Utilizao de fungos no Controle Biolgico de Doenas

AUTOR: Rafaela Mazur Bizi

Obs - este texto foi desenvolvido pela autora na disciplina " Controle Biolgico Florestal, no Curso de Ps-Graduao em Engenharia Florestal, rea de concentrao Silvicultura, do Setor de Cincias Agrrias da Universidade Federal do Paran", ministrada pelo Prof. Dr. Nilton Jos Sousa. Em funo disto, o texto uma compilao de vrias fontes bibliogrficas, desta forma, as informaes aqui descritas no devem ser utilizadas em revises bibliogrficas de teses, dissertaes, monografias, artigos, resumos ou outras formas de produo bibliogrfica, como se fosse de autoria do autor acima citado. Para este tipo de citao recomendamos aos usurios que consultem os trabalhos originais citados na relao de bibliografias consultadas. INTRODUO O conceito de controle de doenas mudou nas ltimas dcadas. Anteriormente, o objetivo era eliminar completamente o patgeno com o uso indiscriminado e contnuo de produtos qumicos sem medir as conseqncias. Este procedimento provocou alteraes no ambiente, como a seleo de patgenos resistentes, ocorrncia de surtos de doenas consideradas como secundrias, diminuio de microrganismos benficos, alm de causar efeitos deletrios (nocivos) ao homem, aos animais e ao ambiente, atravs do acmulo de resduos no solo, na gua e nos alimentos. H tempos, os pesticidas qumicos tem sido usado na agricultura, entretanto, seus efeitos colaterais tm estimulado a reduo de seu uso e a adoo de mtodos naturais menos agressivos. Dentre estes mtodos esto o controle cultural, o controle gentico e o controle biolgico. O controle biolgico visa manter, atravs de certas prticas, um equilbrio no agroecossistema, de modo que o hospedeiro, na presena do patgeno, no sofra danos significativos, em funo da ao controladora dos organismos no patognicos do sistema. N a abordagem de controle biolgico, doena mais do que uma ntima interao do patgeno com o hospedeiro influenciada pelo ambiente. o resultado de uma interao entre hospedeiro, patgeno e uma variedade de no-patgenos que tambm repousam no stio de infeco e que apresentam potencial para limitar ou aumentar a atividade do patgeno, ou a resistncia do hospedeiro. Portanto, patgeno, hospedeiro e antagonistas, interagindo num sistema biolgico, so os fatores componentes do controle biolgico. O controle biolgico a reduo da densidade de inculo ou das atividades determinantes da doena provocada por um patgeno ou parasita nos seus estados de atividade ou dormncia, por um ou mais organismos, realizado naturalmente ou atravs da manipulao do ambiente, hospedeiro ou antagonista, ou pela introduo em massa de um ou mais antagonistas. Outra definio de controle biolgico , Controle de um microrganismo por outro microrganismo. Por esses conceitos, o controle biolgico inclui prticas culturais para criar um ambiente favorvel aos antagonistas e resistncia da planta hospedeira ou ambas; melhoramento da planta para aumentar a resistncia ao patgeno ou adequar o hospedeiro para as atividades antagnicas de microrganismos; introduo em massa de antagonistas, linhagens no patognicas ou outros organismos ou agentes benficos. INTERAES ENTRE PATGENO, HOSPEDEIRO E ANTAGONISTAS Interao com o Ambiente O ambiente composto de vrios fatores (solo, temperatura, potencial hdrico, ph) que devem estar relacionados entre si e com os organismos habitantes do sistema. A interao entre antagonista, hospedeiro e patgeno no ocorre de maneira particular , mas mutuamente. A

ocorrncia de doenas em plantas indica que muitos aspectos do balano biolgico no est em equilbrio. O desenvolvimento de doenas em plantas ocorre quando uma ou mais das seguintes condies ocorrem: O patgeno altamente virulento, a densidade do inculo maior e no h um equilbrio com o antagonista. O ambiente abitico especialmente favorvel ao patgeno, e desfavorvel ao hospedeiro ou antagonista, ou ambos. A planta hospedeira altamente suscetvel, crescendo continuamente e extensivamente. Os antagonistas esto ausentes ou em baixa populao, h falta de nutrientes e ambiente prprio para a funo do antagonista, os antagonistas so inibidos por outros microrganismos, ou a produo de antibiticos absorvido pelo solo ou inativado por outros microrganismos. Interaes entre o antagonista, patgeno e hospedeiro:

PERDA POR DOENAS SEVERAS: Produo moderadamente suscetvel, bem adaptado ao ambiente; patgeno bem adaptado, antagonista no to bem adaptado e ineficiente. PERDA POR DOENAS LEVES: Produo suscetvel bem adaptada ao ambiente; patgeno pobremente adaptado, antagonista moderadamente adaptado e completamente eficiente. NO H PERDA POR DOENAS: Controle Biolgico. Produo suscetvel, antagonista e patgeno bem adaptado ao ambiente. O antagonista reprimi o patgeno. NO H PERDA POR DOENAS: Produo resistente, antagonista e patgeno bem adaptado ao ambiente. Hospedeiro resistente, prevenido de doenas.

TIPOS DE INTERAES ENTRE DUAS ESPCIES (modificado de Odum, E. P. 1976)

Efeito na Sobrevivncia Neutralismo Comensalismo Protocooperao Simbiose mutualstica Simbiose antagnica (Parasitismo) Predao Competio Amensalismo Espcie A 0 + + + + + Espcie B 0 0 + + 0

No quadro podemos verificar que foi feita uma avaliao do efeito de cada um dos organismos envolvidos numa interao sobre a sobrevivncia do outro, simbolizando-se como 0 (zero) a ausncia de efeito (+) um efeito positivo e (-) um efeito prejudicial. Neutralismo Duas espcies vivem lado a lado sem que a presena de uma afete a da outra, podendo classificar-se o neutralismo como ausncia de interao fisiolgica, e de ocorrncia casual. Comensalismo Em comensalismo um dos participantes beneficiado pela presena da outra espcie, mas, esta ltima no deriva vantagens ou desvantagens da situao. O beneficiado, denominado de comensal, encontra condies melhoradas, s vezes indispensveis ao seu desenvolvimento.

Protocooperao Em protocooperao, s vezes tambm denominada de mutualismo no obrigatrio, um participante beneficia o outro e cada qual se torna um complemento do ambiente de vida para o outro. No entanto, esta relao no obrigatria nem especifica, podendo haver mudana entre os organismos participantes e, normalmente, no h uma associao ntima entre suas clulas. Simbiose Mutualstica a coexistncia ntima de duas espcies diferentes, resultando em benefcio mtuo. Cada um dos simbiontes uma parte essencial do ambiente de seu parceiro. Simbiose Antagnica: Parasitismo Parasita um organismo que se alimenta de clulas, tecidos ou flidos de outro ser vivo, o hospedeiro, o qual comumente prejudicado no processo. Competio Competio refere-se luta entre organismos para obter recursos indispensveis nutrientes, gua, luz ou espao que no habitat se encontra em quantidade insuficiente para suprir a demanda biolgica. Amensalismo Em comunidades microbianas com altas densidades de diferentes populaes ocorrem, com freqncia, interaes que sejam prejudiciais a alguns dos residentes. MECANISMOS DE AO DOS MICRORGANISMOS ANTAGONISTAS Os princpios do controle biolgico baseiam-se na relao antagnica entre microrganismos, como: predao, competio, amensalismo e parasitismo. Para que um antagonista seja bem sucedido preciso que ele tenha capacidade de se multiplicar e colonizar a superfcie da planta. O parasitismo parece ser o mecanismo mais eficiente de antagonismo do controle biolgico natural, pois os hiperparasitas por viverem s custas do patgeno, esto sujeitos as mesmas variaes ambientes e dependem das mesmas condies do organismo parasitado. Dentre os fungos filamentosos, o Trichoderma reconhecidamente o hiperparasita mais importante e um dos mais estudados. O desenvolvimento de microrganismos na superfcie foliar afetado pela quantidade e pela qualidade dos nutrientes disponveis no filoplano. Os microrganismos selecionados do mesmo ambiente onde sero utilizados, tem bastante chance de se adaptarem e de serem eficientes, e neste caso so conhecidos como microrganismos residentes. O microrganismo estranho (extico ou introduzido), geralmente tem pouca persistncia no ambiente, devendo ser reaplicados com mais freqncia. No basta o antagonista ser um potente agente de controle in vitro. preciso, pois, conhecer os fatores ecolgicos que podem afetar o desempenho e, via de conseqncia, adotar prticas de manejo adequadas para favorecer a sua permanncia e atividade no ambiente. SELEO DE MICRORGANISMOS ANTAGONISTAS Os testes de seleo de microrganismos com potencial antagonista podem ser realizados in vitro e in vivo. Neste caso, em condies controladas ou em condies naturais. Ambos os mtodos so complementares. A seleo de microrganismo in vivo realizada atravs da aplicao do antagonista, seguida da inoculao do patgeno no hospedeiro por meio de pulverizao de suspenso de clulas, imerso de razes, ferimentos, dentre outros.

Os principais mtodos de seleo de microrganismos in vitro descritos so: pareamento de culturas, papel celofane, placa sobreposta, camada dupla, lquido metablico, entre outros. PRINCIPAIS MTODOS DE SELEO DE MICRORGANISMOS IN VITRO : MTODOS DE GAR EM PLACA Mtodo da cultura pareada Consiste em diversas formas de plaqueamento de antagonista e fitopatgenos em placa de Petri, contendo meio de cultura adequado ao crescimento de ambos os organismos. Em se tratando de dois fungos, este processo deve ser geralmente precedido da elaborao de uma curva de crescimento e plaqueamento diferencial, com a finalidade de que ocorra igualdade de condies competitivas. Existem vrias formas de pareamento. A seguir esto citados os mais comuns. ? Disco de gar ? Disco de papel de filtro ? Riscas ? Pulverizao Mtodo do papel celofane Consiste na transferncia de um disco de crescimento fngico ou crescimento bacteriano para o centro de placas de Petri contendo meio de cultura adequado, sobreposto por papel celofane lavado e esterilizado. Aps incubao suficiente para um bom crescimento do microrganismo, efetua-se a retirada do papel celofane com o crescimento aderente e transfere-se para o centro da placa um disco de gar com crescimento fngico do fitopatgeno. A testemunha consiste no cultivo do fitopatgeno aps a retirada do celofane, sem a prvia sobreposio pelo antagonista. A incubao dever ser realizada, em caso de fungos fitopatognicos, durante o tempo necessrio para que a testemunha atinja a extremidade da placa, quando se faz a avaliao, medindo-se o crescimento micelial e calculando-se a porcentagem de inibio. O mtodo do papel celofane tem o objetivo especfico de detectar a produo de metablitos extracelulares no volteis, devendo, pois, ser utilizado no para seleo de antagonistas mas para a verificao do provvel mecanismo de ao. Mtodo da placa sobreposta tambm chamado de mtodo para deteco de metablitos volteis e consiste no cultivo do antagonista em meio de cultura adequado contido em placa de Petri. Depois de determinado tempo, substitui-se a tampa da placa por um crculo de papel celofane, sobrepondo-se outra placa contendo o fitopatgeno, sendo as duas partes unidas por fita adesiva. O perodo de incubao do antagonista, antes da montagem do aparato, depender do seu crescimento. A avaliao dever ser realizada comparando-se o crescimento dos fitopatgenos em contato com os gases produzidos pelos antagonistas, com aquele da testemunha ao atingir a extremidade da placa. Mtodo da camada dupla O mtodo da camada dupla utilizado exclusivamente para a deteo de bacteriocinas. Consiste em verter inicialmente um meio de cultura adequado ao crescimento do isolado produtor da toxina, o qual ser depositado em pontos equidistantes sobre o meio, sendo incubado por 48 horas. A bactria inativada pela ao de vapores de clorofrmio, por tempo que varia de 5 a 20 minutos, sobrepondo-se uma camada de gar-gua contendo a suspenso da bactria fitopatognica a ser controlada.

Mtodo do lquido metablico Consiste no cultivo do antagonista em meio de cultura lquido, com ou sem agitao durante um determinado perodo de tempo, aps o qual se faz a filtrao do crescimento, com ou sem esterilizao, ou ainda autoclavagem. Segue-se a avaliao do lquido metablico (LM) quanto sua capacidade antagnica. Adicionam-se a um meio slido, fundido e esfriado at 45C fraes conhecidas do LM, colocando-se, aps o esfriamento, o fitopatgeno, seja em discos de miclio de fungo ou disco de papel de filtro imerso em soluo bacteriana. Avalia-se o crescimento do fitoptogeno comparando-se ao da testemunha constituda de meio de cultura sem o LM. PRINCIPAIS AGENTES DE CONTROLE BIOLGICO A seguir so listados e descritos alguns microrganismos utilizados em controle biolgico de doenas de plantas: a) Gliocladium spp. Micoparasita facultativo, habitante natural do solo, tem sido observado parasitando inmeros fungos como Botrytis spp., Eutypa armeniaceae , Ceratocystis fimbriata , e Fusarium spp. Aplicaes desse fungo para controle do mofo cinzento causado por B. cinerea so uma maneira de aumentar a populao desse antagonista. Vrios isolados de G. roseum de diferentes regies geogrficas tm mostrado eficcia no biocontrole do mofo cinzento. Segundo Braun & Sutton, 1984, citado por Melo & Azevedo, 1998, G. roseum diminui a incidncia do mofo cinzento de 90-100% e foi consistentemente to efetivo quanto o fungicida Clorotalonil. Antibiose e hiperparasitismo no parecem ser os mecanismos comuns de controle de B. cinerea por G. roseum . Tambm no foi verificada evidncia de parasitismo de B. cinerea por G. roseum . Esses dados levaram Sutton, 1994, citado por Melo & Azevedo, 1998, a concluir que competio por substrato o principal mecanismo pelo qual G. roseum inibe B. cinerea em morango. b) Trichoderma spp. um deuteromiceto que produz abundantes condios em conidiforos que emergem diretamente das hifas. um fungo de solos orgnicos, vivendo saprofiticamente ou parasitando outros fungos. um antagonista eficaz no controle de inmeros fungos fitopatognicos. Vrias espcies tem sido utilizadas em biocontrole, entretanto, Trichoderma harzianum a espcie mais bem estudada. Elas tem sido utilizadas tanto para patgenos radiculares, como, Rhizoctonia solani, Fusarium spp., Armillaria spp., como da parte area, como, Venturia spp., Botrytis spp, etc. Trichoderma pode atuar, via de regra, atravs de um ou da associao dos seguintes mecanismos: parasitismo, antibiose e competio. Muitas espcies j estudadas possuem a capacidade de produzir metablitos secundrios txicos, tais como antibiticos e enzimas lticas capazes de inibir e destruir propgulos de fungos fitopatognicos. No se conhece, no entanto, o papel desses antibiticos in situ . Em condies de laboratrio, Trichoderma produz uma gama de antibiticos com efeitos pronunciados contra fungos e bactrias, tanto de interesse agrcola como de interesse na medicina. c) Verticillium lecanii Verticillium lecanii um fungo entomopatognico promissor empregado no controle microbiano. Ele ocorre frequentemente sobre pulges e conchonilhas nas regies tropicais e subtropicais. Esse fungo tambm j foi relatado sobre insetos das ordens Coleoptera, Diptera, Hymenoptera e sobre caros eriofideos. A presena dos insetos contaminados por V. lecannii facilmente determinada em funo do aparecimento de um halo branco em sua volta, associado estrutura caracterstica do conidiforo e dos condios do fungo. De acordo com Mondgen, citado por Melo & Azevedo (1998), o fungo V. lecannii se desenvolve melhor e hiperparasita seus hospedeiros em baixas temperaturas, em torno de 18-22 C e com alta umidade relativa do ar entre 95-100%, assim como altas intensidades de luz favoreceram o parasitismo. CONSIDERAES FINAIS O controle biolgico, diferente do qumico, no apresenta efeito imediato e total, e geralmente

seu efeito pode estar abaixo do necessrio, havendo a necessidade da integrao com outros mtodos de controle, estabelecendo-se o que se chama de controle integrado. Algumas lacunas no conhecimento impedem o pleno sucesso do Controle Biolgico, dentre elas, um melhor entendimento sobre a ecologia do patgeno e do antagonista. Muitos microrganismos quando cultivados em grande escala e sucessivamente, podem perder ou reduzir sua capacidade patognica, diminuindo a eficincia e a credibilidade do controle (GRIGOLETTI et al, 2000). BIBLIOGRAFIAS CONSULTADAS ALVES, S. B., Ed. Controle microbiano de insetos . Piracicaba, FEALQ, 1998. 1163p. BAKER, K. F.; COOK, R. J. Biological control of plant pathogens . San Francisco: W. H. Freeman, 1974. 433p. BETTIOL, W. Componentes do Controle biolgico de doenas de plantas. In: Controle biolgico de doenas de plantas . Bettiol, W. (Org.) Jaguarina: Embrapa-Cnpda, 1991a. 338p. (Embrapa-Cnpda. Documentos, 15). CARDOSO, E. J. B. N. Relaes ecolgicas entre microganismos. In: Manual de Fitopatologia , v. 1. GALLI, F. So Paulo, SP, Editora Agronmica Ceres LTDA. 1978. 373 p. GRIGOLETTI Jr, A.; Santos, A. F. dos.; Auer, C. G. Perspectivas do uso do controle biolgico contra doenas florestais. In: Floresta , v. 30. Edio especial. 2000. 200 p. MARIANO, R. DE R. Mtodos de seleo in vitro