UNIME SALVADOR FARMCIA

JSSICA ARAGO PRISCILA SANTANA RAFAELA PAZ

CONTAGEM DE MICROORGANISMOS EM PLACAS

Salvador 2012

UNIME SALVADOR FARMCIA

JSSICA ARAGO PRISCILA SANTANA RAFAELA PAZ

Relatrio apresentado disciplina de Microbiologia de Alimentos, curso de Bacharelado em Farmcia da UNIME, como requisito parcial de avaliao. Orientadora: Marinalva Barbosa.

Salvador 2012

INTRODUO: Prticas laboratoriais so utilizadas comumente para contagem de microrganismos presentes em uma determinada amostra. Dentre essas prticas, destacamos as tcnicas de espalhamento em superfcie (spreadplate) e plaqueamento em profundidade (pour-plate). A primeira tcnica consiste em sucessivas diluies da amostra, e que em cada diluio espalhada em duas placas de Petri contendo meio de cultura 0,1 ml da amostra. Tambm conhecido como mtodo das diluies seriadas, este mtodo serve tanto para o isolamento quanto para contagem de microorganismos. J a segunda tcnica tem como meio de cultura o gar fundido que permite o crescimento no s ao longo da superfcie como no interior do gar. Aps o plaqueamento e incubao, por tempo e temperatura adequados, as clulas ou pequenos agrupamentos vo crescer isoladamente, dando origem a colnias que sero contadas na diluio apropriada e, portanto, chamadas de unidades formadoras de colnia (UFC).

OBJETIVO: Determinar o numero de clulas viveis pela contagem de colnias desenvolvido em placas.

PRINCIPIO DO MTODO: Quando a clula microbiana, presente em uma amostra, se fixar ao meio de cultura solido adequado, ira formar uma colnia visvel e isolada.

MATERIAIS E EQUIPAMENTOS UTILIZADOS: Amostra do alimento (SALADA DE FRUTAS) Plate Count Agar (PCA), fundido e resfriado a aproximadamente 45 C Placas de Petri, estreis Placas de Petri contendo Agar Batata acidificado ou Agar Sabourand Pipetas

 Soluo salina peptonada (diluente estril) Tubos de ensaio com 9 ml de gua peptonada 0,1% ou soluo salina estril (diluente) Estufa incubadora regulada 35-37 C

TCNICA: Antes de iniciarmos o procedimento, identificamos os tubos contendo salina com os nmeros 10-,10-,10-4,10-5. Em seguida, pesamos 25g do alimento (salada de frutas) e adicionamos 225 mL do diluente (diluio 10-). Aps a diluio, transferimos 1 mL da amostra para cada tubo contendo salina. Ocorreram diluies seriadas de um tubo para o outro. Logo depois, iniciamos o procedimento de preparao do meio de cultura. Marcamos as placas em pares de 10- e 10-4. Duas placas encontravam-se sem substncia alguma e outras duas continham o meio de cultura Agar batata dextrose acidificada. Essas placas foram divididas para realizao de duas tcnicas: Tcnica Spread Plate e Tcnica Pour Plate.

Tcnica Spread Plate: Com uma pipeta estril adicionamos ao meio de cultura Agar batata dextrose acidificada, 1 mL das substncias contidas nos tubos 10- e 10-4 espalhamos com a ala de Drigalski e incubamos em uma temperatura ideal.

Tcnica Pour Plate: Adicionamos 1 mL das substncias dos tubos 10- e 10-4 nas placas e

espalhamos com a ala de Drigalski. Deixamos solidificar, invertemos as placas e incubamos a 35-37C por 48 horas.

RESULTADOS:

Concluso: