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ANIMAIS DE EXPERIMENTAO: CUIDADOS E DESCARTES

Fotografias cedidas pelos autores

Um biotrio brasileiro que produz animais de laboratrio utilizados na fabricao de soros e vacinas.

Resumo Diviso Biotrio Central do Instituto Butantan tem por finalidade a realizao da produo, manuteno, descarte e fornecimento de animais de laboratrio, de diversas espcies como camundongos, ratos, coelhos, cobaias, hamsters e meriones, para serem utilizados na produo e controle de qualidade de imunobiolgicos e frmacos, desenvolvimento de pesquisas e alimentao de outras espcies animais tais como serpentes, aranhas e sapos. A produo, manejo e
Ana Paula Rocha da Silva

mentos de fluxos, procedimentos operativos padro, protocolos e certificao, que esto intimamente ligados a biosseguridade dos animais e dos tcnicos. Palavras chave Animais de laboratrio, Biossegurana, Biotrio, cGMP, Descarte. Introduo A experimentao animal data dos antigos Gregos e Romanos, porm foi durante os sculos dezoito e dezenove que progrediu lentamente de uma prtica relativamente incomum, at alcanar um enfoque cientfico. E lentamente tambm, progrediam os primeiros movimentos contra o uso dos animais. A partir do sculo vinte intensificou-se o debate em torno das questes sobre a tica animal. Em meados do sculo dezoito, na Europa, uma elite social comeou a questionar como os animais eram tratados, especialmente nos laboratrios de pesquisas. Com o passar dos anos essas mesmas foras sociais estavam em trabalho tambm na Amrica e a prtica da pesquisa com animais e a oposio a ela, comeavam a crescer j no final do sculo dezoito. No cenrio nacional, podemos verificar que as instituies produtoras de imunobiolgicos e frmacos sofreram vrias manifestaes ticas como as campanhas contra a febre amarela e varola que deram origem revolta da vacina. Em dez de novembro de 1904, aps a publicao do decreto que tornava obrigatria a vacinao, focos de revolta explodiram em toda a cidade (RJ),

(rochap@butantan.gov.br) Pesquisadora Cientifica da Diviso Biotrio Central do Instituto Butantan Biloga

Elizabeth Juliana Ghiuro Valentini

(ghiuro@butantan.gov.br) Pesquisadora Cientifica da Diviso Biotrio Central do Instituto Butantan Mdica veterinria.

Maria de Ftima C. L. F. Tvora

(fatimatavora@butantan.gov.br) Graduanda de Biologia

Ubimara Pereira Rodrigues

(uprodrigues@butantan.gov.br) Pesquisadora Cientifica e Diretora Tcnica da Diviso Biotrio Central do Instituto Butantan.

Virgnia Barreto Moreira

(vivimor@butantan.gov.br) Biotecnloga da Diviso Biotrio Central Zootecnista

Vnia G. M. Mattaraia

(vmoura@butantan.gov.br) Pesquisadora Cientifica e Diretora do Servio de Criao de Animais da Diviso Biotrio Central do Instituto Butantan Zootecnista Endereo: Instituto Butantan Av. Vital Brasil, 1500 , Butant So Paulo SP CEP: 05503-900 (11) 37267222 Ramais 2168 / 2169 / 2085

descarte dos animais so realizados obedecendo rigorosamente as Normas de Boas Prticas de Produo de Animais de Laboratrios e Biossegurana. Estas normas incluem validao de barreiras sanitrias, estabelecimento de fluxos, procedimentos operativo padro, certificao e validao de equipamentos e processos. O objetivo deste trabalho divulgar a estratgia empregada pelo Biotrio Central do Instituto Butantan, descrevendo os principais aspectos utilizados na produo, manuteno e descarte dos animais, validao de barreiras, estabeleci-

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onde vinte e trs revoltosos foram mortos e sessenta e sete feridos tendo sido presos aproximadamente mil pessoas. Tudo porque o cientista Oswaldo Cruz queria salv-los, mesmo fora, da varola (Chalhoub, 1996). O quanto estes movimentos so salutares? No sabemos! Quando retrocedemos, verificamos que alguns deles foram entraves para a sade pblica e muitas vezes o que ocorreu foi o medo pelo desconhecido. Por outro lado, importante que a sociedade exija e cobre dos governantes a criao de rgos fiscalizadores que possam garantir o bem estar e a melhor sobrevivncia do planeta. Atualmente, grande o nmero de pessoas preocupadas com a proteo dos animais e mais recentemente com o padro gentico destes animais. Desde 1995 podemos dizer que o Brasil ingressou efetivamente na era das pesquisas e no desenvolvimento dos Organismos Geneticamente Modificados, conhecidos como produtos transgnicos (Oda, 2001). Uma questo basilar no novssimo campo de conhecimento biossegurana. Podemos definir biossegurana como sendo um conjunto de aes voltadas para a preveno, minimizao ou eliminao de riscos inerentes a estas atividades e que podem comprometer a sade do homem, dos animais, do meio ambiente ou a qualidade dos trabalhos desenvolvidos (Cardoso, 2001). As instituies produtoras de imunobiolgicos e frmacos necessitam de grande quantidade de animais, livres de patgenos especficos, para serem utilizados no controle de qualidade dos mesmos, pois o produto final, por exigncia da farmacopia e manual da WHO deve ser testado in vivo. O Instituto Butantan, que mantm tradio centenria no desenvolvimento de soros contra venenos de animais peonhentos e a raiva, tambm o maior produtor de vacinas da Amrica Latina e principal parceiro do Ministrio da Sade nas campa-

nhas nacionais de vacinao. O Brasil o nico pas do mundo que oferece vacinas gratuitamente para crianas, jovens e idosos (Raw, 2004). Com o propsito de atendermos estas necessidades, no ano de 1999 o Biotrio Central do Instituto Butantan sofreu uma grande adequao fsica, com o intuito de produzir animais livres de patgenos especficos. Para o estabelecimento de um biotrio protegido com barreiras sanitrias restritas, foi necessrio o desenvolvimento de um Plano Mestre de Validao, criado por um grupo multiprofissional, para atuar na certificao da eficincia mxima de cada barreira.(Rodrigues et al, 2003). Foram introduzidos os princpios de zoneamento semelhantes aos utilizados na indstria farmacutica com a utilizao de uma sistemtica coerente para evitar contaminaes danosas, que possam vir a ocorrer durante o processo de produo, ou reduzi-las a nveis aceitveis de acordo com as normas de Good Manufacturing Pratices (GMP), ou em portugus, Boas Prticas de Fabricao (BPF). (Guias de Boas Praticas de Fabricao,1995). Este artigo tem como objetivo divulgar a estratgia empregada pelo Biotrio Central do Instituto Butantan, descrevendo os principais aspectos utilizados na produo, manuteno e descarte dos animais, vali-

dao de barreiras, estabelecimentos de fluxos, procedimentos operativos padro, protocolos e certificao, que esto intimamente ligados a biosseguridade dos animais e dos tcnicos. Materiais e Mtodos O Biotrio Central do Instituto Butantan um biotrio de produo, ou seja, em suas dependncias no alojamos animais infectados ou que tenham passado por algum tipo de manipulao experimental. Nele esto alojadas as colnias de fundao, as quais dependendo do padro gentico da linhagem, tm um manejo definido. Ainda temos as colnias de expanso e de multiplicao, para que possamos atender a demanda e preservar as linhagens. Produzir animais dentro dos conceitos de BPF significa cumprir com os conceitos da Garantia da Qualidade. Boas Prticas de Fabricao a parte da Garantia da Qualidade que assegura que os produtos so consistentemente produzidos e
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controlados, com padres de qualidade apropriados para o uso pretendido e requerido pelo registro. A aplicabilidade desses conceitos para produo de animais de laboratrio ainda muito recente, havendo dificuldades para obteno de literatura de apoio. Portanto, descrevemos as principais prticas (BPF) aplicadas no nosso biotrio: Pessoal qualificado e devidamente treinado; Ns, pesquisadores da Cincia de Animais de Laboratrio, temos como prioridade formar pessoas para a rea. Sendo assim, realizamos anualmente cursos de treinamento para tcnicos de nvel mdio e superior, para os funcionrios do biotrio do Instituto e de outras Instituies. Durante os meses de setembro ou outubro realizamos uma jornada interna, que consiste em: um funcionrio de cada rea apresenta para todos o seu trabalho e as suas observaes. Por muitas vezes, aps a avaliao do supervisor, elas podem ser aceitas e passarem a fazer parte dos Procedimentos Operativos Padro (POP). Todos os funcionrios so instrudos e incentivados a reportar aos seus supervisores quaisquer condies relativas ao ambiente, equipamento ou pessoal que considerem prejudiciais

qualidade e integridade do trabalho por ele desenvolvido. O ingresso de um novo funcionrio depende de um perodo de treinamento, da realizao dos exames admissionais e dos exames especficos para a rea de atuao. Espao e instalaes adequadas; O biotrio um prdio independente, isolado das demais reas. Possu entrada e vestirios separados, sistema de ventilao, exausto, casa de mquinas, caldeiras e gerador ex-

clusivo. Sua arquitetura pavilhonar, sendo que cada linhagem mantida em um pavilho e este totalmente independente dos demais. Fig. 01. As reas auxiliares como; laboratrio, vestirios de barreira, administrao, almoxarifado, rea de descanso e refeio so totalmente separadas. O projeto arquitetnico contemplou cada pavilho com estrutura fsica, equipamentos e definio de fluxos de forma a minimizar ou eliminar os riscos de contaminao atravs dos insumos e pessoas enviados as reas de produo. Fig. 02. A definio do fluxo de materiais e de pessoas evita a contaminao cruzada. Os cantos sanitrios no permitem o acmulo de sujeira e facilitam a manuteno de forma adequada nas reas. Todos os equipamentos so regularmente validados, possuem suas especificaes fixadas ao lado e os procedimentos de uso e limpeza descritos nos POPs e no Manual de Limpeza. Cada unidade de produo dispe de salas com classificao 10.000, destinadas criao de matrizes essas salas possuem sistema de filtrao de ar, com filtros HEPA (Hight Efficiency Particulate Air). A construo obedece aos princpios de zoneamento, onde ocorre um efeito em cascata, com o fluxo de ar partindo da rea de maior presso, para as reas de menor presso. As zonas diferenciam-se pela presso e pureza do ar, porm mantendo os demais parmetros fsicos, como: fluxo do ar no turbulento e unidirecional, velocidade, troca mnima horria, temperatura e umidade relativa, nveis de rudo e iluminao. Uma importante caracterstica do biotrio o sistema de exausto. Os animais so alojados em gaiolas, distribudas em estantes metlicas com seis prateleiras cada e a exausto feita atravs de um sistema de plenos, instalados nas paredes

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das estantes, atrs das gaiolas. Isto significa, que os odores fortes de amnia produzidos pela urina e fezes dos animais so exauridos diretamente das gaiolas sem circular na sala. Fig. 03. Manuais e Procedimentos Operativos Padro A documentao constitui parte essencial do sistema de Garantia da Qualidade e, deve estar relacionada com todos os aspectos das BPF. Tem como objetivo garantir as informaes necessrias a rastreabilidade de qualquer produto. Todos os documentos podem ser reunidos em uma nica pasta, ou permanecerem separados, facilmente disponveis, constituindo o registro de todas as informaes da histria do produto. Todos os processos produtivos dos animais esto descritos nos Manuais, de uma forma mais geral e detalhadamente nos Pops. Os manuais, os procedimentos e toda documentao descrita com a participao do funcionrio da rea, depois avaliada pelos supervisores e finalmente aprovada pelo corpo tcnico do biotrio. No Biotrio temos o Manual de Procedimentos, que trata do manejo com os animais. No Manual de Biossegurana esto relatados todos os possveis riscos e as exigncias para os procedimentos dentro e fora das reas de criao. O Manual de Limpeza trata do procedimento de limpeza de cada rea, desde a forma de ser limpa at os produtos de limpeza e as suas diluies (Fig.4). O Manual de Biossegurana deve ser lido por todos os funcionrios que assinam um termo, de cincia e de acordo, com o cumprimento das normas nele estabelecidas. Um outro complemento do Manual de Biossegurana a documentao de recebimento e de instrues de uso dos equipamentos de proteo individual (EPIs). Os Pops descrevem, passo a passo, cada operao do processo de produo, seja ele manejo, esterilizao, procedimento de fluxo de pessoas e insumos. A elaborao da documentao deve obedecer determinadas exigncias, que dependem do tipo de documento, ou seja, se um Pop, um

nhum documento deve ser modificado sem autorizao prvia. O contedo dos documentos no pode ser ambguo, o ttulo e o seu objetivo devem ser apresentados de forma clara, precisa e correta. Alm disso, devem ser dispostos de forma ordenada e serem de fcil verificao. Os documentos devem ser regularmente revistos e atualizados. As alteraes efetuadas em qualquer documento deve ser assinada e datadas, a alterao deve possibilitar a leitura da informao original. Armazenamento e transporte adequados; Os animais so mantidos em colnias fechadas, com sistemas de acasalamento adequado ao padro gentico de cada linhagem. Ficam em acasalamentos monogmicos nas colnias de fundao, poligmicos nas colnias de multiplicao e separados por sexo nas salas de estoque, onde aguardam atingir o peso ou a idade solicitada pelos usurios. Um procedimento peculiar do nosso biotrio a manuteno de uma amostra de todos os desmames realizados. Essa amostra mantida no biotrio at atingir a idade adulta, com a finalidade de possibilitar o rastreamento dos lotes dos animais fornecidos aos usurios. O transporte dos animais realizado de tera a quinta-feira, sempre na parte da manh. Em conduo do biotrio um tcnico acompanha a entrega dos animais aos diversos Laboratrios. A entrega registrada no protocolo de entrega, onde consta, quantidade, sexo, idade ou peso, dia e hora de fornecimento. Esse protocolo assinado pelo requisitante e arquivado em nossa documentao. Descarte protocolo (prot.), uma requisio de anlise (RqA), etc. Porm existem normas comuns a todos, tais como: Os documentos devem ser redigidos, revistos e distribudos somente as pessoas designadas. Os originais devem ser aprovados, assinados e datados pelo responsvel tcnico. NeO procedimento de descarte dos animais do biotrio obedece normas rgidas, descritas tanto no manual de procedimentos, quanto no manual de biossegurana. Os animais saem das reas de produo pela trampa de expurgo de cada rea. O funcionrio recebe os animais, os conduz cmara de euta19

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nsia e esta efetuada de acordo com o procedimento descrito no Manual de Procedimentos. Nos novos conceitos de tica, as espcies convencionais com peso abaixo de 1Kg, podem ser eutanasiadas em cmeras de CO2, Figs 05 e 06. Animais de peso superior so anestesiados antes de colocados na cmera de CO2. O procedimento de eutansia resultante de vrios treinamentos com a finalidade de preparar o tcnico a identificar a cessao dos sinais vitais nos animais. realizado um revezamento entre os tcnicos, com o objetivo de que estes no fiquem insensveis ao procedimento. Aps a eutansia, os animais so acondicionados em sacos plsticos identificados com smbolo de risco biolgico e levados ao freezer (20C) onde permanecem at a coleta do lixo. A coleta feita pela prefeitura (Coleta de Resduos Infectantes), em carros especiais e levada ao incinerador pblico, Figs. 07, 08, 09, 10 e 11. Resultados A adequao fsica do biotrio foi realizada em 1999 e nestes quatro anos percebemos que a adoo destes cuidados tem permitido a

aplicao do principio dos 3Rs. E apesar da produo cientifica e da produo de produtos ter aumentado ano a ano houve uma diminuio no nmero de animais fornecidos, isto se deve a obteno de um animal com padro sanitrio definido. Concluso Com a implantao das normas de biossegurana e de cGMP em todos os procedimentos de rotina, fomos classificados em conformidade pelos rgos de Vigilncia (Auditoria/Inspeo) e nenhuma adequao ou mudana nos foi solicitada na parte fsica e de documentao. Sempre que fomos submetidos aos rgos de vigilncia sanitria, como ANVISA e WHO, conseguimos a aprovao dos procedimentos e a certificao dos produtos. Alm do que, at o momento conseguimos manter o padro sanitrio e gentico exigido pelos laboratrios de pesquisa e produo e no mesmo perodo no registramos nenhum tipo de acidente de trabalho. Referncias Bibliogrficas 1. Cardoso, T.A.O.Consideraes

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