ANTIBIOGRAMA: método de difusão em meio sólido

Profa. Dra. Dilza A. Nalin de Oliveira Leite

Objetivo: verificar a sensibilidade de micro-organismos à anti-microbianos.

Consiste em se medir a zona de inibição do crescimento microbiano ao redor de um

disco com antibiótico colocado sobre a superfície de uma placa de Petri contendo meio
sólido.

Material:

- Placas com meio sólido adequado ao microrganismo.

- Alça de Drigaslky ou swab (cotonete) para espalhar a cultura.
- Discos para antibiose (comerciais ou preparados no laboratório).
- Solução concentrada de antimicrobiano para impregnação dos discos numa
concentração usual recomendada para fermentação.
- Placas de Petri com meio sólido adequado ao micro-organismo teste.
- Pinça esterilizada em álcool (flambada).
- Estufa a 36ºC.

Método:

Utilizar suspensão diluída do micro-organismo teste após ser incubado por 24h (0,1 para
9,9mL salina), pois o desenvolvimento excessivo acarreta diminuição da zona de
inibição e falsifica a interpretação. Colocar 0,1mL desta suspensão em placa de Petri
com meio sólido adequado ao microrganismo. Espalhar com alça de Drigalsky ou swab
a seguir colocar os discos secos.
Os discos de papel de filtro são impregnados com soluções de antibióticos (adquiridos
comercialmente) ou preparados com pequenos volumes de soluções concentradas destes
antimicrobianos (usar logo após sair o excesso de umidade). Assepticamente (com pinça
flambada no álcool) colocar 3 discos ao redor da placa e um branco no centro. Fazer
uma leve pressão sobre cada um destes para obter boa aderência. Inverter as placas e
incubá-las a 36ºC, durante 24h.

Resultados

Micro-organismo 1 Micro-organismo 2
Antimicrobianos Medição do halo (mm), após 24 h incubação a 36ºC.
1-
2-
3-
4-
5-
6-
7-
Linhagem sensível: θ > 2 mm
Linhagem com sensibilidade limiar: θ < 2 mm
Linhagem resistente: ausência de halo.