UNIVERSIDADE DE PASSO FUNDO

FACULDADE DE ENGENHARIA E ARQUITETURA

CURSO DE ENGENHARIA DE ALIMENTOS

ANTIBITICOS
Lais O. Manica Lusa Bortoluzzi Mariane Zanatta Tatiana Smaniotto Valquria Morais

INTRODUO
Droga com capacidade de interagir com microrganismos mono ou pluricelulares que causam infeces no organismo Os antibiticos so produtos do metabolismo secundrio de microrganismo, que inibem o processo de crescimento de outros microrganismos, inclusive quando utilizado em baixas concentraes

INTRODUO
Mtodos de Por fermentao; Produo dos Por composto semi-sintticos; antibiticos Por sntese conhecidos
De acordo com o mecanismo de ao, espectro microbiano, cepa produtora, forma de biossntese ou estrutura qumica

Classificao

CARACTERSTICAS DOS ANTIBITICOS

Ser ativo frente ao patgeno in vivo; No deve produzir reaes indesejveis, ou seja, deve ser

relativamente atxico para fagcitos, clulas, tecidos e rgos do corpo;

No deve precipitar as protenas do soro;
Deve ser solvel em gua ou soro fisilogico; Nvel Srico Estas substncias concentram-se no sangue e sua

dose deve ser suficiente para atingir uma concentrao mnima inibidora

MICRORGANISMOS PRODUTORES
Microrganismos apresentam dois tipos de metabolismo: Primrio: ativo durante todo o ciclo de vida Secundrio: rotas biossintticas longas e complexas

derivadas do metabolismo primrio

Produo de antibiticos

MICRORGANISMOS PRODUTORES
Mais de 8000 antibiticos foram identificados

200 novos antibiticos a cada ano

So produzidos principalmente por bactrias ou fungos:

Antibiticos produzidos por fungos (principalmente pelos gneros Penicillium e Cephalosporium) Ex.: penicilina, cefalosporina, griseofulvina. Gnero Streptomyces produz 70% dos antibiticos do mercado

MICRORGANISMOS PRODUTORES

MICRORGANISMOS PRODUTORES
Crescimento rpido em substrato econmico

Produo das substncias desejadas em quantidades e

condies econmicas
Aprimoramento da capacidade produtora Conservao das caractersticas biossintticas, sem grandes

riscos de
variao
Baixa produo de substncias que interfiram com a extrao do

antibitico
Ausncia de patogenicidade

HISTRIA

1928 penicilina
o

Alexander

Fleming

descobriu

Colnias de Staphlococcus vizinhas ao fungo Penicillium apresentavam-se translcidos (lise celular)

penicilina Penicillium

Agente antibacteriano chrysogenum

HISTRIA
Cresceu Penicillum em meio liquido, verificando-se a existncia de uma substncia antimicrobiana secretada meio

no

Deste modo, Fleming concluiu que aquele fungo produzia substncias bactericidas

HISTRIA
Penicilina primeiro antibitico usado para o tratamento de infeces em humanos

Deu origem mais variada e mais utilizada classe de antibiticos: os -lactmicos

Atualmente Penicillium crysogenum

1000 vezes mais produto

ANTIBITICOS Grupos microbianos

antibiticos:
Produo

que

produzem

Bactrias Actinomicetos Fungos

Nmero de antibiticos 950

Grupo taxonmico Bactrias diferentes de actinomicetos Actinomicetos Fungos

4.600 1.600

APLICAO DOS ANTIBITICOS

Aplicao teraputica

Amplo espectro

Espectro reduzido

Eficaz em vrias infeces

Ativos a uma faixa restrita de microrganismos

APLICAO DOS ANTIBITICOS

Utilizados clinicamente como agentes citostticos

Txicos- aplicado com cuidadoso controle de doses Aplicados seletivamente em baixas concentraes

So pouco txicos para animais e insetos

Utiliza-se a desinfeco de sementes com antibiticos

APLICAO DOS ANTIBITICOS

Controlados pelo legislao Piramicina: fungicida aplicado a superfcie dos alimentos

Tilosina: eficaz contra esporos de Bacillus

Nisina: eficaz contra Clostridium utilizado em conservas Clorotetraciclina para manter o pescado, carnes e aves por congelamento ou por banho de imerso.

APLICAO DOS ANTIBITICOS

Adio em raes de animais

Melhora o processamento no sistema digestivo do animal e

acelera o aumento de peso

APLICAO DOS ANTIBITICOS

Ajudam no funcionamento de funes celulares: Replicao do DNA Transcrio, traduo e sntese da parede celular

PESQUISA DE ANTIBITICOS

PESQUISA DE ANTIBITICOS

QUANTIFICAO
Tcnica do Halo de Inibio

CLASSIFICAO
Os antibiticos podem ser classificados de acordo com:
Espectro antimicrobiano; Mecanismo de ao; Cepa produtora; Forma de biossntese; Estrutura qumica.

CLASSIFICAO DE ACORDO COM O MECANISMO DE AO

Inibidores da sntese da parede celular Penicilinas e celafosporinas Interferem na sntese de nucleotdeos Sulfonamidas Trimetropina

Inibidores da sntese de protenas;

Eritromicina Rifampicina Estreptomicina

Interferem com a membrana celular bacteriana Polimixina B Colistina

CLASSIFICAO DE ACORDO COM A ESTRUTURA QUMICA

Penicilina
Penicillium chrysogenum;
Interfere na sntese da parede de peptdeoglicano e

leva Lise celular;

Amplo espectro de ao;
DSTs, infeces trato intestinal e meningite.

Penicilina G e V.

CLASSIFICAO DE ACORDO COM A ESTRUTURA QUMICA

Cefalosporinas
Cephalosporium acremonium; Antibitico bactericida;

Possui Anel Beta-lactamico;

Controle de Gram(+) e Gram(-)
Cocos e Escherichia coli, respectivamente.

Interrompem a sntese de Peptdeoglicano Causa diarria e nuseas.

DESENVOLVIMENTO DE CEPA
Fatores Interferentes Qualidade da Cepa; Screening; Tcnicas recombinao do DNA. pH; Em torno 6,5. Temperatura; 25 27C. Oxignio Aerbios; Aerbios facultativos. Agitao;

Fermentador utilizado para produo de antibiticos.

DESENVOLVIMENTO DE CEPAS
Objetivos:
Aumento rendimento
Eficincia na recuperao do

produto;

P. Notatum (Flaming); 1943- P. chrysogenum

NRRL 1951.
Por mutagnese estirpe

WisQ176.

CEFALOSPORINAS
Biossntese e Regulao Precursores:
-(-aminoadipil)-l;
Cisteinil-d-valina; Isopenicilna-n.

Transformao de cadeia lateral;

Formao de penicilina N; Enzima racemase.

Hidroxilaao controlada por uma dioxigenase deacetilcefalosporina

C;

CEFALOSPORINAS
Biossntese e Regulao

O ponto final da via biosinttica em fungos dada pela acetilaao da

cefalosporina C;
A produo de cefalosporina regulada pelo fosfato, pelo nitrognio

e regulao catablica do carboidrato;

A adio de lisina a baixas concentraes favorece a produo de

cefalosporina.

DESENVOLVIMENTO DE CEPAS
Realizado com a cepa original de Brotzu, C. acremonium, utilizando

mutao, seleo e tcnicas parassexuais;

Mutantes reguladores resistentes a enxofre tem uma produo

superior de cefalosporina;
Recombinao parassexual em C. acremonium de difcil

acontecimento.
Fuso de protoplastos de diferentes cepas tem um aumento de 40%

na produo de cefalosporina, melhor crescimento e esporulao;

MECANISMOS DE AO DOS ANTIBITICOS

Os antimicrobianos podem atuar: processos metablicos estruturas dos microrganismos.

MECANISMOS DE AO DOS ANTIBITICOS

Inibio da sntese da Parede celular

Bactericidas - bloqueiam a sntese do peptdeoglicano

Beta-lactmicos (penicilinas, cefalosporinas,

carbapenmicos e monobactmicos), Glicopeptdeos (vancomicina e teicoplanina)

Gram positiva

Gram negativa

MECANISMOS DE AO DOS ANTIBITICOS

Inibio da funo da Membrana celular

Destroem a permeabilidade seletiva, rompem o fosfolipdio

Destroem tanto a clula bacteriana quanto a humana Polimixina B, Colistina, Tirotricina, Nistatina, Anfotericina B,

Miconazol, Cetoconazol, Fluconazol, Itraconazol.

CARACTERSTICAS DE PRODUO
Processos aerbios

Esterilizao de meio e de equipamentos - etapa importante:

Menos de 2 % das bateladas devem ser perdidas como resultado de infeces por microrganismos resistentes ao antibitico ou com fagos
Inculo de 10% do volume a fermentar Controle de temperatura e pH Contnua adio de nutrientes e precursores Quantidades relativamente elevadas de carbono

sntese de componentes celulares

respirao celular produo de substncias aparentemente no so necessrias atividade metablica normal a clula

PRODUO DA PENICILINA
Preparao e esterilizao do meio Inoculao do meio no fermentador

Preparao do inculo

Extrao e purificao da penicilina

Aps a fermentao h a remoo do miclio formado

Aerao forada com ar estril durante a incubao

MTODO DE PRODUO
Penicilina produzida por fermentao submersa em fermentadores de

40000-200000 L
Aerbia com velocidade de absoro do oxignio de 0,4 a 0,8 mM/L. min

A velocidade de aerao entre 0,5-1 vvm dependendo da cepa, do

biorreator e do tipo de agitador, como agitadores de turbina para o caldo.

Faixa de temperatura de 25 a 27C

Operados de forma semi-descontnua (isto , alimentao contnua de

vrias substncias a uma fermentao descontnua)

processos descontnuos alimentados

PRODUO DA PENICILINA
Meios de produo tpicos:

Melao Farinha de soja

gua de milho Extrato de levedura Lactose

Gorduras animais Soro de leite

PRODUO DA PENICILINA
Inculo: utiliza-se esporos liofilizados

em concentrao tima de 5x103/mL

Vrias etapas de crescimento est

preparado o cultivo de produo

Fermentao: fase de crescimento de

aproximadamente 40h, com tempo de duplicao de 6h, durante o qual se forma a massa celular.
A baixa aerao no cultivo em

crescimento critica, porque o aumento da viscosidade dificulta a transferncia de oxignio, resolvido por alteraes no fermentador
Depois da fase de crescimento: fase de

produo com 120-160h

PRODUO DA PENICILINA
O pH mantido em 6,5 cido fenil-actico adicionado como precursor (0,5-0,8 %) Velocidade de alimentao: 1-2,5 kg/m3.h com glicose de 500 kg/m2 Velocidade de utilizao do acar e fornecimento de oxignio Como alternativa: 20-40% do contedo da fermentao retirado e

alimentado novamente com soluo nova de nutrientes, este processo se repete at 10 vezes. 65% da fonte de carbono metabolizada utilizada para os gastos energticos
25 % para o crescimento 10 % para produo de penicilina

PRODUO DA PENICILINA
Penicilina excretada no meio de cultivo e menos de 1%

permanece unida ao miclio

Separao do miclio por filtrao O produto recuperado por 2 etapas de extrao contnua em

contracorrente (extrator) do caldo da fermentao

Com acetato de amila, de butila ou metil a 0-3C e pH 2,5-30 Rendimento de 90%

PRODUO DA PENICILINA

PRODUO DE CEFALOSPORINA
Descobertos em filtrados de cultivo de Cephalosporium

acremonium em 1953
Produz antibiticos: penicilina, cefalosporinas C. So tambm produzidos por fungos como Emericellopsis Possuem baixa toxicidade e so antibiticos de amplo espectro Mais ativos frente a bactrias gram-negativas

PRODUO DE CEFALOSPORINA
Similar a penicilina Utilizam-se meios como:
Lquido de macerao de milho Extrato de carne Acetato de amnio

Sacarose Glicose

Processo descontinuo alimentado Adio semicontnua de nutrientes em pH 6-7 e temperaturas de 24 - 28C Na fase de crescimento necessria alta velocidade de aerao Na fase de produo (48-160h) o consumo de oxignio diminui

PRODUO DE RETAMICINA
Produo de antitumoral retamicina pelo microrganismo

Streptomyces olindensis.
Meios de cultivo
Glicose Extrato de levedura Casaminocidos K2SO4 Soluo de micronutrientes

Em pH 7,2 a 7,4

PRODUO DE RETAMICINA
Com agitao de 500 rpm

vazo especifica de aerao de 1 vvm (volume de ar/volume de meio)

temperatura de 30C pH 7

sendo adicionados 1 L de meio de cultura no biorreator

Com diferentes concentraes de glicose

PRODUO DE RETAMICINA

Na primeira etapa

Inoculou-se 2 erlenmeyers de 1 L, contendo 90 mL de meio de cultura com 10

mL de suspenso de clulas conservadas em soluo de glicerol 20 % a 20C

Os erlenmeyers eram mantidos em incubador rotativo por 16 h a 30 C e 200

rpm

Na segunda etapa

Inoculou-se 2 erlenmeyers de 1 L, contendo180 mL de meio de cultura com 200

mL de suspenso de clulas obtidas na primeira etapa

Os erlenmeyers eram mantidos em incubador rotativo por 24 h a 30 C e 200

rpm, ao final os frascos eram reunidos e utilizados como inculo

RESISTNCIA AOS ANTIBITICOS

Resistncia microbiana: um problema que excede...

2 milhes de pacientes americanos adquirem anualmente

episdios de infeco hospitalar

90.000 bitos anuais so devidos a estes episdios 70% dos microrganismos que causam estas infeces so

resistentes aos antimicrobianos habitualmente empregados

a durao da hospitalizao, levando utilizao de drogas

mais txicas e mais dispendiosas

RESISTNCIA AOS ANTIBITICOS

Os antibiticos aplicam uma presso seletiva que favorece a

emergncia de organismos resistentes.

As bactrias desenvolvem diversas estratgias bioqumicas

para se tornarem resistentes.

Intrnseca ou adquirida Emprego generalizado e indiscriminado de antibiticos Originada por mutao ou transferncia gentica

RESISTNCIA AOS ANTIBITICOS

Stio alvo do antibitico modificado estruturalmente,

resultando em:
Ligao reduzida do antibitico Formao de uma nova via metablica que impede o

metabolismo do antibtico

RESISTNCIA AOS ANTIBITICOS

MUTAES: mutaes pontuais, transposio de segmentos de

genes, inseres, delees, inverses TRANSFERNCIA GENTICA: plasmdeos, bacterifagos, transposio de genes (do plasmdeo para o cromossomo)
Controle:
Preveno de mutantes (doses altas ou terapia combinada) Preveno da disseminao de mutantes (diminuir emprego) Eliminao de cepas resistentes durante o tratamento (ex:

penicilinas resistentes beta-lactamase)

MECANISMO DE RESISTNCIA DOS ANTIBITICOS

Modificao no stio alvo do frmaco
Perda da permeabilidade celular a um

frmaco
Produo enzima inibida / metablito

antagonista do frmaco
Abertura de rota alternativa que contorna

a via inibida
Menor necessidade do produto gerado

pelo sistema inibido

RESISTNCIA AOS ANTIBITICOS

Mecanismos de ao Principais mecanismos de resistncia PBPs de baixa afinidade Diminuio de transporte Bomba de efluxo

Beta-lactmicos

Inativa PBPs (sntese do peptideoglicano)

Glicopeptdeos

Se liga a precursores do peptideoglicano

Modificao do precursor Diminuio de transporte Bomba de efluxo

Aminoglicosdeos Macroldeos Quinolonas

Inibe sntese protica (se Enzimas modificadoras liga a subunidade 30S) (adio de adenil) Inibe sntese protica (se Metilao de rRNA liga a subunidade 50S) Bombas de efluxo Inibe topoisomerases (sntese de DNA) Alterao da enzima alvo Bombas de efluxo

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
EQB353 Microbiologia Industrial Escola de Qumica / UFRJ

Lima, U.A. Biotecnologia industrial. 3 ed. So Paulo: Blucher,

2001.
Norris, S. et al. Indstrias de Processos Qumicos. 4 ed. So

Paulo: LTC, 1997.