Fraccionamento/Separao

Celular

Clulas Sanguneas

Clulas do Sistema Imune

T
Linfcitos

CD4
CD8 B NK

Macrofagos Moncitos Neutrfilos PMN

Eosinfilos

Basfilos

Centrifugao
A suspenso de clulas vai ter partculas com diferentes - tamanho - carga - densidade Separao pela aplicao de fora centrifuga elevada (600 mil x g) Aplicaes:

tcnica preparativa para separar um dado componente para estudo

tcnica analtica para determinar propriedades fsicas (pm; densidade, forma) ou pesquisar a presena de macro molculas

Centrifugao Diferencial
Envolve a separao do material solvel entre o material celular insolvel A fora centrfuga e o tempo de centrifugao so ajustadas de forma a assegurar que o material insolvel fica no pellet e o material solvel (protenas) fica no sobrenadante Ex: sangue/plasma

Centrifugao em Gradiente
Envolve a separao de partculas com base na sua massa e forma mas numa soluo de densidade (de sacarose) e/ou de concentrao (de sais) crescente A amostra colocada no cimo do tubo e durante a centrifugao migram de acordo com a sua velocidade de sedimentao

Separao de linfcitos em gradiente de densidade

Numa centrifugao sedimentam primeiro as partculas mais densas, que por sua vez impedem as menos densas de sedimentar

EX: centrifugao de gradiente de Ficoll-Hypaque

SEPARAO DE CLULAS MONONUCLEARES DO SANGUE PERIFRICO EM GRADIENTE DE FICOLLHYPAQUE

O Ficoll-Hypaque mistura de polissacardeos neutros hidroflicos de alta densidade que se dissolve prontamente em soluo aquosa. O nome "Ficoll" uma marca registrada atualmente de propriedade da GE Healthcare Bio-Sciences.
So utilizados em laboratrios para separar os componentes celulares do sangue perifrico (eritrcitos, leuccitos, etc.).

Princpio da tcnica
A mistura Ficoll-Hypaque colocada no fundo de um tubo e o sangue (coletado em presena do anticoagulante EDTA para evitar a coagulao) vagarosamente colocado sobre a fase de Ficoll. Aps ser centrifugado, as duas fases tornam-se bem visveis e a separao ocorre da seguinte maneira: na fase superior fica o plasma e seus constituintes solveis, na interface as clulas mononucleares, em seguida o Ficoll e aps os eritrcitos e granulcitos que ficam sob a forma de um sedimento celular no fundo do tubo.

Eritrcitos + leuccitos polimorfonucleares (granulcitos) mais densos

Clulas mononucleares (linfcitos + moncitos) menos densos - recuperados superfcie

Soro plaquetas Clulas mononucleares Ficoll-hypaque

density