Swaranjit Singh Cameotra, Pooja Singh International Biodeterioration & Biodegradation, v. 62, p.

274280 2008

INDSTRIA PETROQUMICA: leos residuais e viscosos Hidrocarbonetos de petrleo contaminantes ambientais

Poluio e Toxicidade - Afeta a sade humana

SEMEADURA

BACTRIAS INDGENAS

BIORREMEDIAO

INTRODUO

Principais problemas na biodegradao

Deficincia de nutrientes

Pobre disponibilidade de hidrocarbonetos

Nitrognio, enxofre e fsforo

INTRODUO
Bioestimulao: fornecimento de nutrientes s populaes de microrganismos autctones, aumentando sua populao, promovendo o crescimento e consequentemente o aumento da atividade metablica na degradao de contaminantes.

SUPLEMENTAO NUTRICIONAL

INTRODUO
PROBLEMAS DOS HIDROCARBONETOS

Deficientes em nutrientes Altamente hidrofbicos Solubilizao por agentes tensoativos

Desenvolver um processo para a biorremediao de lama de leo bruto por meio da utilizao de um consrcio bacteriano.

1. AMOSTRA, SOLUES E CONDIES DE CULTURA

Meio mnimo
4 g de Na2HPO4 + 2 g de KH2PO4 + 0,8 g de NH4SO4 + 0,8 g de MgSO4 2 g de NaNO3 + 2 g K2HPO4 + 0,8 g NH4SO4 + 0,8 g de MgSO4 + 0,1 g de extrato de levedura + 1 ml de TES

Soluo nutritiva

+ 1mL de soluo de elementos trao (TES)

22,2 g K2HPO4.H2O + 7,26 g de KH2PO4 + 0,2 g de MgSO4.7H2O + 1,8 g de ureia

Tampo

pH: 7,2

Incubao a 30C Agitao a 210 rpm

MATERIAIS E MTODOS
2. DESENVOLVIMENTO DO CONSRCIO

Diluio em srie em NaCl a 0,9%

Plaqueamento em AN (isolamento)

Testes de crescimento a 1% e 2% de nhexadecano no meio mnimo

Tenso superficial dos pontos

Centrifugao / Pesagem/ Secagem 65C por 48h

Cultivo das bactrias selecionadas em 50mL do meio mnimo + 2% n-H

Teste de degradao de hidrocarbonetos n-hexadecano

Extrao do nhexadecano residual com nhexano

Anlise por cromatografia a Gs (azoto)

MATERIAIS E MTODOS
Clulas colhidas no incio da fase LOG Vrtex 2min / T.A. 20 min Absorb. a 400nm Lavadas 2x e suspensas em tampo

HIDROFOBICIDA DE CELULAR
(Rosenberg et al, 1980 modificada)
Medio da DO a 600nm (0,6 a 0,8) 1,2mL em tubos de 10mm

15 min

Adicionadas de 0,1 / 0,2/ 0,5 e 1,0mL de dif. Hidroc.(T.A.)

A hidrofobicidade expressa em percentagem de adeso ao hidrocarboneto calculada pela frmula:

A Escherichia coli foi usada como um controle negativo.

MATERIAIS E MTODOS
3. CARACTERIZAO DOS MEMBROS DO CONSRCIO

Anlise das linhagens de acordo com as caractersticas morfolgicas, bioqumicas e quimiotaxonmicas

CARACTERIZAO Anlise das linhagens de acordo com o perfil de cidos graxos (CG) (DNA)

Barrow e Feltham (2004)

Garrity (1984)

Sistema de Identificao Microbiana (MIS)

MATERIAIS E MTODOS
4. ATIVIDADE DO CONSRCIO NO LABORATRIO (CONDIES)

Trs culturas selecionadas

Borra de leo bruto Ratnagiri

Inculo: clulas em meio padro + 2% de n-hexadecano

MATERIAIS E MTODOS
5. TESTES - TRATAMENTOS
Solo + borra de leo (controle) Solo + borra de leo + soluo nutritiva Solo + borra de leo + soluo biossurfactante Solo + borra de leo + soluo nutritiva + soluo biossurfactante

Solo + borra de leo + inculo

Solo + borra de leo + soluo nutritiva + inculo Solo + borra de leo + soluo biossurfactante + inculo Solo + borra de leo + soluo nutritiva + soluo biossurfactante + inculo

MATERIAIS E MTODOS
ESTUDO DE CAMPO DA BIODEGRADAO DO LEO BRUTO RATNAGIRI

CARACTERIZAO QUMICA DA MISTURA DE RAMNOLIPDIO

EXTRAO E ANLISE DE HIDROCARBONETO RESIDUAL DO SOLO

SEPARAO E PURIFICAO DA MISTURA DE RAMNOLIPDIO

PRODUO E PURIFICAO DE BIOSSURFACTANTE SSC2

RESULTADOS
1. SELEO DOS MEMBROS DO CONSRCIO
Um total de 38 isolados bacterianos foram obtidos a partir de solo contaminado com hidrocarbonetos: P2, P7, SSC2, SSC3 e SSC4.

Duas propriedades foram analisadas:

Aumento da biomassa, indicando um crescimento no hidrocarboneto;

Reduo da tenso superficial, indicando produo de

biossurfactante

RESULTADOS

Figura 1(a). Crescimento dos isolados bacterianos em nhexadecano como nica fonte de carbono.

RESULTADOS

Figura 1(b). Variao da tenso superficial do meio mnimo contendo n-hexadecano como nica fonte de carbono, pelos isolados bacterianos.

RESULTADOS

Figura 2. Degradao percentual do n-hexadecano pelos isolados bacterianos, calculada pela anlise da CG dos hidrocarbonetos residuais. (P7 70%; P2 75%; SSC2 80%).

RESULTADOS

Figura 3. Avaliao da hidrofobicidade dos membros do consrcio, inclusive do controle negativo.

RESULTADOS
2. CARACTERIZAO DOS ISOLADOS SELECIONADOS

P2 e SSC2

Pseudomonas aeruginosa

Gram negativas, aerbias, fluorescente, catalase e oxidase, padro de cidos graxos

P7

Rhodococcus equi (CG) Rhodococcus erythropolis (98%)

Bacilo gram positivo, no fluorescente, perfil de cidos graxos.

RESULTADOS
3. TESTES DE DEGRADAO - TRATAMENTOS

Tabela 1. Degradao dos hidrocarbonetos do leo bruto Ratnagiri nas quatro semanas de tratamento

RESULTADOS
4. ESTUDO DE CAMPO DA DEGRADAO DO LEO RATNAGIRI

Tabela 2. Degradao do leo Ratnagiri por 8 semanas de tratamento em estudo de campo

RESULTADOS

Tabela 3. Identificao de ramnolipdeos no biossurfactante produzido pelo SSC2

RESULTADOS

Figura 4. Valores ramnolipdeos.

de

absorbncias

da

mistura

de