1) O documento discute as principais causas de morte na população humana, sendo as doenças infecciosas uma delas, devido ao surgimento de microrganismos resistentes aos antibióticos.
2) É importante buscar novos compostos naturais ou sintéticos com atividades antimicrobianas específicas, que atuem por mecanismos alternativos aos antibióticos disponíveis.
3) Os peptídeos antimicrobianos, encontrados em diversas espécies vivas, são elementos primit
1) O documento discute as principais causas de morte na população humana, sendo as doenças infecciosas uma delas, devido ao surgimento de microrganismos resistentes aos antibióticos.
2) É importante buscar novos compostos naturais ou sintéticos com atividades antimicrobianas específicas, que atuem por mecanismos alternativos aos antibióticos disponíveis.
3) Os peptídeos antimicrobianos, encontrados em diversas espécies vivas, são elementos primit
1) O documento discute as principais causas de morte na população humana, sendo as doenças infecciosas uma delas, devido ao surgimento de microrganismos resistentes aos antibióticos.
2) É importante buscar novos compostos naturais ou sintéticos com atividades antimicrobianas específicas, que atuem por mecanismos alternativos aos antibióticos disponíveis.
3) Os peptídeos antimicrobianos, encontrados em diversas espécies vivas, são elementos primit
P|P!lD|O! /N!l8l!lCO! 2AIGKEI= Pej|l1ees ea|l|le|ltes jre1ttl1es jer eretal1ees 51rTc1 aTTrc 1uI:n ~u 1.gu.u.n 1:J~:::n ::.:I~uI~ 1uI:n u 1~jn:In- u~uI u~ 1n:n:.IIg.n, 11, US1 :.unJJ:~6.u:j: Ar1r1o M1rarda 1uI: ~u .~u.n: 1:J~::: uuuI u 1~jn:Inu~uI u~ 1.J.:.n, UN111S1 u.:nuun.J6~ju: M. Tcrca M. M1rarda 1uI:n ~u 1.gu.u.n 1:J~:::n 1.::~-1~uI~ u 1~jn:Inu~uI u~ 1.gu.u.n, 1_, US1 uIu.:nuu6.gu:j: TL1T1ppc LuTc1 1uI: ~u 1.Ig.n ~ 1.:.Ig.n 1.:~I: u~ 1~:gu.:n u 1uI.IuI 1.Ig.~ MI~uIn.:~ ~I ~IIuIn.:~, ~uI:~ NnI.unI u~ In R~I~:I~ S.~uI.J.gu~ (NRS;, 1:I:n:u:g, 1:nun 11uI~I6.uu-:I:n:gJ: Tcdro 1. da 51T+a Jr. 1uI: ~u .~u.n: 1~:gu.:nu: u 1u:I.IuI 1uInuInu j.::6u:j: ATcardra MacLado 1uI:n ~u _u.u.n :gnu.n 1:-1uI:n u 1~jn:Inu~uI u~ 1.gu.u.- n, 1_, US1 unInu6.gu:j: Ardrca 1. 1oyaa 1uI:nuun ~u 1.Ig.n un R~Inn 1nIg~u-H:j~u~.:, 11, US1 u~nJg6u:j: ar1cT M. 1orcrz1r1 1uI:nuu ~u 1.Ig.n un R~Inn 1nIg~u-H:j~u~.:, 11, US1 uI:~u6u:j: 1our1+aTdo 5. Tcrc1ra 1uI:nuu ~u 1.Ig.n un R~Inn 1nIg~u-H:j~u~.:, 11, US1 Iu:.:nI6u:j: Marco A. 1z1o 1uI:nuu ~u 1.Ig.n MI~uIn:, UN111S1 Jnz..J6.uJn:~ju: 1T1arc 11c+c M~:I:nuun ~u 1.Ig.n un R~Inn 1nIg~u- H:j~u~.:, 11, US1 ~I._~:I~:~:6IIun.Iu MarccTo R. Lury1crnar M~:I:nuu ~u 1.Ig.n un R~Inn 1nIg~u- H:j~u~.:, 11, US1 un:u::6z.jun.Iu: s uoonas inlocciosas ostao ontro as principais causas uo morto ua populaao huma- na. Esso lato uoviuo, om granuo parto, ao surgimonto uo micro- organismos multi-rosistontos aos anti- liticos. Portanto, aposar ua uisponili- liuauo uo um granuo numoro uo antili- ticos uo ultima goraao, torna-so ain- ua lunuamontal luscar compostos guo possam atuar como novas urogas a sorom utilizauas no comlato as uoon- as inlocciosas tIohnor 8 Stauuoggor, 2001). O surgimonto uo granuo numoro atual uo copas lactorianas rosistontos pouo tor vrias origons, sonuo uma uolas uocorronto uo prprio tipo uo viua uo sor humano. O principal lator , som uuviua, o consumo oxcossivo o inapropriauo uos antiliticos por ho- mons, outros animais o na agricultura. A proscriao uo antilitico goralmon- to omprica o som a iuontilicaao prvia uo agonto patognico atravs uo oxa- mos laloratoriais. Alm uisso, a sua vonua som oxigncia uo uma proscri- ao muica om alguns pasos, associa- ua ao suprimonto irrogular uosso moui- camonto,, laixa gualiuauo ua moui- caao o ao sou mal uso polos paciontos tguo muitas vozos nao complotam o tratamonto), contriluom para a soloao uo novos microorganismos multirosis- tontos. Associaua a isso, uma granuo guantiuauo uo agontos antimicrolia- nos vom sonuo usauo na agropocuria para promovor o croscimonto uo plan- tas o animais, o guo ocasiona um au- monto ua rosistncia uo microorganis- mos guo sao transmitiuos para o ho- mom. Ao mosmo tompo, o aumonto ua migraao ua populaao o o transporto uo animais ou uo prouutos uo origom animal trazom uoonas para roas onuo nunca haviam so instalauo, rosultanuo no ospalhamonto uo microorganismos rosistontos aos antiliticos. Vuuanas FIgura 1. Possvois mocanismos uo aao uos poptuoos antimicrolianos tIohnor, 2001) Fotos couiuas polos autoros 1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI - u 2 - u:~u:u~z~u: 2UUI 49 amliontais, tais como uosmata- monto o altoraos climticas tamlm proporcionam contato mais ntimo uos homons com animais o insotos guo transmi- tom uoonas muitas vozos uos- conhociuas tIohnor 8 Stauuo- ggor, 2001). Assim sonuo, vrias mouiuas scio-poltico-oconomicas uovo- riam sor tomauas para a conton- ao uo uosonvolvimonto o uo transmissao uo rosistncia anti- microliana. Rouuao uo uso ina- propriauo o oxcossivo uos anti- liticos no tratamonto uo uoon- as om goral, tanto humanas guanto uo animais uomsticos o ua prpria agricultura, pouoria sor uma uossas mouiuas. Paralo- lamonto, para guo so consiga um olotivo controlo uas uoonas in- locciosas, tornou-so vital invostir om posguisa o om posguisauo- ros guo possam so uouicar lusca uo sulstncias naturais ou sintticas guo oxilam ativiuauos anti- microlianas ospoclicas o, acima uo tuuo, guo as oxoram atravs uo moca- nismos uo aao altornativos uaguolos uos antiliticos uisponvois. Nosso contoxto, a posguisa, a puri- licaao, o a caractorizaao gumica, liolgica o ostrutural uo novas sulstn- cias antimicrolianas provoniontos ua launa o ua llora lrasiloira sao valiosas, uma voz guo a prpria ovoluao tratou uo solocionar um vastssimo ospoctro uo sulstncias oliciontos guo uolon- uom contra inlocos. Diariamonto, ns humanos ostamos oxpostos a muitos patgonos om po- toncial atravs ua ingostao, inalaao o contato com suporlcios inloctauas. Como a rosposta humoral o colular auaptativa roguor a oxpansao clonal uos linlcitos B o T, o lova at uias para pouor roalmonto licar ativa contra as inlocos, ola nao a rosponsvol polo impouimonto inicial ua instalaao uossos organismos. Portanto, uoponuo- mos ua rosposta imuno inata para nos uolonuor uo inlocao tJanovay, 1998). Os olotoros ua rosposta imuno inata incluom as clulas lagocticas, tais como noutrlilos o macrlagos, uo outros louccitos, incluinuo mastcitos, uas protonas uo soro, tais como as uo sistoma uo complomonto, o uos popt- uoos antimicrolianos tHancock 8 Dia- monu, 2000). Essos ultimos sao olo- montos primitivos ua rosposta imuno uo touas as ospcios uo sor vivo, cujas vias uo inuuao sao rolativamonto con- sorvauas om vortolrauos, insotos o plan- tas tHollman ot al., 1999, Dangl 8 Jonos, 2001). Rocontomonto, loi uo- monstraua a participaao uolos na mouulaao uo procosso inllamatrio uo mamloros tHancock 8 Diamonu, 2000). Vais uo 00 poptuoos antimicroli- anos j loram iuontilicauos om touas as ospcios vivas, incluinuo lactrias, lun- gos, insotos, moluscos, crustcoos, arac- nuoos, plantas, pssaros, anllios, poi- xos, mamloros, ontro outros thttp: llcm1.univ.triosto.it-tossipag1.htm). Em goral, sao molculas poguonas uo at 5 kDa guo oxilom um alto toor uo aminociuos lsicos o, polo monos, 50` uo aminociuos hiurolli- cos tvor rovisos om Anurou 8 Rivas, 1998, Bulot ot al., 1999, Hancock 8 Diamonu, 2000). Aprosontam um amplo ospoctro uo ativiuauo contra lactrias, lungos, vrus o parasitas. O mo- canismo uo aao mais lom co- nhociuo atravs ua sua insor- ao na momlrana colular guo causa a uostruiao ou a pormoa- lilizaao ua mosma, lovanuo o microorganismo morto tFigura 1). Altornativamonto, os popt- uoos antimicrolianos pouom so ligar a um rocoptor ua momlra- na, lovanuo a uma porua ospoc- lica uo sua lunao. Alm uisso, ao so translocarom atravs ua momlrana, ossas molculas po- uom atuar intracolularmonto, im- pouinuo a sntoso uo motalli- tos importantos para o microor- ganismo. Por atuarom om uilo- rontos compartimontos colula- ros, ossos compostos tornam-so canuiuatos promissoros para o uoson- volvimonto uo urogas importantos no comlato a patgonos rosistontos aos antiliticos convoncionais tIohnor, 2001). Os poptuoos antimicrolianos po- uom sor agrupauos uo acoruo com suas propriouauos gumicas o ostruturais om 2 classos: linoaros o cclicos. Os linoa- ros, nao aprosontam o aminociuo cis- tona om sua composiao, o pouom sor suluiviuiuos nos guo lormam uma - hlico anliptica aps contato com a momlrana colular tpor oxomplo, ma- gainina uo sapo, Hara ot al., 2001) o os ricos om um uotorminauo tipo uo ami- nociuo, tais como prolina, histiuina o triptolano tpor oxomplo, inuoliciuina uo lovino, Rozok ot al., 2000). Os FIgura 2. Estruturas triuimonsionais ua magainina tHara ~I nI, 2001). inuoliciuina tRozok ~I nI, 2000), urosomicina tIanuon ~I nI, 199) o tota-uolonsina tTrali ~I nI, 2001). Roprosontauas, om amarolo, a ostrutura lolha -proguoaua o, om rosa, a ostrutura -hlico) FIgura 3. Alinhamonto ua gomosina com outros poptuoos antimicrolia- nos: taguiplosina o polilomusina uo lmulos, anuroctonina uo oscorpiao o protogrina uo suno tSilva, Jr. ~I nI, 2000) 50 1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI - u 2 - u:~u:u~z~u: 2UUI cclicos sao poptuoos guo aprosontam rosuuos uo cistona om sua ostrutura, pouonuo tor as oxtromiuauos amino- torminal alortas tpor oxomplo, uroso- micina ua mosca Drosophila molano- gastor, Ianuon ot al.199) ou as oxtro- miuauos lochauas tpor oxomplo, tota- uolonsina uo macaco, Trali ot al. 2001) tFigura 2). GomcsIna c outros pcptIdcos antI- mIcrobIanos da aranLa carangucjcIra Entro os invortolrauos, os ostuuos guo visam caractorizar a ostrutura o a ativiuauo uos poptuoos antimicrolia- nos, assim como a rogulaao gnica uolos concontram-so, principalmonto, no grupo uos insotos tBullot ot al., 1999). J h alguns anos, o grupo uo posguisa ua Dra. Sirloi Dallro tDoparta- monto uo Parasitologia, lCB-lSP) vom tralalhanuo ativamonto na iuontilica- ao o caractorizaao uo poptuoos om uuas ospcios uo aracnuoos: a aranha caranguojoira Acanthoscurria gomosia- na o o carrapato uo loi Boophilus microplus. Essos poptuoos sao impor- tantos para a uolosa uossos animais contra inlocos o, como tal, pouorao sor usauos no uo- sonvolvimonto uo novas uro- gas para uso na mouicina o na agricultura. Nos ultimos anos, o roloriuo grupo pas- sou a contar com a colalora- ao uo outros trs grupos uo posguisa: o ua Dra. V. Toro- sa V. Viranua tDopartamon- to uo Biogumica, lQ-lSP), o uo Dr Philippo Bulot tCon- tro National uo la Rochorcho Sciontiliguo, CNRS, Estras- lurgo, Frana) o o uo Dr. Antonio Viranua tDoparta- monto uo Biolsica, lNl- FESP). Quatro poptuoos lo- ram isolauos ua homolinla tsanguo) ua aranha caran- guojoira tTalola l, Silva Jr., 2000). lm uolos, uonomina- uo gomosina, aprosontou um amplo ospoctro uo ativiuauo contra lactrias, lungos o o parasita causauor ua loish- manioso tSilva Jr., 2000, Sil- FIgura 4. Estrutura triuimonsional ua gomosina uotorminaua por rossonncia magntica nucloar tRVN). A uiroita, a roprosontaao osguomtica ua molcula tVanuaru ~I nI., 2001) TabcIa 1. Poptuoos antimicrolianos isolauos ua homolinla ua aranha nuII:u::.n gu~:.nun 1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI - u 2 - u:~u:u~z~u: 2UUI 51 va Jr. ot al., 2000). um octauocapop- tuoo uo massa molocular oguivalonto a 220,4 Da aprosontanuo guatro rosuu- os uo cistona onvolviuos om uuas pon- tos uissulloto t2-15 o 6-11), um ciuo piroglutmico na oxtromiuauo N-tormi- nal o uma arginina -amiuaua como rosuuo C-torminal. Sua ostrutura ccli- ca com torminaao alorta aprosontan- uo um ciuo piroglutmico N-torminal o a amiuaao C-torminal possivolmonto protogom o poptuoo contra uograua- ao por protoasos. A gomosina um poptuoo altamonto lsico tpl calcula- uo uo 12,), pois contm sois rosuuos uo aminociuos carrogauos positiva- monto tcinco argininas o uma lisina). Aprosonta um alto grau uo similari- uauo com a lamlia uos poptuoos lsicos uos l- mulos: taguiplosinas o polilomusinas t50`, Nakamura ot al., 1988, Viyata ot al., 1989), ua anuroctonina isolaua uo oscorpiao t23`, Ehrot- Solatior ot al, 1996) o ua protogrina prosonto om louccitos uo sunos t1`, Kokryakov ot al., 1993) tFigura 3). A uis- posiao uas pontos uis- sulloto, Cys1-Cys4 o Cys2-Cys3, iuntica para touos ostos popt- uoos, sugorinuo guo a gomosina pouo auotar uma ostrutura -hair- pin` como a oncontraua nas taguiplosinas tKava- no ot al., 1990, Tamamu- ra ot al., 1993), protogri- nas tAumolas ot al., 1996, Fahrnor ot al., 1996), o anuroctonina tVanuaru ot al., 1999). Rosultauos rocontos ua anliso ua gomosina por rossonn- cia magntica nucloar tRVN) om soluao com- provam a ocorrncia uossa ostrutura na mol- cula tVanuaru ot al., 2001, Figura 4). A gomo- sina lorma uma ostrutu- ra uo tipo -hairpin` com lolhas lota proguo- auas anti-paralolas liga- uas por uma volta osta- lilizaua por uuas pontos uissulloto. Ela ainua aprosonta uma caracto- rstica anliptica lom uo- liniua, uo lorma similar s ostruturas uotormina- uas para sous anlogos taguiplosina o protogri- na. Esso tipo uo ostrutu- ra loi olsorvauo tam- lm om vrios outros poptuoos anti- microlianos, cujos aminociuos lsi- cos tcarrogauos positivamonto om pH lisiolgico) soriam rosponsvois pola intoraao inicial olotrosttica com os grupos carrogauos nogativamonto uos lipuoos uas momlranas uos microor- ganismos. Postoriormonto, ocorroria a FIgura 5. Ativiuauos antimicrolianas uos anlogos sintticos uo gomosina tGm). As ativiuauos sao oxprossas atravs ua concontraao mni- ma uo poptuoo guo causa 100` uo iniliao uo crosci- monto. PB 1 21 mOsV, 1.0 g uo Poptona + 86 mV NaCl om 100 mI uo H 2 0. PB 2 36 mOsV, 1.0 g uo Poptona + 13 mV NaCl om 100 mI uo H 2 0. PDB 3 9 mOsV, 1.2 g uo uoxtroso uo latata om 100 mI uo H 2 O). PDB 4
333 mOsV, 1.2 g uo uoxtroso uo latata om 100 mI uo H 2 O + 13 mV NaCl 52 1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI - u 2 - u:~u:u~z~u: 2UUI insorao ua porao hiurollica uos poptuoos na momlrana, promovonuo a sua uma uosostalilizaao tOron 8 Shai, 1998). A gomosina mostrou uma lorto aao antimicroliana contra 14 lactrias Gram-positivas, 10 lactrias Gram-no- gativas, 9 lungos lilamontosos o 5 lovo- uuras tSilva Jr. ot al., 2000). Entro ossos microorganismos, oxistom vrias lac- trias causauoras uo inlocos hospita- laros, tais como a Staphylococcus au- rous, a Staphilococcus saprophiticus, a Stroptococcus pyogonos o a Psouuo- monas aoruginosa. Alm uo causauoras uo inlocos hospitalaros, a Staphylo- coccus aurous causa moningito o lurun- culos, a Staphilococcus saprophiticus provoca inlocao no trato urinrio o a Stroptococcus pyogonos, a lolro rou- mtica. Ainua como patognicas aparo- com a Klolsiolla pnoumoniao, causa- uora ua pnoumonia, a Iistoria mono- cytogonos, associaua moningito o pnoumonia, a Canuiua allicans, ros- ponsvol pola canuiuaso, a Cryptococ- cus noolormans, causauora ua monin- gito, a Salmonolla thyphimurium, ros- ponsvol pola salmonoloso o a Trico- phyton montagrophytos, causauora ua micoso suporlicial. Emlora aprosonto uma corta ativi- uauo homoltica tSilva Jr. ot al., 2000), a gomosina tom-so mostrauo um antimi- croliano com um granuo potoncial para aplicaos toraputicas om huma- nos, outros animais o om plantas. Essa alirmaao uocorro ua comlinaao uas soguintos propriouauos: amplo ospoc- tro uo ativiuauo, rpiua aao antimicro- liana o caractorsticas ostruturais guo conlorom alta ostaliliuauo molcula. GomcsIna: ImportncIa das pontcs dIssuIIcto para sua atIvIdadc Com o oljotivo uo oluciuar a impor- tncia uas pontos uissulloto na oxpros- sao ua ativiuauo liolgica uosso popt- uoo o, ao mosmo tompo, luscar anlo- gos mais solotivos oou mais ostvois uograuaao onzimtica guo olo, loram sintotizauos manualmonto polo mto- uo ua laso sliua, os compostos listauos na FIgura 5. Essos compostos loram purilicauos por cromatogralia lguiua uo laso rovorsa tRP-HPIC) o caractori- zauos por RP-HPIC o cromatogralia liguiua acoplaua a um ospoctromotro uo massa uo tipo oloctrospray tICVS). As ativiuauos antimicrolianas loram uotorminauas polo onsaio lguiuo uo iniliao uo croscimonto contra M.:- u: IuI~u: tlactria Gram-positiva), 1:I~:.I.n I. tlactria Gram-nogati- va) o nuu.un nI.nu: tlovouura), sonuo oxprossas atravs ua concontra- ao mnima uo poptuoo guo causa 100` uo iniliao uo croscimonto tSilva Jr ~I nI, 2000). Como pouo sor olsorva- uo na FIgura 5, os anlogos guo apro- sontam somonto uma uas pontos uis- sulloto, os monocclicos |CystAcm)6, 11}, |Cys tAcm) 2,15}, |Sor6,11} o |Sor2,15} - Gomosina, loram uo 2 a 4 vozos monos ativos guo a gomosina nativa para os trs microorganismos tostauos, tanto nos moios com laixa concontra- ao uo NaCl t86 mV, PB 1 ) ou som sal tPDB 3 ), como naguolos com uma con- contraao lisiolgica uo NaCl compar- vol ao uo soro humano t13 mV NaCl, PB 2 o PDB 4 ). J os anlogos som as uuas pontos uissulloto, os linoaros |Sor2,6,11,15} o |CystAcm)2,6,11,15} Gm loram uo 2 a 16 vozos monos ativos guo a gomosina nativa, na ausncia o om laixa concontraao uo NaCl, sonuo ossa ativiuauo rouuziua mais ainua nos moios com uma concontraao uo 13 mV uo NaCl tcorca uo 4 a 64 vozos). FIgura 6. Procossamonto ua Gomosina. O transcrito uo gono ua gomosina trauuziuo om uma protona procursora uo 9,kDa. Essa protona aprosonta um poptuoo sinal tamarolo) o uma rogiao carloxi torminal carrogaua nogativamonto tazul). A protona procursora pro- cossaua pola romoao uo poptuoo sinal o ua rogiao carloxitorminal, a glutamina ua oxtromiuauo amino-torminal mouilicaua om ciuo piroglutmico o a arginina carloxi-torminal amiuaua FIgura 7. Possvol mocanismo uo procossamonto ua cauoia ua homoglolina lovina no intostino uo carrapato uo loi 1 u.:jIu: o goraao uo lragmonto antimicroliano 33-61. A cauoia clivaua ontro os rosuuos uo motionina t32) o uo lonilalanina t33) pola cnzIma 1 o ontro os rosuuos uo lisina t61) o valina t62) pola cnzIma 2, goranuo o poptuoo antimicroliano 1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI - u 2 - u:~u:u~z~u: 2UUI 53 Olsorvamos guo h uma variaao nos- ta rouuao uoponuonuo uo microorga- nismo, sonuo signilicativamonto maior para 1I. t32 a 64 vozos). A inlluncia uo sal na ativiuauo ua gomosina pouo sor oxplicaua polo lato uo o suio ostar compotinuo com os grupos carrogauos positivamonto ua gomosina uuranto a intoraao inicial olotrosttica ontro os- tos o os grupos carrogauos nogativa- monto ua momlrana colular uo micro- organismo tFzio ~I nI, 2001). oxtromamonto importanto oscla- rocor guo omlora os anlogos sintoti- zauos tonham aprosontauo ativiuauos antimicrolianas mais laixas uo guo a gomosina nativa, olos oxiliram ativiua- uos homolticas rouuziuas om rolaao uola: uo 2 a 11 vozos na concontraao uo 100 V. Essos rosultauos sugorom guo amlas as pontos uissulloto sao importantos para a oxprossao ua ativi- uauo antimicroliana ua gomosina o guo os anlogos ostuuauos aprosontam uma ospociliciuauo uo aao uiloroncia- ua contra cortos microorganismos. lsso ocorro, muito provavolmonto, uoviuo s variaos ua composiao ua mom- lrana uo caua microoorganismo, alo- tanuo na intoraao inicial olotrosttica ontro os grupos carrogauos positiva- monto ua gomosina com os grupos nogativos ua momlrana, oou na insor- ao ua gomosina na porao hiurollica ua momlrana. Estuuos onvolvonuo mouilicaos auicionais ua gomosina ostao sonuo roalizauos com o oljotivo uo so oltor om anlogos mais ativos o solotivos nao homolticos. Prccursor da gomcsIna Atravs ua clonagom uo cDNA ua gomosina, vorilicamos guo osso popt- uoo trauuziuo na lorma uo uma protona procursora uo 9, kDA tFigura 6, Ioronzini ot al., 2001). Essa protona aprosonta um poptuoo sinal, inuican- uo guo o procursor ua gomosina uirocionauo ao rotculo onuoplasmti- co, guo ost provavolmonto ligauo via uo transporto para vosculas oxocticas para a liloraao uo poptuoo no moio oxtracolular. A rogiao carloxi-torminal ua protona procursora composta uo aminociuos ciuos, onguanto guo a rogiao guo corrosponuo ao poptuoo mauuro composta uo aminociuos lsicos. A porao carloxi-torminal car- rogaua nogativamonto pouo intoragir com a parto cationica uo poptuoo para ostalilizar a conlormaao uo procursor o pormitir o procossamonto protoolti- co ou ainua protogor a clula prouutora uo intoraos uo suas momlranas com a rogiao lsica uo poptuoo, ovitanuo assim a ativiuauo txica contra a mos- ma. A gomosina oncontra-so armazona- ua nos grnulos uos homcitos, como oviuonciauo por tcnicas uo imunollu- oroscncia usanuo o anticorpo anti- gomosina, sonuo socrotaua para o plas- ma ua aranha polo monos 2 horas aps uma inlocao oxporimontal. Vorilicou- so guo o gono guo couilica para o poptuoo transcrito prouominanto- monto nos homcitos uo animais nao inloctauos oxporimontalmonto, tonuo uma laixa oxprossao nos outros toci- uos analisauos: coraao, intostino, ho- patopncroas, ovrios, musculos o gln- uula uo vonono tIoronzini ot al., 2001). Fragmcnto da LcmogIobIna bovIna com atIvIdadc antImIcrobI- ana no IntcstIno do carrapato A invostigaao ua prouuao uo pop- tuoos antimicrolianos om outro arac- nuoo, o carrapato uo loi Boophilus microplus, loito no nosso laloratrio, lornocou-nos um rosultauo surproon- uonto. Foi iuontilicauo um lragmonto ua cauoia ua homoglolina lovina roloronto rogiao comproonuiua ontro os rosuuos 33 ao 61, com propriouauos antimicrolianas tFogaa ot al., 1999). Esso poptuoo, com massa molocular uo 3.205,6 Da, loi inicialmonto isolauo uo intostino uo carrapato. Para uotormi- nar sou ospoctro uo aao, sintotizou-so guimicamonto o mosmo guo, aps ca- ractorizaao apropriaua, loi tostauo contra vrias copas uo lactrias o uo lungos. Olsorvou-so guo o lragmonto ua cauoia ua homoglolina lovina ago om concontraos micromolaros aponas contra lactrias Gram-positivas o contra lungos, nao tonuo siuo ativo contra lactrias Gram-nogativas. No ontanto, a molcula ua homoglolina intacta nao aprosonta ativiuauo antimi- croliana guanuo tostaua om concon- traos suporioros uo lragmonto 33- 61 ua cauoia ua homoglolina lovina. Vorilicou-so tamlm guo osso lrag- monto aprosonta ativiuauo homoltica laixa, uoscartanuo uma possvol lun- ao uigostiva. Dauos na litoratura mostram guo a homoglolina uigoriua uontro uos oritrcitos uo mamloros goranuo lrag- montos com uilorontos ativiuauos lio- lgicas, tais como liloraao uo corticro- pina .u :.I: o a marcaao uas uoonas Alzhzoimor o isguomia, ontro outras tlvanov ~I nI, 199). Rocontomonto, loi uoscrita a goraao uo lragmontos uo homoglolina com ativiuauo antimicro- liana aps sou tratamonto .u :.I: com onzimas comorciais tVak ~I nI, 2000, Froiuovaux ~I nI, 2001). No ontanto, at o momonto, o unico lragmonto antimicroliano ua homoglolina guo gorauo lisiologicamonto o 33-61 ua cauoia ua homoglolina lovina, uo- toctauo no intostino uo carrapato 1 AranLa carangucjcIra Acar1Locurr1a yonc1ara 54 1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI - u 2 - u:~u:u~z~u: 2UUI u.:jIu: tFogaa ~I nI, 1999). Com laso nossas inlormaos, loi analisauo so os oritrcitos lovinos rompiuos .u :.I: aprosontavam ativiuauo antimi- croliana. Nonhuma ativiuauo loi uo- toctaua, sugorinuo guo a homoglolina uovor ostar sonuo procossaua no intos- tino uo carrapato por onzimas prouuzi- uas nosto rgao, goranuo assim o lrag- monto 33-61 com propriouauos antimi- crolianas tFIgura 7). lniciou-so a in- vostigaao uas onzimas intostinais uo 1 u.:jIu: rosponsvois pola cliva- gom ua homoglolina o a goraao uo lragmonto ativo. Aps a inculaao ua homoglolina lovina com um oxtrato uo intostino uo carrapatos, loi olsorva- ua a oxprossao uo ativiuauo antimicro- lina. Essa loi iniliua pola inculaao simultnoa com um iniliuor uo spar- tico-protoinaso tpopstatina) o um inili- uor uo cistoino-protoinaso tE-64). Esso rosultauo sugoro guo, polo monos, uuas onzimas - uma spartico o uma cisto- no-protoinaso - ostojam onvolviuas na goraao uo lragmonto antimicroliano a partir ua protoliso ua homoglolina. A purilicaao o caractorizaao uossas on- zimas ostao sonuo roalizauas. A prosona uo uma ativiuauo anti- microliana no intostino uos carrapatos uo oxtroma importncia para a uolosa contra inlocos uossos animais, uma voz guo as lmoas pouom ingorir lac- trias uo couro uo hospouoiro uuranto a alimontaao. Alm uisso, aps a ali- montaao, as lmoas so uospronuom uo couro uo lovino cainuo ao solo, colocanuo sous ovos om um amlionto muitas vozos lastanto contaminauo por microorganismos. No ontanto, nao s o intostino uos carrapatos suscoptvol s inlocos. A prosona uo outros trs poptuoos antilactorianos, contonuo cistona, na homolinla uossos animais loi tamlm uotoctaua tFogaa ~I nI, 2001). A prosona uo vrios poptuoos antimicrolianos om um mosmo animal importanto para garantir um ospoctro uo aao amplo contra vrios tipos uo patgonos, garantinuo assim a solrovi- vncia uo animal alvo. Alm uisso, os poptuoos pouom atuar sinorgisticamon- to uuranto o comlato s inlocos. ConcIuso Alm uo vitais para o ontonuimonto ua aao antimicroliana lisiolgica uo- somponhaua nos aracnuoos ostuua- uos, os poptuoos uotoctauos tamlm pouorao sor usauos como molculas- laso para o uosonvolvimonto uo novas urogas antiliticas. Como j uoscrito acima, nao h uuviua uo guo, com o surgimonto uo novos microorganismos rosistontos antiliticos, oxisto a no- cossiuauo urgonto uo so uosonvolvo- rom novas classos uo antiliticos. Pop- tuoos antimicrolianos purilicauos, uo uivorsas ospcios uo animais, aproson- tam caractorsticas uosojvois a uma nova classo uo antiliticos: um largo ospoctro uo ativiuauo, incluinuo isola- uos rosistontos a antiliticos convonci- onais, matam rapiuamonto, ovitanuo a soloao uo mutantos rosistontos, apro- sontam sinorgia com outros antiliti- cos, noutralizam onuotoxinas o, por- tanto, lloguoiam a rosposta sopticmi- ca, o pouom matar microorganismos om animais mouolos. No ontanto, vri- os prollomas procisam sor rosolviuos para sorom prouuziuos om oscala in- uustrial. lm uolos por aprosontarom uma massa molocular rolativamonto granuo om rolaao aos antiliticos usa- uos comorcialmonto, torao ontao, guo sor prouuziuos por tcnicas uo liologia molocular, uo mouo a oltor-so molcu- las rocomlinantos, com um custo mais laixo. Aposar uo vrias motouologias torom siuo uoscritas, nonhuma uolas at agora loi usaua om oscala inuustrial tHancock 8 Scott, 2000). lma altorna- tiva soria a prouuao por rocomlina- ao om gontica om plantas tParizotto ~I nI, 2000). Outro prolloma a toxi- ciuauo guo alguns uossos poptuoos aprosontam contra clulas uo mamlo- ros. Como citauo antoriormonto, isso pouor sor consoguiuo por moio uo mouilicaos gumicas na ostrutura uossas molculas. Outro aspocto a sor consiuorauo a rosistncia uossos pop- tuoos aao protooltica uo nosso organismo. No ontanto, oxistom ostra- tgias para protogor os poptuoos con- tra protoasos, tais como a uo incorpor- los om lipossomos ou a uo usar moui- licaos gumicas tHancock 8 Scott, 2000). J oxistom, polo monos, cinco omprosas no munuo tralalhanuo na prouuao o ostalolocimonto uo popt- uoos antimicrolianos como novos an- tiliticos: Vagainin tElA), PPI Thora- poutics tlnglatorra), lntraliotics tElA), Vicrologix tCanau) o Entomou tFran- a), o guo inuica sor osso um campo lastanto promissor. Portanto, os popt- uoos antimicrolianos nao sao somonto importantos como componontos uo sis- toma imuno inato participanuo uo com- lato s inlocos, mas sous anlogos gumicos ou rocomlinantos aproson- tam um granuo potoncial para sorom aplicauos como antiliticos no comla- to contra microorganismos rosistontos a antiliticos conhociuos ou mosmo con- tra novos alvos. AgradccImcntos Os autoros agrauocom o suporto tcnico uauo por Susana Possoa uo Iima o o tralalho uos alunos uo lnici- aao Ciontlica Ernosto S. Nakayasu, Alino H. Fukuzava o Iuciana V. Kaku. Sirloi Dallro, V. Torosa V. Viranua o Antonio Viranua rocolom lolsa prouu- tiviuauo uo CNPg. Alossanura Vacha- uo, Anura C. Fogaa, Daniol V. Ioron- zini, Eliano Estovos, Iourivaluo uos Santos Poroira sao lolsistas ua FAPESP. Varcolo Russo Burgiorman rocolo lol- sa ua CAPES. Varcos Antonio Fzio lolsista uo CNPg. Esto tralalho rocolo apoio linancoiro ua FAPESP atravs uo projoto Tomtico 981132-4 o uo pro- joto inuiviuual 0003642-3. BIbIIograIIa Anurou, D., Rivas, I. Animal antimicro- lial poptiuos: an ovorviov. Biopo- limors 4: 415-433, 1998. Aumolas, A., Vangoni, V., Roumos- tanu, C., Chicho, I., Dospaux, E., Grassy, G., Calas, B., Chavaniou, A. Synthosis anu solution structuro ol tho antimicrolial poptiuo protogrin- 1. Eur J Biochom 23:55-583, 1996. Bulot, P., C. Hotru, J. I. Dimarcg, D. Hollmann. Antimicrolial poptiuos in insocts, structuro anu lunction. Dov Comp lmmunol. 23:329-44, 1999. Dangl, J.I., Jonos, J.D.G. Plant patho- gons anu intogratou uolonco ros- ponsos to inloction. Naturo 411: 826-833, 2001. Ehroth-Salatior, I., Ioov, D., Goyllon, V., Fohllaum, P., Hollmann, J.A., Van Dorsslaor , A., Bulot, P. Charac- torization ol novol cystoino-rich an- timicrolial poptiuos lrom scorpion lloou. J. Biol. Chom. 214:2953- 29544, 1996. Fahrnor, R. I., Diockmann, T., Harvig, S. S., Iohror, R. l., Eisonlorg, D. 8 Foigon, J. Solution structuro ol pro- togrin-1, a lroau-spoctrum antimi- crolial poptiuo lrom porcino louko- cytos. Chom Biol. 3:543-550, 1996. Fzio, V.A., Dallro, S., Viranua, V.T.V., Bulot, P., Viranua, V. lmportanco 1.I~uIg.n .~u.n 1~:~u:I:.u~uI - u 2 - u:~u:u~z~u: 2UUI 55 ol tho intramolocular uisulliuo lriu- gos in tho liological activity ol go- mosin. Procoouings Book ol tho 1th Amorican Poptiuo Symposium 2001, in pross. Fogaa, A. C., Silva, Jr., P.l., Viranua, V.T.V, Bianchi, A.G., Viranua, A. P, Rilolla, P.E., Dallro, S. Antimicroli- al activity ol a lovino homoglolin lragmont in tho tick 1jI.Iu: u.- :jIu: J Biol. Chom. 24:25330- 25334, 2000. Fogaa, A.C., Viranua, A., Dallro, S. Antimicrolial poptiuos lrom tho cat- tlo tick. Programa o Rosumos ua XXX Rouniao anual ua SBBg, pp.32, 2001. Froiuovaux, R., Krior, F., Noujar-Arrou- mo, N., Vorcaigno-Varko, D., Kos- ciarz, E., Ruckolusch, C., Dhulstor, P., Guillochon D. Antilactorial acti- vity ol a popsin-uorivou lovino ho- moglolin lragmont. FEBS Iott 23:159-63, 2001. Hancock, R.E.W. , Diamonu, G. Tho rolo ol cationic antimicrolial popti- uos in innato host uolonso. Tronus in Vicroliology 8: 402-410, 2000. Hancock, R.E.W., Scott, V.G. Tho rolo pl antimicrolial poptiuos in animal uolonsos. PNAS 9: 8856-8861, 2000. Hara T., Kouama, H., Konuo, V., Waka- matsu, K., Takoua, A.., Tachi T., Vatsuzaki, K. Elocts ol poptiuo ui- morization on poro lormation: Anti- parallol uisulliuo-uimorizou magai- nin 2 analoguo. Biopolymors 58:43- 446, 2001. Hollmann, J. A., Kalatos, F. C., Ja- novay, C. A., Ezokovitz, R. A. Phylo- gonotic porspoctivos in innato im- munity. Scionco, 284:1313-1318, 2000. Janovay, C.A.Jr. Prosiuontial auuross to tho Amorican Association ol lmmu- nologists. Tho roau loss travolou ly: tho rolo ol innato immunity in tho auaptativo immuno rosponso. J. lm- munol. 61: 539-544, 1998. Kavano, K., \onoya, T., Viyata, T., \oshikava, K., Tokunaga, F., Tora- ua, \. , lvanaga, S. Antimicrolial poptiuo, tachyplosin l, isolatou lrom homocytos ol tho horsoshoo cral tTachyplous triuontatus). NVR uo- tormination ol tho lota-shoot struc- turo. J Biol. Chom. 265:15365-1536, 1990. Kokryakov, V. N., Harvig, S. S., Panyu- tich, E. A., Shovchonko, A. A., Aloshi- na, G. V., Shamova, O. V., Kornova, H. A., Iohror, R. l. t1993) Protogrins: loukocyto antimicrolial poptiuos that comlino loaturos ol corticosta- tic uolonsins anu tachyplosins. FEBS Iott. 32:231-236, 1993. Ianuon, C., Souano, P., Hotru, C., Ho- llmann, J., Ptak V. Solution structu- ro ol urosomycin, tho lirst inuucillo antilungal protoin lrom insocts. Pro- toin Scionco 6: 188-1884, 199. Iohnor, K. Tho rolo ol momlrano lipiu composition in coll targoting ol an- timicrolial poptiuos. ln Dovolop- mont ol novol antimicrolial agonts: Emorging stratogios. Iohnor, K. tou), Horizon Sciontilic Pross, Englanu, pp 149-165, 2001. Iohnor , K., Stauuoggor, E. Aro vo on tho throsholu ol tho post-antiliotic ora?. ln Dovolopmont ol novol an- timicrolial agonts: Emorging strato- gios. Iohnor, K. tou), Horizon Sci- ontilic Pross, Englanu, pp 1-15, 2001. Ioronzini, D., Fukuzava, A.H., Bijo- vsky, A.T., Dallro, S. Volocular cha- ractorization ol gomosin, an antimi- crolial poptiuo lrom spiuor homo- cytos. Programa o Rosumos ua XXX Rouniao anual ua SBBg, pp.32, 2001. Vak P., Wjcik K., Sillorring J., Dulin A. t2000). Antimicrolial poptiuos uorivou lrom homo-containing pro- toins: Homociuins. Antonio van Ioouvonhook : 19-20, 2000. Vanuaru, N., Sy, D., Vaulrais, C., Bon- matin, J. V., Bulot, P., Hotru, C., Vovollo, F. Anuroctonin, a novol antimicrolial poptiuo lrom scorpi- on Anuroctonus australis: solution structuro anu molocular uynamics simulations in tho prosonco ol a lipiu monolayor. J. Biomol. Struct. Dyn. 1:36-380, 1999. Vanuaru, N., Bulot, S., Caillo, A., Da- llro, S., Vovollo, F. Solution structu- ro ol gomosin,an antimicrolial cys- toino-rich poptiuo lrom spiuor. Sul- motiuo no Europoan J. Biochom., 2001. Viyata, T., Tokunaga, F., \onoya, T., \oshikava, K.,, lvanaga, S., Niva, V., Takao, T., Shimonishi, \. Anti- microlial poptiuos, isolatou lrom horsoshoo cral homocytos, tachy- plosin ll, anu polyphomusins l anu ll: chomical structuros anu liologi- cal activity. J. Biochom. tTokyo), 106:663-668, 1989. Viranua, A., Koorlor, S.C., Gulyas, J., Iahrichi, S.I., Craig, A.G., Corrigan, A., Rivior, C., Valo, W., Rivior, J. J. Conlormationally Rostrictou Com- potitivo Antagonists ol HumanRat Corticotropin-Roloasing Factor. Vou. Chom., 3:1450-1459, 1994 Nakamura, T., Furunaka, H., Viyata, T., Tokunaga, F., Vuta, T., lvanaga, S., Niva, V., Takao, T., Shimonishi, \. Tachyplosin, a class ol antimicroli- al poptiuo lrom tho homocytos ol tho horsoshoo cral tTachyplous tri- uontatus). lsolation anu chomical structuro. J. Biol. Chom. 263:1609- 1613, 1988. Oron, Z., Shai, \. Vouo ol action ol linoar amphipathic -holical anti- microlial poptiuos. Biopolimors 4: 451-463, 1998. Parizotto, E.A., Do Iucca, P.C., Jung- mann, I., Kompor, E.I., Silva, A.C., Ioito, A. Plantas como liorroatoros. Biotocnologia Cincia 8 Dosonvol- vimonto, 1: 12-1, 2000. Rozok A., Friourich, C.I., Hancock, R.E. Structuro ol tho lovino antimicroli- al poptiuo inuoliciuin lounu to uo- uocylphosphocholino anu souium uouocyl sullato micollos. Biocho- mistry 39:1565-154, 2000. Silva Jr, P.l. Sistoma imuno om aracn- uoos: ostrutura gumica o ativiuauo liolgica uo poptuoos antimicroli- anos ua homolinla ua aranha nu- II:u::.n gu~:.nun. Toso apro- sonatua ao lnstituto uo Cincias Biomuicas ua lSP para oltonao uo ttulo uo uoutor om Cincias, 2000. Silva Jr, P.l., Dallro, S., Bulot . lsolation anu lull charactorization ol gomo- sin, an 18-rosiuuo cystoino-rich uo- lonso poptiuo lrom tho spiuor nu- II:u::.n gu~:.nun homocytos vith soguonco similaritios to hor- soshoo cral antimicrolial poptiuos ol tho tachyplosin lamily. J. Bio- chom. Chom. 25: 33464-3340, 2000. Tamamura, H., Kuroua, V., Vasuua, V., Otaka, A., Funakoshi, S., Nakashima, H., \amamoto, N., Waki, V., Vatsumoto, A. 8 Ianco- lin, J. V. A comparativo stuuy ol tho solution structuros ol tachyplosin l anu a novol anti-HlV synthotic pop- tiuo, T22 t|Tyr5,12, Iys}-polypho- musin ll), uotorminou ly nucloar magnotic rosonanco. Biochim. Bio- phys. Acta 1163: 209-216, 1993. Trali, V., Schirra, H.J., Craik, D.J.T. Throo-uimonsional structuro ol RTD- 1, a cyclic antimicrolial uolonsin lrom Rhosus macaguo loukocytos. Biochomistry, 2001: 4211-4221, 2001.