ISOLAMENTO E IDENTIFICAO DE FUNGOS MICORRZICOS EM Epidendrum nocturnum Jacq.

(ORCHIDACEAE) Kellen Cristhina Incio SOUSA; Amanda Abdallah CHAIBUB; Aline Pereira LUZINI; Jacqueline Campos Borba CARVALHO; Rejane Arajo GUIMARES; Leila Garcsde ARAJO Instituto de Cincias Biolgicas ICB, Universidade Federal de Gois UFG bio_kcis@hotmail.com.br Palavras-chave: Orqudeas, Micorrizas, Cerrado Introduo A famlia Orchidaceae compreende aproximadamente 800 gneros e 40 mil espcies naturais, sendo que a maioria se concentra em pases de clima tropical (Stewart & Zettler, 2002). De acordo com Dressler (1993) a subfamlia Epidendroideae abrange 50% dos gneros de orqudeas e composta principalmente por plantas epfitas, embora possua exemplares terrestres e rupcolas. As orqudeas possuem um grande apelo comercial por suas belas flores, o que impulsiona o cultivo. Dados da American Orchid Society (2006) apontam que no setor de comercializao de plantas envasadas no Brasil arrecadou-se no ano de 2005 cerca de 35 milhes de dlares, enquanto que nos EUA a arrecadao ultrapassou 140 milhes. As orqudeas, por possurem sementes muito pequenas, associam-se afungos micorrzicos. Esta associao, seja durante a germinao e desenvolvimento inicial das plntulas, seja na fase adulta, visa aumentar a absoro de gua e nutrientes (Rasmussen & Rasmussen, 2009). Os fungos micorrzicos de orqudeas pertencem ao gnero Rhizoctonia sp. e so denominados rizoctoniides. Apresentam caractersticas que os diferenciam como, por exemplo, a presena de clulas moniliides, hifas septadas com contries em ngulo de 90, hifas enoveladas (pelotons) e septo doliprico. Os gneros com maior ocorrncia so Ceratorhiza sp., Epulorhiza sp., Rhizoctonia sp., Tulasnella sp., Sebacina sp. e Ceratobasidium sp. (Currah & Zelmer, 1992). O gnero Epidendrum L., com aproximadamente mil espcies, ocorre desde o estado da Flrida nos Estados Unidos at o estado do Paran Brasil (Zettler et al., 2007). A espcie Epidendrum nocturnum Jacquin, pode se apresentar em hbito rupcola, epfita e terrestre (Bonates, 2007). No Brasil tm-se notificaes de plantas terrestres na Mata Atlntica, epfitas na regio amaznica e rupcolas no Cerrado (Batista & Bianchetti, 2003). Os objetivos deste trabalho foram isolar e identificar fungos de razes de E. nocturnum Jacq., e tambm localizar as estruturas fngicas nas clulas do crtex. Material e Mtodos As razes foram coletadas de trs plantas adultas de E. nocturnum Jacq. estabelecidas em rochas na Reserva Biolgica Prof. Jos ngelo Rizzo, localizada no Parque da Serra Dourada, municpio de Mossmedes GO. As amostras das razes aps serem extradas das orqudeas foram armazenadas por 48 horas em cmara fria (4C) no Laboratrio de Gentica de Microrganismos da Universidade Federal de Gois (UFG). Para o isolamento dos fungos, uma amostra de 18 razes foi desinfestada por meio de lavagens em gua corrente, imerso em soluo de lcool a 70%, em soluo de hipoclorito comercial a 2% e em gua destilada autoclavada. Cada raiz foi seccionada em fragmentos de trs centmetros, sendo que para a metade dos fragmentos foi retirado o velame. Os fragmentos foram macerados em almofariz de porcelana autoclavado e o macerado espalhado em placas de Petri contendo meio de cultura BDA. As placas foram incubadas a 28 C com luminosidade controlada em Sala de Crescimento. Os fungos isolados, quando pertencentes aos gneros micorrzicos, foram identificados conforme Currah & Zelmer (1992). Para os demais isolados, no micorrzicos, foi empregada a metodologia de Barnett & Hunter (2003). Na localizao de estruturas fngicas, dentro das clulas do crtex parenquimtico, usou-se fragmentos de razes saudveis desinfestadas superficialmente e fixadas em FAA50% por 48 horas. Aps a fixao, os fragmentos basal, medial

e apical foram transferidos para lcool 70%. Para a visualizao, em microscpio ptico, das hifas enoveladas (pelotons) foram realizados cortes transversais e longitudinais. Os cortes clarificados e corados com safranina 1% (cora as partes mais lignificadas do tecido vegetal) e azul de Astra 0,3% (corando as clulas do crtex) foram fixados em lminas estreis com glicerina a 70%. Resultados e Discusso Dos 18 fragmentos de razes incubados em BDA foram isolados 28 fungos, sendo que a maioria originou-se das razes sem velame. Segundo Bonates (2007) o velame de E. nocturnum altamente lignificado, constitui-se de trs a cinco camadas de clulas mortas e, portanto, no so colonizadas por fungos. Dentre os 28 fungos isolados apenas cinco so micorrzicos, sendo trs s pertencentes ao gnero Epulorhiza sp. e trs Rhizoctonia sp (Figura 1). Os 23 fungos que no so micorrzicos pertencem aos seguintes gneros: Aspergillus sp., Chaetomium sp., Fusarium sp., Halodes sp., Nigrospora sp., Phoma sp. e Pyrenochaeta sp. Os pelotons so estruturas ricas em nutrientes, os quais so favorveis planta, mas para que possa absorver preciso degradar as hifas. Quando os pelotons esto se desenvolvendo em boa parte da clula esto intactos, quando se encontram em tamanho bastante reduzido, esto digeridos ou degradados (Nogueira et al., 2005). Nos cortes histolgicos observou-se a predominncia de pelotons degradados e intactos, o que indica que a associao micorrzica est acontecendo na planta ainda na fase adulta. Concluses Os fungos micorrzicos isolados de E. nocturnum pertencem ao grupo dos rizoctonides. Os cortes histolgicos revelaram que ainda na fase adulta esta orqudea mantm associao com fungos micorrzicos. Estudos posteriores podero testar a eficincia dos fungos micorrzicos obtidos nas razes de E. nocturnum em germinar suas sementes in vitro. Referncias Bibliogrficas AMERICAN ORCHID SOCIETY. Orchid popularity still growing. Orchids, Delray Beach, v. 75, n. 2, p. 563, 2006. BARNETT, H.L.; HUNTER, B.B. Illustrated genera of Imperfect fungi. 4. ed. Saint Paul: The Phytopathological Society, USA, 2003. 218p. BATISTA, J. A. N.; BIANCHETTI, L. B. Lista atualizada das Orchidaceae do Distrito Federal, Brasil. Acta Botnica Braslica, So Paulo, v. 17, n. 2, p. 183-201, 2003. A B BONATES, L. C. M. Anatomia ecolgica da folha e da raz e aspectos ecofisolgicos de Orchidaceae epfitas de uma campina da Amaznia Central. 2007. 130f. Dissertao (Mestrado em Biologia Tropical Recursos Naturais). Instituto Nacional de Pesquisas da Amaznia, Universidade Federal do Amazonas, Manaus, 2007. CURRAH, R. S.; ZELMER, C. D. A key and notes for the genera of fungi with orchids and a new species in the genus Epulorhiza. Reports Tottori Mycol. Inst., v. 30, p. 43-59, 1992. DRESSLER, R. L. Phylogeny and classification of the orchid family. Cambridge: Cambridge University Press, 1993. 314p. rgos Financiadores: Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de Gois (FAPEG) Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior (CAPES)