V Curso de Monitoramento: Teórico-prático da Fermentação Etanólica.

TÉCNICA DE MICROCULTIVO

Profa.Dra. Dejanira de Franceschi de Angelis – Orientadora / Coordenadora

MSc. Márcio Antônio Gomes Ramos – Químico
Téc. Inês Ap. Basso Dalfré
Letícia Mariele Feliciano – Biomédica

1. INTRODUÇÃO
A técnica sobre microcultivo de micro-organismos é utilizada na verificação das estruturas de
crescimento e organização morfológica das células, no caso de fungos filamentosos a técnica é utilizada
no auxílio para identificação de espécies, sem que haja interferência pelo manuseio, permitindo a
observação na condição tridimensional especialmente das estruturas aéreas.

2. OBJETIVO

Identificar mediante a morfologia de crescimento das leveduras, possíveis contaminantes.

3. MATERIAL E MÉTODOS
3.1 Material

Ágar Estufa Microscópio

Água destilada Estufa de Cultura Papel de filtro
Alça de inoculação Espátula Pequeno bastão de vidro recurvado
Algodão Fubá Pinça
Béquer Fungo Placa de Petri
Corn Meal Agar Lâmina
Erlenmeyer Lamínula

3.2. Método

3.2.1. Preparo do meio “Corn Meal”

Pesar 5,1 g de meio Corn Meal Agar em 300 mL de destilada, ou suspender homogeneamente em
béquer de 500 mL, 12,6 g de fubá em 300 mL de água destilada, aquecer a 60°C durante 1 hora, filtrar em
papel filtro (se necessário re-filtrar).

Completar o volume de água perdido com a evaporação. Acrescentar 3,9g de agar, dissolver em
banho-maria, transferindo para Erlenmeyer de 500 mL. Autoclavar a 1 atm, 120°C durante 20min.
 Inverter o meio, sob fogo em bico de Bunsen após leve resfriamento para placas de Petri,
previamente esterilizadas.

3.2.2. Preparo do microcultivo

Adicionar assepticamente, com auxílio de uma espátula sobre a lâmina que está na placa de Petri
esterilizada – dois quadrados de aproximadamente 1 cm2 de meio “corn meal”.
A lâmina deve estar sobre um suporte, que pode ser um pequeno bastão de vidro recurvado ou
pedaços de palito de madeira. Semear a cultura, com a alça de inoculação, a partir de uma cultura recente,
no meio “corn meal”. Colocado na lâmina recobrir, com auxílio de uma pinça estéril, a lamínula
esterilizada sobre o inóculo.
Adicionar água destilada estéril no fundo da placa contendo papel de filtro ou embeber um
pequeno chumaço de algodão estéril, para evitar o ressecamento do meio de cultura, durante o crescimento
do micro-organismo. Incubar a 28°C por 24 – 48 horas e examinar ao microscópio.
Esquema de montagem do microcultivo:

Fonte: Anvisa, 2004, adaptado.

Foto: Placa de Petri montada para Técnica do Microcultivo (Ramos, M., 2010).
 3.3. Resultado e interpretação
Examinar ao microscópio e esquematizar as estruturas e morfologias do micro-organismo. A cultura
cresce, aparecendo as estruturas bem separadas e intactas, permitindo, assim, o estudo detalhado da
micromorfologia dos micro-organismos.

Figura 1: Penicilliun sp Figura 2: Aspergillus y aspergilosis

www.fmrp.usp.br/.../image002.jpg www.uprm.edu/.../Aspergilosis_files/image002.gif

Figura 3: Saccharomyces
www.portalsaofrancisco.com.br/.../fungos-89.jpg Figura 4: Dekkera - microscopia 400x (Ramos, M., 2010).

Figura 5. Saccharomyces - floculante (400 X) Figura 6. Candida viswanatii - formação de

pseudomicélio (400 x.)
4. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

AGÊNCIA NACIONAL DE VIGILÂNCIA SANITÁRIA. Detecção dos fungos de importância médica

módulo VII. Disponível em: http://www.anvisa.gov.br/servicosaude/microbiologia/ mod_7_. Acesso em
25 jan. 2009.

ANGELIS, D. F.; VALSECHI, O. A. (Coord.). II Curso de monitoramento teórico e prático da

fermentação etanólica.Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho”, Rio Claro, 2008.

RIBEIRO,C.R.; SOARES,M.M.S.R. Microbiologia prática roteiro e manual – bactérias e fungos. 1ª

ed., p. 89-91. Ed.Atheneu 2001.