MTODOS CROMATOGRFICOS CROMATOGRAFIA :

CHROM (COR) / GRAPHE (ESCREVER) DESCOBERTO: MIKHAEL S. TSWETT (1906) - SEPARAO DE PIGMENTOS DE FOLHAS CaCO3 ( FASE FIXA)/ TER DE PETRLEO (FASE MVEL).

MTODO:

SEPARAO QUANTIFICAO

PURIFICAO IDENTIFICAO

CONCEITO A SEPARAO DE UMA MISTURA EM VRIAS FRAES PELA DISTRIBUIO ENTRE DUAS FASES: UMA FASE ESTACIONRIA E UMA MVEL.
SISTEMA CROMATOGRFICO O CONJUNTO FORMADO PELA MISTURA A SER ANALISADO (M), PELA FASE MOVEL (FM) E FASE ESTACIONRIA OU FIXA (FE/FF).

CLASSIFICAO DOS MTODOS CROMATOGRFICOS Cromatografia

Planar

Coluna

F.M. Lquida

F.M. Gasosa

F.M. Lquida

C.Papel

C.Camada Delgada

C. Gasosa

CCC

CLAE

CCC-Cromatografia em Coluna Clssica. CLAE-Cromatografia Lquida de Alta Eficincia.

CROMATOGRAFIA DE ADSORO
EQULIBRIO DE ADSORO & DESSORO ENTRE OS COMPONENTES NA SUPERFCIE DA FASE ESTACIONRIA E DISSOLVIDA NA FASE MVEL.

ADSORO DEPENDE:
POLARIDADE DAS MOLCULAS ATIVIDADE DO ADSORVENTE COMPOSIO QUMICA TAMANHO DAS PARTCULAS POROSIDADE DAS PARTCULAS POLARIDADE DA FASE MVEL

TIPOS DE CROMATOGRAFIA DE ADSORO 1- CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA OU FINA (Thin layer

chromatograghy) 2- CROMATOGRAFIA EM COLUNA

CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA OU FINA

VANTAGENS: FCIL COMPREENSO E EXECUO SEPARAES EM CURTO ESPAO DE TEMPO VERSATILIDADE GRANDE REPRODUTIBILIDADE BAIXO CUSTO ANALTICA E PREPARATIVA

ADSORVENTES (FASE FIXA)

SILICA (SiO2 ): AC. SILICICO AMORFO, ALTAMENTE POROSO, CARATER FRACAMENTE ACIDO. G ou H: presena de aglutinantes (10-15% de gesso / 1-3% amido/ talco) P: uso em camada preparativa F 254: presena de substncias fluorescentes+ comprimento de onda F 254+ 366 : presena de substncias fluorescentes+ comprimento de onda USADA: SEPARAR SUBSTNCIAS LIPOFLICAS ( aldedos, cetonas, fenois, cidos graxos, alcalides, terpenos e esterides).

-ALUMINA ( Al2O3 ) : CARACTERSTICAS ALCALINAS USADA: SEPARAR SUBSTNCIAS LIPOFLICAS ( alcalides, hidrocarbonetos policclicos, aminas e vitaminas liposolveis) CLASSIFICAO DA ALUMINA ( ESCALA BROCKMANN & SCHADDER) QUANTIDADE DE H2O/CAPACIDADE DE ADSORVER CORANTES AZICOS - ALUMINA ATIVIDADE GRAU I: A MAIS ATIVA, 4000 C ( 4h), - ALUMINA ATIVIDADE GRAU II: 2- 3% H2O - ALUMINA ATIVIDADE GRAU III: 5-7% - ALUMINA ATIVIDADE GRAU IV: 9-11% - ALUMINA ATIVIDADE GRAU V: 15% - CELULOSE: USADA: SEPARAR ACIDOS CARBOXILICOS, AMINOCIDOS, CARBOIDRATOS, CATIONS INORGNICOS E FOSFATOS - POLIAMIDA USADA: SEPARAR FENOIS E CIDOS CARBOXLICOS. POLIAMIDA 11- cido poliaminoundecanoico (Nylon 11) POLIAMIDA 6 aminopooiprolactama (Perlon)

SOLVENTES OU ELUENTES (FASE MOVEL)

UTILIZAO CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA (CCD )

OBSERVAR NUMERO E CONCENTRAO DE CONSTITUINTES DE UMA MISTURA;

DETERMINAR ORGNICAS; A PUREZA DE SUBSTNCIAS

UTILIZAR COMO (PADRES);

MONITORAR QUMICA. O

MTODO

DE

IDENTIFICAO

ANDAMENTO

DE

UMA REAO

PREPARAO DAS PLACAS

PREPARADAS POR ESPALHAMENTO - MANUAIS - ESPALHADORES 1) PREPARAO DAS PLACAS: 2) ATIVAO DAS PLACAS: Slica, alumina: 105-1100 C, 1h Celulose: 1050 C mximo 10 min 3) APLICAO DA AMOSTRA:
TCNICA DE APLICAO PONTO- ANLISE QUALITATIVA FAIXA- ANLISE QUANTITATIVA E PREPARATIVA.

4) Desenvolvimento:

5) REVELAO:
PROCEDIMENTOS QUMICOS, FSICOS, OU BIOLGICOS APLICADOS AO CROMATOGRAMA PARA TORNAR VISVEL AS MANCHAS DAS SUBSTNCIAS SEPARADAS POR CROMATOGRAFIA. A- PROCEDIMENTOS FSICOS: - Luz ultravioleta (256 e 366nm). B- PROCEDIMENTOS QUMICOS: APLICAO DE UM REATIVO QUMICO PARA FORMAR UM DERIVADO COLORIDO OU FLUORESCENTE. - IODO RESSUBLIMADO

- SULFATO CERRICO
- REAGENTES CROMOGENICOS (REAGENTES p/ ALCALIDES;
FENOLICOS)

C- PROCEDIMENTOS BIOLGICOS E ENZIMTICOS:

- ANTIBITICOS, ENZIMAS E SUBSTRATOS.

D-RADIOATIVIDADE:
- MARCADORES RADIOATIVOS (13C).

RESOLUO DA CCD
DISTNCIA DO PONTO CENTRAL DO SPOT A ORIGEM DO MATERIAL Rf =------------------------------------------------------------------------------DISTNCIA PERCORRIDA PELA FASE MVEL

a Rf = ----b

a= distncia de migrao da substncia a origem do material

b = distncia percorrida pela fase mvel, a partir do ponto de sada

2- CROMATOGRAFIA EM COLUNA
ESQUEMA DE UMA COLUNA DE ADSORO A= RESERVATRIO DA FASE MVEL B= FASE MVEL C= COLUNA DE VIDRO D= ADSORVENTE

E= CHUMAO DE L DE VIDRO OU ALGODO

F= FRASCO COLETOR G= AMOSTRA H= CAMADA DE AREIA OU DE RECHEIO, COLOCADA APS A APLICAO DA AMOSTRA

ATIVIDADE CROMATOGRAFICA DA FASE ESTACIONRIA ( SLIDA)

POLARIDADE

- COOH> - OH> - NH > -CHO > C=O > - COO R> -OCH3 > - CH = CHFASE ESTACIONRIA

REAES NA COLUNA CROMATOGRAFICA

SOLIDOS (FE): CATALIZADORES DE REAES - ALUMINA ALCALINA : CONDENSAO DE ALDEDOS E CETONAS ACETONA FASE MVEL( NO USAR) - CARVO ATIVO : DECOMPOSIO QUIMICA - SLICA: ISOMERIZAO DE TERPENOS E ESTERIDES

ENCHIMENTO DA COLUNA
- UNIFORME: MAIOR EFICINCIA - EVITAR FORMAO DE AR : VIBRAO DA COLUNA 1/3 FASE MVEL , PASTA DO ADSORVENTE+FASE MOVEL.

ELUIO
- FIXAR EM POSIO VERTICAL - ELUIO AO DA GRAVIDADE - AUMENTAR GRADUALMENTE A FASE MVEL

COMPLETA SEPARAO A FASE MVEL DEVE:

- SER FRACAMENTE ADSORVIDA PELA FASE ESTACIONRIA - NO SER AFETADA QUIMICAMENTE - POSSIBILITAR O DESENVOLVIMENTO DE UMA CORRIDA CROMATOGRAFICA/ GRAU DE ADSORO.

Fig 03- ELUIO DE UMA MISTURA

RESOLUO CROMATOGRAFICA CROMATOGRAFIA EM COLUNA

- DIAGRAMA DE CONCENTRAO / PESO DAS FRAES