I.

Objetivo
Determinar a concentrao de mentol (principal constituinte da essncia de menta) numa amostra feita no laboratrio, por cromatografia gasosa de alta resoluo (CGAR) utilizando-se

o mtodo de padronizao interna.

II. Materiais, reagentes e equipamentos utilizados

- Bcher de 100 mL - Metanol - Seringa cromatogrfica - 2 Bales volumtricos de 25,00 mL e 4 de 10,00 mL - Pipetas volumtricas de 1, 2 e 5 mL - Cromatgrafo Agilent com FID e coluna HP-5

III. Procedimento
1) Para o preparo da soluo [M2] (soluo-me de mentol), transferiu-se 2,00 mL da soluo [M1], fornecida pelos bolsistas, para um balo volumtrico de 25,00 mL, o qual foi avolumado com metanol. 2) Da soluo [E1], tambm fornecida pelos bolsistas, transferiu-se 2,00 mL para um balo volumtrico de 25,00 mL e o volume deste foi elevado com metanol at o trao de aferio, preparando-se assim a soluo [E2] (soluo de eucaliptol diluda). 3) Para o preparo dos padres a serem utilizados na curva de calibrao adicionou-se 2,00 mL da soluo [E2] a cada um dos quatro bales volumtricos de 10,00 mL. Depois, adicionou-se volumes diferentes da soluo [M2] a cada um deles, conforme determinado na tabela abaixo, sendo todos previamente identificados. Por fim, avolumou-se todos os bales com metanol.

Padro [PAD 1] [PAD 2] [PAD 3] [PAD 4]

mL da sol. [M2] 1 2 5 7

4) Procedeu-se a anlise de cada um dos padres preparados e, em seguida, da amostra fornecida no cromatgrafo Agilent com detector por ionizao de chama e coluna HP-5 (de polidimetilsiloxano com 5% de fenil; 30 m x 0,25 mm x 0,25 m), utilizando-se como gs de arraste o N2 (em vazo de 1,0 mL/min), sendo injetado um volume de 1,0 L com split 1:20. A temperatura de injeo foi de 270C e a do detector 280C. Para a coluna, a programao de temperatura iniciava-se em 60C com rampa de 25C/min at os 150C. Deve-se destacar que antes da injeo dos padres importante rinsar a seringa com metanol

cinco vezes (no mnimo), para assegurar que na mesma no h nenhum resduo alm do prprio solvente. Para garantir que todo a amostra/padro ser injetado na coluna, deve-se puxar primeiramente o equivalente a 1 L de ar, seguido de 1 L de padro/amostra e, mais uma vez, 1 L de ar. 5) A cada cromatograma anotaram-se os valores referentes as reas do mentol e do eucaliptol e seus devidos tempos de reteno.

IV. Leituras/Resultados
Apesar de as solues-estoque [M1] e [E1] terem sido preparadas pelos bolsistas, saber o modo de preparo faz-se necessrio para proceder-se ao clculo da concentrao de mentol e eucaliptol em cada um dos padres. Tem-se que para a primeira foram pesados 150 mg de mentol, os quais foram diludos em 10,00 mL de metanol. O mesmo foi realizado para a segunda soluo, no entanto os 150 mg de mentol do lugar a 150 mg de eucaliptol, de modo que a concentrao de cada uma destas solues , portanto, 15 mg L-1. A partir deste valor possvel montar uma tabela com as concentraes de mentol e eucaliptol em cada um dos padres, a qual pode ser observada abaixo. Os clculos encontram-se explicitados no item seguinte (V. Clculos).

Padro [PAD 1] [PAD 2] [PAD 3] [PAD 4]

Conc. de Mentol (mg L-1) 120 240 600 840

Conc. de Eucaliptol (mg L-1) 240 240 240 240

A seguir so apresentadas as tabelas com os valores observados para a rea dos picos de cada um dos padres e da amostra, bem como o tempo de reteno dos mesmos.

Amostra Pico 1 2 3 4 5 rea 4400848 1027524 179111 296784 17862 TR 1,12 1,22 3,51 4,40 4,50

Padro 1 Pico 1 2 3 rea 8564110 162724 74780 TR 1,14 3,51 4,39 Pico 1 2 3

Padro 2 rea 14442071 233071 231258 TR 1,15 3,51 4,39

Padro 3 Pico 1 2 3 4 rea 14908322 227986 547527 20913 TR 1,16 3,51 4,39 4,49 Pico 1 2 3 4

Padro 4 rea 10517907 232978 795526 21540 TR 1,12 3,50 4,38 4,48

A partir dos dados acima, constri-se, ento, uma nova tabela, na qual define-se o tempo de reteno mdio (TRm) do mentol e do eucaliptol e as respectivas reas dos picos destas substncias na amostra e em cada um dos padres, como pode ser observado abaixo.

reas TRm Eucaliptol Mentol 3,51 4,39 [Amostra] 179111 296784 [PAD 1] 169724 74708 [PAD 2] 233071 231258 [PAD 3] 227986 547527 [PAD 4] 232978 795526

Desta tabela so retiradas, ainda, as informaes necessrias para a construo da curva de calibrao Sx/SPI x [mentol], na qual o eucaliptol utilizado como padro interno (as reas utilizadas como SPI so, portanto, referentes a ele). Antes, no entanto, pode-se compilar uma nova tabela, a qual agrega informaes das anteriormente apresentadas e facilita

consideravelmente o trabalho de construo da curva solicitada, a qual encontra-se anexada a este relatrio.

[Amostra] Sx/SPI [Mentol] 1,66 ?

[PAD 1] 0,46 120 mg L

-1

[PAD 2] 0,99 240 mg L

-1

[PAD 3] 2,40 600 mg L

-1

[PAD 4] 3,41 840 mg L-1

V. Clculos
a) Clculo da concentrao das solues-estoque [M1] e [E1]: 150 mg _____ 10,00 mL x _____ 1,00 mL x = 15,0 mg mL-1

b) Clculo da concentrao da soluo [M2]: Soluo [M1] = 15,0 mg mL-1 Fator de diluio = 2:25 [M1] . FD = 15 . 2:25 [M2] = 1,2 mg mL-1 (ou 1200 mg L-1) c) Clculo da concentrao da soluo [E2]: Soluo [E1] = 15,0 mg mL-1 Fator de diluio = 2:25 [E1] . FD = 15 . 2:25 [E2] = 1,2 mg mL-1 (ou 1200 mg L-1) d) Clculo da concentrao de eucaliptol nos padres: Soluo [E2] = 1200 mg L-1 Fator de diluio = 2:10 [E2] . FD = 1200 . 2:10 [eucaliptol nos padres] = 240 mg L-1 e) Clculo da concentrao de mentol no [PAD 1]: Soluo [M2] = 1200 mg L-1 Fator de diluio = 1:10 [M2] . FD = 1200 . 1:10 [metanol em PAD 1] = 120 mg L-1 6

f) Clculo da concentrao de mentol no [PAD 2]: Soluo [M2] = 1200 mg L-1 Fator de diluio = 2:10 [M2] . FD = 1200 . 2:10 [metanol em PAD 1] = 240 mg L-1 g) Clculo da concentrao de mentol no [PAD 3]: Soluo [M2] = 1200 mg L-1 Fator de diluio = 5:10 [M2] . FD = 1200 . 5:10 [metanol em PAD 1] = 600 mg L-1 h) Clculo da concentrao de mentol no [PAD 4]: Soluo [M2] = 1200 mg L-1 Fator de diluio = 7:10 [M2] . FD = 1200 . 7:10 [metanol em PAD 1] = 840 mg L-1 i) Clculo da razo entre os picos para a amostra: 296784 : 179111 = 1,66 j) Clculo da razo entre os picos para o [PAD 1]: 74708 : 169724 = 0,46 k) Clculo da razo entre os picos para o [PAD 2]: 231258 : 233071 = 0,99 l) Clculo da razo entre os picos para o [PAD 3]: 547257 : 227986 = 2,40 m) Clculo da razo entre os picos para o [PAD 4]: 795526 : 232978 = 3,41

VI. Tarefas
1) Fazer o grfico da curva de calibrao Sx/SPI x concentrao de mentol, considerando o eucaliptol como padro interno. - Vide anexo. 2) Calcular o teor de mentol na essncia de menta. - A partir da curva de calibrao, obtm-se a equao y = 4,08 . 10-3 x 0,026, a qual permite calcular o teor de mentol na amostra fornecida. Como y = Sx/SPI, pode-se substituir a razo entre as reas dos picos de interesse da amostra e, assim, obter a concentrao x de mentol na amostra, em mg L-1, e a concentrao de mentol na amostra seria, portanto, de aproximadamente 413 mg L-1, como pode-se observar atravs do clculo abaixo. y = 4,07 . 10-3 x 0,0126 1,66 = 4,07 . 10-3 x 0,0126 x = 405,21 mg L-1 3) Por que os valores de rea do eucaliptol no so os mesmos nos cromatogramas obtidos, apesar das concentraes serem as mesmas e por que a sua concentrao no considerada nos clculos? - Tendo em vista que as concentraes de eucaliptol nos padres eram as mesmas, no foi necessria a incluso dos mesmos nos clculos. Quanto aos diferentes valores encontrados para as reas do eucaliptol, supe-se a existncia de possveis erros analticos, erros estes que acarretariam em variaes nos volumes adicionados aos padres e que so minimizados pela utilizao do mtodo de padronizao interna.

VII. Discusso dos resultados

O mtodo utilizado na prtica foi a padronizao interna, capaz de minimizar variados erros de anlise e que bastante interessante tambm em casos de preparos complexos de amostra, com muitas etapas. A escolha do eucaliptol como padro interno deve-se s semelhanas fsico-qumicas deste com o analito de interesse, de modo que comportar-se-iam 8

de maneira parecida quando submetidos s mesmas condies. Observando-se a ordem de eluio, aps a injeo dos padres, foi possvel perceber que o padro interno eluiu antes do analito, pois como a fase estacionria era apolar os solutos interagiram de forma parecida, separando-se ento na ordem de seus pontos de ebulio, sendo o do mentol 212 C e eucaliptol 177 C. O tempo de reteno foi um fator crucial para a identificao do mentol, identificao sem a qual no seria possvel chegar ao resultado final (o qual no divergiu muito do esperado). Apesar de um mesmo operador ter realizado todo o procedimento, tendo-se em vista minimizar os erros, o fato de a injeo ser manual implica em possveis variaes na velocidade de aplicao, as quais tem como consequncia uma variao nos resultados. Esta baixa repetibilidade na injeo (que ocorre com certa frequncia quando a injeo realizada por pessoas menos experientes) pode ser observada na anlise dos picos do padro interno nos diferentes padres injetados: embora a concentrao seja a mesma em todos, suas reas variam. A utilizao de uma curva de calibrao que leva em conta a razo entre as reas do analito e do padro interno ao invs da concentrao do padro interno somente permite manter uma certa proporo, corrigindo as variaes citadas.

VIII. Concluso
Com a realizao da prtica foi possvel observar melhor a tcnica de CGAR (Cromatografia Gasosa de Alta Resoluo), assim como os equipamentos utilizados na anlise. A utilizao de padro interno tambm pde ser melhor compreendida a partir do experimento, de modo que pode-se dizer que a aula prtica permitiu avaliar as vantagens, a eficincia e aplicabilidade de ambos.