Microbiologia ambiental

Engenharia do Ambiente
Escola Superior Agrria Instituto Politcnico de Coimbra
abelho@esac.pt www.esac.pt/abelho

Mdulo 2.Microbiologia ambiental aplicada

3.1 QUALIDADE MICROBIOLGICA DA GUA

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gua e transmisso de doenas Doena epidmica: afecta simultaneamente muitos indivduos, por contgio Doena endmica: verificase permanentemente numa dada regio

Vector de vrias doenas variadas, algumas graves, que se fazem sobretudo sentir nos pases em vias de desenvolvimento (frica, sia e Amrica Latina) Todos os anos morrem mais de 3 milhes de crianas devido a diarreias e doenas similares transmitidas e disseminadas pela gua que consomem

Nos pases de nvel scio-econmico mais elevado apenas esporadicamente se detectam situaes de doena epidmicas ou endmicas Ocorrncia de acidentes, erros de manipulao de ETAs (Estao de Tratamento de guas) ou contaminao imprevisvel das guas de consumo por esgotos ou matrias fecais

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Microrganismos nas guas naturais

guas naturais apresentam uma grande quantidade e diversidade de microrganismos (bactrias, fungos, protozorios,) Alguns podem ser patognicos para o Homem embora a maioria no represente um risco para indivduos saudveis

Bactrias de origem intestinal que se encontram naturalmente nas fezes causam epidemias graves (e.g. clera e febre tifide) e doenas menos graves como gastroenterites
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Microrganismos patognicos na gua

Alguns microrganismos patognicos (bactrias e protozorios) que vivem associados ao homem e a outros animais podem sobreviver na gua e infectar humanos guas usadas para recreao ou como fonte de marisco no cozinhado podem aumentar a possibilidade de transmisso de doenas Estas infeces so particularmente importantes em indivduos imunologicamente deprimidos A purificao da gua permite o controlo da transmisso de doenas pela gua - guas municipais tratadas em 3-4 passos dependendo do tipo de impurezas presentes

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Bactrias patognicas que sobrevivem na gua

Bactria Aeromonas hydrophila Campylobacter Helicobacter pylori Legionella pneumophila Reservatrio Vida livre Aves e mamferos Vida livre Vida livre e associada a protozorios Animais infectados Vida livre Intestinos dos animais Vida livre Vida livre em guas costeiras Animais e meio ambiente Comentrios Gastroenterite, celulite e outras doenas Microaerfilo; diarreia; comum na carne de aves Gastrite tipo B, lcera pptica, adenocarcinoma gstrico Torres de arrefecimento, evaporadores, condensadores, chuveiros e outras fontes de gua Efeitos hemorrgicos Infeces do ouvido Comum em vrios tipos de gua Muitos tipos de gua incluindo esturios Diarreia aps ingesto de bivalves Gastroenterite

Leptospira Pseudomonas aeruginosa Salmonella enteriditis Vibrio cholera Vibrio parahaemolyticus Yersinia enterocolitica

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Protozorios patognicos que sobrevivem na gua

Protozorio Acanthamoeba Cryptosporidium Reservatrio reas de libertao de esgotos Muitas espcies de animais domsticos e selvagens Comentrios Encefalite, lcera crnea Enterocolite aguda, indivduos imunologicamente deprimidos muito susceptveis, quistos resistentes desinfeco qumica, insensvel aos antibiticos Diarreia de longa durao (mdia 43 dias), sensvel ao tratamento com antibitico Bactrim Diarreia da Primavera, comum nas guas frias de montanha Adquirida por inalao, infeco afecta o sistema nervoso central, meningoencefalite
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Cyclospora cayetanensis

guas (no suporta dissecao) e provavelmente outros reservatrios Castores, ovelhas, ces, gatos guas quentes, piscinas, lagos

Giardia lamblia Naegleria fowleri

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Grupo 1: Doenas por ingesto

Doenas ligadas gua

Doenas por ingesto de gua de consumo contaminada por agentes patognicos de origem fecal

Bactrias (coliformes, Salmonella, Shigella, Vibrio,) Enterovrus Protozorios Vermes intestinais

Causam elevadas taxas de mortalidade (infantil e adulta) Constituem o problema mais abundante
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Grupo 2: Doenas por contacto

Doenas ligadas gua

Doenas por contacto com a gua:

Intestinos Olhos (tracoma) Pele,

Resultam principalmente de situaes de carncia hdrica associada a m qualidade dos recursos hdricos disponveis
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Grupo 3: atravs de vectores

Doenas ligadas gua

Doenas relacionadas com a presena de vectores especficos que transmitem os microrganismos

Caracis aquticos + Platelminte Schistosoma - bilharziose

Mosquito Anopheles + protozorio Plasmodium - malria

Mosquito Aedes - vrus DEN + dengue Mosca tsetse (Glossina) + protozorio Trypanosoma + doena do sono Mosca Simuliidae + nemtode Onchocerca volvulus cegueira dos rios

Constituem o problema mais importante em termos de desenvolvimento scioeconmico das populaes afectadas

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Doenas ligadas gua nos pases em desenvolvimento

Tipo de doena
Por ingesto

Infeco
Amebiases Diarreias Clera Plio Febre tifide Ascariases Lepra Trichuriases Ancilostomiases Bilharziose Doena do sono Malria Cegueira dos rios
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Nmero de infeces
400 milhes 3-5 mil milhes 200 mil 80 milhes 1 milho 8-10 milhes 1,3 milhes 500 milhes 7-9 mil milhes 200 milhes 1 milho 800 milhes 30 milhes
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Por contacto

Com vectores associados

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Conceito de qualidade da gua

O conceito de qualidade relativo - funo do objectivo do utilizador e do fim a que se destina Nenhuma gua boa para todos os fins gua destilada imprpria para beber devido falta de minerais gua para beber imprpria para uso na indstria da pasta de papel devido presena de ferro

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Utilizaes da gua que afectam a sua qualidade

produo e descarga de esgotos; efluentes de descargas pluviais produo e gesto de estrumes; uso de produtos agro-qumicos; descarga de guas de drenagem produo de guas residuais; guas de arrefecimento fabril; drenagem de efluentes de minas Utilizaes da gua que so afectadas pela sua qualidade

consumo; usos domsticos e pblicos (rega, lavagem de ruas,) abastecimento de exploraes agro-pecurias; rega processamento de alimentos; abastecimento de caldeiras; outros processamentos fabris; explorao mineira desportos com contacto com a gua (natao); prazer esttico vida selvagem; pesca; habitats hmidos; pntanos
Utilizaes da gua no ligadas sua qualidade

gerao de energia; navegao desportos sem contacto directo com a gua (remo, vela, ); navegao de lazer
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 Organizao Mundial de Sade (1971)

O conceito de poluio da gua

gua poluda aquela cuja composio ou estado tenham sido alterados de tal forma que se torne menos adequada para todas ou algumas das funes e fins a que pode ser adequada no seu estado natural

UNESCO Relatrio do Programa Hidrolgico Internacional (1982)

Qualquer modificao natural ou artificial que directa ou indirectamente modifique a qualidade da gua e altere ou destrua o equilbrio dos ecossistemas e dos recursos naturais de tal modo que: (1)traga perigo para a sade pblica, (2)diminua a sua adequabilidade ou eficincia e o bem-estar do Homem e das suas comunidades

Comisso CT-72 da Direco Geral da Qualidade (1983)

Inadequao da sua aplicabilidade para algum objectivo considerado

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Contaminao da gua

Introduo ou descarga na gua de organismos patognicos ou de substncias txicas que a tornem imprpria para consumo pblico e/ou usos domsticos (OMS, 1972)

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gua potvel

Aquela que pode ser bebida sem que da resulte perigo para a sade de quem a consome A potabilidade avaliada atravs da anlise de um conjunto de parmetros; todos eles devero ser respeitados para que a gua seja considerada apta para o fim pretendido

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 Valor Mximo Recomendvel

Limites impostos na legislao

Garante a manuteno da sade do consumidor e a cobertura das suas necessidades alimentares Seria conveniente que qualquer anlise apresentasse um valor VMR

Valor Mximo Admissvel

Como nem sempre os valores obtidos so VMR, toma-se em conta o VMA, na perspectiva de que nesse intervalo de valores (VMRVMA) no se verificaro riscos significativos para a sade dos consumidores

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Critrios para o indicador ideal 1

1. A concentrao do microrganismo indicador na gua contaminada deve ter uma relao directa com o grau de contaminao; 2. O microrganismo indicador deve ser suficientemente conhecido, de forma a permitir a atribuio de valores-limite; 3. A anlise do microrganismo indicador deve ter uma metodologia padronizada e especfica para o microrganismo em causa (i.e., a presena de outros microrganismos no deve gerar resultados positivos) e suficientemente sensvel para detectar nveis baixos do indicador; 4. A anlise do microrganismo indicador deve ser rpida, inequvoca e de baixo custo; 5. O microrganismo indicador deve estar presente sempre que microrganismos fecais patognicos estejam tambm presentes, e em quantidade superior aos patognicos;
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Critrios para o indicador ideal 2

6. O microrganismo indicador deve ser mais resistente aos agentes desinfectantes que os microrganismos patognicos (i.e., deve sobreviver mais tempo); 7. O microrganismo indicador no deve reproduzir-se na gua (para no causar sobre-estimativas da poluio) 8. O microrganismo indicador deve distribuir-se de forma aleatria na massa de gua; 9. O microrganismo indicador deve ser propcio para a anlise de todos os tipos de gua: torneira, rios, subterrnea, barragens, esturios, oceanos, guas residuais (i.e., deve ser capaz de sobreviver nos vrios tipos de gua); 10. O microrganismo indicador deve ser inofensivo para o ser humano.

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Constituem 10% dos microrganismos entricos do homem e de outros animais homeotrmicos Bactrias da famlia Enterobacteriaceae, bacilos, Gram-negativas, anaerbias facultativas, oxidasenegativas, crescem em meio de cultura selectivo contendo sais biliares Capazes de fermentar lactose a 37-44.5C com libertao de gs e de cido A fermentao da lactose a 44.5C permite distinguir os coliformes no fecais (37C) dos coliformes fecais (44.5C) Escherichia coli Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae, Citrobacter sp., Aerobacter sp.

Coliformes fecais e no fecais

Indicadores microbiolgicos clssicos

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De origem intestinal; ocorrem juntamente com coliformes fecais Bactrias Gram-positivas, cocos, em cadeia ou aos pares, catalase-negativas Crescem entre 10 e 45C, a pH 9.6, em meio de cultura contendo 6.5% de cloreto de sdio (NaCl), na presena de 40% de sais biliares, em concentraes de azida inibidoras do crescimento dos coliformes, reduzem azul-demetileno em 0.1% de leite, conseguem sobreviver a 60C durante 30 minutos Subgrupo dos enterococos mais resistentes salinidade que estreptococos fecais Enterococcus faecalis, E. faccium, E. avium, E.durans, E. gallinarum

Estreptococos e enterococos fecais

Indicadores microbiolgicos clssicos

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Clostridium perfringens

Indicadores microbiolgicos clssicos

Bactria anaerbia, esporulada, redutora de sulfito, Gram-positiva, em forma de bacilo, habitante do intestino do homem e de outros animais homeotrmicos Indicador de poluio fecal antiga, devido ao seu longo tempo de permanncia na gua e grande capacidade de sobrevivncia dos seus esporos

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Teor microbiano total | UFC a 22C e a 37C

No um indicador especfico de poluio fecal mas sim de enriquecimento por matria orgnica facilmente degradvel As contagens de colnias so teis para a avaliao do estado da gua e dos processos de tratamento utilizados, por exemplo, nas ETARs

Indicadores microbiolgicos clssicos

O principal interesse da contagem de colnias reside na possibilidade de detectar as alteraes em relao ao histrico, baseando-se num controlo frequente e a longo prazo ou seja, permite controlar a variao quantitativa dos microrganismos
Contagem de microrganismos heterotrficos mesfilos e termfilos

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Escherichia coli

De origem fecal, indicador de contaminao fecal

Novos indicadores microbiolgicos

Apresenta uma grande diversidade de adaptaes ao meio, algumas estirpes produzem toxinas que originam diarreias Substituiu, na legislao actual, os coliformes fecais como indicadores de contaminao fecal

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Pseudomonas aeruginosa

Bactrias oportunistas, no so habitantes especficos do intestino (provenientes da gua ou do solo) mas aparecem em 12% da populao Aerbias, Gram-negativas, bacilos direitos ou curvos (0.5-1.0mm por 1.5-5.0mm), mveis por flagelos polares Quimiotrficas, desnitrificantes, produzem um pigmento verde amarelado, difusvel, solvel em gua e fluorescente sob radiao UV Capacidade de adsoro a metais pesados e de sntese de surfactantes naturais Patognicas e com elevada resistncia a antibiticos, podem provocar infeces no sistema auditivo de nadadores, nos olhos, nos sistemas urinrio ou digestivo, pneumonias, podem ser contaminantes de alimentos, podem desenvolver-se em feridas e queimaduras

Novos indicadores microbiolgicos

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Outros indicadores

Existem outros microrganismos presentes na gua que podem representar perigo para as populaes humanas, mas a legislao actual no prev a sua anlise de rotina
Vermes helmintas Protozorios (e.g., Giardia, Cryptosporidium, Entamoeba, Acanthamoeba,) Vrus

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Controlo da qualidade

Legislao actualmente em vigor

guas para produo de gua para consumo humano e guas de rega: Decreto-Lei 236/98
gua destinada ao consumo humano: Decreto-Lei 306/2007 guas balneares: Decreto-Lei 135/2009

Usos da gua nos quais a legislao prev normas de qualidade

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Decreto-Lei 236/98, de 1 de Agosto 1. guas para produo de gua para consumo humano, para suporte de vida aqucola e guas de rega

Estabelece normas, critrios e objectivos de qualidade com a finalidade de proteger o meio aqutico e melhorar a qualidade das guas em funo dos seus principais usos: utilizao da gua para consumo humano, para suporte de vida aqucola, para efeitos balneares (revogado pelo Decreto-Lei 135/2009, de 3 de Junho) e para rega. No que respeita utilizao da gua para consumo humano, consideram-se trs tipos: (i) guas doces superficiais destinadas produo de gua para consumo humano; (ii) guas subterrneas destinadas produo de gua para consumo humano e (iii) guas de abastecimento para consumo humano (revogado pelo Decreto-Lei 306/2007)
http://dre.pt/pdf1s dip/1998/08/176A 00/36763722.pdf

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Captao de gua para consumo humano Qualidade e tratamentos

Categorias A1, A2 e A3, de acordo com as normas de qualidade (anexo I do DecretoLei 236/98) Esquemas de tratamento tipo distintos (anexo II do Decreto-Lei 236/98), para as tornar aptas para consumo humano
classe A1-tratamento fsico e desinfeco, classe A2-tratamento fsico e qumico e desinfeco, classe A3-tratamento fsico, qumico de afinao e desinfeco

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guas de rega

Os critrios e normas de qualidade das guas de rega visam proteger a sade pblica, a qualidade das guas superficiais e subterrneas, as culturas que podem ser afectadas pela m qualidade das guas de rega e os solos cuja aptido para a agricultura pode ser degradada pelo uso sistemtico de guas de rega de m qualidade.
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Decreto-Lei 236/98: parmetros microbiolgicos e valores mximos recomendveis

Anexo I. guas doces superficiais destinadas produo de gua para consumo humano

Anexo XVI. guas de rega

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Decreto-Lei 306/2007, de 27 de Agosto 2. gua destinada ao consumo humano

Estabelece o regime da qualidade da gua destinada ao consumo humano, procedendo reviso do Decreto-Lei 243/2001, de 5 de Setembro, que transps para o ordenamento jurdico interno a Directiva 98/83/CE, do Conselho, de 3 de Novembro, tendo por objectivo proteger a sade humana dos efeitos nocivos resultantes da eventual contaminao dessa gua e assegurar a disponibilizao tendencialmente universal de gua salubre, limpa e desejavelmente equilibrada na sua composio.
http://dre.pt/pdf 1sdip/2007/08/1 6400/05747057 65.pdf

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gua destinada a consumo humano Definio

Toda a gua no seu estado original, ou aps tratamento, destinada a ser bebida, a cozinhar, preparao de alimentos, higiene pessoal ou a outros fins domsticos, independentemente da sua origem e de ser fornecida a partir de uma rede de distribuio, de um camio ou naviocisterna, em garrafas ou outros recipientes, com ou sem fins comerciais; Toda a gua utilizada numa empresa da indstria alimentar para fabrico, transformao, conservao ou comercializao de produtos ou substncias destinados ao consumo humano, assim como a utilizada na limpeza de superfcies, objectos e materiais que podem estar em contacto com os alimentos, excepto quando a utilizao dessa gua no afecta a salubridade do gnero alimentcio na sua forma acabada.

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Decreto-Lei 306/2007: parmetros microbiolgicos e valores mximos recomendveis, anexo I

gua fornecida por redes de distribuio, fontanrios, camies ou navios-cisterna, reservatrios e gua utilizada na indstria alimentar

gua colocada venda em garrafas ou outros recipientes

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 Estabelece o regime jurdico de Decreto-Lei 135/2009, identificao, gesto, de 3 de Junho monitorizao e classificao da qualidade das guas balneares e 3. guas balneares de prestao de informao ao pblico sobre as mesmas, transpondo para a ordem jurdica interna a Directiva n. 2006/7/CE, do Parlamento Europeu e do Conselho, de 15 de Fevereiro, relativa gesto da qualidade das guas balneares, e complementando a Lei da gua, http://dre.pt/pdf 1sdip/2009/06/1 aprovada pela Lei 58/2005, de 0700/03460034 29 de Dezembro. 68.pdf
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guas balneares Definio

guas superficiais, interiores, costeiras ou de transio, tal como definidas na Lei da gua, aprovada pela Lei n. 58/2005, de 29 de Dezembro, em que se preveja que um grande nmero de pessoas se banhe e onde a prtica balnear no tenha sido interdita ou desaconselhada de modo permanente.
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Decreto-Lei 135/2009: parmetros microbiolgicos e valores mximos recomendveis, anexo I

guas balneares interiores

guas balneares costeiras e de transio

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 Mtodo da inoculao de meio lquido em tubos mltiplos com leitura do Nmero Mais Provvel (NMP)
Mtodos gerais de anlise

Mtodo da filtrao por membrana com inoculao de meio slido Na legislao portuguesa mais antiga o mtodo de referncia era o dos tubos mltiplos, mas na legislao mais recente o mtodo de referncia passou a ser o da filtrao por membrana Apesar desta alterao das normas legais, ambos os mtodos possuem vantagens e desvantagens

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Tubos mltiplos e NMP

Inoculao de repeties de 3 , 5 ou 10 sries de tubos com meio de cultura lquido, especfico para o microrganismo a pesquisar com 3 volumes da amostra: 10 mL, 1 mL e 0.1 mL Presume-se que os meios de cultura inoculados com as ltimas diluies no vo apresentar qualquer crescimento (resultados negativos) e que ocorrer crescimento nos tubos que tenham, pelo menos, um microrganismo vivel Se a amostra e as diluies forem homogneas e se houver um nmero suficiente de repeties, possvel tratar estatisticamente os resultados e generaliz-los amostra inicial A prpria designao do mtodo aponta claramente para o carcter probabilstico que lhe deve ser atribudo O nmero de tubos positivos nos quais ocorreu crescimento em cada diluio utilizado para determinar o Nmero Mais Provvel (NMP) desse microrganismo na amostra de gua analisada, consultando uma tabela estatstica (tabela de McGrady)
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Filtrao em membrana

Filtrao de um volume conhecido de amostra atravs de um filtro de 0.45 mm, que retm os microrganismos na sua superfcie A membrana depois colocada num meio slido especfico e levada a incubar O sucesso do mtodo depende na utilizao de um meio diferencial ou selectivo, efectivo para o microrganismo que se quer pesquisar

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Enumerao de coliformes pelo mtodo dos tubos mltiplos Inoculao de sries de tubos mltiplos com 10, 1 3 0.1 mL de amostra 1.Teste presuntivo

2.Teste confirmativo

3.Teste final

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Mtodo das membranas filtrantes

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Mtodos analticos de referncia

Normas

Recolha de amostras de gua. EN 25667-2 | ISO 5667-2:1991 Enumerao de microrganismos cultivveis: contagem de colnias por sementeira em meio extracto de levedura agar. EN ISO 6222 | ISO 6222:1999

Deteco e enumerao de Escherichia coli e de bactrias coliformes pelo mtodo da filtrao por membrana. EN ISO 9308-1 | ISO 9308-1:2000
Deteco e enumerao de enterococos intestinais pelo mtodo da filtrao por membrana . EN ISO 7899-2 | ISO 7899-2:2000
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