
convencionais. Sob condições de cultura de perfusão, as células
continuaram a proliferar por um período de 2-3 dias até formarem
uma monocamada confluente (Fig. 4C e D). Os mesmos padrões de
crescimento foram observados em outros tipos de células, incluindo
células endoteliais (Fig. 4E) e células estromais semeadas nas
membranas COL (Fig. 4F e G). Observação direta e visualização do

Fig. 4 Cultura de células microfluídicas usando membranas derivadas de ECM. A. Fotografia digital de um dispositivo de cultura de células microfluídicas composto por microcanais
superior (azul) e inferior (vermelho) separados por um COL-Membrana MAT (mostrada com linhas pontilhadas). A injeção de corantes alimentícios vermelhos e azuis demonstra a
permeabilidade da ligação do dispositivo e a função de partição da membrana. B. Uma vista em corte transversal do dispositivo ao longo da linha a-a mostrado em A. A membrana
ECM indicada com uma seta branca foi imunomarcada para visualizar o colágeno tipo I. As linhas pontilhadas mostram as paredes do canal. Largura do canal = 500 mícrons. C.
Micrografia de contraste de fase de uma monocamada de célula epitelial brônquica humana confluente (BEAS-2b) formada em uma membrana COL em um microdispositivo de três
camadas. As células foram cultivadas por 72 horas sob condições de fluxo a uma taxa de fluxo de 100µlh-1 Barra de escala = 200 µm. D. Uma monocamada confluente de células
BEAS-2b coradas com corante vermelho CellTracker. Barra de escala = 200µm. E. Células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC) crescidas até a confluência na superfície de
um COL-Membrana MAT visualizada por imagem de fluorescência da expressão da proteína fluorescente verde constitutiva (GFP, verde) após 48 horas de cultura de perfusão
microfluídica a 100 µl hora. Barra de escala = 200µm. F. Fibroblastos de pulmão humano normal (NHLFs) crescendo no COL-Superfície da membrana MAT. O corante Red CellTracker
foi usado para visualizar as células. Barra de escala = 100µm. G. Coloração de imunofluorescência de alfa actina de músculo liso (α-SMA) em NHLFs cultivados no microdispositivo.
Barra de escala = 100µm.

Chip de laboratório Este jornal é © The Royal Society of Chemistry 2017

 Ver artigo online

Lab on a Chip Papel

as células cultivadas foram grandemente facilitadas pela
transparência óptica das membranas ECM (Fig. 4A e C). Em taxas de
fluxo típicas usadas nestes experimentos (70-100 µlh-1), a perfusão do
meio através dos microcanais não teve nenhum efeito adverso
mensurável na integridade da membrana. Sob essas condições de
cultura de perfusão, os substratos COL mantiveram sua arquitetura
de membrana original por períodos prolongados (mais de uma
semana) sem perda de integridade estrutural, demonstrando a
estabilidade a longo prazo de nossas membranas COL e sua
resistência à degradação proteolítica mediada por células (Fig. . S5†).
Publicado a 15 de agosto de 2017. Descarregado por University of Windsor em 15/08/2017 14:09:33.
substratos de brana em nosso dispositivo microfluídico (Fig. 5A). FAK
é um componente importante do complexo de adesão focal que sofre
fosforilação em resposta ao envolvimento da integrina e serve como
um regulador chave das vias de sinalização que medeiam a adesão
celular, proliferação e uma série de outras funções celulares críticas.31-
33 Quando as células foram cultivadas em membranas Transwell PE
nuas ensanduichadas entre dois microcanais, elas mostraram níveis
uniformemente baixos de FAK fosforilado (pFAK) em toda a
monocamada. A incubação das membranas de PE com soluções de
fibronectina antes da semeadura celular levou a um ligeiro aumento
na fosforilação, presumivelmente devido à absorção de fibronectina
na superfície da membrana que facilitou a adesão celular e a

Efeito das membranas ECM na adesão e crescimento celular

Depois de confirmar a capacidade de nossas membranas de suportar
cultura de células microfluídicas, questionamos se as membranas
ECM oferecem vantagens significativas sobre as inserções de
membrana tradicionais para promover células fisiológicas-interações
de matriz. Para resolver esta questão, analisamos quantitativamente
a fosforilação da cinase de adesão focal (FAK) em monocamadas de
HUVECs cultivadas em diferentes tipos de mem-
sinalização mediada por integrina. Quando as membranas COL foram
usadas em nosso dispositivo, no entanto, a coloração de pFAK tornou-
se significativamente mais pronunciada, conforme evidenciado por
um aumento de mais de 2,5 vezes na intensidade de fluorescência em
uma base por célula (P < 0,05) (Fig. 5B). Este efeito promotor foi ainda
mais amplificado pela incorporação do COL-Membranas MAT, caso
em que os níveis de pFAK eram mais de 9 vezes maiores do que
aqueles

Fig. 5 Adesão celular ajustável e formação de monocamada na engenharia Membranas ECM. A. Impacto da composição da membrana no citoesqueleto
organização (coloração com actina, linha superior) e sinalização associada à adesão focal (coloração pFAK, linha inferior) em HUVECs cultivadas. HUVECs foram
semeados em alta densidade e cultivados por 6 horas na superfície de poliéster (PE), poliéster revestido com fibronectina (PE + FN), COL ou COL-Membranas MAT. A
coloração de actina localizada (verde) nas bordas das células indica organização de barreira rápida após a semeadura em COL-Membranas MAT. A coloração da forma
fosforilada da cinase de adesão focal (pFAK, vermelho) localiza complexos de sinalização associados à adesão ativados por adesão às respectivas membranas. Células
cultivadas em COL-As membranas MAT mostram atividades pFAK significativamente aumentadas. Barra de escala = 50µm. B. Quantificação da fosforilação de FAK em
uma base por célula apresentada como a intensidade de fluorescência relativa normalizada para valores obtidos para membranas de PE não revestidas. * e espetaculo
P < 0,05 e P < 0,01, respectivamente. C. Imagens de contraste de fase de células A549 crescendo como agregados em cúpula em membranas COL (esquerda) ou
monocamadas confluentes em COL-Membranas MAT (direita). As células foram cultivadas por 72 horas sob perfusão contínua de meio de cultura a 100µl por hora.
Barra de escala = 200µm. D. Pericitos espalhando-se em COL (esquerda) e COL-Membranas MAT (direita) em canais microfluídicos. Os pericitos expressam um repórter
vermelho do tomate do fator de transcrição Gli1. Barra de escala = 100µm. E. Coloração de integrina alfa-6 (verde) de pericitos (vermelho, repórter Gli1) após 16 horas
de cultura em COL (esquerda) e COL-Membranas MAT (direita). Barra de escala = 200µm.

Este jornal é © The Royal Society of Chemistry 2017 Chip de laboratório


Papel
medido nas membranas de PE nuas (P < 0,01) (Fig. 5B). O aumento da
sinalização de FAK nas membranas compostas também foi
acompanhado pela montagem de fibras de estresse de actina em
feixes grossos na periferia da célula, resultando em intensa coloração
de actina ao longo da célula-junções celulares. Conforme
demonstrado por esses dados, nossas membranas projetadas a partir
de proteínas ECM nativas permitem que as células se envolvam na
superfície de seus substratos subjacentes de uma maneira muito
mais robusta do que é possível com os suportes de membrana
sintética comumente usados. Além disso, a incorporação de
componentes da membrana basal em nossas membranas fornece um
meio eficaz para aumentar ainda mais o envolvimento da integrina e
Publicado a 15 de agosto de 2017. Descarregado por University of Windsor em 15/08/2017 14:09:33.
induzir o rearranjo do citoesqueleto que contribui para a formação de
tecido de barreira com integridade estrutural aprimorada.
Curiosamente, respostas diferenciais de adesão celular
observadas em células endoteliais também foram encontradas em
outros tipos de células aderentes. Por exemplo, células de câncer de
pulmão humano (A549) cultivadas nas membranas COL em nosso
dispositivo exibiram uma morfologia alongada e crescimento 3D em
agregados em forma de cúpula, enquanto formaram monocamadas
2D confluentes na superfície de COL-Membranas MAT (Fig. 5C).
Pericitos, que servem como um componente celular chave do nicho
da membrana basal endotelial,34 são outra população de células
testada em nosso estudo que mostrou respostas distintas a
diferentes composições de membrana. Quando essas células foram
semeadas nas membranas COL, elas mostraram má adesão e
permaneceram arredondadas sem se espalhar por 4 horas após a
semeadura. Em contraste, o COL-As membranas MAT permitiram que
as células se ligassem, se espalhem e estendam as projeções
celulares rapidamente ao mesmo tempo (Fig. 5D). Nossa hipótese é
que a rápida adesão e disseminação do pericito observada no COL-
Membranas MAT foi devido ao engajamento de receptores de
adesão específicos da lamina, como o α6 subunidade integrina.35
Permitindo tempo suficiente para os pericitos aderirem e se
espalharem no COL puro por 16 horas após a semeadura,
comparamos α6 abundância e localização por imunofluorescência e
observada acentuadamente aumentada α6 coloração em membranas
COL + MAT (Fig. 5E). Esses exemplos simples sugerem a possibilidade
de usar nossas membranas ECM para controlar e manipular
racionalmente a adesão e o crescimento celular em modelos de
cultura de células microfluídicas.
Construção de tecido microfluídico-interfaces de tecido
Na cultura de células microfluídicas, as inserções de membrana
semipermeável são usadas predominantemente como barreiras físicas
que separam duas ou mais câmaras de cultura de células adjacentes,
enquanto sua porosidade permite o transporte ativo e passivo de fluidos e
vários fatores solúveis entre as câmaras. Este projeto é comumente
implementado na construção de modelos de cultura de células
compartimentadas em que dois tipos de células distintos são cultivados
em cada lado de uma membrana porosa para replicar interfaces
multicelulares entre dois compartimentos de tecido adjacentes.3,8
Motivados por este uso difundido de inserções de membrana
semipermeável, criamos dispositivos microfluídicos de 3 camadas
contendo COL-Membranas MAT como uma plataforma para projetar
Chip de laboratório
Ver artigo online
Lab on a Chip
vários tipos de tecido-interfaces de tecido sem a necessidade de quaisquer
revestimentos de membrana específicos do tipo de célula ou outro pré-
processamento.
Como um estudo preliminar, realizamos cultura microfluídica de
células epiteliais do pulmão humano em nosso dispositivo para
recriar o ar.-interface pulmonar (Fig. 6A). Para projetar este modelo,
primeiro cultivamos células pulmonares A549 para confluência na
superfície da membrana da câmara superior sob perfusão de meio
contínuo em ambos os lados da membrana. Quando a barreira
epitelial foi formada, o meio foi aspirado suavemente da câmara
superior para expor o lado apical das células ao ar. Devido à
permeabilidade de nossas membranas, esta configuração permitiu a
alimentação basolateral do tecido epitelial, conforme ilustrado por
quase 100% de viabilidade celular após 3 dias de ar-
cultura de interface líquida (ALI) (Fig. 6A). A barreira epitelial
pulmonar em nosso sistema permaneceu viável por períodos
prolongados e evitou efetivamente o vazamento de meio de cultura
da câmara inferior, permitindo a manutenção estável do ar da
microengenharia-interface pulmonar.
Com base nesses resultados, procuramos estabelecer modelos de
co-cultura e replicar a organização estrutural das interfaces biológicas
entre dois tipos diferentes de tecido humano. Usando os mesmos
dispositivos de 3 camadas e técnicas de cultura de perfusão, por
exemplo, geramos tecidos vivos de duas camadas que lembram o
tecido epitelial-interface estromal que consistia em uma
monocamada de células epiteliais brônquicas humanas (BEAS-2b) e
uma camada de fibroblastos primários de pulmão humano (NHLFs)
separados por um COL-Membrana MAT (Fig. 6B). Neste modelo, os
NHLFs foram semeados em baixas densidades e mantidos em meio
sérico inferior para minimizar a proliferação celular e para mimetizar
a celularidade frouxa do tecido conjuntivo subepitelial em muitos
órgãos. Estratégias de co-cultura semelhantes foram aplicadas com
sucesso para modelar o epitélio-endotelial (Fig. 6C) e vascular-
interfaces estromais (Fig. 6D) em nosso sistema microfluídico.
Finalmente, modificamos o design do nosso dispositivo
para incorporar COL-Membranas MAT entre um micropoço
aberto e uma câmara de cultura celular inferior para explorar
a possibilidade de combinar esferóides 3D com camadas de
tecido 2D (Fig. 6E). Neste estudo, nós pré-formamos
esferóides tumorais através da cultura de células de
adenocarcinoma pulmonar A549 em poços de agarose e as
introduzimos no poço aberto de nosso dispositivo. NHLFs
foram semeados na câmara inferior e cultivados no outro
lado da membrana para modelar a arquitetura de tumores
sólidos e seus fibroblastos associados. Embora a adesão dos
esferóides à superfície da membrana induziu o crescimento
de células cancerosas, a disseminação resultante dos
esferóides não foi significativa o suficiente para causar a
desintegração do tecido, tornando possível reter a
tridimensionalidade e circularidade dos esferóides, como
mostrado na Fig. 6E.
Como demonstrado, nossas membranas ECM têm a flexibilidade
de acomodar a co-cultura de vários tipos de células e fornecer
suportes estruturais estáveis para reconstituir suas distribuições
espaciais relativas de uma maneira fisiologicamente relevante. Esses
Este jornal é © The Royal Society of Chemistry 2017
 Ver artigo online

Lab on a Chip Papel

Publicado a 15 de agosto de 2017. Descarregado por University of Windsor em 15/08/2017 14:09:33.

Fig. 6 Engenharia on-chip de tecido-interfaces de tecido usando membranas ECM. A. Ar-cultura de interface líquida de células de adenocarcinoma humano (A549) em
um dispositivo de microfluidos de 3 camadas. As imagens de contraste de fase mostram monocamadas epiteliais confluentes após 48 horas de cultura submersa (“
submerso”) e 72 horas de cultura ALI (“TODOS”). A imagem de fluorescência das células coradas com fluorescência de calceína-AM (verde) indica virtualmente 100% de
viabilidade. Barras de escala = 200µm. B. Células epiteliais brônquicas humanas (BEAS-2b, vermelho CellTracker) são cultivadas na superfície superior de uma
membrana ECM com fibroblastos de pulmão humano (NHLFs, CellTracker verde) semeados em baixa densidade na superfície da membrana inferior para recriar o
epitélio das vias aéreas-interface estromal no pulmão. Barra de escala = 200µm. C. Epitelial-barreira endotelial composta por células BEAS-2b (vermelho CellTracker) e
HUVECs (GFP, verde) cultivadas nos lados opostos de um COL-Membrana MAT. A renderização 3-D foi conduzida para mostrar uma visão angular das camadas de
células. Barra de escala = 200µm. D. Co-cultura de HUVECs (verde) e NHLFs (vermelho). Barra de escala = 200µm. E. Um esferóide pré-formado de células de
adenocarcinoma de pulmão humano (A549, red CellTracker) é cultivado na superfície da membrana superior em um micropoço PDMS estático. NHLFs (verde) são
cultivados no outro lado da membrana em um canal microfluídico para imitar o arranjo espacial de tumores sólidos e suas células estromais associadas no tecido
circundante. Barra de escala = 200µm. Detalhe: seção óptica confocal de coloração com calceína-AM (verde) em um esferóide representativo cultivado por 96 horas em
nosso microdispositivo, demonstrando a viabilidade das células em todo o esferóide. Barra de escala = 200µm.

resultados destacam o potencial de nossas membranas como um bloco de
construção essencial de sistemas de co-cultura microfluídica para modelar
vários tipos de tecido-interfaces de tecidos durante a saúde e a doença.
organização sugere a possibilidade de engenharia do fenótipo de
células usando pistas instrutivas contidas em membranas de cultura.
Quando combinado com matrizes extracelulares específicas de tecido
(por exemplo, tecido descelularizado) que têm sido cada vez mais
reconhecidos como determinantes críticos do destino e função das

Conclusões células, nossas membranas podem permitir novas estratégias para

Neste artigo, descrevemos uma técnica de engenharia de hidrogel
simples, mas versátil, para criar membranas de cultura de células
semipermeáveis que imitam a arquitetura fibrosa e a composição
das membranas basais nativas. A integridade estrutural,
transparência óptica e propriedades biofísicas ajustáveis desses
análogos biomiméticos de ECM os tornam atraentes para uso em
sistemas de cultura de células microfluídicas. Em comparação com as
inserções de cultura de células tradicionais feitas de polímeros
sintéticos, nossas membranas compostas inteiramente de proteínas
ECM naturais fornecem microambientes celulares mais insolúveis
fisiológicos, conducentes à promoção da adesão e do crescimento
celular. Também mostramos a utilidade dessas membranas para a
construção de modelos microfisiológicos de estruturas de tecidos em
várias camadas.
Embora mais investigações sejam necessárias, os efeitos
demonstrados da composição da membrana na adesão celular e no tecido
induzir respostas fisiológicas ou patológicas desejadas de uma forma
programável. Tais capacidades permitiriam que as membranas de
cultura de células servissem como um regulador ativo externamente
controlável de processos biológicos para o desenvolvimento e
otimização de modelos de cultura de células microfisiológicas mais
preditivas. Além disso, a simplicidade, acessibilidade e
controlabilidade de nossa técnica de fabricação fornecem vantagens
atraentes para uso difundido e podem oferecer um meio para
abordar as opções limitadas de inserções de membrana
semipermeável comercialmente disponíveis.
O trabalho futuro se concentrará em abordar as limitações atuais
de nossas membranas de ECM. É necessário um controle de
engenharia mais refinado da espessura da membrana para modelar
todo o espectro da espessura da membrana basal observada nas
condições fisiológicas e patológicasna Vivo. Embora nossas
membranas compostas de colágeno tipo I derivado de roedores e
Matrigel derivado de tumor tenham demonstrado

Este jornal é © The Royal Society of Chemistry 2017 Chip de laboratório


Papel
bioatividade para cultura de células humanas, estudos futuros devem
explorar a possibilidade de utilizar materiais de ECM derivados de
humanos para desbloquear todo o potencial de nossa tecnologia. Um
conjunto de técnicas descritas neste artigo fornecerá uma plataforma
robusta para testar misturas racionalmente projetadas de diferentes
ECM e materiais de sacrifício e para controlar com precisão as
propriedades críticas da membrana (por exemplo, Composição,
permeabilidade e rigidez de ECM) que desempenham um papel
crucial na regulação dos fenótipos celulares em vitro. Apesar das
limitações de nosso estudo, acreditamos que nosso trabalho
estabelece uma nova abordagem para a engenharia programável e
específica de aplicações de membranas de cultura de células que
Publicado a 15 de agosto de 2017. Descarregado por University of Windsor em 15/08/2017 14:09:33.
aumentará muito a relevância fisiológica e o poder preditivo da
microfluídica em vitro modelos e órgãos em chips para uma
variedade de aplicações biomédicas, farmacêuticas e ambientais.
Reconhecimentos
Este trabalho foi apoiado pelo National Institutes of Health
(NIH) Do diretor Novo Inovador Prêmio paraD. H.
(1DP2HL127720-01). Agradecemos ao Dr. Benjamin Humphreys por
a Gli1-Tomato-expressing roedor pericitos,
Brukman pela assistência com microscopia de força atômica, e
Raymond Meade pela assistência com microscopia eletrônica
de varredura. Agradecemos também G. Alm, Brian Nam,
David Conegliano, Jeongyn Seo, Cassidy Blundell, Eric Esch e
Megan Farrell por suas valiosas contribuições.
Referências
1 EW Esch, A. Bahinski e D. Huh, Organs-on-chips no
fronteiras da descoberta de drogas, Nat. Rev. Drug Discovery,
2015, 14 (4), 248-260
2 SN Bhatia e DE Ingber, órgãos microfluídicos em chips,
Nat. Biotechnol.,2014, 32 (8), 760-772.
3 D. Huh, GA Hamilton e DE Ingber, da célula 3D
cultura para órgãos em chips, Trends Cell Biol., 2011, 21 (12), 745-
754.
4 C. Blundell, et al., Um modelo microfisiológico do ser humano
barreira placentária, Chip de laboratório, 2016, 16 (16), 3065-3073.
5 Y. Choi, et al., Um modelo fisiopatológico de microengenharia
de câncer de mama em estágio inicial, Chip de laboratório, 2015, 15 (16),
3350-3357.
6 D. Huh, et al., Um modelo de doença humana de toxicidade de drogas
edema pulmonar induzido em um microdispositivo lung-on-a-chip,
Sci. Tradução Med.,2012, 4 (159), 159ra147.
7 D. Huh, et al., Reconstituindo as funções pulmonares em nível de órgão em
um chip, Ciência, 2010, 328 (5986), 1662-1668.
8 D. Huh, et al., Microfabricação de órgãos humanos em chips,
Nat. Protoc.,2013, 8 (11), 2135-2157.
9 D. Huh, YS Torisawa, GA Hamilton, HJ Kim e DE
Ingber, Biomimética fisiológica microengenharia: chips de órgãos,
Chip de laboratório, 2012, 12 (12), 2156-2164.
10 JH Lo, EK Bassett, EJ Penson, DM Hoganson e
JP Vacanti, Gas Transfer in Cellularized Collagen-
Chip de laboratório
Ver artigo online
Lab on a Chip
Dispositivos de troca de gás de membrana, Tecido Eng., Parte A,
2015, 21 (15-16), 2147-2155.
11 L. Richter, et al., Monitorar as respostas ao estresse celular para
nanopartículas usando um lab-on-a-chip, Chip de laboratório, 2011, 11 (15),
2551-2560.
12 Y. Sun, CS Chen e J. Fu, Forcing stem cells to behave: a
perspectiva biofísica do microambiente celular,
Annu. Rev. Biophys.,2012, 41, 519-542.
13 PC Dingal e DE Discher, combinando insolúvel e
fatores solúveis para orientar o destino das células-tronco, Nat. Mater.,
2014, 13 (6), 532-537.
14 B. Li, J. Chen e JH Wang, RGD peptide-conjugated
poliIJdimetilsiloxano) promove a adesão, proliferação e secreção
de colágeno de fibroblastos humanos, J. Biomed. Mater. Res.,
Parte A,2006, 79 (4), 989-998.
15 VS Le Bleu, B. Macdonald e R. Kalluri, Structure and
função das membranas basais, Exp. Biol. Med.,
2007, 232 (9), 1121-1129.
16 J. Albuschies e V. Vogel, The role of filopodia in the
reconhecimento de nanotopografias, Sci. Rep.,2013, 3, 1658.
17 KB Neeves e SL Diamond, um micro baseado em membrana
dispositivo fluídico para controlar o fluxo de agonistas plaquetários em
Mateus
sangue fluindo, Chip de laboratório, 2008, 8 (5), 701-709.
18 Y. Liu, D. Yang, T. Yu e X. Jiang, Incorporation do
eletrofiado nanofibra PVDF membranas para dentro uma
microfluídico chip montado por PDMS e fita adesiva para
imunoensaios, Eletroforese, 2009, 30 (18), 3269-3275.
19 C. Iliescu, H. Taylor, M. Avram, J. Miao e S. Franssila, A
guia prático para a fabricação de dispositivos
microfluídicos usando vidro e silício, Biomicrofluídica,
2012, 6 (1), 16505-1650516.
20 PD Yurchenco, Membranas basais: andaimes celulares
e plataformas de sinalização, Perspectiva de Cold Spring Harbor. Biol.,
2011, 3 (2), a004911.
21 SR Gordon, anticorpo de fibronectina marca o estroma corneano
fibrilas de colágeno in situ ao longo de seu comprimento e
circunferência e demonstra coloração distinta ao longo da célula
e interfaces estromais da membrana de Descemet, Curr. Eye Res.,
2014, 39 (3), 312-316.
22 R. Kalluri, Membranas de base: estrutura, montagem e
papel na angiogênese tumoral, Nat. Rev. Cancer,2003, 3 (6),
422-433.
23 MJ Randles, MJ Humphries e R. Lennon, Proteomic
definições da composição da membrana basal na saúde e na
doença, Matrix Biol., 2016, 57, 12-28
24 P. Lu, K. Takai, VM Weaver e Z. Werb, Extracellular matrix
degradação e remodelação no desenvolvimento e doença,
Perspectiva de Cold Spring Harbor. Biol.,2011, 3 (12), a005058.
25 P. Friedl e D. Gilmour, migração celular coletiva em
morfogênese, regeneração e câncer, Nat. Rev. Mol. Cell Biol.,
2009, 10 (7), 445-457.
26 M. Para, et al., Morfológica induzida por diabetes, biomecânica
mudanças cal, e composicional nas membranas basais
oculares, Exp. Eye Res.,2013, 116, 298-307.
27 J. Candiello, et al., Propriedades biomecânicas de nativos
membranas basais, FEBS J., 2007, 274 (11), 2897-2908.
Este jornal é © The Royal Society of Chemistry 2017

Lab on a Chip
28 S. Krag, T. Olsen e TT Andreassen, Biomecânica
características da cápsula da lente anterior humana em relação à
idade, Investir. Ophthalmol. Visual Sci.,1997, 38 (2), 357-363.
29 R. Gueta, D. Barlam, RZ Shneck e I. Rousso,
Medição das propriedades mecânicas da membrana
tectorial isolada usando microscopia de força atômica,
Proc. Natl. Acad. Sci. EUA,2006, 103 (40), 14790-14795.
30 CT McKee, JA Last, P. Russell e CJ Murphy, Recuo
versus medições de tração do módulo de Young para tecidos
biológicos moles, Tissue Eng., Parte B, 2011, 17 (3), 155-164
31 SK Mitra, DA Hanson e DD Schlaepfer, Focal
cinase de adesão: no comando e controle da motilidade celular,
Publicado a 15 de agosto de 2017. Descarregado por University of Windsor em 15/08/2017 14:09:33.
Nat. Rev. Mol. Cell Biol.,2005, 6 (1), 56-68
Este jornal é © The Royal Society of Chemistry 2017
Ver artigo online
Papel
32 TS Panetti, fosforilação da tirosina de paxilina, FAK, e
p130CAS: efeitos na propagação e migração celular, Frente.
Biosci., Landmark Ed.,2002, 7, d143-d150.
33 X. Zhao e JL Guan, cinase de adesão focal e seus
vias de sinalização na migração celular e angiogênese, Adv.
Drug Delivery Rev.,2011, 63 (8), 610-615.
34 A. Armulik, G. Genove e C. Betsholtz, Pericytes:
de desenvolvimento, fisiológico e patológico
perspectivas, problemas e promessas, Dev. Célula,
2011, 21 (2), 193-215
35 V. Ramovs, L. Te Molder e A. Sonnenberg, Os oponentes
papéis das integrinas de ligação à laminina no câncer, Matrix Biol.,
2016, 57-58, 213-243.
Chip de laboratório