DADE BEHRING
MicroScan®
‘Manual de Procedimento para Gram Negativo Desidratado
‘As alteragGes a0 manual de procetimertos sio indlcadas através de Sombeamenta.
Fim a que se destina
Para utilizagdo com os Painéis Desidratados para
Gram Negativo CIM/Painéis Combo e para os
Painéis Desidratados Combo de Ponto de Corte
para Gram Negativo MicroScan,
(s paingis MicroScan® foram eoncebidos para
serem utilizados na determinagio da
susceptibilidade do agente antimicrobiano e/ou
para a identificagio do nivel da espécie de
bacilos gram negativos aerobios e anaersbios
facultatives
Resume e Prineipios
(s testes de susceptbilidade antimicrobiana so
‘miniaturizagdes de testes de susceptibilidade por
) a concentragio mais elevada.
©) Quando nao ocorre erescimento em qualquer das concentragées dos antimicrobianos, a
CIM registada & menor ou igual (<) & concentragZo mais baixa,
4) Um pogo limpido numa série de pogos de erescimento, p.cx., crescimento a 1, 2¢ 8
ig/ml, mas néo a 4 ug/ml é chamado um pogo salteado € deve ser ignorado,
2) Resultados de Ponto de Corte
8) A seguir a uma incubagdo de 16-20 horas, a falta de crescimento nos antimicrobianos é
registada como “S” (Susceptivel)
b)Umerescimento nas concentragdes mais baixas do antimicrobiano, mas niio nas
concentragdes mais elevadas, €registado como “I” (Intermédio)
©) Umerescimento em ambas as concentragoes do antimierobiano ou num pogo tinico de
‘uma diluigo de antimicrobiano é registado como “R” (Resistente).
4) Se existe crescimento na concentrago mais elevada do antimicrobiano mas niio na
concentragiio mais baixa, © pogo pode estar contaminado e o teste deve ser repetido,
3) Crescimentos em mancha em posos isoladas indicam contaminagio. O teste deve ser repetido.
4) Poderd observar-se um "efeito de arrastamento" em algumas combinagdes de
16 mga (erescimeato era todos 08 pogos).
CIM na cofuna 3 = $ 0,12 nw/ml (Sem erescimento em qualquer pose). 27
‘CIM na coluna 4= 2 gin! (eftito de rasto nos pogos 2-8; efit tipieo 4
derasio de T/). 84
CIM na coluna 5 =< 0,12 ng/ml (efito de rato em todos 0s poses, 16-0
‘portato & CIM & < Ito €spico de algumas combinagies
sntimicrobiano/microorganismo),
CIM na coluna 6 =< 0,12 ml
6. Leitura de Identificagio de Substratos
a. _Efectue a leitura de todos os substratos de identificagdo em fundo branco excepto o CET os
antimicrobianos utilizados para identificagio (Cli, Cf, Ps, Ks, Fda, To4) que devem ser lidos
sobre fundo preto (iluminagdo indirecta),
b__ Fermentadores de glucose ~ Se apés 16-24 horas de incubag3o, o GLU se apresenta amarelo forte,
‘© microorganismo ¢ um fermentador de glucose ¢ devem ser lidos os 24 testes de fermentador de
‘Elucose, No caso de a reacgio da glucose se apresentar cor de laranja ou vermelho, 0
‘microorganismo nio € um fermentador de glucose. Algumas espécies nio fermentativas de
zlucose podem produzir ume coloragao dourada que deve ser considerada negativa. Algumas
cespécies de Pasteurella nao crescerio no poco de glucose se este estiver coberto com éleo mineral
‘mas fermentardo a sucrose e/ou o sorbitol. No easo do pogo GLU no mostrar creseimento e
‘SUC ou o SOR forem positives, tratar como um fermentador de glucose.
€. Nio fermentadores de glucose Os organismos nao fermentadores de glucose podem ser lidos
p65 16-24 horas de incubagio, no caso de qualquer das seguintes combinagdes de testes serem
positivas: (1) ARG e OF/G ou ARG e CET, (2) LYS, ou (3) ORN. Se todas estas reacgdes forem
negativas ¢ exist ereseimento no pogo de crescimento, registe os CIM, CET, ¢ 08
antimicrobianos utilizados para a identificagio e volte a ineubar por mais 24 horas antes de
cefectuar uma leitura final e identificagio.
4. Se, depois de nova incubagao, 0 microorganismo continuar nio reactivo, verifique que 0
microorganismo teve erescimento nos hidratos de carbono de fenol vermelho (cm particular no
‘caso de ter havido pouco ou nenhum ereseimento no controlo de erescimento de Mueller-Hilton),
[No caso de nfo se apresentar crescimento nos hidratos de carbone de fenol vermelho, deve-se
suspeitar de um microorganismo fastidioso tal como um Vibrio halofilico ou uma espécie de
Yersinia que apresenta um melhor crescimento a 25°C, ou um membro do grupo
Pasteurella/Actinobacillus. Uma coloragao de Gram deve ser repetida para confitmar que se trata
dde um organismo gram-negative,
[No caso de se suspeitar de um Vibrio halofilico, volte a testar emulsionando varias colénias em
3,0 ml de soluglo salina esterilizada a 0,85%. A turvagdo final deve ser equivalente a um Padrio
‘de Turvagdo de Sulfato de Bario de McFarland 0,5. Volte a hidratar o painel com 25 ml de Agua
para Inoculagéo com PLURONIC no inoculada utilizando um RENOK". Utilizando ume pipeta
3250-76804 6ae1s ce e distribuigao esterlizada adicione uma gota (45-50 jt) da suspensio salina a cada pogo de
identificagio incluindo os pogos de crescimento, os pogos Cl, ¢ Cf. Incubar os paingis a 35°C
durante 16-24 horas.
¢. Antes da leitura, adicionar os reagentes do seguinte mode:
1) Adicionar uma gota de hididxido de potissio (KOH) a 40% ea seguir um gota de alia nafto a
'5% a0 pogo VP. Espere pelo menos 20 minutos para que a reaegao VP se desenvolva.
2) Adicionar 1 gota de cloreto férico a 10% ao pogo TDA. AA colorayio seré imediatamente
desenvolvida
3) Adicionar 3 gotas do reagente MieroScan" de Kovac’ ao pogo IND. A colorag seri
imediatamente desenvolvida
4) Para todos os microorganismos de CQ ¢ os nio fermentativos clinicos, adicionar 1 gota de
‘vido sulfanilico a 0,8% , em seguida, uma gota de N, N-dimetil-alfnaftilamina ao pogo
NIT. Esperar pelo menos 5 minutos antes de efectuar a leitura para. a reaegao NIT se
desenvelver.
£ Consulte a secgdio RESULTADOS para obter ajuda na interpretagdo bioguimica
Controlo de Qualidade
A accitabilidade dos meios de identificagZo e dos agentes antimicrobianos deve ser verificada testando os
‘organismos em reacgdes ¢ intervalos de CIM conhecidos. Consultar a Tabela de referéncia de CQ
internacional para obter organismos de Controlo da Qualidade ¢ 0s resultados de ponto final acetiveis
* 0 reagente de Kovac MicroScan" é uma formula especial concebida para a utilizago com os
instrumentos MicroScan* Apenas uma gota deve ser utilizada no caso de o painel ser lido
manualmente,
3250-76804 Taos ce Resultados
A, Resultados Bloquimicas
1. Interpretagdes Bioquimicas
Pogo Reagente
GLU
Positive
‘apenas anal Tone
Negative
Tarun a vermatio
Alans no fermentatvos podem produzi uma
Cx ee 1632 Sot
‘Cefuoxima ail (ora -Brrrahactriaceae crm <4 ele 22
‘Cefoxina sho (puentera)- Enerobucteracene Cm =8 16 =a
‘Coalotina = Eerobuctelaceae cess e B32
‘Gloranienicol"—F- cholerae wamnegaivosquraio C= 16 53
Peecreghan
Cipeoftoxcina et z En
‘Colisina=+ gram napaivos nchindo P-aoragnosa C=? St
Doviielins™ V. cholerae pram negativos incuindo” Dox = ¥ 216
Prooruginos
Foafomcing!| Fos 32,
Gentian Gi = Be
imipenem my s ET
Mecilinn®nneroacaeae ‘Mer a Se
Meropenen Mer = =e
3250-76804 oes ce Melon’. aerasiona ia
‘outros grim negate 20s
aot S08
Nettie ‘Nt is =
‘Nirofuanuinn Ber obarieriaceae Fd a =e
‘Norflosacina| Naw 5 S16
‘Ofoxasina on H Be
Pefloxacia? Pet z Sa
‘eid Pipemiion pA <8 16 S16
PipenallinaTarabactan PT
Peaerupinosa sos 2 12k
oats gram nezativos 164 sous > 1288
Piperaciin Wi
Pacruginesa <4 : > us
utes grr negatives 516 iw 2008
Bullametonazl 7. cholerae &
gin negtivas que no P aeruginosa 5286 zs
Tesrciclina*- 7. choleraee Teed 7 B16
szam negatives que mo P.aeruginasa
TiearelnalK Cavulanata™ Te
P-aeraginosa oun 21282
‘Outros gra negatives 162 sep-e4n 51282
Tieareiina 7
Peaoriginoss 8
‘uta gram netivos e168 ae 2128
Tobranicine Te <4 « S16
Teimetoprin Salfrsetonazaie Ts <288 2a76
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Limitagées do Procedimento
1. Bactérias fastidiosas ~ Haemophilus e outras bactérias fastidiosas gram negativas nio se desenvolverio
«em caldo de cultura de Mueller-Hinton que nao tena sido enriquecido com suplementos de
crescimento,
2. Bactérias anaerdbias ~ Os paingis de antimierobianos ¢ os procedimentos aqui deseritos sao adequados
apenas para bacilos anaerébios facultativos e gram negativos aerébios.
3. Estudos de investigagdo sobre a actividade in vitro do Cefamandole contra a Enterobacter spp.
demonstraram uma grande frequéncia de variantes resistentes presentes nas culturas em caldo de
Enterobacter spp, sugerindo que a quimioterapia com Cefamandole contra estes microorganisms deve
ser cuidadosamente avaliads quando comparada com outras cefalosporinas ou outros agentes
antimicrobianos.”
4, No caso de existir a identificagtio de mais do que uma espécie listada para um nimero espeeifico de
bi6tipo, podem ser necessirios testes suplementares listados no livro de eédigos para determinar a
identificagao final,
S.A interpretagio dos resultados dos testes requer pessoal clinic treinado que deve fazer uso do seu
proprio julgamento, dos seus conhecimentos ¢ de testes confirmatérios adicionais sempre que
necessitio antes de aceitar a identificagao de um microorganismo.
6. Osnntimeros de bistipo nio devem ser utilizados para a identificagio fenotipica de estirpes isoladas de
vrias amostras do mesmo doente.
3250-76804 Meets ce 7. Os resultados obtidos com as seguintes combinagSes microorganismofagente antimicrobiano
:mostraram CIMs discrepantes quando comparadas com um método de referéncia . No caso do agente
antimicrobiano ser crucial para o tratamento do doente, deve ser utilizado um procedimento
alternativo,
pias oab | Oe
‘ag reac,
sa Soe
emt ae
8 Os resultados de testes comparativos entre Paingis Gram Negatives Desidratados MicroScan” e paingis,
de referéncia congelados NCCLS nio coincidem com os Intervalos Aceitiveis de Controlo de
Qualidade NCCLS para E.coli ATCC 25922, E.coli 35218 e P.aeruginosa ATCC 27853 com alguns
agentes antimicrobianos,
9. O desempenho dos métodos altemativos foi comparado com os resultados obtidos com Painéis
Desidratados lides manualmente utilizando o método padrio da turvagio do inoculado.
10. © desempenho de Cefepime, Meropenem, ¢ Ceftazidima/K Clavulanato niio foi estabelecido com os
métodos de indeulo da fase logaritmica e estaciondria. O indeulo deve ser preparado usando os
métodos de turvagio ou Prompt™.
11. Os resultados de identificacio para isolamentos de P. aeruginosa podem nao ser fidveis em doentes|
com fibrose quistica devido a diferengas nas reacgdes bioquimicas entre estes isolados e outros
P. aeruginosa, Devem ser utilizados métodos alternativos para a identificagio da suspeita de
P. aeruginosa cultivada de doentes com fibrose quistica.
12. Os resultados obtidos em autoSCAN-4 com isolamentos de P. aeruginosa de doentes com fibrose
uistice mostraram CIM diserepantes quando comparados com um método de referéncia overnight.
Devido ao potencial para um crescimento muito ligeiro com P. aeruginosa de doentes com fibrose
uistica, os resultados de CIM para estes isolamentos devem ser obtidos através da leitura manual de
painéis ou com um instrumento WalkAway®,
13. Podem observar-se CIM elevados com antimicrobianos beta-lactimicos (ex: aztreonam) se os painéis
estiverem sobre-inoculados com mieroorganismos tais como Pseudomonas aeruginosa, Serratia spp.
Proteus spp, Morganella spp., ¢ Providencia spp. As concentragées de inéculo so criticas com estes
agentes antimicrobianos uma vez que o seu mecanismo de aeglo envolve a rotura na sintese das
paredes de células bacterianas, O utilizador deverd prestar especial atengio & preparagio do indculo
‘nomeadamente com métodos manuais que sio tecnico-dependentes como o sistema Prompt ou
qualquer método de preparagio de inéculo sem presenga de um dispositive fotométtico,
Resultados que induzem em erro
A Norma M7-A4 da NCCLS especifica que podem ocorrer resultados que induzem perigosamente em erro
‘quando testados contra determinados microorganismos. Estas combinagies incluem: cefalosporinas ¢
aminoglicosidos de primeira e de segunda gerasio contra Salmonella ¢ Shigella spp. O Sistema de Gestio
de Dados (SGD) registaré apenas a CIM, c nio a interpretagdo, sempre que ocorram as combinagdes
‘microorganismo/antimicrobiano listadas acima,
Valores esperados
Para obter os valores esperados, consulte os Mapas de Percentagens no Livro de eédigos dos bidtipos de
bacilos gram negativos aerébios MicroScan* ou no Manual de Microbiologia para Fermentadores de
Glucose e Nao Fermentadores/Fermentadores Lentos de Glucose
3250-76804 1eéeis ce Caracteristicas de Desempenho
(© desempenko dos Painéis Desidratedos MicroScan’” foi estabelecido em avaliagSecs realizadas em varios
Taboratérios elinicos. Os agentes antimicrobianos foram testados num painel desidratado MicroSean”
utilizando 0 método de turvagio do inéculo, tendo sido submetidos a leitura manual. Estes resultados
foram comparados com um sistema de microdiluigao de referéneia para CIM.
Reprodutibilidade
Foram realizados estudos de reprodutibilidade em varios locais clinicos para confirmar a aceitagio do
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