BARRA, G B; VELASCO, L F R; PESSANHA, R P; CAMPOS, A M; MOURA, F N; DIAS, S M G; POLIKARPOV, I; RIBEIRO, R C J; SIMEONI, L A; NEVES, F A R. Mecanismo molecular da ao do receptor do hormnio tireoideano.

Arquivos Brasileiros de Endocrinologia e Metabologia, v. 48, n. 1, p. 25-39, 2004. RESUMO DA OBRA Os hormnios tireoidianos esto ligados no desenvolvimento de vrios tecidos como por exemplo : o sistema nervoso e fatores de crescimento. Atuam tambm nas vias metablicas: metabolismo de protenas e

gorduras. 1 A principal forma secretada 3,5,3,5-tetraiodo-Ltironina (tiroxina ou T4) e uma menor quantidade secretada como 3,5,3-triiodotironina (T3), a forma ativa do hormnio. A principal fonte de produo de T3 a partir da desiodao de T4. Os hormnios tireoidianos se ligam, na corrente sanguinea, a protenas plasmticas que aumentam suas meia - vidas e assegura a distribuio regular dos hormnios nos tecidos alvos. A entrada dos hormnios na clula acontece, em maior parte, por receptores especficos, que medeiam a ao do hormnio ligando de diretamente na regio promotora dos genes alvos, regulando a transcrio em todos os tecidos. Uma pequena parte entra na clula atravs de difuso passiva. 2 Os receptores do hormnio tireoidiano pertencem a super famlia de receptores nucleares que compreende 49 genes e codificam 75 protenas diferentes que esto envolvidas na transduo de sinais hormonais extra nucleares em respostas transcricionais. Os membros da super famlia de receptores nucleares so fatores dependentes do ligante e atuam por ligarem se a seqncias especificas no DNA chamadas de elementos responsivos ao hormnio. Esto includos nessa famlia os receptores para esterides, vitamina D, retinides, dentre outros. Na ausncia de ligantes, os receptores esterides glicocorticides, mineralocorticides, andrognio, estrognio, e progesterona esto associados a um complexo com protenas de choque trmico no citoplasma. A ligao do hormnio dissocia os receptores deste complexo e induz a formao de homodimeros que se dirigem ao ncleo e se ligam os elementos responsivos ao hormnio. A outra subclasse da super famlia de receptores nucleares formada pelos hormnios tireoidianos que formam heterodimeros ou homodimeros. Esses dmeros se associam a outras protenas conhecidas como correpresssores, pois atuam reprimindo a expresso gnica. A associao dos hormnio ao receptor h a formao do heterodimeros com RXR, que juntamente com dissociao de

protenas correpressoras e associao de protenas co-ativadoras, que passam a estimular a transcrio dos genes alvos. Esses receptores, na ausncia de hormnios esto localizados predominantemente no ncleo, em soluo ou ligados ao DNA. Quando ligados so DNA esto ligados a seqncia de repeties diretas do hexamero AGGTCA. 3 Os domnios dos receptores do hormnio tireoidiano so: aminoterminal, o de ligao ao DNA,e o que ligao ao ligante. Existindo uma associao entre o de ligao ao DNA e o de ligao ao ligante, chamada de dobradia. O domnio amino terminal exibe uma funo de ativao transcricional independente do ligante. O domnio de ligao ao DNA bastante conservado entre todos os receptores nucleares e tem como funo principal a ligao ao DNA. Est situado na poro central dos receptores e organizados por dois segmentos estruturais chamados de dedos de zinco. Nestes segmentos, resduos de cisteinas, formam complexos coordenados por ons de zinco, formando estruturas independentes em forma de ala. O domnio de ligao ao ligante e menos conservado e por isso tem uma variedade de ligantes que atuam nesses receptores. Este domnio possui varias funes: a homo e a heterodimerizao do receptor, localizao nuclear, interao com protenas correpressoras e co- ativadores. A dobradia que conecta o domnio de ligao ao DNA ao domnio de ligao ao ligante bastante varivel entre os diferentes receptores. No caso dos receptores tireoidianos a principal funo promover o movimento de rotao do domnio de ligao ao DNA em relao ao domnio de ligao ao ligante permitindo que receptores dos hormnios tireoidianos se liguem em diferentes orientaes. 4 Nos cromossomos 17 e 3 foram localizados dois genes que codificam o receptor tireoidiano(alfa) e o receptor tireoidiano (beta), sendo que cada um desses codificam varias protenas, (1, 2, 1, 2, 1, 2, 3 e 3), devido ao processamento alternativo do RNAm. As diferenas entre as protenas (alfa) est na regio carboxi-terminal. E as protenas (beta)diferem na regio amino terminal. Deste modo uma isoforma se liga ao hormnio e a outra no. Desta forma, as isoformas que no tem sitio especifico com o hormnio pode inibir a transcrio mediada pelas outras formas. A expresso dos RNAm dos receptores tireoidianos varia com o desenvolvimento e com a diferenciao celular: cada um tipo de receptor expresso em um tipo de tecido. A expresso variada dos receptores tireoidianos pode constituir um mecanismo usado pelo T3 para a regulao da transcrio de forma seletiva para alguns tecidos. Foi observado que

mutaes no receptor tireoidiano (beta) pode causar a sndrome de resistncia ao hormnio tireoidiano caracterizada por elevao dos nveis sricos de T3 e T4. A deleo de TR(alfa)1 causa nveis baixos de T4 e TSH
Possivelmente, as mutaes em TR que poderiam exercer o efeito dominante negativo no seriam visualizadas, porque o controle dos nveis de TSH dependente do TR e no do TR . Como podemos perceber, a importncia das isoformas TR e TR foram evidenciadas nos modelos de animais com deleo dos genes induzida pela recombinao homloga. Assim, o fentipo do camundongo com deleo do TR (TR 1 e TR 2) caracterizado por, alm dos altos nveis sricos de TSH, T4 e T3, hiperplasia da glndula tireide, freqncia cardaca basal elevada, m formao da cclea (defeitos auditivos graves) e da retina. A deleo desses receptores do hormnio tireoidiano em animais, mostrou que, cada um tem um papel importante na formao dos sistemas do corpo dos animais. Foi observado sintomas : nveis altos de T3 e T4, freqncia cardaca e basal elevada, m forma da cclea, diminuio da temperatura e da freqncia cardaca, m formao intestinal, retardo de crescimento dentre outros.

As delees isoladas no provocam grandes distrbios: possvel que uma isoforma possa compensar a ausncia da outra. Os resultados mostraram que a regulao da transcrio dos receptores tireoidianos depende de todas as isoformas, mesmo daquelas que no se ligam ao T3. 5 As respostas celulares dependem da concentrao intracelular dos hormnios tireoidianos, que corresponde ao nvel de T3 e T4 na clula. A diminuio ou aumento da concentrao de T3 pode se dar devido ao aumento do seu efluxo ou influxo pela membrana plasmtica. Que pode ser demonstrado por superexpresso de protenas transportadoras do sistema L. Interferindo assim na resposta transcricional. 6 Os efeitos dos receptores tireoidianos na regulao da expresso gnica so inicialmente obtidas com a ligao do receptor a seqncia de DNA especificas, presentes na regio regulatria dos genes alvo. O T3 em concentraes fisiolgicas modifica o equilbrio entre os receptores de hormnio tireoidiano que se ligam ao DNA como homodimeros e heterodimeros. 7 Vrios estudos sugerem que a associao dos receptores de hormnios tireoidianos com protenas correpressoras solveis critica e fundamental para o receptor reprimir a transcrio basal.

A represso mediada pela ds-acetilao das histonas presentes na regio promotora, possivelmente porque as histonas acetiladas torna a cromatina mais condensada restringindo o acesso dos fatores de transcrio basal do DNA. A importncia da represso na ausncia do ligante pode ser observada quando camundongos com deleo de uma protena responsvel pelo desenvolvimento da tireide, morrem logo aps o nascimento, de hipotireoidismo severo. Os co ativadores estimulam a transcrio o acetilarem as histonas. A super acetilao das histonas relaxa a cromatina e facilita o acesso dos fatores de transcrio basal ao promotor do gene alvo, estimulando a atividade transcricional. 8 O receptor do hormnio tireoidiano induz a uma alterao alosterica no domnio de ligao ao ligante. Os receptores nuclares contem duas regies independentes para a dimerizao: uma no domnio de ligao ao ligante e outra no domnio de ligao ao DNA. Foi observado que dois aminocidos hidrofbicos envolvidos: leucina 422 do domnio de ligao ao ligante do TR(beta) 1 o resduo que cumpre um papel critico tanto pra a homo como para a heterodimerizao. os homodimeros exercem um papel na atividade transcricional induzida pelo T3. A adio de T3 promove a dissociao dos tetrmeros e aumenta a formao de dmeros 9 O domnio de ligao ao ligante receptor de hormnios tireoidianos esto envolvidos na homodimerizao ou heterodimerizao do receptor de hormnio tireoidiano com RXR e que tanto homo quanto heterodmero se ligam aos diferentes elementos responsivos. A regio da dobradia seria correspondente ala composta de 6 aminocidos que separa a -hlice amino-terminal do domnio de ligao ao ligante. 10 A estrutura completa de qualquer receptor nuclear ainda no foi definida, em virtudes das dificuldades tcnicas de se expressar os domnios simultaneamente. Em relao ao receptor tireoidiano, o domnio de ligao ao ligante funcionalmente complexo executando varias atividades incluindo a ligao ao hormnio, dimerizao do receptor e interao com correpressores e co ativadores. ( represso da transcrio no estado de apto-receptor e ativao induzida pelo hormnio) A importncia do conheimento da estrutura cristalogrfica do receptor tireoidiano foi fundamental para a compreenso do seu mecanismo molecular da ao. Foi possvel realizar uma serie de mutaes pontuais nos aminoacidos que se encontram no domnio de

ligao ao ligante, o que levaram a identificao do receptor tireoidiano (beta)1 com os co-ativadores. 11 O hormnio tireoidiano tambm reprime a transcrio de vrios genes que codificam o hormnio liberador de tirotropina e o hormnio estimulante da tireide. Atravs do sistema de feedback o T3 regula negativamente a atividade a atividade transcricionais desses genes via elementos responsivos negativos. Porem, existem evidencias de que os genes podem adotar mecanismos distintos para este tipo de represso, e que uma interao receptor tireoidiano - DNA no seja absolutamente necessria para a represso pelo T3. Existem evidencias de que correpressores esto envolvidos na ativao da transcrio por receptores tireoidianos sob forma de apto receptor. 12 Muitos efeitos farmacolgicos dos hormnios tireoidianos poderiam ser utilizadas no tratamento de patologias no relacionadas a tireide como a obesidade e a hiperlipidemia. Entretanto eestes no so utilizados no tratamento porque os efeitos benficos so acompanhados de efeitos colaterais, como taquicardia, e arritmias atrais. Logo, os anlogos dos hormnios tireoidianos que promovam os efeitos desejados sem induzir aes deletrias, seia de grande interesse para a rea medica. como, os receptores de hormnios (beta)1 so expressos somente em tecidos especficos, como por exemplo, mais expressos no fgado e muito pouco no corao podem constituir uma nova classe de medicamentospara o tratamento, por exemplo, da obesidade, hipercolesterolemia e nveis elevados de lipoprotena. O conhecimento de estruturas das isoformas (alfa) e (beta) permitiu o desenvolvimentos de alguns agonistas, com afinidades com os receptores tireoidianos. Onde foi observado nos testes a diminuio dos niveis de colesterol plasmaticos, sem causar taquicardia. Todavia o interesse no reside somente nos agonistas seletivos, o desenvolvimento de antagonistas do receptor tireoidiano pode ser de grande utilidade para o tratamento do hipertiroidismo. 13 A sndrome de resistncia ao hormnio tireoidiano caracterizada pela resistncia ao do T3 resultando freqentemente, em sinais de hipotireoidismo ou eutireoidismo associado a hipertireoidismo. Os indivduos no tratados freqentemente um estado metablico normal s custas de altos nveis de hormnios circulante, mantidos pela elevao na secreo de TSH. Algumas caractersticas comuns so: bcio, taquicardia, crescimento de maturao dos ossos alterados, retardo mental, dficit de ateno e problemas de ateno.

Aps a clonagem dos receptores tireoidianos (beta), percebeu se que a resistncia ao hormnio tireoidiano est relacionada ao gente TR(beta). At o presente momento, no mutaes no gene TR(alfa). Quase todas as mutaes esto agrupadas em tres regies princinpais no dominio de ligao ao ligante. Essas mutaes alteram uma ou mais caractersticas no receptor, principalmente a afinidade ao T3. 14 Existem varias evidencias de que os hormnios tireoidianos T3 E T4 pode exercer alguns de seus efeitos via mecanismos no genomicos, pois so efeitos que ocorrem em fraes de segundos. Poe esta via, os hormnios tireoidianos ativam cinases, calmodulina, captao de glicose em vrios tecidos e modulao do transporte de clcio.