Metabolismo de aminocidos

OBJETIVOS
Ao nal desta aula, voc dever ser capaz de:

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Conhecer alguns erros do metabolismo geral dos aminocidos e suas conseqncias. Conhecer experincias que permitam demonstrar que a uria sintetizada no fgado, que os aminocidos fornecem nitrognio para a molcula de uria, que a partir dos aminocidos se forma a amnia e a partir da amnia sintetizada a uria. Analisar criticamente os resultados obtidos em experincias realizadas ao longo do sculo passado sobre o ciclo da uria, relacionando-os. Explicar mudanas na atividade das transaminases no soro, relacionando-as com possveis leses celulares hepticas, cardacas e erros metablicos.

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INTRODUO

Na ltima aula, vimos os principais caminhos pelos quais o esqueleto carbonado de aminocidos pode ser obtido e como o nitrognio excretado em mamferos. Agora, conheceremos alguns defeitos metablicos relacionados ao ciclo da uria e suas conseqncias. Ao nal, apresentaremos uma srie de temas para discusso. Estes temas so importantes, pois reproduzem vrios experimentos cientcos a partir dos quais voc entender como o ciclo da uria foi descoberto e por que o metabolismo de aminocidos to importante. Como em aulas anteriores, o contedo das discusses no

Figura 19.1: Voc sabe o que o teste do pezinho e o que ele tem a ver com o metabolismo de aminocidos? Veja em: http: //www.yourgenesyourh ealth.org/ygyh/mason/ gyh.html.syndrome=pku

essencial para se entender o ciclo da uria ou os erros inatos do metabolismo. apenas uma oportunidade de reetir e pensar sobre o universo cientco, sua lgica e suas histrias.

ERROS INATOS DO METABOLISMO DE AMINOCIDOS E SUAS CONSEQNCIAS Desordens do ciclo da uria

A ausncia completa de qualquer uma das enzimas do ciclo da uria resulta na morte do indivduo pouco tempo aps o seu nascimento. Entretanto, em indivduos vivos, tm sido identicados quadros clnicos
Figura 19.2: Recm-nascidos so vtimas preferenciais das desordens do ciclo da uria, que podem acarretar danos cerebrais ou mesmo levar morte.

que resultam da decincia dessas enzimas, quer seja por uma reduo no nvel de expresso, quer seja por uma alterao na atividade. Essas decincias so chamadas desordens do ciclo da uria ou simplesmente DCUs, erros inatos do metabolismo. Em geral esses erros so doenas raras, mas representam causa substancial de danos cerebrais e morte entre recm-nascidos e crianas. A estimativa exata da incidncia de DCUs desconhecida e, provavelmente, subestimada, pois ainda hoje existe grande diculdade em diagnosticar tais desordens, e muitas crianas morrem antes de um diagnstico denitivo.

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Os sintomas aparecem nas primeiras 24 horas de vida. O recmnascido mostra-se inicialmente irritado e, a seguir, aparecem vmitos e um aumento da letargia. Logo depois, observa-se hipotonia (tnus muscular deciente) e angstia respiratria que podem levar ao coma. Em alguns casos, os sintomas podem aparecer tardiamente durante a infncia ou mesmo durante a vida adulta. Existem sete principais DCUs. Cada uma delas recebe uma denominao relacionada s iniciais da enzima deciente. Assim: CPS- decincia na carbamoil-fosfato sintetase. NAGS- decincia na N-acetilglutamato sintetase. OTC- decincia na ornitina transcarbamilase. AS- decincia na cido arginino-succnico sintetase (citrulinemia). AL/ASA- decincia na arginino-succinato liase (arginino-succnico aciduria). AG- decincia na arginase. AO- decincia na ornitina aminotransferase. As decincias so, quase todas, conhecidas como hiperamonemias, porque o diagnstico detecta um alto nvel de amnia no sangue. Isso no ocorre apenas no caso da decincia de ornitina aminotransferase. Na pgina http://www3.ncbi.nlm.nih.gov/Omim/searchomim.html voc pode entrar com o nome da doena gentica (em ingls) e ver sintomas, caractersticas metablicas e diagnstico laboratorial. Esse um banco de dados do National Center for Biotechnology Information. Neste centro de informaes, voc pode acessar o Online Mendelian Inheritance in Man da Johns Hopkins University. D uma olhada quando puder.

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Veja na Tabela 19.1, um resumo de algumas dessas desordens.

Tabela 19.1: Principais DCUs. DCU Hiperamonemia do tipo I - CPS Enzima Decincia Carbamoil-fosfato sintetase I Sintomas/Comentrios 24h - 72h aps o nascimento o recm-nascido torna-se letrgico, necessitando de estmulo para comer, apresentando vmito, aumento da letargia, hipotermia e hiperventilao; o recmnascido ir morrer caso no ocorra o diagnstico por medidas do nvel de amnia srica e interveno apropriada: tratamento com arginina que ativa N-acetilglutamato sintetase. Hiperamonemia severa; hiperamonemia suave associada com coma profundo, acidose, diarria recorrente, ataxia, hipoglicemia, hiperornitinemia. Tratamento inclui administrao de carbamoil-glutamato para ativar a CPS. A DCU mais comum ligada ao cromossomo X. Nveis de amnia e aminocidos elevados no soro; aumento do cido ortico no soro devido ao carbamoil-fosfato mitocondrial ser liberado no citoplasma e incorporado em nucleotdeos do tipo pirimidina, o que leva a um excesso de produo de produtos catablicos. Tratamento com dieta rica em carboidratos e pobre em protenas; detoxicao de amnia com fenilacetato de sdio ou benzoato de sdio. Hiperamonemia episdica, vmito, letargia, ataxia, convulso, coma eventual. Tratamento com administrao de arginina para aumentar a excreo de citrulina e tambm com benzoato de sdio para detoxicao de amnia. Sintomas episdicos similares citrulinemia clssica; nveis de argino-succinato elevados no plasma e uido espinhal cerebral. Tratamento com arginina e benzoato de sdio. DCU rara, quadriplegia progressiva e retardo mental; alto nvel de amnia e arginina no uido espinhal e no soro; altos nveis de arginina, lisina e ornitina na urina. Tratamento inclui dieta de aminocidos essenciais, excluindo arginina e dieta pobre em protenas.

Decincia de Nacetilglutamato sintetase - NAGS Hiperamonemia do Tipo 2 - CPS

N-acetilglutamato sintetase

Ornitina transcarbamilase

Citrulinemia clssica - AS

Arginino-succinato sintetase

Arginino-succnico acidria - AL/ASA HiperargininemiaAG

Arginino-succinato liase (argininosuccinase) Arginase

Neurotoxicidade associada amnia

Os efeitos do aumento dos nveis de amnia circulante so vrios. A alterao do pH do sangue apenas um deles. Mas, o mais importante que a amnia pode atravessar a barreira hematoenceflica (BHE). No crebro, ela pode ser convertida em glutamato, por ao da enzima
Figura 19.3: A barreira hematoenceflica (BHE).

glutamato desidrogenase. Entretanto, essa ao depleta, ou seja, faz com que o crebro perca substncias importantes como -cetoglutamato, o substrato da enzima. Como conseqncia deste fato, h uma diminuio dos nveis de oxaloacetato e uma queda drstica na atividade do ciclo do cido ctrico. Voc pode imaginar o que isso signica para o crebro?... A queda da atividade respiratria causa srios e irreparveis danos aos tecidos neurais, levando-os morte. Alm disso, o excesso de glutamato

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posteriormente ativa a formao de glutamina. Isso resulta numa queda da concentrao dos estoques de glutamato. O glutamato , no tecido neural, um neurotransmissor e tambm um substrato para a sntese de outro neurotransmissor, o -aminobutirato.

Fenilcetonria (PKU)
Alm dos erros inatos ligados diretamente s enzimas do ciclo da uria, algumas outras doenas genticas so conseqncias de outras alteraes no metabolismo de aminocidos. A fenilcetonria (PKU) uma delas, que se caracteriza por uma inabilidade do corpo de utilizar o aminocido essencial, fenilalanina. A PKU ocorre quando a criana herda dois genes mutantes para a enzima fenilalanina hidroxilase (PAH). Essa enzima, normalmente, converte molculas de fenilalanina em tirosina. Tal reao usa O2 como substrato e requer o co-fator tetrahidrobiopterina (THB) como agente redutor. Fenilalanina hidroxilada produzindo tirosina, enquanto o THB transfere tomos de hidrognio para reduzir um segundo tomo de hidrognio em gua. No processo, o THB oxidado a diidrobiopterina (DHB).
Figura 19.5: A estrutura da fenilalanina hidroxilase (PAH). Figura 19.4: Fenilcetonria a incapacidade de converter fenilalanina em tirosina.

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Uma das causas do autismo a PKU no tratada! Para saber mais sobre autismo, ver h t t p : / / w w w. a u t i s m society.org

Sem esta enzima, a fenilalanina e os produtos de sua quebra por outra rota enzimtica se acumulam no sangue e nos tecidos do corpo. Um aumento na concentrao de fenilalanina no sangue leva sua transaminao em fenilpiruvato ou descarboxilao a feniltilamina.

Figura 19.6: Estrutura da biopterina, co-fator da PAH.

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Uma decincia da fenilalanina hidroxilase causa acmulo de fenilalanina, de cido fenilpirvico, de fenilacetato e outros derivados. Um excesso de fenilalanina bloqueia o seqestro de outros aminocidos no crebro. O cido fenilpirvico inibe a piruvato descarboxilase no crebro e interfere na formao de mielina.

A inabilidade de remover o excesso de fenilalanina do sangue, e o conseqente acmulo daqueles produtos durante a infncia, produz uma variedade de problemas, incluindo o retardo mental. Felizmente, um teste simples (o teste do pezinho) feito logo aps o nascimento pode identicar esse defeito gentico e, com muita ateno quantidade de fenilalanina em sua dieta, a criana pode desenvolver-se normalmente.

Fenilalanina

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Temas para reexo e discusso e um pouco da histria

A seguir apresentaremos alguns temas para voc pensar em casa e discutir com seus colegas ou com seu tutor no plo. Vrios dos experimentos que sero apresentados so parte da histria que nos levou ao conhecimento mostrado, nas aulas anteriores, sobre o metabolismo de aminocidos. A idia dessas discusses, como voc j sabe, desenvolver a lgica e o pensamento cientco. Encare como um quebra-cabea e ento, divirta-se... Tema 1. Suponha uma populao de animais que requerem fenilalanina na dieta, mas no requerem tirosina para o seu crescimento normal. Antes do incio da experincia, eles foram mantidos com uma dieta carente em tirosina e fenilalanina. 1.1. Desenhe as curvas que voc esperaria encontrar, mostrando a evoluo do peso mdio da populao de animais, nos seguintes casos: a) Administrao de uma dieta de tirosina e uma semana aps uma dieta de fenilalanina. b) Administrao de uma dieta de fenilalanina e uma semana aps, supresso dessa dieta e administrao de uma dieta de tirosina. c) Administrao dos dois aminocidos juntos e supresso de ambos aps uma semana. d) Administrao dos dois aminocidos juntos e supresso de fenilalanina aps uma semana. e) Administrao dos dois aminocidos juntos e supresso de tirosina aps uma semana. 1.2. Discuta os conceitos de aminocidos essenciais e no-essenciais, lembrando as aulas de Bioqumica I e com base nas informaes dadas no incio da questo.

Figura 19.8: Ces foram e so at hoje utilizados para experimentos como este apresentado na questo.

Para lembrar Bioqumica I... Sabendo-se que o cido glutmico um aminocido e o cido pirvico no, identifique quem quem nas duas guras abaixo.

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Pense sobre isso!

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Tema 2. Incubando-se homogeneizados de diferentes tecidos com os cidos glutmico e pirvico, observa-se que: a) O cido glutmico desaparece em parte, e aparece o aminocido alanina. b) O cido pirvico tambm desaparece em parte, e aparece o cido -cetoglutarato. A velocidade desta reao aumentada aps a adio de fosfato de piridoxal (vitamina B6), que no consumido durante a reao. 2.1. Monte o esquema de reao que os dados sugerem e analise o provvel papel da vitamina B6. 2.2. A constante de equilbrio desta reao prxima de 1. Qual seria a conseqncia deste fato? Tema 3. A enzima L-glutamato desidrogenase apresenta um comportamento alostrico, existindo em duas formas (monomrica menos ativa, e polimrica mais ativa) e sendo regulada por ATP, GTP, ADP e GDP. Dois desses moduladores so ativadores e induzem a polimerizao da enzima. 3.1. Diga quais e por qu. 3.2. Faa um grco de velocidade enzimtica, em funo da concentrao de cido glutmico na presena e na ausncia de ativador. Discutir o papel dessa enzima na economia metablica. Tema 4. Qual o signicado da elevao do nvel de transaminases no
Figura 19.9: Estrutura tridimensional da aspartato aminotransferase. http://cwx.prenhall.com/ horton/medialib/media_ portfolio/17.html

soro? Faa um grco mostrando a evoluo do nvel de GTP no soro de um paciente com hepatite, que primeiro vai melhorando e aps um ms sofre uma recada. Discuta o papel das transaminases no metabolismo geral dos aminocidos. Tema 5. Quando o fgado de um cachorro extirpado, ele pode viver alguns dias, desde que alimentado com uma dieta sem protenas. No entanto, morre rapidamente se a carne incorporada dieta. Na hora da morte, ele apresenta elevadas concentraes de NH4+ no sangue e na urina e, praticamente, nada de uria nos mesmos lquidos biolgicos. O que sugerem estes dados? Que experincias voc proporia para testar sua hiptese?

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Tema 6. Observe a seqncia de resultados abaixo: a) Entre 1894-1897, CHARLES RICHET vericou que o fgado que foi macerado e deixado para apodrecer formava uria, cuja quantidade aumentava medida que o tempo transcorria, com simultnea e notvel liberao de arginina. b) Em 1904, Kossel e Darkin mostraram a existncia de um fermento obtido a partir de contedo intestinal, capaz de catalisar a reao a seguir:

c) Na mesma poca, Antnio Clementi mostrou que esse fermento (enzima) estava presente no fgado de mamferos (nos quais a uria a principal forma de excreo de nitrognio) e ausente em pssaros e rpteis (que eliminam nitrognio sob forma de cido rico). d) Em 1917, Wilhelm Lofer mostrou que a produo de uria estava associada ao consumo de oxignio no fgado. e) Em 1931, Kase no teve xito quando tentou produzir uria numa preparao acelular de fgado. 6.1. Que concluses voc tiraria dessas experincias? Na poca, embora o papel e a relevncia da arginase na formao de uria fossem evidentes, no era quantitativamente possvel acreditar que a grande formao de uria no fgado se processasse somente atravs da hidrlise da arginina presente nas protenas. Por outro lado, existiam dados que indicavam que outros aminocidos eram a fonte de uria e que esta podia ser sintetizada a partir de amnia. 6.2. Discuta esses dados e sugira uma hiptese. CHARLES RICHET
Nasceu em Paris em 1850. Tornou-se doutor em Medicina em 1869, doutor em Cincias em 1878 e professor de Fisiologia da Faculdade de Medicina em 1887. Ganhou o prmio Nobel de Medicina em 1913. http://www.nobel.se/ medicine/laureates/ 1913/richet-bio.html

Figura 19.10: A estrutura do cido rico, principal forma de excreo de nitrognio em pssaros e rpteis. CEDERJ 111

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Tema 7. Em 1932, Hans Krebs e Kurt Henseleit zeram um conjunto de experincias memorveis para testar essa hiptese. Eles incubaram fatias de fgado num aparelho de Warburg, na presena de lactato e de tampo bicarbonato a pH 7,4 e adicionaram quantidades conhecidas de diferentes aminocidos. Observaram que a produo de uria ocorria, como esperado, de acordo com o contedo de N da molcula dos diferentes aminocidos. No caso da arginina, no entanto, a produo
ESTEQUIOMETRIA

de uria era superior quela observada pela ESTEQUIOMETRIA da reao. O que sugerem esses dados? Que experincia voc faria? Pense bem antes de passar ao ponto seguinte. Tema 8. Numa outra experincia, o resultado foi mais surpreendente ainda. Incubando fatias de fgado na presena de lactato, e adicionando 12mg/ml de amnia, eles encontraram uma produo de uria de 1,94mm3 de uria-CO2 por mg de tecido seco por hora (determinada manometricamente aps hidrlise com urease que libera CO2 e NH3). Quando adicionaram ornitina (2mg/ml) a produo de uria subiu para 9,32mm3. 8.1. Por que este resultado era inesperado? O que voc postularia ento? 8.2. Olhe agora para as molculas de arginina e ornitina, cujas estruturas esto na atividade 6b. Como encaixar esses resultados com os j discutidos at agora? 8.3. Torne a olhar as molculas de arginina e ornitina. O que voc procuraria agora? Por qu?

A palavra estequiometria deriva do grego stoicheon, que signica a medida dos elementos qumicos, ou seja, as quantidades envolvidas de cada substncia em uma reao qumica. Veja a discusso da pgina http://www.cdcc.sc. usp.br/quimica/ experimentos/ estequi.html

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Tema 9. Em 1930, Mitsouri Tada chegou frmula de um composto chamado citrulina, que j havia sido isolado do suco da melancia em 1924.

9.1. O que, nesta estrutura, chama a ateno? 9.2. O que voc faria com esta informao, ou seja, com aquilo que lhe chamou a ateno? 9.3. Proponha uma experincia predizendo seu resultado. 9.4. Compare agora as frmulas da citrulina e da arginina e tire uma nova concluso. 9.5. Descreva o processo de formao de uria no fgado, empregando apenas os conhecimentos obtidos at aqui. Tema 10. Continuando a histria... Em 1954, Sarah Rathner mostrou que, na converso de citrulina em arginina, o nitrognio adicionado no era proveniente diretamente do NH4, mas de uma transferncia catalisada enzimaticamente. O grupo amino do cido asprtico era exclusivamente responsvel por um dos nitrognios da molcula, numa reao que requeria ATP. Nesta reao, forma-se um composto intermedirio no fosforilado, AMP e pirofosfato (PPi), que rapidamente hidrolisado por uma pirofosfatase. Em 1955, Mary Ellen Jones, Leonard Spector e FRITZ LIPMANN mostraram que a ornitina no reagia diretamente com NH3 e CO2 para dar citrulina, mas com o carbamil-fosfato, um intermedirio fosforilado formado a partir de NH3,CO2 e ATP. Utilize o conhecimento adquirido at agora, para descrever todo o processo. FRITZ ALBERT LIPMANN
Nasceu na Alemanha em 1899. Cientista e mdico ganhador do prmio Nobel de Fisiologia e Medicina de 1953. http://www.nobel.se/ medicine/laureates/ 1953/lipmannbio.html

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RESUMO

Voc viu nesta aula alguns dos erros inatos do metabolismo de aminocidos que levam a doenas que, em muitos casos, acarretam a morte de recm-nascidos, crianas e adultos. A maior parte dos danos provocados por estas desordens do ciclo da uria conseqncia da toxicidade dos altos nveis de amnia (hiperamonemias), principalmente no crebro. Nesta aula, pudemos tambm discutir aspectos experimentais do ciclo da uria, mostrando os principais pontos da histria da elucidao desta via metablica. Nesta aula no apresentaremos exerccios: voc j usou neurnios sucientes por ora.

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