Introduo aos mtodos espectrofotomtricos

Apontamentos de apoio s aulas prticas e terico-prticas de Mtodos de Anlise Qumica

Eduarda Bastos Henriques dos Santos

Eduarda B. H. Santos

1. Absoro de radiao pela matria; espectrofotometria

Em espectroscopia, absoro um processo em que uma espcie qumica num meio transparente atenua (decresce a intensidade de) certas frequncias da radiao electromagntica. Segundo a teoria quntica, a energia dos tomos, ies, ou molculas est quantizada, isto , s lhe so permitidos determinados valores. Para que uma dessas partculas absorva um foto de radiao, necessrio que a energia desse foto coincida com a diferena de energia entre dois dos nveis de energia (E1 e E0) da partcula: h = 10 (1)

Se se colocar uma soluo de uma espcie qumica que absorve radiao de frequncia , no percurso ptico de radiao com essa frequncia (ver figura 2), a radiao que atravessa a soluo sofre atenuao.

b P0 P

Soluo da espcie absorvente, de concentrao C

P0 = potncia do feixe incidente P = potncia do feixe aps atenuao

Figura 1 Atenuao do feixe de radiao incidente, devida absoro por uma ou mais espcies em soluo

A transmitncia e a absorvncia so duas grandezas que podem ser usadas para exprimir quantitativamente a atenuao da radiao.

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Transmitncia, T:

T=

P P0

Absorvncia, A

A = log10 T = log

P0 P

O espectro de absoro de uma amostra (por exemplo da soluo representada na figura 2) um grfico da absorvncia, ou da transmitncia, em funo do comprimento de onda (ou da frequncia). Cada espcie qumica tem um espectro de absoro cararcterstico, pois s absorve determinadas frequncias (as que correspondem diferena de energia entre dois nveis energticos dessa espcie; ver equao 1). Assim, a espectroscopia pode ser usada em anlise qualitativa (identificao de analitos). As molculas tm trs tipos de energia quantizada: energia electrnica, vibracional e rotacional. Alteraes na energia dos electres requerem radiao mais energtica do que alteraes na energia vibracional ou rotacional. Por isso, enquanto a absoro de radiao da zona do infravermelho pode originar alteraes na energia vibracional das molculas, a alterao da energia dos electres requer radiao da zona do visvel e ultravioleta, a qual mais energtica (de maior frequncia). A absoro de radiao pertencente regio UV-Visvel (200 a 800 nm) por uma espcie molecular resulta geralmente na excitao de electres ligantes: o valor do comprimento de onda ao qual ocorrem os picos de absoro pode assim ser relacionado com os vrios tipos de ligaes nas espcies em estudo. Mas a alterao de energia electrnica das molculas pode ser acompanhada de alterao da energia vibracional e rotacional: se imaginarmos um grande nmero de molculas que esto no nvel de energia electrnica e vibracional mais baixo e que passam para um estado electrnico excitado, umas podero ficar com mais energia vibracional do que outras aps excitao. Ento, embora a alterao da energia electrnica tenha sido a mesma para todas, a variao da energia total dessas molculas no exactamente a mesma para todas elas. Assim, umas tero de absorver fotes com um pouco mais de energia do que outras. Por isso uma dada transio electrnica d origem a uma banda de absoro, constituda por numerosas riscas muito prximas (absoro de radiao com

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frequncias muito prximas). Assim, os espectros das molculas e dos ies moleculares so espectros de bandas. tomos isolados no estado gasoso apenas possuem energia electrnica quantizada. Recorde-se que a energia voibracional, por exemplo numa molcula diatmica, corresponde energia com que os ncleos vibram (alteram a distncia internuclear) em torno de uma posio de equilbrio. Assim, os espectros dos tomos so espectros de riscas.

2. Espectrofotometria de absoro molecular no ultravioleta-visvel

2.1. Espectrofotmetro de ultravioleta-visvel

Um espectrofotmetro de UV-visvel um instrumento que permite medir a absorvncia de uma amostra em funo do comprimento de onda.. Os constituintes principais de um espectrofotmetro de UV-visvel esto indicados esquematicamente no diagrama de blocos da Figura 3.

Fonte

Monocro mador

Detector

Processador de sinal/registador

Compartimento da amostra, onde colocada a clula com a soluo amostra

Figura 2 Diagrama de blocos representativo de um espectrofotmetro de absoro molecular no UV-visvel

O monocromador um selector de comprimento de onda (Figura 4). A radiao policromtica entra atravs de uma fenda. O elemento dispersor dispersa a radiao policromtica proveniente da fonte separando-a nos feixes de vrios comprimentos de onda que a constituem (efeito idntico ao da disperso da luz branca do sol, dando origem s cores do arco-iris). Uma fenda de sada do monocromador permite

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seleccionar o comprimento de onda que incide na amostra. O espectrofotmetro tem um dispositivo que permite rodar o elemento dispersor e variar assim o comprimento de onda que focado na fenda de sada do monocromador. Desta forma, possvel variar o comprimento de onda que incide na amostra. Note-se que nenhum monocromador capaz de seleccionar um nico comprimento de onda. Pela fenda de sada do monocromador sai uma banda estreita de comprimentos de onda

Espelhos cncavos

Fenda de entrada

Elemento dispersor

Fenda de sada

Figura 3 Esquema de um monocromador

2.2. Anlise quantitativa. A lei de Beer

A aplicao de espectroscopia em anlise quantitativa, baseia-se na lei de Beer. Segundo a lei de Beer, a absorvncia de uma soluo a um dado comprimento de onda dada por A= .b.C

(2)

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em que C a concentrao da espcie absorvente (mol/dm3), b, o comprimento (cm) da clula que contem a amostra (percurso ptico; ver figura 1) e representa a absortividade molar a um dado comprimento de onda, a qual caracterstica da espcie absorvente. Medindo as absorvncias de uma srie de solues padro do analito, sempre na mesma clula de quartzo (b constante) obtem-se uma recta de calibrao que pode ser usada para determinar a concentrao de analito na amostra a partir do valor da absorvncia desta (ver apontamentos sobre calibrao). A lei de Beer vlida em solues diludas e em condies de radiao incidente monocromtica (note-se que varia com o comprimento de onda). Note-se que o feixe incidente na amostra, seleccionado pelo monocromador, no absolutamente monocromtico, mas sim uma banda, embora bastante mais estreita do que a banda de absoro do analito. Para minimizar o facto de o feixe incidente na amostra no ser absolutamente monocromtico, deve trabalhar-se ao valor de comprimento de onda correspondente ao mximo da banda de absoro, pois nessa situao, praticamente no varia com pequenas variaes do comprimento de onda. Por outro lado, consegue-se o mximo de sensibilidade (pequenas variaes de concentrao entre amostras do maior variao da absorvncia ao comprimento de onda correspondente ao mximo da banda de absoro, do que a outro comprimento de onda desviado do mximo). Na Figura 4 est representada uma banda de absoro de um analito. Se se ajustasse o monocromador do espectrofotmetro de forma a seleccionar a banda B de comprimentos de onda, fora do mximo da banda de absoro, para fazer as leituras de absorvncia de vrias solues padro, poderia no se obter uma recta ao representar a absorvncia em funo da concentrao (lei de Beer no era obedecida). Esses desvios lei de Beer devem-se ao facto de do analito variar com o comprimento de onda na gama de comprimentos de onda seleccionada pela fenda de sada do monocromador. Seria melhor ajustar o monocromador de forma a seleccionar a banda A. Nessa zona, o valor de praticamente no varia com o comprimento de onda.

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comprimento de Figura 4 Vantagens de fazer as leituras de absorvncia ao mximo da banda de absoro do analito

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3. Espectroscopia de absoro atmica

3.1. Fundamentos da espectroscopia de absoro atmica Em espectroscopia atmica as amostras so vaporizadas a uma temperatura bastante elevada, decompondo-se em tomos. A absoro ou emisso de radiao aos comprimentos de onda caractersticos desses tomos pode ento ser medida. Devido sua sensibilidade e facilidade com que pode analisar-se um grande nmero de amostras, a espectroscopia atmica muito utilizada como tcnica analtica na indstria e em laboratrios de anlises qumicas. Na Figura pode ver-se uma representao esquemtica de um espectrofotmetro de absoro atmica com atomizao por chama.

chama fonte acetileno ar capilar Nebulizador-queimador

Copo com amostra

Monocromador

Detector

Chopper

Processador de sinal/registador

A amostra (soluo) arrastada para o nebulizador-queimador pelo fluxo rpido do oxidante que passa numa ponta de um capilar que tem a outra ponta mergulhada na amostra. Desta forma a amostra lquida aspirada e pulverizada em pequenas gotas, formando um aerossol. O fluxo de oxidante, combustvel e gotculas de amostra passa por um sistema que promove a mistura e rejeita as gotas de maior tamanho que se acumulam na parte de baixo da cmara de nebulizao e so escoadas

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por um dreno. A mistura oxidante/combustvel mais usada ar/acetileno (mistura que vai ser usada nas aulas prticas). As gotculas de menor tamanho so arrastadas para a chama. Uma chama de ar-acetileno atinge uma temperatura no intervalo 2125-2400 C. Aps evaporao do solvente os solutos so volatilizados e dissociados dando origem a tomos. A chama deve estar alinhada com o feixe de radiao proveniente da fonte, a qual emite radiao aos comprimentos de onda a que absorvem os tomos do elemento a analisar. Assim, a radiao, ao passar na chama, parcialmente absorvida por esses tomos, provocando a transio dos mesmos do estado fundamental para um estado excitado. A chama , portanto, a fonte de energia que permite a atomizao dos componentes da amostra e , simultaneamente, o compartimento da amostra. A absorvncia medida proporcional concentrao de tomos na chama e esta proporcional concentrao do elemento na amostra lquida, se esta for introduzida na chama a uma velocidade estvel e reprodutvel. Diversas propriedades fsicas da amostra podem afectar a absorvncia medida, devido ao facto de alterarem o caudal de aspirao. Por exemplo, a presena de agentes tensioactivos numa amostra faz com que a tenso superficial desta seja menor do que a de uma soluo padro com a mesma concentrao de analito mas sem agente tensioactivo. Em consequncia disso, as gotculas de aerosol que se formam na cmara de nebulizao durante a aspirao da amostra tero tamanho diferente das que se formam durante a aspirao da soluo padro, fazendo com que a quantidade de soluo que chega chama por unidade de tempo, e consequentemente a concentrao de tomos na chama, seja diferente. A amostra e a soluo padro dariam absorvncias diferentes, apesar de ambas as solues terem a mesma concentrao de analito. Assim, uma anlise dessa amostra feita usando padres de calibrao onde o agente tensioactivo no est presente, conduziria a um resultado errado. Diferenas significativas entre as propriedades fsicas da amostra e dos padres de calibrao podem conduzir a erros na anlise. Neste caso, a calibrao pelo mtodo de adio de padro mais adequada do que a calibrao com padres externos. Muitos elementos formam xidos e hidrxidos na chama. Uma vez que as molculas no tm os mesmos espectros que os tomos constituintes, o sinal de absoro atmica diminudo. Se a chama for rica em combustvel, o excesso de Eduarda B. H. Santos 9

espcies contendo carbono tende a reduzir os xidos e hidrxidos aumentando a sensibilidade. O mesmo pode, por vezes, ser conseguido, aumentando a temperatura da chama de forma a decompor os xidos e hidrxidos formados, o que pode ser conseguido alterando a composio da mistura combustvel/oxidante. O contrrio de uma chama rica uma chama pobre (lean) que contm um excesso de oxidante e mais quente. Para cada elemento recomendada uma determinada mistura combustvel/oxidante e uma chama mais ou menos rica. Por esse motivo, antes de efectuar a anlise, deve consultar o manual de mtodos analticos que acompanha o aparelho, onde esto indicados os caudais e tipo de combustvel e oxidante que deve usar e o tipo de chama para o elemento a analisar.

3.2. Comparao entre um espectrofotmetro de absoro atmica e um espectrofotmetro de UV-visvel (para estudar depois de dar esta matria na aula terica)

Existem trs diferenas fundamentais entre um espectrofotmetro para espectroscopia de absoro atmica e um espectrofotmetro para espectroscopia de absoro molecular. Uma delas o compartimento da amostra. As outras duas so o tipo de fonte de radiao e a necessidade de um mtodo de correco de fundo, no caso da espectroscopia atmica.

Compartimento da amostra

Num espectrofotmetro de absoro molecular no UV-visvel, o compartimento da amostra apenas uma cavidade onde se introduz a clula contendo a amostra. Normalmente, a amostra introduzida numa clula de vidro, ou quartzo, a qual encaixada num suporte adequado no compartimento da amostra. As espcies absorventes so molculas ou ies que se encontram na soluo. Em espectroscopia de absoro atmica mede-se a absoro de radiao por tomos neutros do elemento a analisar, no estado gasoso. Ora, o elemento a analisar na amostra no se encontra nessa forma, pelo que o compartimento da amostra inclui

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um acessrio para fazer a atomizao. No caso de um espectrofotmetro de absoro atmica com atomizao por chama, o compartimento da amostra inclui o nebulizador-queimador que permite aspirar a soluo amostra para a chama, a qual provoca a volatilizao do solvente e a dissociao dos solutos em tomos. na chama que o elemento a analisar passa ao estado de tomos neutros, os quais vo absorver a radiao da fonte

Tipo de fonte

A lei de Beer s se aplica a radiao monocromtica. Em termos prticos, isso implica que a banda de radiao que chega ao detector (seleccionada pelo monocromador) deve ser bastante mais estreita do que a banda de absoro da amostra. Como os espectros atmicos so constitudos por riscas estreitas (largura 10-4 nm) e o monocromador no tem uma resoluo to elevada, a fonte de radiao no pode ser contnua (emitir todos os comprimentos de onda de uma dada gama), como acontece nos espectrofotmetros para espectroscopia molecular. A fonte usada em espectroscopia de absoro atmica emite riscas com largura inferior e o mesmo comprimento de onda das riscas de absoro do elemento a analisar na amostra. O monocromador permite isolar a risca pretendida, eliminando outras riscas emitidas pela fonte. Nas aulas prticas vai usar-se como fonte uma lmpada de ctodo oco de magnsio. Se pretendesse analisar ferro numa amostra teria de trocar a lmpada por outra que emitisse as riscas caractersticas do ferro.

Necessidade de correco de fundo

Num espectrofotmetro de absoro atmica, necessrio eliminar interferncias devidas emisso de radiao pela chama, resultante do decaimento de molculas e tomos excitados para um estado de menor energia. Muita da radiao emitida removida pelo monocromador, mas h sempre radiao emitida pelos tomos e molculas na chama que passa para o detector. Para eliminar os efeitos da emisso da chama necessrio modular o sinal de sada da fonte de tal forma que a

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sua intensidade flutue a uma frequncia constante. Essa modulao pode ser conseguida por meio de um chopper ou interruptor de sinal, posicionado entre a fonte e a chama. O chopper um disco em que quadrantes alternados so removidos e que roda a uma velocidade constante, provocando a interrupo do sinal da fonte frequncia desejada Num espectrofotmetro de feixe duplo os quadrantes no abertos so espelhados: quando a radiao incide nos quadrantes abertos passa pela chama, quando incide nos quadrantes espelhados relectida e encaminhada para o monocromador e detector sem passar na chama.

O detector recebe assim dois tipos de sinal: um sinal contnuo proveniente da chama e um sinal alternado proveniente da fonte. O sinal contnuo pode ser filtrado por um dispositivo adequado e apenas o sinal alternado amplificado. O chopper no permite corrigir interferncias espectrais devidas presena de produtos de combusto moleculares que absorvam ao comprimento de onda do analito nem interferncias devidas presena de produtos particulados que dispersem a radiao. Ambas as interferncias provocam diminuio da intensidade do feixe transmitido e do origem a erros positivos. O aparelho que vai utilizar possui um

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sistema de correco de lmpada de deutrio, o qual permite corrigir este tipo de interferncias.

3.3. Anlise quantitativa

A anlise quantitativa por espectrofotometria de absoro atmica baseia-se na lei de Beer que prev que a absorvncia proporcional concentrao do analito (ver seco 2.3 do trabalho n 5).

A= .b.C

(1)

No entanto, para muitos elementos no se observa uma relao linear em toda a gama de concentraes. No caso do magnsio o limite mximo das concentraes para as quais se observa resposta linear de 0,5 ppm, conforme est indicado no manual de mtodos que acompanha o aparelho que vai usar nas aulas prticas

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