es =m D =RIEUX noes Boletim de Andlise: 0573/17 Avaliagao da Biodegradabilidade Imediata. Biodegradabilty: 301 B CO, Evolution Test adopted on 1992 (OECD, 1997). Titulo do Ensaio Determinacéo da Biodegradablidade Imediata da Substancia Teste LIFEMOLD FM Rolatério Final ‘2aINow2017 Solicitado por LIFE IND E COM PRODUTOS QUIMICOS LT - EPP Rua Angela Berbel Pagano, 1136 — Nove Ribeirania Cravinhos/SP — CEP: 14.140-000 Fone: (16) 3969-5600 Executado por BIOAGRI Laboratories Ltda. Rod. SP 127, km 26 Tolefone: +85 (19) 3429-7700 ~ Fax: +55 (19) 3429-7713, Caixa Postal 573 — CEP: 13412:000 PiracicabarSP — Brasil aru merieuxnutisciences.com.br Pagina 146 9-BA.LcMLosra7MERIEUX Nutri$ciences Boletim de Analise: 0573/17 | Avaliagao da Biodegradabilidade Imediata. Biodegradabilty: 301 B CO; Evolution Test adopted on 1992 (OECD, 1997). Declaragao de condugao do ensaio © ensaio desorto neste relatrio foi executado sob nossa supervsio, de acordo com a metodolagia “Ready Bladegradabilty: 301 8 (CO; Evolution Test adopted on 1992" (OECD, 1897). Este relatrio refere-se somente a amostra analisada, ndo sendo extensivo a outros les elou produtes. Pode ser reproduzido somente por ineiro e sem nenhuma ateracso (© Plano de amostragam nao foi realizado pela BIOAGRI. s resultados @ observagdes apresentados neste relatirio final so uma descricgo precisa dos dados brutos gerades durante @ ‘condugo do ensaio Os documentos e regisiros gerados neste ensalo serdo mantidos nos arquivos da BIOAGRI Laboratérios Ltda por um periodo de 6 oO LE von 00 aes Snes on asia Fone: (19) 3428-7700 Pagina 2 de BALCW.O579!17MERIEUX fas NwiriSciences Boletim de Analise: 0573/17 Avaliagao da Biodegradabilidade Imedista. Biodegradabilty: 301 B CO, Evolution Test adopted on 1992 (OECD, 1997). Dados da amostra: ‘Substancia teste; LIFEMOLD FM Aspecto Fisico: Oleo Lote: 201710451 ‘Quantdade recebida de amostra: 48529 Data de Fabricagso: 11/10/2017 Data de Valiade: 24 meses Composicéo deciarada (patrocinador) (cépia digitalizada do dacumento original: emm anexo Il édigo Bioagr: SAN-1034/17, Proposta: O7172/17 Data de recebimento: 16/10/2017 Data do inicio do teste: 08/11/2017 Data do término do teste: 23/11/2017 CConclusdo do Relatéio: 23/11/2017 ‘Metodologia ullizadas: 301 B - OECD (1997) 1. OBJETIVO Avaliar a biodegradabildade imediata de substéncias organicas hidrossoliveis ou pouco hidrossolivels ou adsorventes, porém néo-volétels, sob as condigdes do teste, com metodolagia analitca que permita a determinagdo da biodegradagao total, 2. DEFINIGOES: Biodegradabilidade imediata: & a propriedade de uma substancia orgénica de ser metabolizeds, isto 6, oxidada por uma cultura mista de ‘microrganismes eriundos do meio ambiente, Biodegradacdo para efeito deste teste: ¢ definida como a percentagem de CO: liberado, pela ego microblana em um determinade tempo (28 dias), em relacao 20 total de CO; teoricamente esperado para a oxidagdo completa da quantdade de substancia ensalada, Substancia teste: € qualquer espécie quimica, biolégica ou biotecnolégica, formulagéo ou metabslte, que esté sob investigacgo em um ‘Substiincia teste facilmente biodegradavel: um minimo de 60% de degradacio deve ser alcangado em 10 dies, contados a partir dos 10% de biodegradapéo, sendo que a janela de 10 dias deve acabar em 28 dias 3. PROCEDIMENTOS A substincia teste @ avaliada de acordo com o método - “Ready Biodegradabilty: 301 B CO: Evolution Test adopted on 1882" (OECD, 1997) 3.4. Inéeulo Emprege-se, da estago de esgoto doméstico de Pirecicaba, uma mistura de microrganismas do esgoto, em alta concentracdo de material corganico, Dos itros do material coletado séo centrfugados, fitrados, e 0 sobrenadante & descartado. O precpitad € suspenso em solusdo nutriente para obtencao do indeulo para teste. O nimero de microrganismos é determinado pela diuigzo em places pelo metodo de plaqueamento em profundidade, 3.2. Deserigdo do ensaio ‘Sto transferides quantidades da substancia teste correspondente @ 10,0 mg de carbono/Litre,em frescos contende 3 lites de solugdo ‘utritva mais uma mistura de microrganismas. Para o teste utlize-se um sistema de aeraglo de fuxo continuo, ondo, colocam-se em série rascos com hidréxido de séio para firaro ar de entrada no sistema. Os frascos de 3 L dos tratamentos edo acopladcs ao sistoma de aeracSo e a cada frasco acopla-se, em seta, raccoe ‘com 100 mL de hidréxido de bario - Ba(OH)2, para captura do CO liberado. (teste é conduzido no escuro, a temperatura de 20 a 25°C, podendo durar até 28 dias. gina 3 de 9- BA.LCNLOS7a/17SS MERIEUX aN viriSciences Boletim de Andlise: 0573/17 Avaliago da Biodegradabilidade Imediata, Biodegradability: 301 B CO; Evolution Test adopted on 1992 (OECD, 1997). ‘Sao utlizados os seguintes trtamentos: ‘A. Branco - solugéo mineral (em duplcata) 1B. Solugdo padrao para biodegradabilidade — benzoato de sédlo 20 mg de carbonolLiro CC. Subsiancia testa - na concentragéo de 10,0 mg de carbono/Ltr (em duplcata). D. nibigdo ~ benzoato de sédio (20 mg carbonofL tro) e substancia taste (10,0 mg carbonofLito) ‘Todos 0s tratamentos recebem 10 mL do inécula! iro de melo, 26 horas antes da acioao da substancia teste A biodegradabilidade da amostra ¢ avaliada pela evolucao do CO,, que é calculado da seguinte forma: Determina-se a diferenca de volumes de HCI gastos entre as ttulagSes dos brancos e as dos ensaios com as substancias: ‘+ 1,0.mg de carbono organico oxidado produz 3,686 mg de CO2 (0 que correspond a 0,0833 mmoles de CO2), + 1,0 mmole desse gs reage com 2.0 mmoles de OH- do Ba (OH), usado para @ sua absorgdo, 0.0839 mmoles de CO; ‘consumiréo 0,1666 mmoles de HCI; * Na ttulagdo, ¢ uiizado HC! 0,050 N, cada 1,00ml gasto na ttulaglo, comresponderd a 1,10 mg de CO2 absorvido. ‘A quantidade de CO; ¢ calculada pela seguinte formu: mgCO2 = mi de HCl (diferenga) x 1,10 mg.mI" (Os resultados (mg de CO.) obtidos em cada ttulagdo so somados aos das ttulagSes subsequentes, de modo a fazer-se a totalzacéo do CO, desprendido ao longo do tempo de incubasao. A partir da quantidade de CO, desprendida para cada substancia ensaiada, calcular a porcentagem de degradacao, pela seguinte formula: WCOrt= (CAICY) x 100 Onde: 980 Ont = porcentagem de degradacdo da substancia ensaiada, num determinado tempo de incubagao (dias) (Cq= quantidade totalizada de CO, (mg) desprendido num determinado tempo de incubagao (dis), para a substancia enssiada y= quantidade de CO, (mg) teoricamente esperada para a oxidagiio completa da quantidede de subetancia ensaiada, O teste @ considerado valido, se a alferanga entre os extremos nas duplcatas for menor do que 20% no momento em que a amosta ‘demonstra um piaté e/ou onde ndo se observa mais a evolucdo de CO>, no final do teste ou apés a janela de 10 dias de incubagso, © padrso biodegradavel apresenta biodegradacdo, quando atinge 60% de evolugao de CO; em 10 dias contados a parti do momento em gue se gbserva 10% de evolugdo de CO,, ¢ no deve exceder 0 periodo maximo de 14 dias, Ainge deve apresentar biodegradaczo, etingindo os 25% de lbverago de CO; em 14 dias, demonstrando que a substancia teste no é inbitéria aos microrganismos, 4, RESULTADOS ‘© ensaio foi conduzido tendo come condiges: + Teor de Carbono encontrado na amostra: 65.6%. = Numero de células visveis obtidas no inoculo: 38 x 10° UFCImL, = Quantidede de amostrautiizada para o ensaio: 0,045g /3 L Pagina ade 9— Ba LcMos7a17MERIEUX u ras iSciences Boletim de Andlise: 0573/17 Avaliagao da Biodegradabilidade Imediata, Biodegradability: 301 B CO, Evolution Test adopted on 1992 (OECD, 1997). © ensaio fol considerado valiiado porque a diferenca entre os extremos nas duplicatas foi menor do que 20%, 0 padre biodegradével ‘apresentou biedegradagao de 60% de evolurao de CO em 10 dias contades a partir do momento em que se observou 10% de evelugao Ce COs, endo excedeu 0 periodo maximo de 14 dias e, ndo howve inibigdo dos microrganismas empregados uma vez que 0 tratamento nibicdo alingiu 25% de liveracdo de CO, em 14 dias, (0s valores obtidos no ensaio encontram-se no Anexo |, onde esti! 1. Os valores diarios a liberago do CO: dos tratamentos benzoato de s6dio, da substincia teste © solugto de inbigso estdo apresentados a Tabela 1 2. Os valores cumulatvos da liberaglo do CO, ,apresentados na Tabela 2 53. Valores das percentagens de COs{iberadas de todos os tratamentos, epresentados na Tabela 3 4. Figura 1 demonstra @ liberagao de CO:, em percentagem, das solugdes de benzoato de sédio, da solupio da substincia teste © da ‘olugdo de iibiggo em fungo do periodo de incubagae. 5. CONCLUSAO De acordo com @ metodologia empregada © nas condigGes do ensaio a substancia teste apresentou biodegradagao de 100 %, medido em (CO, liberade durante 0 periodo de 13 dias e foi considerada como facimente biodegradavel. gina § de 9= BA.LCMLOSTINI7A Bol MERIEUX utriSciences de Anélise: 0573/17 Avaliagéo da Biodegradabilidade Imediata, Biodegradability: 301 B CO, Evolution Test adopted on 1992 (OECD, 1997). Tabela 1. Quantiade disria de CO; lberade Incubacao de 1 das, ‘Anexo! (me) do benzoato de sédio, substancia teste © da solupéo de inibigdo, durante o perlado de Tratamentos Dias de incubagao Benzoato de Sédio LIFEMOLD Fat Inibigao O21 C22 CO,-1 0, -2 Co, -1 e 12,24 71.88 847 7.04 75,18 3 16,56 17.44 16,78 18,54 25,91 & 23,16 24,48 20.44 20,74 26,78 & 22,66 24,64 18,92 19.03 28,16 10° 2742 29,10 22,61 22,50 36,69 13° 28,16 30,25 26.54 24,86 38,72 Tagen CO, 6 00,2 mare de repetRbe). Tabela 2. Total de COs liberado (mg) do benzoato de sédio, substancia teste € da solu¢so de inibgdo, durante o Periodo de incubagao de 13 dias. Tratamentos. Dias de incubagio Benzoato de Sédio LIFEMOLD FM Inibiggo Co c0,-2 COp-4 CO,=2 602-1 + 12,21 17,88 8.47 7,04 15,18 ¥ 28,7 29,32 25,25 25,58 41,09 e 51,92 53,79 45.65 46,31 67.87 a 74,58 78,43 64,57 65,34 96,03 10° 101,70 107,63, 87,18 87,84 132,72 13° 129,86 | 137,78 113,69 112,70 174,44 andar 00; =¥ © CO, —2 (rirere ae ropa), Phgina 6 do 9- BALCMLOS79I174 MERIEUX Pad NuiriSciences Boletim de Anélise: 0573/17 Avaliagao da Biodegradabilidade Imediata. Biodegradability: 301 B CO; Evolution Test adopted on 1992 (OECD, 1997). ‘Tabela 9, Percentagem de CO: liberado do benzoato de sédio, substincia teste @ de solugdo de inbigdo, durante 0 periodo de incubago de 23 das. Tratamentos Dias de incubagao Benzoato de Sédio LIFEMOLD Fi inibigdo CO.-1 | CO,-2 CO 00,-2 CO,-1 1" 5,55 5,40 7,70 6,40 4,60 ES 13.08 13,33 22.95 23.25 12,45 se 23,60 24,45 41,51 42,11 20,57 8 33,91 35,66 58,71 59,41 29,11 10° 46,23 48,88 79,26 79,86 40,22 13° 59,04 62,64 100,00 100,00 51,96 Total Médio 6084 700,00 51,96 Tagendar CO, ¥ 0 CO; = 2 (HORRTS Ue SPEIRS) Pina 7 de 9-BALCWLOS7S/17MERIEUX Mad NutriSciences Boletim de Andlise: 0573/17 Avaliagao da Biodegradabilidade Imediata, Biodegradability: 301 B CO; Evolution Test adopted on 1992 (OECD, 1997). 100 80 70 60 %€0, evolido 40 30 0 ° 2 4 6 8 10 12 eriodo de incubagao (dias) Pas benzoate de sido —e—Subetincateste —e—inbigto Figura 1. Percentagem de CO lberado na solugio de benzoato de sécio, na solucdo da substincia teste LIFEMOLD FM e na solupo {de inivgao em fungao do periodo de incubacéo em dias (medias obtidas da Tabela 2). Pagina 9 de 9- BA LoMos7a117MERIEUX fad NviriScience Boletim de Anélise: 0573/17 Avaliag&o da Biodegradabilidade Imediata. Biodegradabilty: 301 B CO, Evolution Test adopted on 1992 (OECD, 1997). Anexo il- Composig#o Quimica: ‘COMPONENTES CONCENTRAGOES (%) COMPONENTS. CONCENTRATION (%) ‘OLEOS REFINADOS VEGETAIS 99,9 CORANTE ALIMENTICIO 0,005% AROMATRIZANTE FLORAL 0,005% Pigina 9 de 9- BA LCMO87I117